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Ana Cristina da Silva Figueiredo, Luis Manuel Gaspar Pedro, Jos Manuel Gonalves Barroso,
Maria Margarida Moutinho Giro de Oliveira
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA VEGETAL
Por:
Figura da capa:
Autores:
Ana Cristina da Silva Figueiredo
Luis Manuel Gaspar Pedro
Jos Manuel Gonalves Barroso
Maria Margarida Moutinho Giro de Oliveira
Os autores declaram que no seguiram o acordo ortogrfico na redaco deste guia prtico.
Edio:
Faculdade de Cincias da Universidade de Lisboa, Centro de Biotecnologia Vegetal.
Tiragem:
1 Edio, Lisboa, Maio de 2013 verso pdf online e verso impressa
2 Edio, Lisboa, Julho de 2014 verso pdf online e verso impressa
NDICE
GUIA PRTICO DE BIOLOGIA CELULAR .................................................................................................................... 1
NDICE ................................................................................................................................................................... I
2.1. Procariotas.......................................................................................................................................... 14
2.1.1. Bacteria........................................................................................................................................ 17
2.1.2. Archaea ....................................................................................................................................... 19
2.2. Eucariotas ........................................................................................................................................... 19
2.2.1. Protistas ....................................................................................................................................... 22
2.2.2. Fungos ......................................................................................................................................... 28
2.2.3. Animais ........................................................................................................................................ 29
2.2.4. Plantas ......................................................................................................................................... 29
3. A CLULA ....................................................................................................................................................... 30
I
Guia Prtico de Biologia Celular
5. PROTOCOLOS ................................................................................................................................................. 72
6. APNDICE....................................................................................................................................................... 96
7. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................................................. 99
II
Guia Prtico de Biologia Celular
1. MICROSCOPIA PTICA
Mquina fotogrfica
Oculares
Objectivas
Platina
Parafusos de focagem
Condensador
Base
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Guia Prtico de Biologia celular
P ou base
Brao
Tubo ou canho
Parte Mecnica Platina ou porta-objectos com pinas e nnios
Revlver ou porta-objectivas
Parafuso macromtrico
Parafuso micromtrico
Oculares
A microscopia pode ser definida como the art and science of making fine detail visible. Esta
definio acarreta conceitos importantes para os utilizadores de microscpios: ampliao,
resoluo, contraste e medio.
A ampliao relaciona a dimenso da imagem do objecto com a sua dimenso real. A
resoluo de um microscpio corresponde capacidade de separar dois pontos to prximos
quanto possvel um do outro. O contraste corresponde a acentuar as diferenas entre os
constituintes da preparao de modo a fazer sobressair uns em relao aos outros. Finalmente,
fazendo uso de uma correcta ampliao, resoluo e contraste, possvel ao utilizador fazer
medies precisas, vlidas e reprodutveis do objecto em estudo.
Num microscpio de luz visvel, os raios de luz da fonte de iluminao so concentrados,
sobre o espcime a observar, atravs de uma lente condensadora, Fig. 1.1. Os raios luminosos
que atravessam o espcime so focados, numa imagem ampliada, por duas lentes colocadas nas
extremidades opostas do tubo ou canho, Fig. 1.1. A lente mais perto do espcime designada
objectiva e a da extremidade oposta a ocular. Com o auxlio de parafusos de ajuste grosseiro e/ou
fino possvel mover o espcime de molde a coloc-lo na posio correcta para se poder focar. A
posio do condensador pode ser igualmente ajustada por forma a convergir a luz sobre o
espcime, Fig. 1.1.
Objectiva
leo de imerso
Lamela
a b
Fig. 1.2. Abertura da objectiva. a) Empregue a seco. b) Empregue com imerso num lquido com ndice de
refraco idntico ao do vidro (n = 1,51). Os fotes no sofrem refraco pelo que o ngulo do cone til
superior ao de a).
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o comprimento de onda, que, para a luz visvel, 0,4 a 0,7m, isto , para o microscpio
ptico o constante e 0,5,
0,6 uma constante que reflecte o grau de sobreposio de dois pontos que ainda podem ser
visualizados separadamente,
n .sen a abertura numrica da objectiva (numa boa objectiva o seu valor de 1,4),
n o ndice de refraco do meio = velocidade no ar / velocidade no material
ex. ndice de refraco do vidro = Velocidade da luz no ar / velocidade da luz no vidro =
300000 km.s / 200000 km.s = 1.5
ar = 1,0; gua = 1,33; vidro = 1,5; leo = 1,51 ou blsamo do Canad = 1,53
o semi-ngulo com vrtice no cone formado pelos raios, que saindo da preparao,
atingem a lente frontal da objectiva e depende da largura da lente e da sua distncia ao
espcime (numa boa objectiva o seu valor de 70, o que d um sen 0,94).
A ptica dos microscpios pode criar artefactos de imagem designados por aberraes, que
podem ser de dois tipos: cromticas e esfricas. A aberrao cromtica deve-se ao diferente grau
de refraco dos diversos componentes da luz, de tal modo que se criam orlas coloridas na
extremidade do material, Fig. 1.3.a. A aberrao esfrica uma consequncia dos diferentes
ngulos dos raios luminosos emergentes da lente, Fig. 1.3.b. Ambos os tipos de aberraes so
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a) b)
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Fig. 1.4. Os raios luminosos so retardados diferentemente ao passarem pelos vrios constituintes celulares.
Objectiva
Raios reflectidos
Raios oblquos
Espcime
Condensador
Disco opaco
a) b)
Fig. 1.5. a) Representao esquemtica do microscpio de fundo escuro e b) observao de bactrias com o
microscpio de fundo escuro.
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diversos anis, Figs. 1.6 e 1.8. Os anis so de vidro opaco, mas incluem um anel central de vidro
transparente que permite a passagem dos raios luminosos menos refractados. Os anis de vidro
opaco tm um revestimento e uma espessura tal que retardam, adicionalmente, os raios mais
refractados de 1/4 de comprimento de onda. Tais diferenas acentuam o contraste entre o objecto
em observao e o meio circundante.
Raios
difractados
Placa de fase
Objectiva
Anis complementares
Espcime
Anel de fase
Condensador
Analizador
Prisma
Objectiva
Espcime
Condensador de
contraste de
interferncia
com prisma
Polarizador
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a) b)
c) d)
Fig. 1.8. Comparao de imagens obtidas a) com um microscpio ptico normal, b) com contraste de fase, c)
com contraste de Nomarski e d) de fundo escuro.
Vermelho
Filtro de emisso
Filtro de excitao
Verde
Espelho dicrico
Fonte luminosa
Objectiva
a) Espcime b)
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Com este tipo de microscpio pode detectar-se a presena de substncias que emitam luz
visvel quando irradiadas com luz ultra-violeta. Muitas substncias podem manifestar
fluorescncia natural, designada autofluorescncia. Outras h, porm, que, para se detectar a sua
presena, necessrio faz-las reagir com compostos fluorescentes (ou tornados fluorescentes
aps reaco), os fluorocromos. Neste caso, a fluorescncia induzida.
Detector
Imagem focada
Abertura confocal
Imagem desfocada
impedida de chegar ao
detector
Luz fluorescente emitida pelo espcime
Espcime
Focado
Desfocado
a) b)
Fig. 1.11. Comparao das imagens obtidas com a) microscpio de fluorescncia convencional e
b) microscopia confocal.
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Focagem
1. Coloque a preparao na platina, com a lamela virada para cima, e, com o auxlio dos
parafusos de movimento da sobre-platina, desloque o objecto a observar para o centro da
abertura da platina.
2. Comece por observar a preparao com a objectiva de menor ampliao. Com o auxlio dos
parafusos macromtricos aproxime, o mais possvel, a objectiva da lamela, tendo o cuidado de
evitar o contacto entre ambas. Para focar o objecto, proceda, de forma lenta, ao movimento
inverso, controlando a observao atravs da ocular. Logo que obtenha uma imagem
suficientemente ntida, rectifique a focagem com os parafusos micromtricos.
Alinhamento do Microscpio
1. Foque a preparao.
2. Feche o diafragma da fonte luminosa, de molde a observar um pequeno crculo.
3. Centre o crculo com os parafusos do condensador.
4. Desloque o condensador na vertical de molde a obter os bordos do diafragma, que
delimitam o crculo, perfeitamente focados.
5. No altere a posio do condensador para a objectiva alinhada. No decurso da observao,
ajuste a quantidade de luz abrindo ou fechando o diafragma do condensador.
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Fig. 1.12. Representao esquemtica da calibrao da ocular com auxlio de uma ocular e objectiva
micromtricas. M1 - escala (da objectiva micromtrica). Mx - escala da ocular micromtrica a calibrar.
Calibrao da ocular
1. Coloque a ocular micromtrica em posio no tubo do microscpio e instale a objectiva
micromtrica na platina do microscpio.
3. Rode a ocular micromtrica de molde a que as escalas da objectiva e da ocular fiquem
paralelas e se sobreponham parcialmente, Fig. 1.12.
4. Desloque a objectiva micromtrica para que o incio da graduao das duas escalas se
sobreponha (0 e 0,0), Fig. 1.12.
5. Tendo os zeros sobrepostos, verifique em que outro ponto do campo as duas escalas se
sobrepoem igualmente. No exemplo da Fig. 1.12, verifica-se que 70 divises da ocular
micromtrica correspondem exactamente a 0,4mm (= 400m) da objectiva micromtrica, i. e.,
1 graduao = 400m / 70 = 5,7m. Este valor s vlido para a objectiva utilizada, sendo pois
necessrio proceder calibrao para cada uma das outras objecticas.
6. Para a medio de um objecto desconhecido, determina-se primeiro o nmero de divises
(por ex. 4) e multiplica-se pelo valor micromtrico previamente determinado (por ex. 5,7), obtendo-
se a dimenso de 22,8m.
Exerccio
Com base na calibrao da ocular da Fig. 1.13a calcule o comprimento do estoma da
Fig. 1.13b.
a) b)
Fig. 1.13. a) Calibrao da ocular micromtrica (em cima) com auxlio de uma objectiva micromtrica (em
baixo). b) Medio do comprimento de um estoma com a ocular micromtrica.
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2. DIVERSIDADE CELULAR
As clulas so as unidades estruturais e funcionais de todos os seres vivos.
A sntese proteica, regulada pelos cidos nucleicos, foi, sem sombra de dvida, um
acontecimento crucial, que levou formao da primeira clula. Por outro lado, o aparecimento de
membranas semipermeveis possibilitou a compartimentao celular, tanto do ponto de vista
fsico como funcional. Um outro marco importante no processo evolutivo foi o DNA tomar o lugar
do RNA como material hereditrio.
Cr-se que todos os organismos e todas as clulas que os constituem tenham evoludo de um
ancestral comum. A evoluo poder-se- ter dado por dois processos:
1. Variao ao acaso da informao gentica que passou de um indivduo aos seus
descendentes;
2. Seleco da informao gentica que permitiu aos seus utentes a sobrevivncia e a
propagao.
Durante muitas centenas de anos, os bilogos classificaram os organismos vivos em apenas
dois grupos: animais e vegetais. Com o desenvolvimento dos microscpios, tornou-se evidente
que muitos organismos no se encaixavam bem nem no grupo dos animais, nem no grupo dos
vegetais. Por exemplo, no s as bactrias no podem ser consideradas plantas, como
organismos como as Euglenas apresentam caractersticas tanto de plantas como de animais.
Com efeito, muitos organismos unicelulares tm entre si mais caractersticas em comum, do que
com os animais ou as plantas. Este tipo de observaes levou criao de um sistema de
classificao, proposto por Whittaker em 1969, que contemplava 5 reinos (Procariotas: Reino
Monera; Eucariotas: Reino Protista, Reino Plantae, Reino Animalia, Reino Fungi). Este sistema de
classificao no inclui vrus, virides ou pries, j que no se tratam de formas de vida celulares.
