Ekspresi Imunohistokimia Faktor Angiogenik dengan Neoplastik Sel Epitel Berhubungan

dengan Karsinogenesis Prostat pada Anjing

C. Palmieri
School of Veterinary Science, The University of Queensland,
Gatton Campus, 4343 Gatton, Queensland, Australia.
Email: c.palmieri@uq.edu.au
Abstrak
Anjing adalah satu-satunya spesies selain manusia, di mana terjadi kanker prostat
spontan. Oleh karena itu anjing berharga untuk dijadikan model mempelajari faktor-faktor
yang mengatur perkembangan tumor. Angiogenesis penting dalam pengembangan dan
penyebaran berbagai jenis kanker, termasuk kanker prostat. Untuk lebih mendefinisikan
peran sel epitel kanker pada neovaskularisasi kanker prostat pewarnaan imunohistokimia
untuk faktor angiogenik vascular endothelial growth factor [VEGF], platelet endothelial cell
adhesion molecule1 [PECAM-1], Tie-2, and fibroblast growth factor2 [FGF-2] dilakukan
pada formalin-fixed, paraffin embedded jaringan dari 10 prostat normal, 15 prostat
hiperplastik, dan 11 karsinoma prostat dari anjing. Normal dan sel epitel hiperplastik negatif
untuk PECAM-1, VEGF, dan Tie-2, sementara spidol yang sama dinyatakan dengan variabel
intensitas pewarnaan sitoplasma oleh sel neoplastik. Pewarnaan FGF-2 yang ringan sampai
sedang terdeteksi pada semua prostat normal dengan lebih sedikit dari 10% sel positif,
terutama didistribusikan di lapisan basal. Persentase sel hiperplastik FGF-2-positif bervariasi,
dengan sel basal dan sekretori menunjukkan perinuklear untuk meredakan pewarnaan
sitoplasma. Jumlah rata-rata sel positif dan intensitas pewarnaan lebih tinggi pada karsinoma
prostat daripada prostat normal dan hiperplastik. Apalagi kepadatan mikrovesel dianalisis
pada slide bernoda PECAM-1 meningkat pada kanker prostat dibandingkan dengan prostat
normal dan hiperplastik. Oleh karena itu, sel neoplastik prostat mampu mengekspresikan
simultan berbagai faktor angiogenik dan dapat meningkatkan tumor proliferasi dan
angiogenesis dalam mode parakrin dan autokrin.

