UNIVERSIDAD DE LA SALLE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS

FISICOQUIMICA
_______________________________________________________________________
PRACTICA 3. ESPECTROFOTOCOLORIMETRIA
Mara Fernanda Flrez1, Luisa Mahecha2, Valeria Gonzalez3
23 Agosto del 2017
RESUMEN
La Espectrofotocolorimetra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en la
relacin que existe entre la absorcin de luz por parte de un compuesto y su concentracin. Cada
sustancia tiene su propio espectro de absorcin, el cual es una curva que muestra la cantidad de
energa radiante absorbida (Absorbancia) por la sustancia en cada longitud de onda del espectro
electromagntico, es decir, a una determinada longitud de onda de la energa radiante, cada
sustancia absorbe una cantidad de radiacin que es distinta a la que absorbe otro compuesto. El
objetivo principal de la prctica es estudiar las leyes de la espectrofotometra y sus leyes de
aplicacin al anlisis cuantitativo y la estandarizacin de mtodos. En el laboratorio, se realiz la
cuantificacin de hierro en una muestra de agua; para esto se utilizaron 7 balones aforados a los
cuales se le aadi de 0-7 ml de patrn II del catin Fe ++ y un baln aforado para la muestra a
analizar; a cada baln se le agrego 1 ml de hidroxilamina, 1 ml de HCL, 5 ml de C 2H3NaO2, 5 ml de
o-fenantrolina y se complet su volumen (50ml) con agua destilada para los balones del 1-7 y con
agua residual para el baln 8. Esto se realiz con el fin de calcular la concentracin, la absorbancia
y el porcentaje de transmitancia para cada una de las alcuotas tomadas. Se obtuvo que la longitud
de onda del Fe fue de 508,0(nm), esto se logr interpolando en la grfica que arrojo el
espectrofotmetro de la curva espectral, adems tambin se obtuvo que el error relativo fue de
0,020481 dado esto se puede mencionar que los ensayos realizados para cada uno de los
volmenes se dieron de manera eficiente