Com a descoberta de tecnologias que permitiram a sequenciao e comparao da informao
gentica das clulas - nas dcadas de 1970-1980 - foi possvel estabelecer as relaes evolutivas
entre os organismos, ou seja, a sua filogenia, na forma de rvores filogenticas. Carl Woese foi
pioneiro no uso de RNA ribossomal (rRNA), existente em todos os tipos celulares, para medir a
divergncia evolutiva entre organismos. O principal resultado foi a descoberta da existncia de
duas categorias de procariotas fundamentalmente distintas, o que levou proposta em 1990 de
um sistema natural de classificao dos organismos em trs linhagens evolutivas / domnios:
Bacteria e Archaea (ambos com clulas procariticas) e Eukarya (eucariotas), Tabela 2.1, Fig.
2.1.
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Gram-positivas (GC )
Gram-positivas (GC )
Bactrias hipertermfilas
Hadobactrias
Cianobactrias
Origem Espiroquetas
da vida
Clamdeas
Proteobactrias
Origem das
Origem dos
mitocndrias
cloroplastos
Crenarchaeota
Euryarchaeota
Fig. 2.1. Sistema natural de classificao dos organismos em trs linhagens evolutivas (adaptado de Sadava
et al. 2012).
2.1. Procariotas
Os procariotas dos domnios Bacteria e Archaea, compreendem as clulas actuais com
caractersticas mais primitivas e, por conseguinte, menos complexas. Estes organismos no
apresentam compartimentao celular. Ao contrrio do que acontece com as clulas eucariotas, o
seu material gentico localiza-se num corpo irregular, nucleide, no rodeado por invlucro
nuclear.
Nos procariotas incluem-se as Archaea (termoacidfilas, metanognicas e halfitas) e Bacteria
(bactrias fotossintticas, saprfitas ou parasitas, cianobactrias e micoplasmas).
Os procariotas encontram-se nos mais diversos ambientes naturais. Apesar da sua
simplicidade, as espcies existentes so capazes de, virtualmente, metabolizar qualquer
composto bio-orgnico (acares simples, polissacridos, aminocidos, protenas, lpidos e
hidrocarbonetos). Muitos conseguem utilizar o CO2 e o N2 atmosfricos como fontes de carbono e
azoto, respectivamente. Estas caractersticas conferem aos procariotas uma enorme aptido para
explorar os diversos nichos ecolgicos. Por essa razo, so o tipo celular mais abundante
superfcie da terra e nos oceanos.
Apesar de serem frequentemente mencionadas como patognicos, s uma minoria das
espcies conhecidas so realmente responsveis por doenas. Muitas mais espcies tm um
papel positivo nas nossas vidas e na biosfera: participam nos processos digestivos dos animais,
no processamento do azoto e enxofre do solo, como decompositores, e tm ainda um papel
importante em muitos processos industriais e agrcolas.
Os procariotas apresentam formas muito diversas, mas a maioria das espcies mais
abundantes incluem-se em uma de trs categorias, Fig. 2.2:
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a) b) c)
d) e)
Fig. 2.2. Diferentes formas de procariotas, a) Coccus, b) Bacillus e c) Spirillus em microscopia de varrimento
e d) e e) em microscopia ptica.
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Cpsula
Parede celular Lamelas citoplasmticas
Membrana plasmtica
Ribossomas
Nucleide
Mesossoma Citosol
Fmbria
Corpo basal
Gancho Flagelo
Filamento
As Bacteria possuem uma parede celular que difere quimicamente da dos vegetais superiores
por possuir um peptidoglicano, tambm designado murena, mucopptido ou glicopptido. Esta
macromolcula que se encontra apenas nos procariotas, consiste em dois tipos pouco usuais de
acares (acetilglucosamina e cido acetilmurmico) ligados a pequenos pptidos. Os esqueletos
de polissacridos adjacentes mantm-se ligados por pequenas sequncias de aminocidos, Fig.
2.4. A composio da parede celular bacteriana est na base da classificao histoqumica das
bactrias em Gram-positivas e Gram-negativas.
Hans Christian Gram, bacteriologista Dinamarqus, desenvolveu, por volta de 1800, a
chamada tcnica de Gram que permite classificar as bactrias em um de dois grupos: Gram-
positivas ou Gram-negativas. A base qumica desta reaco permanece mal conhecida. Aps
fixao pelo calor as clulas so coradas com violeta de cristal e iodo, e depois sujeitas aco
de um solvente orgnico. As bactrias Gram-positivas, resistentes descolorao, mantm a
colorao azul-violeta, enquanto as Gram-negativas a perdem rapidamente. Seguidamente
efectua-se uma colorao com safranina para tornar visveis as Gram-negativas. A colorao
acumulada no interior da clula e no a nvel da parede celular. A natureza desta ltima parece de
algum modo impedir a remoo do corante violeta de cristal e iodo. A diferena pode ser
simplesmente devido espessura da parede das Gram-positivas ser muito superior das Gram-
negativas, retardando assim a remoo do corante. Por outro lado, a parede das Gram-positivas
tem uma maior percentagem de peptidoglicanos e apenas 1 - 4 % de lpidos, enquanto a parede
das Gram-negativas tem uma menor percentagem de peptidoglicanos e 11 - 22 % de lpidos. Os
micoplasmas, que no tm parede celular, e as Archaea, que no tm peptidoglicanos no so
corados pela reaco de Gram.
A capacidade de resistir descolorao pelo etanol ou acetona parece ser dependente da
idade das bactrias. Com efeito, verifica-se que enquanto algumas bactrias jovens se
comportam como Gram-positivas, as bactrias mais velhas da mesma espcie podem perder a
capacidade de reter a colorao, e portanto comportam-se como Gram-negativas. Como tal, a
reaco positiva tem mais valor do que a reaco negativa, j que esta ltima pode ser devida
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Exterior da clula
Porina
Peptidoglicanos
Membrana
Plasmtica
Fig. 2.4. Representao simplificada da composio da parede celular das bactrias a) Gram-positivas e
b) Gram-negativas.
2.1.1. Bacteria
As Bacteria constituem um grupo diverso, com cerca de 80 linhagens / filos / divises, que vai
dos organismos autotrficos quimiossintticos termfilos extremos, que oxidam o hidrognio ou
reduzem compostos com enxofre, a autotrficos fotossintticos, representados pelas
cianobactrias e pelas bactrias verdes e roxas. As cianobactrias sero as nicas referidas pela
sua importncia.
Cianobactrias
As Cianobactrias representam, actualmente, a maior via de entrada de carbono e azoto na
biosfera. Estes organismos so os mais auto-suficientes que existem na actualidade, podendo
viver em apenas ar e gua, fazendo apelo a mecanismos que parecem ter permanecido
constantes desde h cerca de 2700 milhes de anos. So tambm dos mais abundantes
organismos na Terra com uma biomassa estimada em cerca de mil milhes de toneladas (peso
fresco).
A diversidade morfolgica deste grupo muito grande e serve de base taxonomia.
Consideram-se em geral cinco grupos morfolgicos: (1) unicelulares, com diviso por fisso
binria/ bipartio; (2) unicelulares formando colnias, com formas e arranjo das clulas muito
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variados; (3) filamentos simples (tricomas), que podem diferenciar clulas designadas
heterocistos/ hetercitos; (4) filamentos simples, sem diferenciao de heterocistos; e
(5) filamentos com verdadeiras ramificaes. Estes agrupamentos morfolgicos correspondem em
geral a linhagens evolutivas distintas, com excepo das unicelulares que so muito
diversas / polifilticas. Em muitos casos existe uma bainha gelatinosa a envolver as clulas, ou os
filamentos (tricomas), facilmente visualizvel por montagem em tinta-da-china.
Ao contrrio das bactrias fotossintticas, as cianobactrias efectuam fotossntese aerbia,
isto , com libertao de oxignio, em que o CO2 fixado por formas de RuBisCO (Ribulose-
Bisfosfato Carboxilase Oxigenase) idnticas s presentes nos cloroplastos de clulas
eucariticas. No seu citoplasma, as cianobactrias possuem membranas citoplasmticas
idnticas aos tilacides onde existe sempre clorofila a - ligada aos dois tipos de centros de
reaco (fotossistemas I e II) - e dois tipos de complexos de antena com pigmentos acessrios.
Na maioria das vezes, estes so ficobilinas, principalmente ficocianina (azulada), e por vezes
tambm ficoeritrina (avermelhada), formando estruturas ganulares, os ficobilissomas, que se
encontram acoplados membrana externa dos tilacides, em contacto com as protenas e
citocromos transmembranares do fotossistema II (PS II->libertao de O2). Refira-se, a ttulo de
curiosidade, que o mar vermelho deve esta designao predominncia de cianobactrias com
ficoeritrinas do gnero filamentoso Trichodesmium que forma florescimentos superficiais muito
extensos e visveis. Em algumas cianobactrias no existem ficobilissomas e o pigmento
acessrio a clorofila b. Neste caso inclui-se, por exemplo, Prochlorococcus que uma
importante componente do picoplncton dos oceanos apesar de s ter sido descoberta em 1988.
Estima-se que Prochlorococcus produza cerca de 1/5 do total de oxignio atmosfrico. De realar
ainda a presena de uma substncia de reserva de natureza proteica, a cianoficina, exclusiva
deste grupo, e de amido cianofcio, semelhante ao glicognio dos animais e dos fungos.
Em alguns gneros filamentosos observa-se a presena de heterocistos. Os heterocistos so
clulas diferenciadas a partir de clulas vegetativas normais, de maiores dimenses e de parede
espessa que aparecem intercaladas, ou terminais, nos tricomas (filamentos). Estas clulas so as
responsveis pela fixao do azoto atmosfrico e a sua diferenciao desencadeada em
resposta concentraes baixas de azoto orgnico (no atmosfrico) no ambiente. A diferenciao
dos heterocistos um processo complexo, onde so activados e/ou desactivados milhares de
genes, e tem como principal resultado a sntese e acumulao de complexos enzimticos
designados nitrogenases que so responsveis pela reduo de azoto molecular (N2) em azoto
reactivo (NH3). A actividade das nitrogenases requer um ambiente com baixo teor em oxignio,
pelo que, durante a diferenciao dos heterocistos, os ficobilissomas e o fotossistema II acoplado,
responsveis pela formao de oxignio, so desactivados mas os fotossistemas I mantm-se
activos para formao de ATPs. Em algumas zonas da sia o arroz pode ser cultivado
continuamente sem adio de fertilizantes devido presena de cianobactrias nos arrozais.
Nesses locais, as cianobactrias, particularmente membros do gnero Anabaena, ocorrem em
associao com um feto aqutico a Azolla.
Quando as condies ambientais se tornam adversas formam-se muitas vezes endsporos, ou
acinetos, que permitem ao organismo sobreviver em condies de seca, calor ou frio, extremas.
Nas cianobactrias s se conhece reproduo assexuada por diviso ou por fragmentao,
neste ltimo caso em formas filamentosas. A fragmentao dos tricomas (filamentos) ocorre,
muitas vezes, ao nvel de clulas que realizam um processo de morte celular programada, as
necrdias. Os pequenos segmentos de clulas vivas, separados pelas clulas mortas, so
denominados hormognios, Fig. 2.5, e possuem capacidade de movimentao por deslizamento,
sendo foto- e quimiotrficos.
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a) b) c) d)
e) f)
2.1.2. Archaea
O domnio Archaea constitudo por dois filos, os Crenarcheota que incluem espcies
termoflicas e hipertermoflicas (Pyrolobus) e os Euryarcheota que incluem espcies
metanognicas, halfilas extremas e acidfilas extremas (Thermoplasma). Tidas inicialmente
como ocupantes exclusivos de ambientes hostis, sabe-se hoje as rqueas de ambientes no
extremos, apesar de pouco conhecidas, so tambm muito abundantes e provavelmente
constituem uma grande parte do picoplncton (organismos <1). Morfologicamente variveis, as
Archaea diferem das Bacteria na sequncia de bases no RNA ribossmico, na composio
lipdica da membrana plasmtica e na ausncia de peptidoglicanos na parede celular (ver Tabela
2.1).