Kata kunci

angiogenesis, karsinoma, anjing, hiperplasia, imunohistokimia, prostat

Kanker prostat adalah penyebab utama kedua dari kanker kematian setelah kanker paru
pada pria, dan kejadiannya terus berlanjut meningkat di hampir semua negara. Perkembangan
kanker prostat terjadi dalam 2 tahap, androgen pertama responsif dan androgen kedua
independen dengan tingkat metastasis tinggi. Prostat anjing memiliki kesamaan anatomis dan
fungsional dengan manusia umumnya dan secara spontan berkembang benign prostatic
hyperplasia (BPH), high-grade prostatic intraepithelial neoplasia (HGPIN), dan kanker
prostat. Dengan demikian anjing adalah model hewan yang sangat relevan dari kanker
prostat.
Perkembangan kanker prostat termasuk multistep program perubahan genetik pada jalur
yang mempengaruhi siklus sel, apoptosis, adhesi, motilitas, dan angiogenesis. Tanda
angiogenik sangat penting untuk pertumbuhan tumor dan progresi. Sel kanker merangsang
angiogenesis baik langsung mensekresikan faktor pertumbuhan dan sitokin yang bekerja pada
sel endothelial pembuluh dan microvessels yang berdekatan atau oleh pengaktifkan senyawa
angiogenik dalam matriks ekstraselular.
Protein angiogenik diekspresikan berbeda secara padat tumor, sehingga mewakili target
potensial dalam pengelolaan dari kanker vascular endothelial growth factor [VEGF], salah
satu faktor angiogenik yang paling manjur, dinyatakan dalam epitel prostat manusia normal,
dan
karsinoma prostat dengan intensitas pewarnaan bervariasi. Jaringan nonneoplastik telah
menunjukkan jumlah yang rendah secara positif sel epitel bernoda, 50,53 jika tidak hilang
atau lemahnya imunoreaktivitas. Pewarnaan tumor tampak berkorelasi dengan derajat
diferensiasi, dengan ekspresi tertinggi dalam diferensiasi buruk kanker prostat manusia.
Basic fibroblast growth factor (bFGF or FGF-2) telah menarik perhatian khusus untuk
sifat angiogenik dan untuknya. Merangsang diferensiasi sel mitogen yang kuat dan
proliferasi.18 FGF-2 memiliki fungsi biologis yang luas dapat memainkan peran penting
dalam tumorigenesis, seperti meningkat motilitas dan invasiveness, 25 serta bertindak sebagai
autokrin faktor pertumbuhan dan merangsang perkembangan menuju keganasan. FGF-2 juga
dapat mempengaruhi sitotoksisitas bahan kimia dan tekanan nonfisiologis lainnya yang
ditimbulkan pada sel, dan ini sangat penting untuk interaksi kanker sel dengan obat
kemoterapi dan kerusakan DNA lainnya agen.56 Pada manusia, hasil imunolokalisasi FGF-2
Pada prostat nonneoplastik kontroversial, dan perannya
FGF-2 pada karsinoma prostat masih belum jelas, 16,37,46,49 Konsentrasi FGF-2 telah
terbukti meningkat pada serum pasien yang terkena.31
Ungkapan imunohistokimia platelet endothelial molekul adhesi sel-1 (PECAM-1) atau
CD317,8 oleh Sel endotel telah banyak digunakan untuk menganalisis kepadatan
mikrovaskular karsinoma prostat manusia, 41 sementara tidak ada laporan yang tersedia
mengenai potensi ekspresi penanda ini pada sel epitel neoplastik.
Tie-2 adalah reseptor tyrosine kinase sel endotel dinyatakan dalam sistem vaskular
sejak tahap awal embriogenesis, 45 yang ekspresinya baru saja dijelaskan pada prekursor
hematopoietik dan sel neoplastik pada manusia kanker.35,48
Untuk lebih menentukan peran faktor angiogenik pada prostat taring Penyakit terutama
karsinoma prostat kaninus, ini studi menganalisis ekspresi imunohistokimia VEGF, FGF-2,
PECAM-1, dan Tie-2 pada anjing normal, hiperplastik, dan sel epitel karsinomatosa.

Materi dan Metode

Sampel studi
Tiga puluh enam formalin-fixed, parafin embedded prostat anjing sample dipilih dari
arsip diagnostik pathology layanan dari Sekolah Kedokteran Hewan, Universitas Queensland.
Bagian hematoksilin dan eosin oleh ahli patologi berpengalaman untuk mengkonfirmasi
diadnosis histopatologis. Sepuluh prostat anjing normal dari anjing dewasa, 15 sample BPH,
dan 11 karsinoma prostat yang dipelajari. BPH dan karsinoma prostatderasal dari anjing
mulai usia 3 sampai 11 tahun dan 6 sampai 12 tahun. Jenis yang paling terkena dampak
adalah German Shepherd (3), Rottweiler (2), dan Scottish Terrier (2), untuk BPH dan
German Shepherd (3) dan Doberman Pinscher (2) untuk karsinoma prostat.

Histologi
Karsinoma prostat dikelompokkan menurut pertumbuhan yang telah dijelaskan Lai et
al: micropapillary (Jaringan kapiler sel neoplastik dalam saluran diperpanjang yang
kekurangan inti fibrovaskular yang berbeda), cribriform (jaringan yang benar-benar terisi
oleh sel neoplastik membentuk penetrasi biasa dengan nekrosis sentral atau komedonekrosis),
padat (sarang padat atau sel anaplastik individu), sarcomatoid (sel neoplastik dengan
morfologi spindel), asinar kecil/ duktal (struktur acinar tanpa stroma fibrosarcoma
scirrhous), atau tubulopapillary (saluran dilatasi dengan lapisan sel kolumnar tunggal sampai
berlapis-lapis)
Imunohistokimia
Prosedur imunohistokimia diberikan secara rinci di bahan tambahan 1.

Evaluasi Imunohistokimia (VEGF, PECAM-1, Tie-2, FGF-2) pada Normal, Hiperplasia dan
Sel Epite Karsinoma Prostat
Sebuah analisis imunohostokimia semiquantitatif dan kualitatif dilakukan seperti yang
dijelaskan pada Bahan Tambahan 1.

Kepadatan Microvessel
Kepadatan mikrovese (MVD) dianalisis dengan benign dan malignant jaringan prostat
dengan menghitung jumlah rata-rata dari PECAM-1 positif seperti yang dijelaskan
sebelumnya dan rinci dalam Bahan Tambahan 1

Analisisi statistik
Perbedaan antara 3 kelompok dinilai dengan uji x2 dan dianggap signifikan pada P <
0,01.