PALABRAS CLAVE: Espectrofotometra, Absorbancia, Transmitancia, Longitud de onda,

Concentracin de Hierro

ABSTRACT
Spectrophotometry is one of the most widely used methods of analysis, and is based on the
relationship between the absorption of light by a compound and its concentration. Each substance
has its own absorption spectrum, which is a curve showing the amount of radiant energy absorbed
(Absorbance) by the substance at each wavelength of the electromagnetic spectrum, is at a given
wavelength of radiant energy, each substance absorbs an amount of radiation that is different from
that absorbed by another compound. The main objective of the practice is to study the laws of
spectrophotometry and its laws of application to quantitative analysis and standardization of
methods. In the laboratory, iron quantification was performed in a water sample; For this, 7
volumetric flasks were used, adding 0-7 ml of standard II of the Fe ++ cation and a volumetric flask
for the sample to be analyzed; 1 ml of hydroxylamine, 1 ml of HCl, 5 ml of C2H3NaO2, 5 ml of o-
phenanthroline were added to each flask and the volume (50 ml) was completed with distilled water
for the flasks of 1-7 and with residual water to the balloon 8. This was done to calculate the
1
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sexto Semestre
2
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sptimo Semestre
3
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sptimo Semestre
concentration, absorbance and percent transmittance for each of the aliquots taken. It was obtained
that the wavelength of Fe was 508,0 (nm), this was achieved by interpolating in the graph that
showed the spectrophotometer of the spectral curve, in addition also it was obtained that the
relative error was of 0.020481 given this It can be mentioned that the tests performed for each of
the volumes were given efficiently
KEY WORDS: Spectrophotometry, Absorbance, Transmittance, Wavelength, Iron Concentration
OBJETIVOS
GENERAL
Estudiar las leyes de la
espectrofotocolorimetria y sus leyes
de aplicacin al anlisis cuantitativo
y la estandarizacin de mtodos.
ESPECIFICO
Tener conocimiento de la Ley de
Lambert y la Ley de Beer.
INTRODUCCIN
La Espectrofotometra es una de las
tcnicas experimentales ms utilizadas
para la deteccin especfica de
molculas. Se caracteriza por su
precisin, sensibilidad y su aplicabilidad
a molculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomolculas, etc) y
estado de agregacin (slido, lquido,
gas). Los fundamentos fsico-qumicos
de la espectrofotometra son
relativamente sencillos. Las molculas
pueden absorber energa luminosa y
almacenarla en forma de energa interna.
Esto permite que se inicien ciclos vitales
de muchos organismos, entre ellos el de
la fotosntesis en plantas y bacterias. La
Mecnica Cuntica nos dice que la luz
est compuesta de fotones cada uno de
los cules tiene una energa. La
espectrofotocolorimetra se define como
la medicin de la cantidad de energa
que puede absorber o transmitir un
sistema en funcin de la longitud de
onda; se refiere a la medida o anlisis
cuantitativo de cantidades relativas de
luz absorbida por una muestra en
funcin de la longitud de onda,
actualmente es el mtodo de anlisis
ptico ms utilizado en investigaciones
qumicas y biologas. Cada componente
tiene una capacidad nica para absorber
la energa dado por ciertas longitudes de
onda, ese fue el motivo por el cual se
escogi como uno de los mejores
mtodos para la cuantificacin de este
elemento dentro de los elemento patrn y
de la muestra.
Teniendo en cuenta la utilidad de la
espectrofotocolorimetra en la
investigacin qumica y biolgica se
utiliz como mtodo de cuantificacin de
hierro para una muestra de agua; para la
determinacin de dicho elemento se tuvo
la medicin de la cantidad de energa
que puede absorber o transmitir un
cuerpo de acuerdo a una longitud de
onda determinada.
MARCO TERICO
La espectrofotometra es uno de los
mtodos de anlisis ms usados, y se
basa entre la relacin que existe entre la
absorcin de luz por parte de un
compuesto y su concentracin. Cuando
se hace incidir luz monocromtica (de
una sola longitud de onda) sobre un
medio homogneo, una parte de la luz
incidente es absorbida por el medio y
otra transmitida, como consecuencia de
la intensidad del rayo de luz sea
atenuada desde Po (Intensidad de la luz
incidente) y P (Intensidad del rayo de luz
transmitido). Dependiendo del
compuesto y del tipo de absorcin a
medir, la muestra puede estar en fase la ecuacin 2 se puede observar este
lquida, slida y gaseosa. trmino.
Cada sustancia tiene su propio espectro P
T= 100 (Ecuacin 2)
el cual es una curva que muestra la Po
cantidad de energa radiante absorbida,
por la sustancia en cada longitud de La ley de Lambert establece que cuando
onda del espectro electromagntico, es pasa luz monocromtica por un medio
decir, a una determinada longitud de homogneo, la disminucin de la
onda de la energa radiante, cada intensidad del haz de luz incidente es
sustancia absorbe una cantidad de proporcional al espesor del medio, lo que
radiacin que es distinta a la que equivale a decir que la intensidad de la
absorbe otro compuesto. Como se puede luz transmitida disminuye
observar en la imagen 1. exponencialmente al aumentar
aritmticamente el espesor del medio
Imagen 1. Espectro de absorcin de dos compuestos
absorbente como se puede observar en
diferentes.
la imagen 2
Imagen 2. Ley de Lambert

Fuente: Neira, 2010.