2.2. Eucariotas
Um dos marcos mais importantes da evoluo, foi a transio das clulas procariotas para as
eucariotas, que se traduziu principalmente em: (i) estrutura celular mais complexa com
compartimentao intracelular, permitindo maior controlo dos processos celulares; (ii) incluso
dos cromossomas num desses compartimentos (ncleo), permitindo a separao entre
transcrio de genes e sntese proteica e maior complexidade e controlo da expresso gentica;
(iii) maior capacidade de recombinao gentica (meiose, cariogamia), potenciando maior aptido
evolutiva.
Muitas protenas e cidos nucleicos podem ser considerados como verdadeiros fsseis vivos,
no sentido em que a sua estrutura se tem mantido dinamicamente conservada ao longo do
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Guia Prtico de Biologia celular
Vida
Mitocndrias
Protistas
Protistas
Protistas
Protistas
Protistas
EUKARYA Animais
1300000 10 milhes 100 milhes
100000 1 2 milhes
Fungos
Fig. 2.6. Representao esquemtica da teoria da simbiose (adaptado de Sadava et al. 2012).
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(ii) Eukarya emergem de dentro dos Archaea, i.e., tm um ancestral comum com um sub-grupo
dos Archaea, e constituem um s domnio. Desta ltima hiptese resultam apenas dois domnios
primrios. Quanto ao momento da simbiose com a alfa-proteobactria (proto-mitocndria), os dois
modelos com mais suporte consideram ou que esta se deu muito cedo e directamente com um
rquea, dando posteriormente origem complexidade celular caracterstica eucaritica, ou, em
alternativa, que antes da endossimbiose ter ocorrido desenvolvimento significativo de
membranas intracelulares endgenas, incluindo eventualmente um proto-ncleo, e outras
estruturas celulares, num rquea progenitor que foi o ancestral da linhagem eucaritica. Os
defensores do primeiro modelo argumentam com as vantagens energticas para o proto-eucariota
de possuir uma mitocndria, enquanto os proponentes do segundo modelo do nfase
necessidade de o proto-eucaritica j possuir mecanismos celulares que possibilitassem a
fagocitose do endossimbionte. Na Figura 2.6 apresenta-se uma das hipteses actualmente em
debate, considerando-se o domnio Eukarya um linhagem irm de Archaea (partilham um
ancestral comum com excluso de Bacteria), sendo os 3 domnios monofilticos.
As clulas eucariotas so tambm nicas pelo facto de possurem um citoesqueleto formado
por filamentos de natureza proteica que d estrutura fsica ao citoplasma e desempenha papel
preponderante na gerao de correntes citoplasmticas.
As clulas eucariotas, ao contrrio das procariotas, possuem grande quantidade de DNA.
importante salientar que, por vezes, apenas 1 % do DNA nuclear transporta informao utilizvel
pela clula, o que tem levado alguns autores a considerar a hiptese dos restantes 99 % existirem
apenas para aumentar a massa nuclear. Segundo outra hiptese pode tratar-se de uma existncia
parastica; determinadas sequncias vo-se acumulando na clula ao longo dos anos, explorando
os mecanismos celulares para a sua prpria reproduo, sem lhe trazer qualquer benefcio.
Sabe-se, no entanto, que as pores de DNA nuclear que no codificam protenas
desempenham funes estruturais, condicionando a condensao de parte do material gentico,
e/ou funes reguladoras, ajudando a activar ou desactivar os genes que codificam as
protenas, tendo assim papel crucial no controlo de expresso gnica nas clulas eucariotas.
O sucesso da adaptao das bactrias aos diferentes ambientes foi tal que, actualmente,
estes organismos representam mais de metade da biomassa total do globo. Poder-se- ento
perguntar o que motivou o aparecimento dos organismos pluricelulares. Na realidade, estes
organismos utilizam, muitas vezes, recursos de difcil explorao para organismos unicelulares.
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Guia Prtico de Biologia celular
2.2.1. Protistas
Os protistas so um vasto grupo de eucariotas que incluem os ciliados, dinoflagelados,
apicomplexa, foraminferos, euglenfitos, diatomceas, algas castanhas, outras algas, 'fungos'
mucilaginosos e aquticos, etc. etc., Algas e Fungos mucilaginosos e aquticos. Os protistas
variam desde unicelulares microscpicos, coloniais at pluricelulares, os de grandes dimenses
com alguma complexidade (algas castanhas tipo kelp). So organismos heterotrficos ou
autotrficos, maioritariamente aerbicos, mas alguns anaerbicos, que na sua maioria
apresentam vida livre, embora se conheam formas de associao simbionte ou parastica. So
na sua maioria organismos aquticos, constituindo o plncton dos oceanos, lagos e rios.
Protozorios
A designao de Protozorios foi originalmente dada a organismos unicelulares com
caractersticas semelhantes a animais. A unicelularidade no significa, contudo, simplicidade e
muitos protozorios so estruturalmente complexos.
Rizpodes
Neste grupo incluem-se as amibas, organismos que podem atingir 0,6 mm de comprimento. As
amibas so incolores, de forma irregular e em constante mudana. Tudo indica que o seu
movimento resulta da alterao do estado fsico do citoplasma, passando de sol (fluido) a gel
(mais viscoso) e vice-versa. Para se alimentar, a amiba projecta pseudpodes que envolvem
pequenas partculas de alimento e gua. O material em seguida encaminhado para vacolos
digestivos, por um processo de endocitose, onde degradado, Fig. 2.7.
A amiba reage negativamente luz forte, a solues salinas concentradas, a diversos
produtos qumicos ou a objectos, como agulhas. A reproduo d-se por diviso binria.
Alguns membros deste grupo produzem uma cobertura calcificada com poros atravs dos
quais saem os pseudpodes.
a) b)
Ciliados
Os representantes deste grupo possuem clios que utilizam na locomoo ou na captura de
alimento. Apresentam formas diversas, caractersticas de cada espcie, Fig. 2.8.
Possuem pelo menos dois ncleos: um menor, o microncleo relacionado com o processo
22
Guia Prtico de Biologia Celular
a)
b)
Esporozorios
So dois grupos cujos representantes so na sua quase totalidade parasitas, pelo que
extremamente difcil encontrar formas de vida livre.
Flagelados
Os zologos incluem nos flagelados organismos como as Euglenas e Dinoflagelados por
possurem flagelos, manifestarem reaco a estmulos luminosos e possurem, ocasionalmente,
nutrio saprfita. A este grupo pertencem tambm organismos parasitas como, por exemplos o
Trypanosoma.
23
Guia Prtico de Biologia celular
Euglenides
Cerca de 1/3 dos 40 gneros de euglenas conhecidas tm cloroplastos com clorofila a, b e
carotenides. A Euglena e o Phacus so organismos desprovidos de parede celular. Subjacente
membrana plasmtica e formando com esta o periplasto, existe uma rede de natureza proteica
com 6 - 17 % de lpidos ou polissacridos. O periplasto pode ser rgido, como no Phacus, ou no,
como na Euglena. Estes gneros apresentam em comum um estigma ou mancha ocular que
recebe os estmulos luminosos, Fig. 2.9.
Os representantes deste grupo podem ser autotrficos ou heterotrficos. Algumas espcies
podem alterar a sua estratgia trfica, dependendo da iluminao e dos nutrientes disponveis. Os
zologos consideram-nos protozorios.
Dinoflagelados
Os dinoflagelados so um grupo de organismos unicelulares muito importantes no plncton
dos sistemas aquticos. Tm uma grande diversidade de estratgias trficas mas frequente
considerar que cerca de 50% das espcies so autotrficas. A maioria das espcies so de vida
livre mas h formas simbiontes, como as que ocorrem nas formaes de coral, e parasitas.
Possuem um revestimento celular muito caracterstico, o anfiesma, constitudo por um sistema de
membranas que inclui o plasmalema e um conjunto de vesculas comprimidas localizadas
imediatamente abaixo deste. As vesculas (alvolos) por vezes apresentam deposies de
celulose conferindo clula uma robustez semelhante aquela normalmente associada presena
da parede celular nas plantas. Os cloroplastos, quando presentes, resultam de um processo
endosimbitico complexo, sendo a composio em pigmentos dependente do grupo fotossinttico
que participa no processo. As formas autotrficas mais frequentes apresentam clorofila a e
clorofila c2 e o principal pigmento acessrio a peridinina que mascara o verde da clorofila
conferindo um tom acastanhado. Acumulam amido nos plastos e no hialoplasma. Possuem dois
flagelos desiguais, um longo, que se projecta posteriormente em relao direco do
deslocamento, e outro que, inserindo-se na mesma regio da clula, se dispe transversalmente
em torno do organismo, Fig. 2.10.
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Diatomceas
As Diatomceas so organismos de extrema importncia em sistemas aquticos pela sua
abundncia e diversidade. H formas planctnicas que ocorrem na massa de gua, e bentnicas,
vivendo neste caso associadas a diversos tipos de substratos orgnicos e inorgnicos. A parede
celular muito caracterstica, composta predominantemente por uma forma amorfa de slica
hidratada e uma pequena fraco de compostos orgnicos, sobretudo protenas. A parede das
diatomceas designa-se por frstula e comparvel, pela sua natureza e forma, a uma caixa de
Petri em vidro, Fig. 2.11.
Para alm das clorofilas a e c e do -caroteno, as diatomceas possuem tambm fucoxantina
(xantofila) que lhes confere, geralmente, uma colorao tpica castanho-dourado. Como
substncia de reserva possuem a laminarina, um polissacrido diferente do amido. Nos
cloroplastos apresentam ainda pirenides, estruturas de natureza proteica, onde existe RuBisCO
em elevada concentrao e funcionam mecanismos de concentrao de CO2 (semelhantes aos
carbozissomas das cianobactrias).
Os primeiros registos fsseis abundantes de diatomceas so de h 115Ma no Cretcico
Inferior. A acumulao fssil das suas paredes, ricas em silcio, originou os actuais depsitos de
diatomito ou terra de diatomceas. Conhecem-se hoje em dia vrios locais onde se acumulam
estes depsitos. Este material, semelhante a p, poroso e extremamente leve contm cerca de 6
bilies de frstulas de diatomceas por litro. Entre as suas vrias aplicaes, salienta-se a de
agente polidor de prata e outros metais, utilizado em pastas de dentes, para fabrico de tintas
reflectoras para auto-estradas, sinais de trnsito e ainda em matrculas de automveis de alguns
pases.
25
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Ndulo Rafe
central Ndulo
polar
Epivalva
Cinturas
conectivas Epivalva
Cinturas conectivas
a) Hipovalva b) Hipovalva
c) d)
Algas verdes
Na escala evolutiva, as algas surgem como os organismos eucariotas clorofilinos que mais
caractersticas de primitividade evidenciam, Fig. 2.12. Embora o grupo Algae tenha j sido
abandonado como categoria taxonmica e os seus representantes distribudos por vrias
Divises, possvel encontrar algumas caractersticas em comum, nomeadamente do ponto de
vista reprodutor:
1. Alguns indivduos, principalmente as algas unicelulares, podem comportar-se como clulas
sexuais ou gmetas, fundindo-se para formar o zigoto;
2. Os gmetas podem ser produzidos em gametngios unicelulares especializados ou em
gametngios pluricelulares em que todas as clulas so frteis;
3. Os esporos desenvolvem-se em estruturas unicelulares ou multicelulares (esporngios).
Embora nas bactrias se verifique j a associao colonial, nas algas verdes que se
encontram formas com graus de complexidade varivel, ilustrando o tipo de progresso que
provavelmente ocorreu na evoluo das plantas superiores e dos animais.
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a) b) c) d) e)
f) g) h) i) j)
l) m) n) o)
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Algas vermelhas
A maioria das algas vermelhas pluricelular e abundante em guas marinhas. Os seus
cloroplastos possuem clorofila a, carotenides, ficoeritrinas e ficocianinas. As paredes celulares
das algas vermelhas contm polissacridos mucilaginosos de interesse comercial (agar).
Algas castanhas
Todas as algas castanhas so pluricelulares, variando em dimenso de alguns centmetros a
aproximadamente 60m. Os cloroplastos possuem clorofila a e c, e fucoxantina (um pigmento
amarelo-acastanhado que ocorre s nas algas castanhas, nos dinoflagelados e nas diatomceas).
