UFRJ Universidade Federal do Rio de Janeiro

1O Estudo Dirigido

Disciplina: Fundamentos de Engenharia Bioqumica Experimental (EQB-473)

Aluna: Fernanda Soares Rebelo Matos

DRE: 111473047

Professores: Marcella Souza

Felipe Valle

Mariana Mello

Data de entrega: 17/01/2017

ESTUDO DIRIGIDO 1 - FUNDAMENTOS DA ENGENHARIA BIOQUMICA EXPERIMENTAL

PERODO ESPECIAL - JAN/2017

1- Qual a etapa prvia necessria para que as amostras retiradas nos experimentos
realizados possam ser analisadas pelo mtodo de Somogyi? Justifique.

Resposta: Diluio, pois o mtodo de Somogyi possui sensibilidade na faixa de 25 a 500 mg/L e
para alcanarmos essa faixa necessrio diluir a soluo onde encontram-se os acares
redutores, a fim de que os mesmos sejam detectados pelo mtodo.

2 - Qual a importncia das curvas de calibrao de acares redutores e peso seco para a
anlise dos dados experimentais?

Resposta: A curva padro de peso seco ir nos ajudar a calcular a concentrao de clulas
presente no meio que estamos analisando, atravs da retirada de alquotas, centrifugao ,
diluio das mesmas e leitura a 570 nm em espectrofotmetro. Os dados da absorbncia sero
correlacionados com as informaes obtidas atravs das pesagens contnuas em que
descobrimos a concentraes de clulas e ser feito ento um grfico Concentrao de clulas
x Absorbncia. O resultado ser uma reta, cujo o inverso do coeficiente angular multiplicado
pelo fator de diluio e absorbncia de cada amostra, nos dar a real concentrao de clulas
em cada ponto.

A curva padro de acares redutores, nos ajuda a analisar o perfil dos acares presentes no
meio fermentativo, atravs do mtodo de Somogyi, que baseia-se nas propriedades redutoras
dos acares pela reao da hidroxila hemiacettica dos monossacardeos, que possuem um
grupo aldedo ou cetnico, que em solues alcalinas, reduzem ons de Cobre de Cu++ a Cu+
pelo acar redutor com formao Cu2O, que reduz o arsenomolibdato e produz um composto
de colorao azul. Assim, reagentes e uma soluo de glicose so preparados e diludos de
acordo com a concentrao de clulas e a fase que o microrganismo ocupa (informao
conhecida atravs da curva de calibrao de peso seco). A absorbncia ento, lida em
duplicata a 540 nm e coma mdia dos resultados obtidos plotamos a curva padro absorbncia
x concentrao de glicose, obtendo ento uma reta, cujo o inverso do valor do coeficiente
angular igual ao fator de converso, que ser multiplicado pelo fator de diluio e pela
absorbncia, obtendo-se assim, o valor da concentrao de substrato presente em cada ponto.

Com estas informaes, podemos estudar a capacidade fermentativa e o crescimento celular

do microrganismo utilizado atravs da anlise de parmetros de concentrao de biomassa, do
consumo de substrato (glicose) e da anlise de parmetros cinticos.
3 - Em relao ao grfico abaixo, quais pontos voc no usaria para a construo da curva de
calibrao? Qual fenmeno est correlacionado a esse comportamento fora da curva?

Resposta:

Desconsideraria os dois ltimos pontos do grfico, pois neles a regio de saturao atingida.
Ou seja, os dois ltimos pontos esto fora do intervalo operacional especificado e por isso no
respondem de modo proporcional concentrao da substncia na amostra.

4 - Quais so as fases de crescimento de um microrganismo em uma batelada simples? Quais

dessas fases devem ser evitadas na produo de fermento de panificao? Justifique.

Resposta:

1- Fase lag ou fase de adaptao ( = 0)

2- Fase de acelerao ( 0 < < )

3- Fase Exponencial ( = = cte )

4- Fase de desacelerao ( > > 0 )

5- Fase estacionria ( = 0 )
6- Fase de morte ( < 0 )

Durante a produo do fermento de panificao, em que o objetivo obteno de um valor

mximo de densidade celular ao fim do processo, importante minimizar a durao da fase de
latncia e maximizar a taxa de crescimento e durao da fase exponencial, j que nessa fase
so produzidos os metablitos essenciais ao crescimento das clulas, como aminocidos,
nucleotdeos e protenas.

5 - Qual a funo do pr-inculo?

Resposta: A fase Lag ou de latncia pode ter uma durao mais ou menos extensa dependendo
do estado fisiolgico da cultura usada como inculo e as condies de crescimento. Nessa fase,
clulas depletadas de coenzimas essenciais e/ou outros constituintes essenciais absoro de
nutrientes presentes no meio, tentam se recuperar e tornarem-se aptas para o crescimento na
fase exponencial . Portanto, se as clulas dos microrganismos estiver bem adaptada ao novo
meio, a fase Lag durar um tempo menor, para isso, o usa-se o pr-inculo, que tem como
objetivo tornar a cultura de clulas melhor adaptada, para assim, diminuir ao mximo a fase
Lag .