Fuente: Neira, 2010
La absorbancia se define como la
cantidad de energa radiante absorbida La ecuacin 3 expresa la relacin
por una sustancia pura o en solucin. En matemtica de esta ley:
la ecuacin 1 se puede observar este P
trmino. =ekb (Ecuacin 3)
Po
A=log ( T ) ; A=abc (Ecuacin 1)
Donde;
Donde;
Po: Intensidad de la luz incidente
T: Transmitancia
P: Intensidad de la luz transmitida
a: Absortividad
b: espesor del medio absorbente
b: Longitud de la cubeta
k: cte que depende de la naturaleza del
c: Concentracin soluto, la longitud de onda, el espesor del
medio absorbente y la naturaleza del
La Transmitancia es la razn entre la luz medio
monocromtica transmitida (P) por una
muestra y la energa o luz incidente (Po) Mientras, que la Ley de Beer establece
sobre ella. Tanto la energa radiante que la intensidad de un haz de luz
incidente como la transmitida deben ser monocromtica disminuye
medidas a la misma longitud de onda. En exponencialmente al aumentar
aritmticamente la concentracin de la
sustancia absorbente, cuando este haz La ley de Lambert-Beer se cumple para
pasa a travs de un medio homogneo soluciones diluidas; para valores de
como se puede observar en la imagen 3 concentraciones altos, (constante de
proporcionalidad) vara con la
concentracin, debido a fenmenos de
dispersin de la luz, agregacin de
molculas, cambios del medio, etc.
lustracin 3. Ley de Beer
(Nieves, 2013)
Los mtodos espectroscpicos de
anlisis estn basados en la medida de
la radiacin electromagntica que es
absorbida o emitida por una sustancia.
En funcin de ello se clasifican
fundamentalmente en:
Fuente: Neira, 2010
Mtodos de absorcin que se basan en
La ecuacin 4 expresa la relacin la disminucin de la potencia de un haz
matemtica de esta ley: de radiacin electromagntica al
P interaccionar con una sustancia.
=ekc (Ecuacin 4)
Po Mtodos de emisin que se basan en
la radiacin que emite una sustancia
Donde;
cuando es excitada previamente por
Po: Intensidad de la luz incidente medio de otro tipo de energa (trmica,
elctrica).
P: Intensidad de la luz transmitida
Mtodos de fluorescencia que se basan
c: concentracin de la solucin en la radiacin que emite la sustancia
k: cte que depende de la naturaleza del cuando es excitada previamente por un
soluto, la longitud de onda, el espesor del haz de radiacin electromagntica.
medio absorbente y la naturaleza del Otras clasificaciones de los mtodos
medio (Neira, 2010) espectroscpicos se establecen en
Ambas leyes se combinan en una sola funcin de la regin del espectro
generando la Ley de Lambert-Beer, la electromagntico que interviene en la
cual expresa la relacin entre tcnica. As, pueden utilizarse regiones
absorbancia de luz monocromtica (de como rayos X, ultravioleta, visible,
longitud de onda fija) y la concentracin infrarrojo, microondas, etc. En la Imagen
de un cromforo en solucin (ecuacin 4 se puede observar las regiones del
5): espectro electromagntico, en funcin de
los valores de la longitud de onda () de
Po cada radiacin. En esta figura puede
A=log =log T (Ecuacin 5)
P observarse como la luz visible para el ojo
humano constituye nicamente una
Donde; pequea parte del espectro
A: Absorbancia electromagntico.

P/Po= T: Transmitancia
 determinada originando un haz
monocromtico.
Un recipiente para contener la muestra
Imagen 4. Espectro electromagntico
denominado cubeta fabricado con un
material que permite el paso de la
radiacin en la regin del espectro de
inters. Suelen ser de vidrio, plstico o
cuarzo. El espesor de la cubeta ms
habitual es 1 cm.
Un detector que convierte la energa
radiante en una seal elctrica (Harris,
Fuente: Harris,2007
2007)
Dado que en la parte experimental de Imagen 6.Metodologa para determinar absorbancia
esta prctica las medidas van a
realizarse con espectrofotometra visible,
es conveniente conocer que longitud de
onda tiene cada color en su mxima
absorcin, lo que se muestra en la
imagen 5
Imagen 5.Colores de luz visibles

Fuente: Harris, 2007

MATERIALES Y METODOS
Materiales
2 Beaker de 50ml
4 pipetas de 10ml
8 balones aforados de 50ml
2 pipetas de 1ml
2 Beaker de 100ml

Fuente: Harris, 2007 Reactivos

Para medir los valores de absorbancia y Patrn II del catin Fe++
transmitancia de una disolucin se HCl 1N
utilizan espectrofotmetros UV-Vis, que, Solucin de hidroxilamina
como puede verse en la Imagen 6, se Acetato de sodio
componen de cinco elementos Solucin de o-fenantrolina
principales:
Una fuente de radiacin que suele ser
una lmpara de filamento de wolframio
Un monocromador que permite
seleccionar una longitud de onda
METODOLOGA
RESULTADOS
Reacciones
En la imagen 7 se puede observar el
resultado final de cada baln aforado
despus de haber agregado todos los
reactivos
Imagen 7. Reaccin ocurrida en cada baln aforado