So comercialmente importantes pela produo de algina, um polissacrido que se acumula nas
paredes celulares e que pode representar at 40% do peso seco. A algina extremamente
importante do ponto de vista comercial, pela sua aplicao, entre outras, nas indstrias alimentar,
de papel, txtil, farmacutica e cosmtica, de materiais de limpeza e cervejeira. O iodo tambm
um elemento importante que se retira das algas castanhas, e pela elevada concentrao de azoto
e potssio so tambm utilizadas como fertilizantes. O Mar dos Sargaos deve o seu nome,
invaso das costas do Golfo do Mxico com a alga castanha Sargassum, aquando das
tempestades tropicais.
2.2.2. Fungos
Os verdadeiros fungos so filamentosos ou unicelulares e no possuem clulas mveis. Todos
produzem hifas e tm paredes celulares cujo constituinte dominante a quitina. So
maioritariamente organismos decompositores, responsveis por enormes percas econmicas por
doenas e /ou estragos em alimentos. Os lquenes resultam de uma associao entre um fungo e
uma alga (alga verde ou cianobactria), em que a alga fornece o alimento para ambos, enquanto
o fungo protege a alga das radiaes luminosas intensas, produz uma substncia que acelera a
fotossntese da alga e absorbe e retm gua e minerais para ambos.
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Guia Prtico de Biologia Celular
2.2.3. Animais
Todos os animais so eucariotas pluricelulares heterotrficos, sem parede celular, cloroplastos
ou pigmentos fotossintticos. A maioria capaz de se locomover, responde rapidamente a
estimulos e reproduz-se sexuadamente. Excepto nas formas mais simples, as clulas que
constituem os animais mostram uma diviso de funes em rgos especficos.
2.2.4. Plantas
Os membros do Reino Plantae apresentam uma grande diversidade e organizao estrutural.
Quase todos apresentam cticula a cobrir as partes areas e desenvolveram embries e tecidos
especficos para fotossntese, conduo, suporte, ligao e proteco. O ciclo de vida das plantas
alterna entre uma fase haplide gametoftica, e uma diplide, esporoftica. Muitas plantas so de
uma importncia econmica extrema para o Homem.
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3. A CLULA
Micelas
Pectina
Ca2+ Ca2+
Hemicelulose
Microfibrilha
Microfibrilha Extensina
de celulose
10 m
Fig. 3.1. Representao esquemtica do arranjo dos constituintes da parede celular primria.
30
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Fig. 3 2. Ilustrao do modo como a orientao das microfibrilhas de celulose da parede celular primria
determina a orientao do alongamento da clula.
Existem relativamente poucos tipos bsicos de clulas nas plantas superiores e todos eles so
facilmente distinguveis pela forma e estrutura da sua parede. Todas as clulas definitivas se
formam a partir de clulas com parede celular primria, por um processo de maturao que
envolve, em muitos casos, a deposio de novo material da parede.
Quando a clula atinge a sua forma definitiva, regista-se uma certa relaxao dos
componentes da parede, devido tenso a que foram sujeitos durante o perodo de crescimento.
A menor coeso dos diversos componentes compensada, quer pela deposio de novos
materiais na parede celular primria, quer, em muitos casos, pela deposio de novas camadas
de composio diversa, dando origem parede celular secundria. A deposio da parede celular
secundria ocorre entre a membrana plasmtica e a parede celular primria. Faz-se,
normalmente, em camadas sucessivas com orientao diversa, Fig. 3.3.
A forma e a composio da parede esto relacionadas com a funo da clula no tecido. No
floema, por exemplo, tecido responsvel pelo transporte dos produtos da fotossntese, sobretudo
a sacarose, das clulas fotossintticas para os restantes rgos da planta, a sua diferenciao
envolve a deposio de grande quantidade de celulose e hemiceluloses na parede. Por seu turno,
no xilema, tecido especializado no transporte de gua e ies da raiz para o resto da planta, as
clulas, de forma tubular, possuem parede celular secundria extremamente espessa e rica em
lenhina. J o colnquima, tecido vivo de suporte, localizado periferia dos rgos vegetais,
possui uma parede celular primria espessa, de natureza pectocelulsica, muito rica em gua,
Fig. 3.4.
31
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a) b)
Pontuao
a) b)
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Pontuao
Plasmodesmos Plasmodesmos
Fig. 3.6. Ilustrao da distribuio dos plasmodesmos numa parede celular sem e com pontuaes.
Lenhificao
A lenhina um heteropolmero de natureza fenlica que no forma microfibrilhas. Este
composto confere maior resistncia parede uma vez que substitui os componentes da matriz. A
lenhina pode impregnar total ou parcialmente as parede celular como, por exemplo, nas clulas
do esclernquima, do tecido esclerenquimatoso, ou nos vasos lenhosos, Fig. 3.7.
As clulas de parede lenhificada esto adaptadas a funes de suporte, graas s
propriedades mecnicas e resistncia das paredes reforadas, e a funes de conduo, que
so favorecidas pelo carcter hidrfobo da lenhina. A capacidade de elaborar paredes celulares
lenhificadas caracteriza as plantas vasculares ou Traquefitas. O reforo adicional fornecido pela
lenhina foi determinante para a aquisio do porte erecto e para a conquista do meio terrestre. Em
consequncia da impermeabilizao da parede celular, todas as clulas de paredes lenhificadas
so clulas mortas desprovidas de protoplasma. possvel distinguir, por mtodos histoqumicos,
clulas com parede celulsica de clulas com parede lenhificada. Fazendo uma colorao com
verde iodo e carmim aluminado, a parede celulsica surge corada de rosa enquanto a parede
lenhificada apresenta colorao verde. As lenhinas podem ser ainda postas em evidncia com
outros reagentes, entre os quais o floroglucinol, que reage com paredes lenhificadas dando uma
cor vermelha em meio cido, Fig. 3.7. As lenhinas absorvem os raios ultravioletas, a um
comprimento de onda entre 250 e 280nm e apresentam uma autofluorescncia amarela, Fig. 1.9b.
Paredes de Reserva
As sementes acumulam substncias que asseguram uma autonomia nutritiva para a
germinao, enquanto a planta ainda no fotossinttica. Essas substncias acumulam-se
preferencialmente no citoplasma ou nos plastos. Menos conhecido o facto de muitas plantas
acumularem, temporariamente, glcidos particulares que so depositados massivamente nas
paredes celulares, conduzindo sua hipertrofia, Fig. 3.8. Aquando da hidratao germinativa,
essas substncias so mobilizadas, e os produtos de hidrlise so exportados para as regies de
33
Guia Prtico de Biologia celular
a) b)
c) d)
Fig. 3.7. a) Representao esquemtica da parede celular lenhificada dos vasos xilmicos (v.a. - vasos com
espessamento anelar; v.e. - espiralado; v.ra. - raiado; v.re. - reticulado; v.p. - pontuado). b) Observao, em
microscopia ptica de vasos xilmicos corados com Floroglucinol e de paredes celulares celulsicas,
lenhificadas e suberificadas em cortes transversais de c) raiz e d) caule.
a) b)
As paredes celulares das clulas do albmen das palmeiras e de famlias como a das
Liliceas, Iridceas, Rubiceas e Umbelferas so particularmente ricas em manose. Estes
espessamentos tornam as sementes muito duras, como o caso das sementes de Phytelephas
macrocarpa, justamente apelidadas de marfim vegetal. As paredes celulares das clulas do
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Cutinizao e Cerificao
As clulas da epiderme possuem paredes celulares laterais e basal de natureza celulsica
mais ou menos delgada. Durante a diferenciao, a parede celular celulsica externa destas
clulas torna-se mais espessa e cobre-se por uma cutcula que constituda, essencialmente, por
cutina, um polmero insolvel, e por ceras, facilmente extradas por solventes orgnicos. A
superfcie da cutcula apresenta muitas vezes estrias orientadas de modo varivel, que
correspondem a pregueamentos da sua superfcie, Fig. 3.9b.
a) b)
c) d)
e) f) g)
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Guia Prtico de Biologia celular
corantes gerais de lpidos (Negro Sudo e Vermelho Sudo III). A sua espessura varivel,
relativamente delgada em rgos jovens (0,5 - 1 m), tornando-se mais espessa com a maturao
celular, podendo atingir 10 - 20 m na folha da oliveira e do loureiro.
A cutina um polmero de cidos gordos, que forma uma extensa rede superfcie do corpo
da planta, e que aparece frequentemente impregnada e coberta por ceras, Fig. 3.9 a, que
aumentam a impermeabilidade da epiderme. A acumulao das ceras muitas vezes to
abundante (5 g de cera por folha) que podem ser extradas e utilizadas comercialmente, como no
caso de Copernica cerifera.
Muitas clulas epidrmicas, designadas tricomas, podem sintetizar e acumular essncias
volteis. Os tricomas, lato sensu, so estruturas uni- ou pluricelulares, que tm nos vegetais
essencialmente dois tipos de funes: protectora (tricomas de cobertura) ou secretora (tricomas
glandulares), Fig. 3.9. Nestes ltimos, a essncia secretada , muitas vezes, acumulada,
temporariamente, entre a parede celular e a cutcula destacada, num espao designado espao
sub-cuticular. Por ruptura da cutcula liberta-se a essncia, que em seguida se evapora, Fig. 3.9 c
e d.
Mineralizao
A parede celular pode ser impregnada por carbonato de clcio [CO3Ca], oxalato de clcio
[(COO)2Ca] (ambos designados por calcificao) ou por slica (silicificao).
a) b)
c) d) e) f)
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calcrio que aparecem no interior da clula, fixos a uma excrescncia da parede. Observam-se,
com muita facilidade, na epiderme das folhas de Ficus elastica e de Humulus lupulus, Fig. 3.10.
A silicificao consiste na deposio de xido de silcio hidratado amorfo ou opalino [Si(OH)4].
As diatomceas representam um caso de silicificao parietal massiva. Um exemplo caracterstico
da silicificao nos vegetais superiores o dos tricomas de urtiga, Fig. 3.10. Neste caso, o reforo
apical silicioso permite que estes funcionem como minsculas seringas.
Suberificao
A suberificao consiste na deposio de camadas sucessivas de suberina na face interna da
parede celular, Fig. 3.11. Uma vez terminada a suberificao, e antes da morte da clula,
deposita-se uma camada de celulose. A suberina tem uma natureza qumica prxima da da
cutina, um polmero de steres de cidos gordos e de fenis.
A suberificao tem um papel protector e impermeabilizador. Podemos encontrar exemplos de
suberificao nas clulas da camada suberosa da rizoderme, e nas clulas da endoderme, Fig.
3.11. Tambm as clulas do sber, um tecido de crescimento secundrio, tm paredes celulares
suberificadas em maior ou menor grau. Como o sber constitui uma camada impermevel que
impossibilita as trocas gasosas, ela interrompida regularmente por lenticelas, constitudas por
um conjunto de clulas parenquimatosas arredondadas, com numerosos meatos entre si. A
suberificao pode ainda ocorrer em consequncia da destruio acidental da epiderme (feridas
ou picadas).
a) b)
c) d)
Esporoderme
A parede dos gros de plen e dos esporos , geralmente, constituda por duas camadas: uma
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Guia Prtico de Biologia celular
Integrina
a) b)
Fig. 3.13. a) Representao esquemtica dos diversos componentes da matriz extracelular animal e da sua
relao com a membrana plasmtica. b) Observao de tecido conjuntivo laxo em microscopia ptica.
O colagnio a principal protena estrutural da matriz extracelular animal que faz parte de uma
grande famlia de protenas com mais de 20 tipos diferentes (colagnios). Estas protenas
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Guia Prtico de Biologia Celular
caracterizam-se por formar hlices triplas em que 3 cadeias polipeptdicas, do mesmo tipo, se
enrolam umas nas outras, Fig. 314a. Na sequncia de aminocidos que constitui os colagnios, a
glicina ocorre sempre de 3 em 3 posies, sendo que, nas 2 intermdias, a prolina e a
hidroxiprolina so os aminocidos mais frequentes, Fig. 3.14b.
a) b)
Fig. 3.14. Representao esquemtica a) da hlice tripla de colagnio e b) da sequncia de aminocidos que
constituem a molcula de colagnio.