Fuente: Las Autoras

Curva espectral
Los valores de absorbancia (A)
arrogados por el espectro fotocolormetro
se pueden observar en la tabla 1
Tabla 1. Absorbancia de cada patrn

Patrn Volumen (ml) A

P0 0 0
P1 1 0,16
P2 2 0,021
P3 3 0,099
P4 4 0,1711
P5 5 0,244
P6 6 0,315
P7 7 0,369

Su respectiva grfica se puede observar

en la imagen 8 la cual fue emitida por el
espectro fotocolormetro
Imagen 8. Absorbancia con respecto a
 Grfica 1. Curva patrn (A vs C)

Curva patrn
0.4
0.35
0.3 f(x) = 0.21x - 0.05
0.25
R = 0.96
0.2

A
Fuente: Las autoras 0.15
0.1
0.05
0
Curva de calibracin 0 0.5 1 1.5 2 2.5
C (ppm)
La ecuacin 6 expresa matemticamente
la manera de determinar la concentracin
de cada patrn Para calcular el %T se utiliza la ecuacin
5. En la tabla 3. Se puede observar el
C 1 V 1
C2 = (Ecuacin 6) %T de cada patrn
V2
Tabla 3. Concentracin y %T de cada patrn
Donde;
Volumen C2 (p
C1 = concentracin de sln patrn II Patrn %T
(ml) pm)
(13,8ppm) P0 0 0 100
P1 1 0,276 96,38
V 1 = volumen de cada patrn P2 2 0,552 95,28
P3 3 0,828 79,61
V 2 = volumen de baln aforado (50ml)
P4 4 1,104 67,45
En la tabla 2. Se puede observar la P5 5 1,38 57,01
concentracin para cada patrn P6 6 1,656 48,41
P7 7 1,932 42,75
Tabla 2. Concentracin y absorbancia de cada patrn

C2 (p En la grfica 2 se puede observar la

Patrn Volumen(ml) A
pm) curva patrn (%T vs C)
P0 0 0 0 Grfica 2. Curva patrn (%T vs C)
P1 1 0,276 0,16
P2 2 0,552 0,021
P3 3 0,828 0,099
P4 4 1,104 0,1711
P5 5 1,38 0,244
P6 6 1,656 0,315
P7 7 1,932 0,369

En la grfica 1 se puede observar la

curva patrn (A vs C)
 Para calcular la concentracin de hierro
%T vs C en la muestra analizada se utiliza la
120 ecuacin 7
100
80
f(x) = - 33.1x + 105.34 A mb
60
R = 0.97 Cm = (Ecuacin 7)
m
%T

40
20
Donde;
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Am= absorbancia de la muestra (dada
C (ppm)
por el espectro fotocolormetro)
b= interseccin de la grfica 1.
Curva de Ringbon
m= pendiente de la grfica 1
Esta curva se obtiene graficando %T vs
log C, en la tabla 4 se pueden observar Reemplazando en la ecuacin 7
estos valores
0,020(0,0464)
Tabla 4. Log C con respecto a cada %T
Cm = =0,3193 pp m
0,2079
Patrn Log C %T En la tabla 5. Se puede observar los
P0 --- 100 resultados de la muestra analizada
P1 -0,559 96,38
P2 -0,258 95,28 Tabla 5. Resultados muestra analizada
P3 -0,082 79,61
Cm (p
P4 0,043 67,45 Patrn A %T
P5 0,140 57,01 pm)
P6 0,219 48,41 Muestr 0,02 95,4
0,3193
a 0 9
P7 0,286 42,75

Error relativo
En la grfica 3. Se observa la Curva de
Ringbon Para calcular el error relativo de
Grfica 3. Curva Ringbon
concentraciones se utiliza la ecuacin 8
C 2.303 0,15
= (Ecuacin 8)
Curva de Ringbon C m
120 Donde m es la pendiente dela parte recta
100 de la curva de Ringbon y se calcula
80 mediante la ecuacin 9
60 T 2T 1
T
%T