Intervalo
Ligao
cruzada
Hlice
tripla de
colagnio
a) b)
Fig. 3.15. a) Representao esquemtica da organizao das fibrilhas de colagnio. b) Observao das fibras
de colagnio em microscopia electrnica de transmisso.
Para alm das fibras de colagnio, a matriz extracelular animal contm, ainda, fibras elsticas,
particularmente abundantes em rgos que se expandem e contraem, como o caso dos
pulmes. Estas fibras so constitudas, principalmente, por uma protena, a elastina, que se
associa atravs de ligaes intercruzadas para formar uma rede. A rede de elastina funciona
como uma faixa elstica permitindo a expanso e a retraco do tecido ou rgo ao seu estado
inicial.
As protenas fibrosas estruturais da matriz extracelular (colagnio, elastina) esto envolvidas
numa rede gelificada constituda por polissacridos, denominados glicosaminoglicanos, e
proteoglicanos (GAGs), Fig. 3.16a. Dado que possuem grupos sulfato, os GAGs tm muitos
grupos aninicos negativamente pelo que, tal como as pectinas da parede celular vegetal, se
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Guia Prtico de Biologia celular
ligam a caties e retm gua, formando gis. Na sua grande maioria os GAGs esto ligados a
protenas formando os proteoglicanos.
Diversos proteoglicanos ligam-se ao hialuronano para formar complexos supramoleculares.
Exemplo disso o agrecano, o proteoglicano maioritrio da cartilagem, Fig.3.16b. Os complexos
de hialuronano/proteoglicanos, de grandes dimenses, acabam por ficar aprisionados nas fibras
de colagnio. Ao mesmo tempo, interagem com o prprio colagnio e com outras protenas da
matriz constituindo redes gelificadas.
As protenas adesivas constituem o 3 grupo de constituintes da matriz extracelular animal.
So responsveis pela ligao entre os diversos componentes da matriz e entre esta e a
superfcie das clulas. A fribonectina, as lamininas, a entactina, so exemplos de protenas
adesivas que possuem locais de ligao para o colagnio e para os GAGs, estabelecendo
ligaes cruzadas entre aqueles dois componentes da matriz extracelular, Fig. 3.13a. Algumas
dessas protenas adesivas possuem, ainda, locais de ligao a receptores da membrana
plasmtica, responsveis pela ligao das clulas matriz extracelular.
Agrecano
Hialuronano Agrecano
Sulfato de condroitina Sulfato de queratano
Protena
de ligao
cido Idurnico N-Acetilglucosamina
Sulfato de Heparano
a) b)
Tecido epitelial
Os epitlios so camadas de clulas que cobrem a superfcie do corpo e delimitam as suas
cavidades internas tais como os pulmes e os intestinos.
As clulas podem ser colunares (mais altas que largas), pavimentosas (achatadas) ou cbicas.
Os tecidos epiteliais podem ser simples, estratificados ou pseudo-estratificados, Fig. 3.17.
Tratando-se de tecidos de revestimento e proteco, as suas clulas no apresentam, regra
geral, matriz extracelular na zona de justaposio.
40
Guia Prtico de Biologia Celular
a) b) c)
d) e) f)
Fig. 3.17. Representao esquemtica de diversos tipos de epitlios. a) Escamoso simples. b) Cuboidal
simples. c) Colunar simples. d) Escamoso estratificado. e) Cuboidal estratificado. f) Colunar pseudo-
estratificado.
Tecido conjuntivo
Constitui um grupo de tecidos, muito diversificado, com funes de armazenamento (tecido
adiposo), de suporte mecnico (tecido sseo, cartilagem) ou de ligao entre outros tecidos
(tecido conjuntivo laxo). Frequentemente, o tecido conjuntivo surge logo abaixo de tecido epitelial,
Fig. 3.18.
Tecido
conjuntivo laxo
Tecido epitelial
colunar simples
Fig. 3.18. Representao esquemtica da frequente localizao do tecido conjuntivo, relativamente ao tecido
epitelial.
O tecido conjuntivo caracterizado, na maioria dos casos, por ser constitudo por poucas
clulas num grande volume de matriz extracelular, a qual constituda por diversos tipos de fibras
embebidas numa substncia fundamental, Fig. 3.19. A mais abundante destas fibras o
colagnio, uma protena que constitui cerca de 1/3 das protenas do corpo humano. A elastina
outra protena abundante na matriz extracelular de clulas de alguns tecidos conjuntivos.
Dependendo do tipo de tecido conjuntivo, os componentes predominantes da matriz
extracelular so diversos. No tecido conjuntivo laxo, a matriz extracelular rica em fibras de
colagnio e de elastina, embebidas numa rede polissacardica. Neste tipo de tecido, as clulas
predominantes so os fibroblastos, que produzem as fibras e os componentes da substncia
fundamental, Fig. 3.19a. O tecido cartilagneo caracterizado por uma matriz extracelular em que
predomina a rede polissacardica gelificada, composta por glicosaminoglicanos e proteoglicanos.
Os condrcitos so clulas facilmente observveis em lacunas dispersas na matriz extracelular,
41
Guia Prtico de Biologia celular
Fig. 3.19b. No caso do tecido sseo, a matriz extracelular rgida devido deposio de fosfato
de clcio. Os ostecitos so as clulas que se destacam, Fig. 3.19c.
a) b)
Matriz
Fibra
gelificada
Fibroblasto
Condrcito
Rede Lacuna
gelificada
Eosinfilos Basfilos
Neutrfilos
Ostecito
Matriz
Linfcitos Plaquetas
c) Moncitos Eritrcitos
d)
Fig. 3.19. Representao esquemtica de diversos tipos de tecido conjuntivo. a) Conjuntivo laxo.
b) Cartilagneo. c) sseo. d) Sanguneo.
Tecido nervoso
O tecido nervoso apresenta uma matriz extracelular bem desenvolvida, onde se encontram
dispersos dois tipos bsicos de clulas, Fig. 3.20. Os neurnios, envolvidos na conduo do
impulso nervoso, so o principal tipo de clulas deste tecido e apresentam prolongamentos, os
axnios, que podem atingir mais de 1 metro de comprimento. O outro tipo de clulas so clulas
da glia, ou neuroglias, com funo de suporte e proteco dos neurnios.
Extenses
citoplasmticas
Corpo celular
do neurnio
Clula da glia
42
Guia Prtico de Biologia Celular
Tecido muscular
O tecido muscular pode ser de 2 tipos: liso e estriado. As clulas do msculo liso so
alongadas e finas, Fig. 3.21a, e encontram-se geralmente nas paredes de rgos tubulares tais
como os intestino e os vasos sanguneos. As clulas musculares lisas contraem-se lentamente e
so capazes de manter o estado de contraco durante um longo perodo de tempo.
Clula muscular
Ncleos
Ncleo
a) b)
Fibra muscular
Ncleos
c)
Fig. 3.21. Representao esquemtica de tecido muscular. a) Liso. b) Estriado cardaco. c) Estriado
esqueltico.
Existem dois tipos de msculo estriado, o cardaco e o esqueltico, Fig. 3.21b, c. O msculo
cardaco constitui as paredes das cavidades do corao. constitudo por clulas ramificadas,
ligadas entre si, e a sua contraco automtica ritmada leva ao batimento cardaco. Cada
msculo esqueltico um feixe de centenas a milhares de fibras, sendo cada fibra uma clula
gigante, com muitos ncleos (sinccio), resultante da fuso de vrias clulas.
43
Guia Prtico de Biologia celular
Fig. 3.22. Representao esquemtica tridimensional de uma seco da membrana plasmtica (tambm
designada de plasmalema ou membrana celular).
Para assegurar o seu metabolismo, uma clula viva tem necessidade de trocar substncias
com o meio exterior, incluindo outras clulas. Essas trocas fazem-se atravs da membrana
plasmtica, que separa o meio intracelular do meio extracelular.
O transporte das mais diversas substncias pode ser determinado por fenmenos de difuso.
Neste caso, trata-se de transporte passivo, em que o movimento das molculas de gua e do
soluto determinado pela diferena de concentrao entre os meios intra- e extracelulares, i.e.
pelo gradiente de concentrao, ou devido existncia de potenciais de membrana, i.e. pelo
gradiente electroqumico.
As molculas de gua esto em constante movimento atravs da membrana plasmtica. Esse
movimento no se traduz em alteraes visveis da forma ou do tamanho da clula devido ao
fluxo ser o mesmo em ambas as direces. Quando a concentrao de um qualquer soluto difere,
no interior e no exterior da clula, o fluxo da gua direccionado no sentido da maior
concentrao de soluto podendo, em consequncia disso, a clula contrair-se ou dilatar-se,
consoante os casos. Se da membrana plasmtica permevel s molculas do soluto, ento este
difunde-se, sendo o seu fluxo inverso ao do da gua.
Existem formas de transporte que no podem ser explicados por simples processos de
difuso. Nesses casos intervm transportadores especficos que tanto promovem o transporte a
favor de gradientes de concentrao, difuso facilitada, como contra esses gradientes. Quando o
transporte efectuado contra gradientes de concentrao, transporte activo, a clula tem
necessidade de recorrer a molculas de elevado potencial qumico como, por exemplo, o ATP.
A gua o constituinte essencial da clula, representando 70 - 90 % da massa total da
componente citoplasmtica. O teor em gua da clula vegetal pode variar muito com o estdio
fisiolgico da planta ou com as condies hdricas do meio. No entanto, o grau de hidratao do
hialoplasma varia muito pouco. Com efeito, a perda e a acumulao de gua verifica-se ao nvel
dos vacolos, como pode ser comprovado pelos fenmenos de plasmlise e de turgescncia, Fig.
44
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3.23. Quando uma clula colocada num meio com tonicidade superior do fluido vacuolar (meio
hipertnico) a gua tende a sair do vacolo, conduzindo diminuio do seu volume, e
retraco do citoplasma. Este fenmeno, designado plasmlise, reversvel, por desplasmlise,
se o meio onde se encontram as clulas for substitudo por uma soluo hipotnica. Neste caso, a
tonicidade do meio inferior do fluido vacuolar e, como tal, a gua tende a entrar para os
vacolos, levando a um aumento do seu volume e pressionando o hialoplasma contra a parede
celular. A clula diz-se, nesse caso, trgida.
a)
b) c)
N CH 3
(CH 3 )2 N N+ NH 2
d) H
Fig. 3.23. a) - c) Resposta da clula vegetal (clula trgida, incio de plasmlise convexa e plasmlise
cncava / convexa com trabculas citoplasmticas) s alteraes da tonacidade do meio extracelular. d)
Vermelho neutro.
45
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vacolo. Esse vacolo pode ser atravessado por trabculas citoplasmticas e, muitas vezes, o
hialoplasma aparece comprimido numa pequena faixa, entre o tonoplasto e a parede celular.
O fluido vacuolar essencialmente constitudo por gua contendo em soluo ou suspenso
diversas substncias. O vacolo pode armazenar muitos tipos de compostos, em particular,
substncias potencialmente nefastas para a clula quando em concentraes elevadas no resto
do citoplasma.
a)
b)
Fig. 3.25. a) Representao esquemtica da evoluo vacuolar numa raiz. b) Representao do aspecto
celular da evoluo vacuolar.
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Sais minerais
A acumulao de nitratos, em particular nitrato de potssio, fosfatos e iodetos comum em
certas algas como Fucus e Laminaria.
Substncias orgnicas
Entre as substncias orgnicas acumuladas no vacolo encontram-se os cidos orgnicos
(cido mlico na ma, cido ctrico no limo, cido oxlico nas azedas), pigmentos, coumarinas,
protenas, taninos, aminocidos, alcalides (morfina e cafena) e glcidos (glucose e frutose em
diversos frutos, sacarose na cana de acar e na beterraba sacarina, inulina nas razes da
chicria), Fig. 3.26a.
A inulina, extrada pela primeira vez da Inula helenium, um glcido de reserva acumulado
nos rgos subterrneos, em particular das plantas da famlia das Compostas e das
Campanulceas, muitas vezes at 15 % do seu peso seco. A inulina constituda por vrias
unidades de frutofuranose unidas por ligaes (2-1) com um resduo de sacarose terminal, Fig.
3.26a. Enquanto a clula est viva, este glcido existe em soluo coloidal no interior do vacolo.
Por desidratao artificial, numa srie ascendente de lcoois, ocorre a sua cristalizao de
encontro parede celular. Formam-se numerosos cristais que se agregam, dando origem a uma
estrutura em forma de leque, Fig. 3.26b e c.
A acumulao de protenas no vacolo tambm frequente, em particular sob a forma de
corpos proteicos entre os quais se salientam os gros de aleurona. Em algumas sementes
fortemente desidratadas, as clulas do tecido de reserva no apresentam vacolos de contedo
lquido. Nas sementes jovens e ainda no desidratadas, o parnquima de reserva formado por
clulas com grandes vacolos. Durante a maturao, a desidratao dos tecidos est associada
fragmentao dos vacolos noutros mais numerosos e de menores dimenses. Durante esta fase
so a lanadas substncias de reserva, essencialmente protenas. Numa fase final, o contedo
dos vacolos solidifica, constituindo-se os gros de aleurona. No caso da semente de rcino, estes
gros, bastante volumosos, apresentam uma substncia fundamental contendo um ou dois
globides (constitudos essencialmente por um sal derivado do hexafosfato de inositol) e uma
importante incluso proteica, de contorno poligonal, o cristalide, Fig. 3.26d. O cristalide e a
substncia fundamental so essencialmente constitudos por protena.
Durante a germinao, as clulas da semente sofrem uma re-hidratao. Os gros de
aleurona aumentam de volume e dissolvem-se por aco de enzimas. Os vacolos assim
formados aumentam de tamanho, fundem-se e do origem a um nico vacolo de grandes
dimenses. Durante a germinao o vacuoma evolui de forma inversa observada durante a
maturao, Fig. 3.26d.
Por vezes, o fluido vacuolar corado devido presena de pigmentos, genericamente
denominados antocianinas. Numerosas flores e frutos assim como folhas de certas plantas
ornamentais, devem a sua cor presena das antocianinas. As antocianinas possuem dois
ncleos benznicos ligados a um anel heterocclico central, contendo oxignio, Fig. 3.27. A cor
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HOH 2C
OH
H H
HO OH H
H OH
O
HOH 2C O
H H HO CH 2
OH H
O
HOH 2C O
H H HO CH
2
OH H
O
HOH 2C O
H H HO CH 2
OH H
a) b) c)
Vacolos
Gro de aleurona
Globide
Cristalide
Substncia
d)
fundamental
e) f)
Fig. 3.26. a) Frmula da inulina. b) e c) Formao dos esferocristais de inulina por desidratao em lcool do
contedo vacuolar. d) Formao de gros de aleurona durante a fase de maturao da semente (da
esquerda para a direita) e sua hidratao durante a fase de germinao (da direita para a esquerda).
e) e f) Observao dos gros de aleurona em microscopia ptica.
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2' 3'
8 1 Metilao
O 1'
7 B 4' Vermelho
2
A OCH 3
6 3 6' 5'
5 4 B OH B OH
Estrutura base
Pelargonidina Peonidina
Hidroxilao
O OCH 3
B OH
A B OH
B OH
OH OH
O Petunidina
Cianidina
Flavonis
OH OCH 3
O
B B OH B OH
A
OH OCH 3
O Delfinidina Malvidina
O Gluc
OH
-H+
OH
HO O+
HO O
HO -H+ O -H+ HO
O O
OH HO
O
O Gluc OH O Gluc
O OH
OH
OH (Gluc)
Pelargonidina-3-Glucsido
+
-H
+H2O
OH OH
O
HO OH HO
O OH
O Gluc O Gluc
OH OH
d) e)
Fig. 3.27. a) Estrutura base das antocianinas. b) Relao entre a cor das antocianinas e o grau de
hidroxilao e metilao do anel B. c) Variao estrutural das antocianinas em soluo aquosa a diferentes
valores de pH. d) e e) Observao de vacolos corados em microscopia ptica.
Oxalato de clcio
O cido oxlico um cido dicarboxlico, Fig. 3.28. No vacolo, este cido pode formar
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a) b) c) d) e)
f) g) h)
Fig. 3.28. a) Converso do cido oxlico em oxalato de clcio. b) h) Cristais de oxalato de clcio: b) e f)
cristal isolado tetradrico, c) e g) drusa, d) e h) feixe de rfides e e) pequenos cristais dispersos.
Os diferentes tipos de substncias que podem ser acumuladas no vacolo, acima descritas,
podem ainda ser agrupadas segundo derivam do metabolismo primrio da planta, i.e. so
intermedirios normais do metabolismo celular resguardados temporria ou permanentemente do
hialoplasma (cido mlico, cido oxlico cido ctrico, cido tartrico, cido ascrbico, sacarose,
inulina, aminocidos e protenas), ou do metabolismo secundrio, i.e. de vias biossintticas mais
especializadas (antocianinas, coumarinas, taninos, alcalides). Este ltimo grupo de substncias,
tido durante muito tempo como desperdcios fisiolgicos, actualmente considerado como um
conjunto de compostos que intervm duma maneira subtil nos equilbrios naturais e nas relaes
planta / animal e planta / patogneos, quer como agentes de atraco, quer como repelentes e
meios de defesa.
51
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3.6. Plastos
Como se referiu anteriormente, so basicamente duas as caractersticas que diferenciam as
clulas vegetais das clulas animais: a presena de parede celular e a capacidade de realizar a
fotossntese.
A nutrio vegetal est dependente da produo de compostos orgnicos durante a
fotossntese. Nos vegetais superiores esta funo ocorre nos cloroplastos. Os produtos da
fotossntese podem ser utilizados directamente em diversos processos biossintticos,
armazenados sob a forma de amido, um polissacrido osmoticamente inerte, ou convertidos em
sacarose, um acar de baixo peso molecular, que transportada at outros tecidos da planta,
consoante as suas necessidade metablicas.
Os cloroplastos fazem parte de um grupo mais vasto de organitos, intimamente relacionados,
os plastos. Possuem como caractersticas comuns, dimenso superior das mitocndrias,
invlucro constitudo por duas membranas e genoma prprio. De acordo com a colorao que
manifestam, possvel distinguir cloroplastos (verdes), cromoplastos (amarelos, alaranjados ou
vermelhos) e amiloplastos e leucoplastos (incolores). Os dois primeiros tipos so muitas vezes
referenciados como cromatforos.
Todos os plastos evoluem a partir de proplastos, organitos relativamente pequenos, que se
encontram nas clulas meristemticas. Estes proplastos desenvolvem-se de acordo com as
necessidades e condies ambientais de cada clula em diferenciao. Se a clula se desenvolve
na escurido, os proplastos evoluem para estioplastos, organitos com arranjo membranar interno
semicristalino e com protoclorofilida, um precursor amarelo da clorofila. Se expostos luz, os
estioplastos originam cloroplastos, por converso da protoclorofilida em clorofila bem como pela
sntese de mais componente membranar, pigmentos, enzimas e componentes da cadeia de
transporte electrnico.
3.6.1. Cloroplastos
Os cloroplastos so organitos citoplasmticos existentes nas clulas vegetais fotossintticas,
Fig. 3.29. Nas clulas dos vegetais superiores o seu nmero varivel. Apresentam-se, em geral,
sob a forma de discos lenticulares de 3 - 1 0 m de dimetro e 1 - 2 m de espessura. So
facilmente observados ao microscpio ptico devido presena de clorofila que lhes confere a
colorao verde caracterstica.
As clorofilas a e b e os carotenides (carotenos e xantofilas) so os pigmentos mais
importantes nos cloroplastos dos vegetais superiores. Estes pigmentos apresentam espectros de
absoro caractersticos e so os responsveis pela absoro de energia luminosa, que fazem
graas presena de ligaes duplas conjugadas. Do ponto de vista qumico, as clorofilas so
complexos porfirino-magnesianos. Por seu turno, os carotenides so pigmentos de natureza
terpnica, lipossolveis e de cor amarela, laranja ou vermelha.
Nas algas castanhas, a cor verde, devida s clorofilas a e c, est mascarada por um caroteno
de cor amarelo-acastanhada, a fucoxantina. As algas vermelhas e azuis possuem, alm dos
carotenides, clorofila a e pigmentos de natureza proteica, as ficobilinas (ficoeritrina, ficocianina e
aloficocianina). Outros tipos de clorofila, nomeadamente c, d e e, existem apenas em alguns
grupos vegetais. Por seu turno, a bacterioclorofila encontra-se apenas nas bactrias autotrficas.
Em microscopia electrnica, Fig. 3.30, observa-se o invlucro cloroplastidial constitudo por
duas membranas: a membrana externa e a membrana interna. Em alguns casos, a membrana
interna invagina-se originando uma rede complexa de tbulos, o retculo perifrico.
O invlucro cloroplastidial delimita o estroma onde se encontram diversos sculos achatados
de natureza membranar, os tilacides.
52
Guia Prtico de Biologia Celular
a) b)
Fig. 3.29. a) Distribuio dos cloroplastos numa folha de um vegetal superior. b) Observao de cloroplastos
numa folha de Elodea.
Os tilacides esto, regra geral, orientados segundo o eixo maior do cloroplasto. Em termos
anatmicos, distinguem-se dois tipos de tilacides: os tilacides dos grana (discos achatados e
empilhados uns sobre os outros que correspondem, em microscopia ptica, s zonas de verde
mais intenso) e tilacides do estroma (membranas tilacoidais polimrficas que aparecem no
estroma, unindo entre si tilacides de grana diferentes ou de um mesmo granum, Fig. 3.30.
a) b)
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Gro de amido
Pirenide
Cloroplasto
A) B) C) D) E)
Fig. 3.31. Diversidade morfolgica dos cloroplastos das algas: a) Spirogyra sp., b) Pleurosigma angulatum,
c) Odegonium sp., d) Zygnema sp., e) Mougeotia sp., com pormenor de pirenide.
3.6.2. Leucoplastos
Os leucoplastos (plastos incolores) existem em rgos vegetativos expostos luz (epiderme e
tricomas glandulares) e em rgos subterrneos (razes, bolbos e tubrculos), Fig. 3.32.
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3.6.3. Amiloplastos
Os amiloplastos existem sobretudo em caules subterrneos, razes tuberculosas e sementes.
Dizem-se polimrficos dadas as diferentes formas que assumem, em funo do nmero e volume
dos gros de amido acumulados: lenticulares, piriformes, cnicos ou poligonais. Tambm a sua
dimenso pode variar de 1-175 m. Este tipo de plastos acumula grande quantidade de amido,
no possui pigmentos e a sua ultrastrutura muito simples. O estroma reduz-se a uma estreita
faixa, comprimida entre os gros de amido e o invlucro plastidial, e as estruturas membranares
so raras.
a) b) c) d) e) f)
g) h)
Fig. 3.33. Representao esquemtica de diversos tipos de gros de amido simples a) do trigo, b) da batata,
c) feijo, d) da aveia (gros simples associados); semi-composto e) da batata (estrias comuns) e composto f)
da batata. g) e h) Observao de gros de amido em microscopia ptica.
A deposio do amido faz-se em camadas sucessivas em torno de um ponto, o hilo, Fig. 3.33.
Em determinadas circunstncias, a deposio do amido to elevada que este acaba por ocupar
todo o plasto.
As estrias mais ou menos concntricas, que se observam em torno do hilo dos gros de amido
de algumas espcies, devem-se deposio de amilose e amilopectina. Ambas so
polissacridos com ligaes (1-4) mas com caractersticas fisco-qumicas diferentes): enquanto
a amilose um polmero linear solvel em gua quente, a amilopectina um polmero ramificado
e insolvel. A proporo entre estes dois constituintes depende do tecido e da espcie em estudo
(por exemplo, a amilose representa 16 % nos gros de amido da banana, 20 % na batata, 25 % no
trigo e 50 % em algumas variedades de pera), e determina a tonalidade apresentada quando
corados com o reagente de Lugol.