40 m= =
LogC log C 2log C1
20
(Ecuacin 9)
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
El error relativo se toma entre el patrn 3
log C y el patrn 4 de la siguiente manera:
79,6195,28
Muestra
m= =46,088
0,0820,258
 C 2.303 0.15 3 absorbancia la cual nos haba arrojado el
= =7.49 10
C 46,088 equipo como se haba mencionado con
anterioridad al momento de linealizar se
ANALISIS DE RESULTADOS evidencia que el R2 es de 0,9685 dado
Se obtiene que los errores relativos para esto una lnea recta. En la grfica 2 se
cada una de las pruebas realizadas puede observar que la transmitancia es
experimentalmente tienen un promedio inversamente proporcional a la
de 0,077 esto evidencia la manera concentracin en cada uno de los
eficiente de como se hizo la prueba de volmenes determinados. Haciendo una
Espectrofotocolorimetra. comparacin de estas dos graficas se
obtiene que la absorbancia es la
Al momento de desarrollar la curva caracterstica de cada sustancia, la cual
espectral se obtuvo la absorbancia (A) depende de la longitud de onda, mientras
que fue dada por el espectrofotmetro, y que la transmitancia es la luz que entra
por medio de este dato se pudo obtener en cada una de las muestras realizadas.
el porcentaje de transmitancia de manera
cuantitativa observando que este va En la curva de Ringbon se grafic el
disminuyendo considerablemente con logaritmo de cada una de las
cada uno de los volmenes en los concentraciones de los volmenes
ensayos realizados, esto se puede dar ya dados,
que la transmitancia es una relacin con
entre la luz monocromtica transmitida y respecto
la energa o la luz incidente que se da a la
sobre una determinada muestra. Dado
esto, el porcentaje es mayor en el baln
aforado nmero 0 que en el nmero 7.
Con respecto a la muestra (nmero 8)
este tiene poco color en la luz
monocromtica y por lo tanto la luz
incidente no se manifiestan, porque hay
una especie de reflejo esto se puede
demostrar porque tiene uno de los
porcentajes de Transmitancia ms altos. transmitancia se evidencia que es
inversamente proporcionalmente dando
En la grfica que arrojo el equipo de la
su pendiente negativa, de la misma
curva espectral, se puede evidenciar que
manera que el grafic de la
el mayor pico se da cuando la
concentracin con respecto a la
absorbancia est en 0,046 con respecto
transmitancia. La pendiente de la curva
al lambda, donde la longitud de onda es
se puede hallar tericamente por el delta
508,0 (nm).
de la transmitancia sobre el delta de los
Ya con respecto a la curva de calibracin logaritmos de las concentraciones.
se dio por la concentracin de la solucin
Segn la Resolucin 0631 de 2015 la
madre aplicada en cada una de las
concentracin de hierro para un agua
muestras, en la grfica 1. se observa que
residual no domstica se debe llevar a
las concentraciones de cada uno de los
analizar y de acuerdo a su valor
volmenes determinados son
reportado se demuestra que est entre
directamente proporcionales a la
un rango aceptado, por lo tanto, en la
muestra que se tom no se puede
demostrar si est o no est dentro del
rango aceptado. En el anexo 2 se puede
observar esto.
CUESTIONARIO
1. Cules son los principales espectros
en los que se divide el espectro
electromagntico? Dentro de que
rangos de longitud se encuentra cada
uno
RTA: El espectro electromagntico se
extiende desde la radiacin de menor
longitud de onda, como los rayos gamma
y los rayos X, pasando por la luz
ultravioleta, la luz visible y los rayos
infrarrojos, hasta las ondas
electromagnticas de mayor longitud de
onda, como son las ondas de radio. Se
cree que el lmite para la longitud de
onda ms pequea posible es la longitud
de Planck mientras que el lmite mximo
sera el tamao del Universo aunque
formalmente el espectro
electromagntico es infinito y continuo.
Para su estudio, el espectro
electromagntico se divide en segmentos
o bandas, aunque esta divisin es
inexacta.
Fuente: Internet
2. Enumere los colores que componen
el espectro visibles y cules son sus
correspondientes longitudes de onda
RTA:
Rojo: 618-780 nm
Anaranjado:581-618 nm
Amarillo:570-581 nm
Verde:497-581 nm
Cian: 476-497 nm
Azul:427-476 nm
Violeta:380-427 nm
3. Defina el color blanco y el color negro
RTA: Blanco: Es un color acromtico, de
claridad mxima y oscuridad nula.
Perceptualmente es la consecuencia de
la fotorrecepcin de una luz intensa
constituida por todas las longitudes de
onda del espectro visible, por tres
longitudes de onda (larga, media y corta)
o por dos longitudes de
onda complementarias. Se asemeja al
color de la nieve, aunque otras
sustancias de mxima reflectancia, como
la magnesia y la baritina (sulfato de
bario), resultan ejemplos ms especficos
del blanco
Negro: Es la percepcin visual de
mxima oscuridad, debido a la
inexistencia de fotorrecepcin, por falta
total de luz. Se asemeja a la coloracin
del carbn.2
El negro que se encuentra estandarizado
en catlogos de colores e inventarios
cromticos responde a la definicin dada
ms arriba, es decir, es de claridad nula y
acromtica. La denominacin de color
negro incluye a las coloraciones
similares al negro estndar, que poseen
una ligera variacin de saturacin y
matiz.
4. Cules la mayor absorbancia en el
sistema estudiado?
RTA: La absorbancia se define como la
relacin (logartmica) entre la intensidad
de la luz que incide sobre una muestra y
la intensidad de esa misma luz que es
transmitida a travs de esa muestra.
Cuando una luz de una longitud de onda
determinada, seleccionada por un filtro,
incide sobre una muestra, parte de esa
luz es absorbida. La luz no absorbida
pasa a travs de la muestra y es
recogida por un detector colocado en el
otro lado del pocillo de la microplaca,
frente a la fuente de luz.
La absorbancia mayor, se encontr en la
alcuota nmero 7, debido a que en ella
se encontraba la mayor cantidad de
hierro y debido a todo lo que se estudi
en la prctica, el espectro de luz absorbi
la mayor cantidad de luz en la alcuota 7
y esto dio como resultado una
absorbancia mayor en esta muestra.
5. Los iones presentes en la solucin
que usted trat cumplen la ley de
Lambert Beer? Explique
color es porque hay una gran
cantidad de soluto, y esto se da y
se presenta en las soluciones
realizada por con diferentes
concentraciones.
La absorbancia y la transmitancia
son caractersticas de todos los
lquidos y nos permiten conocer la
concentracin de soluto.