3.6.4. Cromoplastos
A colorao dos cromoplastos deve-se presena de xantofilas (amarelo), carotenos (laranja)
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e/ou licopenos (vermelho). Estes pigmentos existem no estroma sob a forma de gotculas ou de
estruturas cristalinas. O significado biolgico destes plastos mal conhecido.
Os cromoplastos so observados em clulas epidrmicas de ptalas de algumas flores
(gladolos, amores-perfeitos, chagas, tlipas, calndulas, entre outros), no pericarpo de alguns
frutos (tomate, fruto da roseira, entre outros) e em algumas razes como, por exemplo, a da
cenoura, Fig. 3.34.
Do ponto de vista da microscopia ptica, possvel distinguir dois tipos de cromoplastos:
a) fibrilhares, em que os pigmentos (carotenos, licopenos) esto integrados em estruturas
fibrilhares e b) globulares, em que os pigmentos (xantofilas) esto incorporados em gotculas
lipdicas dispersas no estroma.
a) b) c) d) e)
f) g)
Fig. 3.34. Representao esquemtica de diferentes tipos de cromoplastos. a) Rosa canina, b) Calendula
vulgaris, c) Forsythia suspensa, d) Gladiolus sp., e) Viola tricolor. f) e g) observao de cromoplastos em
microscopia ptica.
3.6.5. Proteoplastos
Este tipo de plastos, tambm designados aleuroplastos ou proteinoplastos, pouco frequente.
Observam-se no saco embrionrio de algumas espcies e no parnquima radicular de algumas
orqudeas. As protenas acumulam-se no estroma sob a forma de corpos cristalinos, de feixes ou
fibrilhas.
3.6.6. Oleoplastos
Tambm designados por elaioplastos, este tipo de plastos ocorre com pouca frequncia.
Observam-se sobretudo em clulas epidrmicas. Acumulam lpidos no estroma sob a forma de
plastoglbulos ou gotculas lipdicas.
3.7. Ncleo
O ncleo a unidade estrutural e funcional de importncia vital para a clula, responsvel
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1 2
a) b)
Fig. 3.35. a) Representao esquemtica do ncleo interfsico. b) 1-2 Ncleo interfsico observado em
microscopia electrnica de transmisso.
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acidfilas).
O tempo que medeia duas divises celulares sucessivas designa-se interfase. Durante este
perodo, o ncleo, ncleo interfsico, aparentemente em repouso, controla a sntese proteica, a
gliclise, a sntese de ATP, e outros processos vitais. Pouco tempo antes da diviso celular, o
ncleo assegura a duplicao da informao hereditria, promovendo a sntese de novo DNA. O
controlo da actividade celular deve-se transmisso, para o citoplasma, da informao contida no
DNA, por intermdio do RNA mensageiro.
G2
Profase
Metafase
S Mitose
Anafase Fase M
Telofase
G1
Citocinse
A maior parte do ciclo preenchida pela interfase, delimitada pelo final de uma diviso e pelo
incio da seguinte. A durao desta fase varia em funo da natureza e condies fisiolgicas da
clula: as clulas intestinais dividem-se duas vezes por dia, enquanto as clulas hepticas uma a
duas vezes por ano. A interfase pode ser dividida nos seguintes perodos: G1, S e G2 (G de "gap"
= intervalo, S de sntese), Fig. 3.36.
O perodo G1 o que sucede a uma mitose, sendo a sua durao varivel de clula para
clula. Neste perodo, enquanto se verifica um aumento significativo do volume do citoplasma, a
quantidade de DNA permanece constante. Ao mesmo tempo os vrios organitos aumentam de
nmero. No final da fase G1 a clula pode entrar em fase G0 (diferenciao celular) ou na fase S
(proliferao celular).
No perodo S, a totalidade do DNA nuclear replicada.
No perodo G2, o ncleo e a clula preparam-se para entrar em diviso: dividem-se as
mitocndrias e outros organitos e forma-se o fuso acromtico.
3.7.2. Mitose
Pela mitose formam-se dois ncleos filhos com o mesmo nmero de cromossomas do ncleo
original e morfolgica e geneticamente equivalentes entre si. Por mitose e citocinese (diviso
celular) os organismos crescem por aumento do nmero de clulas e reparam tecidos
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danificados, substituindo clulas feridas ou mortas. No individuo adulto, estima-se que 25 milhes
de clulas por segundo esto em diviso. Estas clulas destinam-se a substituir clulas velhas e
mortas. Os eritrcitos velhos, por exemplo, so renovados a uma velocidade de 100 milhes/min.
Nas plantas, a diviso nuclear e celular ocorre em reas especficas de clulas embrionrias,
meristemas, localizados nas extremidades de caules e razes e no cmbio. Nas clulas animais
possvel observar diferentes estdios de mitose em embries.
Durante a diviso nuclear ou mitose, Fig. 3.37, 3.39, regista-se uma alterao progressiva da
estrutura e morfologia dos cromossomas. Embora a mitose seja um processo contnuo, ela
dividida, por convenincia, em quatro etapas: profase, metafase, anafase e telofase.
A durao da mitose varia com o tecido e organismo. Contudo, normalmente a profase o
processo mais longo e a anafase o mais curto. Numa raz os perodos de tempo so,
normalmente: profase 1-2h, metafase 5-15min, anafase 2-10min, e telofase 10-30min. A interfase
dura normalmente 12-30h.
a) b)
c) d)
e)
Profase
caracterizada pela condensao dos cromossomas, o desaparecimento dos nuclolos e do
invlucro nuclear e formao dos microtbulos do fuso acromtico. Se no perodo que antecede a
profase a clula apresenta centrolos, estes dividem-se e deslocam-se para os plos logo que o
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Guia Prtico de Biologia celular
Metafase
Na metafase, os centrmeros dos cromossomas esto ligados a fibras do fuso e alinhados ao
longo da placa celular. Os centrmeros so duplicados e cada cromatdeo converte-se num
cromossoma individualizado. Cada um dos cromossomas, assim formados, est ligado a uma
fibra do fuso fixa a um dos plos.
Anafase
O incio da anafase caracterizada pela ascenso dos cromossomas para os plos. nesta
fase que substncias como a colchicina, que interferem na formao e funo dos microtbulos,
inibem a mitose. Sem microtbulos para afastar os cromossomas em direces diametralmente
opostas na clula, o ncleo no se pode dividir em dois. Contudo, os centrmeros separam-se,
permitindo a separao dos cromatdeos e, consequentemente a duplicao do nmero de
cromossomas na clula.
Durante a anafase tem incio um processo denominado citocinese, que divide a clula em
duas.
Telofase
Na fase final da mitose, ou seja, na telofase, os cromossomas atingem os plos do fuso
acromtico ao mesmo tempo que se inicia o seu processo de descondensao. Durante a
telofase reaparece o nuclolo bem como o invlucro nuclear.
Embora a citocinese seja um processo distinto do da diviso nuclear ela muitas vezes com
ele sncrono, tornando-se mais evidente no final da telofase. Este processo decorre de modo
diferente em clulas animais e vegetais. Nas clulas animais observa-se a formao de uma
depresso na zona mediana da clula que vai aprofundando cada vez mais, at que as clulas
acabem por se separar. Nas clulas vegetais a formao da nova parede celular comea na zona
mediana da clula e vai crescendo para as extremidades opostas, at encontrar as paredes
laterais da clula me. A formao da nova parede celular comea com a construo do seu
precursor, a placa celular. O primeiro sinal da formao da placa celular comea no final da
anafase incio da telofase, com o aparecimento do fragmoplasto, na zona mediana da clula em
diviso. O fragmoplasto corresponde ao conjunto de microtbulos que se dispem na zona mdia
de cada lado da placa celular, aos quais esto associadas vesculas que contm material denso
aos electres. Depois da formao do fragmoplasto as vesculas golgianas movem-se para a
zona mediana da clula, e fundem-se entre si originando a placa celular. Esta vai crescendo por
adio de mais vesculas at a clula ficar separada em duas. As membranas das vesculas do
origem membrana plasmtica, enquanto os produtos de secreo, contidos nas vesculas,
contribuem para a formao da parede celular. Os plasmodesmos primrios formam-se nesta
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Guia Prtico de Biologia Celular
3.7.3. Meiose
A meiose uma forma de diviso nuclear de importncia fundamental entre os organismos
com reproduo sexuada que resulta na formao de clulas reprodutoras designadas gmetas
nos animais e esporos nos vegetais. Em contraste com a mitose, da meiose resulta diversidade
gentica. Os gmetas no s so geneticamente diferentes da clula me, como so diferentes
entre si. A meiose ocorre nos eucariotas cujas clulas contm nmero diplide de cromossomas
(2n). A diploidia, entendida numa perspectiva gentica, implica que a informao contida num
cromossoma esteja tambm armazenada num segundo cromossoma nuclear, cromossoma
homlogo.
Durante a meiose, os cromossomas replicados no ncleo so segregados pelos quatro
ncleos filhos (clulas haplides), recebendo cada um deles metade do nmero de cromossomas
da clula me (clula diplide). Embora estes ncleos possuam apenas metade do nmero de
cromossomas, eles esto dotados da informao gentica completa porquanto recebem um
membro de cada um dos pares de cromossomas homlogos. A segregao dos cromossomas
homlogos faz-se ao acaso, durante a anafase, o que explica a grande variabilidade gentica que
caracteriza os organismos com reproduo sexuada. importante salientar que para essa
variabilidade contribui tambm um processo denominado crossing-over que tem lugar durante a
profase da primeira diviso nuclear.
A meiose, semelhana da mitose, pode ser dividida em fases caractersticas, Figs. 3.28-3.30:
Centrolos
Cromatina Nuclolo
Interfase I Profase I Metafase I Anafase I Telofase I
Meiose I
Profase I
1. Leptteno. Os cromossomas, embora delgados e compridos (Lepto - delgado), tornam-se
visveis medida que vo espiralando. Nesta fase, os cromossomas aparecem formados por dois
cromatdeos.
2. Zigteno. Os cromossomas homlogos emparelham-se (Zigo = conjugao) formando
61
Guia Prtico de Biologia celular
Metafase I
Nesta fase forma-se o fuso acromtico e as dadas alinham-se na placa celular. Os
centrmeros dos cromossomas homlogos ligam-se a fibras do fuso que emergem de plos
opostos.
Anafase I
Os cromossomas homlogos separam-se uns dos outros e migram para plos opostos do
fuso.
Telofase I
Com a telofase I termina a primeira diviso meitica do ncleo. Os cromossomas homlogos,
cada um formado por dois cromatdeos, encontram-se separados nos respectivos plos, sendo
por isso visveis duas reas nucleares. Em muitos organismos forma-se um novo invlucro
nuclear e observa-se alguma desespiralao dos cromossomas.
Intercinese
A intercinese um perodo muito curto que separa o final da telofase I e o incio da profase II.
Durante este perodo, o DNA dos dois ncleos formados durante a primeira diviso nuclear da
meiose no sofre qualquer replicao.
Meiose II
Profase II
Embora cada ncleo possua apenas metade do nmero de cromossomas, esta fase em tudo
idntica profase de mitose. Cada cromossoma composto pelos dois cromatdeos formados na
profase I.
Metafase II
Esta fase idntica metafase mittica. Os cromossomas, com os dois cromatdeos, migram
para o centro do fuso acromtico.
Anafase II
Na anafase II os cromatdeos de um mesmo cromossoma separam-se e d-se a sua ascenso
62
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Telofase II
Esta fase tambm idntica telofase mittica. Forma-se o invlucro nuclear em torno de
cada conjunto de cromossomas que migrou para os respectivos plos e tem incio a
desespiralao cromossmica.
Mitose Meiose
63
Guia Prtico de Biologia celular
Tabela 4.1. Comparao entre microscopia ptica, microscopia electrnica de varrimento e de transmisso.
64
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PODER DE
RESOLUO ESCALA EXEMPLO
1
10
MILMETRO (mm)
200 mm Raio do ovo de avestruz,
-1
10 100 clula gigante
-2
10 10
5 mm Raio duma clula de alga
10
-3 gigante
1 1000
MICRMETRO (m)
Olho -4
nu 10 100
METRO (m)
-5 15 m Raio do ncleo
10 10
10 m Comprimento de um cromossoma
-6
10 1000 1 1 m Dimenso de uma mitocndria
NANMETRO (nm)
-8
MEV 10 10 15 nm Raio do vrus do mosaico do tabaco
ANGSTROM ()
Canho
Filamento Emissor
Condensador
Porta-objectos
Objectiva
Lente Intermediria
Projectoras
Janela de observao
Alvo fluorescente
Placa fotogrfica
Vcuo
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4.1.1. Fixao
Os fixadores qumicos so de dois tipos: coagulantes e no coagulantes. No primeiro caso
encontram-se o lcool, a acetona e o cido actico e no segundo os aldedos (formaldedo e
glutaraldedo) e o tetrxido de smio.
Na prtica, normal recorrer-se fixao dupla aldedo /smio a fim de estabilizar o maior
nmero de componentes das estruturas celulares. Na fixao aldedica, pr-fixao, utiliza-se
frequentemente o glutaraldedo. O grau de estabilidade das molculas fixadas funo do aldedo
utilizado, dimenso do material, composio do tampo, durao do processo, temperatura,
concentrao e rapidez de penetrao. A fixao deve ocorrer em meio tamponado, pH 7.2 - 7.5, e
a temperatura prxima de 4C, para evitar as alteraes ps-mortem, resultantes da aco de
enzimas hidrolticas libertadas em consequncia da ruptura de algumas clulas. A dimenso do
material tambm um factor determinante. Este no deve possuir mais de 1 mm3 para possibilitar
uma adequada penetrao do fixador. O tempo de fixao deve ser ajustado a cada situao,
devendo resultar do compromisso entre uma boa fixao e uma pequena extraco. pr-fixao
segue-se uma ps-fixao com tetrxido de smio em soluo aquosa, a 4C.
Incluso Impregnao
60
C
Seccionamento
em tronco de
pirmide
Polimerizao Ultramicrotomia Contrastao
Fig. 4.3. Principais passos da preparao de material biolgico para microscopia electrnica de transmisso.
4.1.2. Lavagens
As lavagens so necessrias para remoo do fixador que no reagiu. No devem ser
prolongadas porque podem conduzir extraco e diminuio de volume, e devem decorrer no
mesmo solvente dos fixadores para evitar desintegrao e extraco de material no fixado, por
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4.1.3. Desidratao
A desidratao necessria para substituir a gua do material biolgico por outro lquido
miscvel com as resinas de impregnao. normalmente realizada em acetona (parcialmente
miscvel nas resinas de impregnao).
4.1.5. Seccionamento
Do mesmo bloco, podem obter-se seces de diferente espessura, para observao quer em
microscopia electrnica (10-100nm), quer em microscopia ptica (0,5-10).
4.1.6. Contrastao
Os materiais biolgicos so constitudos maioritariamente por molculas contendo C, H, O e N
e poucos elementos de elevado massa atmica, pelo que so transparentes aos electres. O
problema ainda maior em cortes finos porque a composio qumica dos componentes celulares
idntica da resina. O contrastante deve aumentar o poder de disperso dos electres, ser
selectivo e ter densidade superior do meio de incluso, Fig. 4.8.
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Alta Tenso
Canho
Filamento Emissor
Condensador
Circuito de
varrimento
Objectiva
Bobina de varrimento Amplificador
Detector
Porta-objectos
Placa
fotogrfica
cran
Vcuo
Tal como no caso da microscopia electrnica de transmisso, o material biolgico deve ser,
neste caso, previamente tratado de forma a preservar-se a sua estrutura e eliminar a gua
tecidual. Com este objectivo, o material deve ser sujeito a um dos tratamentos a seguir
esquematizados, Fig. 4.5.
A escolha do processo de secagem depende, normalmente, das condies materiais do
laboratrio. Pese embora este facto, importante ter-se uma ideia precisa sobre as diferenas
qualitativas entre os dois mtodos.
Ps-fixao Criossecagem
Lavagens
Secagem ao ar Desidratao
Fludo Intermedirio
Fludo de transio
Secagem pelo Mtodo do Ponto crtico
Metalizao
Observao
Fig. 4.5. Esquema do procedimento geral a que deve ser submetido o material biolgico para observao em
microscopia electrnica de varrimento.
4.2.1. Secagem ao ar
excepo de alguns tipos de material (diatomceas, esporos, entre outros) um processo
que conduz a grandes alteraes morfolgicas do material (as foras a que o material sujeito
podem atingir 46.000 Kg /cm 2).
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4.2.2. Criossecagem
A criossecagem requer uma congelao prvia do material. Esta congelao deve processar-
se rapidamente de molde a evitar a formao de cristais de gelo de grandes dimenses no interior
das clulas. A temperatura extremamente baixa do azoto lquido (-15OC) adequada a este fim.
No entanto, a imerso do tecido neste lquido criognico leva libertao violenta de azoto
gasoso, devida grande diferena de temperatura, o que danifica o material. O propano lquido,
com ponto de ebulio de -42C e de fuso de -l87C, substitui com vantagem o azoto lquido
porquanto impede a formao de cristais de gelo de grandes dimenses e no liberta bolhas de
gs.
A secagem do material processa-se lentamente, a presso e temperatura muito baixas
(10-1 Pa a - 65C). A sublimao lenta do gelo evita que o tecido seja danificado.
Os tecidos sujeitos criossecagem sofrem, regra geral, uma reduo de volume de cerca de
15%.
Manmetros Sada de gs
Presso Temperatura Entrada de lquido
Sada de gua
Janela
Cmara
de Material pressurizada
vidro
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4.2.4. Metalizao
A composio elementar do material biolgico (C, O, H, N, P, S) no favorece a emisso
electres secundrios. De igual modo, a sua condutividade no tambm a melhor pelo que, para
ser possvel fazer-se uma observao de qualidade, se torna necessrio revestir o espcime com
material condutor e denso como, por exemplo, ouro ou ouro/paldio, Figs 4.7 e 4.8.
0,5 - 2,0 KV
a)
b)
Fig. 4.8. a) Observao de material em microscopia electrnica de varrimento (1) e de transmisso (2) e b)
cortes semi-finos de material preparado para microscopia electrnica de transmisso.
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5. PROTOCOLOS
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2. Com uma pipeta retire uma gota da amostra de lodo e coloque-a numa lmina de vidro.
Coloque igualmente alguns filamentos das algas que lhe sero fornecidas. Monte entre lmina
e lamela e observe ao microscpio.
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Vorticella Diatomaceas
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Resultado da colorao:
Paredes celulares celulsicas rosa; paredes celulares lenhificadas - azul.
* Alternativamente pode ser utilizada a dupla colorao verde iodo /carmim aluminado
I. Imerso em hipoclorito de sdio 30 min
II. Lavagem em gua actica 1 % 2 min
III. Imerso em verde iodo 10 seg
IV. Lavagem em H2O 1 min
V. Imerso em carmim aluminado 10 min
VI. Lavagem em H2O, montagem e observao
Resultado da colorao:
Paredes celulares celulsicas rosa; paredes celulares lenhificadas - verde.
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2. Monte, entre lmina e lamela, uma folha de Elodea e observe os movimentos de ciclose.
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1. Observao de cloroplastos
a) Faa cortes transversais da folha que lhe fornecida, monte-a entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe.
2. Observao de amiloplastos
a) Faa cortes finos do tubrculo de batata, monte entre lmina e lamela e observe. Substitua, pelo
mtodo de irrigao, o meio de montagem por uma soluo de Lugol e observe.
b) Faa cortes finos da polpa de banana. Proceda como em a).
4. Observao de cromoplastos
a) Destaque uma poro da epiderme do fruto de Piracantha (ou, em alternativa, da epiderme adaxial
da ptala de Alle, Tropaeolum ou de Gerbera), monte entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe. Faa uma nova preparao e substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de
montagem por uma soluo de NaOH e observe.
b) Faa cortes transversais na raiz da cenoura, monte entre lmina e lamela e observe.
Seguidamente, substitua, pelo mtodo de irrigao, a soluo de montagem por uma soluo de
Lugol e observe.
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* Alternativamente:
a) Coloque um pice radicular de Allium cepa num microtubo (Eppendorf) contendo uma gota de HCl
1N, e 2 gotas de orcena actica. Agite moderadamente e deixe em repouso durante 1 h.
b) Transfira o material para uma lmina limpa, faa um esfregao e observe.
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6. APNDICE
Reagente de Lfler
Azul de metileno 4,2 g/l
lcool 96% 190 g/l
pH 8.4
Corante de Newman-Lampert
Azul de metileno 1g
lcool 96% 54 ml
Clorofrmio 40 ml
cido actico glacial 6 ml
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Vermelho Neutro
Vermelho Neutro 5g
H2O 500 ml
Adicionar
Tampo Acetato ph 4.8 20 ml
Filtrar antes de usar
Soluto de Lugol
Iodo 1g
Iodeto de Potssio 2g
H2O 100 ml
Resultado da colorao: Amido cora de castanho, roxo ou azul violceo de acordo com a
proporo relativa de amilose e amilopectina.
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Soluo de Ringer
Cloreto de Sdio 6g
Cloreto de Potssio 0,075 g
Cloreto de Clcio 0,1 g
Bicarbonato de Clcio 0,1 g
H2O 1000 ml
Orcena Actica
Orcena 1g
cido Actico glacial 45 ml
H2O 55 ml
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7. BIBLIOGRAFIA
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8. INDICE REMISSIVO
aberrao cromtica, 3, 5 drusas, 51
aberrao esfrica, 3, 5 elastina, 39
abertura numrica da objectiva, 5 electres primrios, 67
alcalides, 48 electres secundrios, 67
algas, 26 endsporos, 15
Algas castanhas, 28 espao perinuclear, 57
Algas verdes, 26 espao periplsmico, 17
Algas vermelhas, 28 Espirilos, 15
Alinhamento do Microscpio, 11 Esporoderme, 37
aloficocianina, 52 Esporozorios, 23
amilopectina, 55 estrias, 55
Amiloplastos, 55 Eucariotas, 14, 19
amilose, 55 Euglenides, 24
aminocidos, 48 exina, 38
ampliao, 4 ficobilinas, 18, 52
anafase, 59 ficobilissomas, 53
Anafase, 60 ficocianina, 18, 52
Anafase I, 62 ficoeritrina, 18, 52
Anafase II, 62 Fixao, 66
Animais, 29 Flagelados, 23
antocianinas, 48 flagelina, 15
Archaea, 19 flagelos, 15
autofluorescncia, 10 fluorocromos, 10
Bacillus, 15 Focagem, 11
Bacteria, 17 frmula de Abbe, 5
bacterioclorofila, 52 fucoxantina, 52
Calibrao da ocular, 12 Fungos, 28
carmim aluminado, 33 Fungos Mucilaginosos e Aquticos, 28
carotenos, 55 fuso acromtico, 60
Cerificao, 35 glicosaminoglicanos, 38
Cianobactrias, 17 globides, 48
cianoficina, 18 glbulos osmifilos, 53
Ciliados, 22 Gram-negativas, 16
Cloroplastos, 52 Gram-positivas, 16
Coccus, 15 gros de aleurona, 48
colagnio, 38 heterocistos, 18
Contrastao, 67 hilo, 55
contraste, 4, 6 histonas, 57
corantes vitais, 6 histoqumica, 6
coumarinas, 48 hormognios, 18
Criossecagem, 69 Impregnao e Incluso, 67
cristais prismticos, 51 ndice de refraco do meio, 5
cristalide, 48 Intercinese, 62
cromatina, 57 interfase, 58
Cromoplastos, 55 intina, 38
crossing-over, 62 inulina, 48
Cutinizao, 35 invlucro cloroplastidial, 52
Desidratao, 67 invlucro nuclear, 57
Diatomceas, 25 lamela mdia, 31
difuso, 44 Lavagens, 66
difuso facilitada, 44 Lenhificao, 33
Dinoflagelados, 24 Leptteno, 61
Diplococcus, 15 Leucoplastos, 54
Diplteno, 62 licopenos, 56
distncia de trabalho, 5 Matriz extracelular, 38
Diversidade Celular, 13 medio, 4
100
Guia Prtico de Biologia Celular
101