RTA: S cumple con la ley de Lamber- La absorbancia es inversamente

Beer ya que esta establece que la proporcional al porcentaje de
absorbancia est directamente transmitancia
relacionada con la concentracin y la
longitud de onda. Como se pudo
observar en el laboratorio la absorbancia Entre la concentracin de Hierro
de la muestra fue 0,020 y esto se debe a en la solucin y la absorbancia
que la muestra tena poca intensidad de hay una proporcionalidad
color (Traslucida) y por lo tanto su linealmente directa.
concentracin es de 0,3193
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
La medida de la absorbancia con
el espectrofotmetro es un Harris, D. (2007). Anlisis
excelente mtodo ya que es muy Qumico Cuantitativo. Ed.
confiable y brinda valores que Revert.
ayudan a calcular la
concentracin de soluto de las Neira, M. (2010).
sustancias que absorben luz en INTRODUCCION TEORICA
diferentes intervalos de longitud FUNDAMENTOS DE
de onda, las cuales se pueden ESPECTROFOTOMETRA.
graficar en una curva de Universidad de Chile
calibracin donde se demuestra
que la absorbancia y la
Nieve, J. (2013)
concentracin son directamente
Espectrofotometra: Espectros de
proporcionales.
absorcin y cuantificacin
El color juega un papel importante colorimtrica de biomolculas.
al caracterizar una sustancia de Crdoba: UCO
forma cualitativa ya que cuando
se presenta ms intensidad de
ANEXOS
Anexo 1. Resolucin 0631/2015

1
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sexto Semestre
2
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sptimo Semestre
3
Facultad de Ingeniera. Ingeniera Ambiental y Sanitaria. Sptimo Semestre