Hasil
Histologi
Pada prostat normal kelenjar kecil sampai sedang yang dilapisi oleh sel kubus selapis
sampai .BPH ditandai dengan hiperplasia epitel, pelebaran kristik, dan fibrosisi ringan. Jenis
karsinoma prostat yang paling umum adalah cribriform (6 dari 11 : anjing 26,28,33, 34, 35,
36) dengan komedonekrosis terdapat 5 kasus (anjing 26, 28, 34, 35, 36) dan acinar kecil/
ducktal (3 dari 11 : anjing 29, 31, 32). Pola solid yang lazim dengan multi daerah
sarcomatoid fokus (anjing no 27) dan mikrokapiler (anjing no 29) diamati dlam 1 kasus
masing-masing. Metastase terdeteksi dalam 1 kasus (anjing no 27) di paru-paru, kelenjar
getah bening, dan ginjal.

Imunohistokimia
Dalam semua sample, pewarnaan positif diamati pada fibrovaskular stroma (VEGF,
FGF-2) dan endotelium pembuluh darah (VEGF, FGF-2,PECAM-1, Tie-2). Hasil
imunohistokimia dianalisis dalam Tabel Tambahan 1.
Sel epitel normal dan hiperplstik negatif untuk PECAM-1 (Gambar 1), VEGF dan Tie-
2. PECAM-1 dinyatakan dalam semua 11 karsinoma prostat dengan lemah (8 kasus) untuk
moderate (3 kasus) pewarnaan sitoplasma (Gambar 2) dan variable skor semikuantitatif.
Ekspresi Tie-2 terdeteksi pada 9 dari 11 karsinoma prostat (Gambar 3) dengan presentase
faktor neoplastik berlabel mulai dari >0% sampai <10% (kasus), 10% -<25% (3 kasus).
Intensitas pewarnannya ringan sampai moderate. Pada karsinoma prostat, sel neoplastik
positif VEGF (Gambar 4) lebih rendah jumlahnya dibandingkan dengan Tie-2, sel PECAM-1
positif, dengan multifokal ekspresi sitoplasma kurang dari 10% sel di 8 dari 11 sample dan
10% sampai 25% sel dalam 1 sampel. Dua kasus negatif, sebagian besar sel neoplastik
menunjukkan reksi pewarnaan ringan
FGF-2 diekspresikan pada setiap kelompok sample prostat tapi berbeda dalam skor
semiquantitatif dan kualitatif. Ringan sampai sedang pewarnaan sitoplasma terdeteksi pada
normal prostate (GAMBAR 5) lebi rendah dari 10% sel-sel positif, terutama tersebar pada
lapisan basal. Pada 2 dari 10 prostat normal, sesekali (1%-2%) sel FGF-2 positif tersebar
secara acak diamati. Pewarnaan variabel ditandai dengan BPH kurang dari 10% (4/15), 10% -
25% (4/15), 25% sampai <50%
(4/15) 50% sampai < 75% (3/15) sel. Baik sel basal dan sekretori positif (Gambar 6)
DENGAN POLA PERINUKLEAR UMUM DI Indonesia
Skor imunohistokimia terakhir dari FGF-2, ekspresi PECAM-1, Tie-2 dan VEGF
secara normal, hiperplastik, dan sel epitel prostat karsinoma dirangkum dalam tabel 1. Skor
akhir FGF-2 berbeda secara signifikan antara prostat normal dan karsinoma (p<0,01).
Perbedaan dalam PECAM-1, Tie-2 dan ekspresi VEGF secara statistik signifikan antara
karsinoma prostat dan normal dan hiperplasia prostat (P <0,01).

Kepadatan Microvessel
Analisis kepadatan microvesel oleh PECAM-1 menunjukkan signifikan secara statistik
(P < 0,01)meningkat dalam jumlah microvessels pada kanker prostat (mean +SD, 65.03+
6.63) dibandingkan dengan normal (11,02+ 1,66) dan jaringan BPH (40,55+69,23).

DISKUSI

Studi ini menunjukkan sel prostat karsinoma anjing mampu produksi bersama
berbagai faktor angiogenik (VEGF, PECAM-1, Tie-2) yang tidak diekspresi secara alami
atau pada sel eiptel prostat yang hyperplasia. Selain itu, peningkatan ekspresi faktor
angiogenik dari sel neoplasia mempunyai hubungan dengan peningkatan jumlah vaskularisasi
pembuluh darah.

Pada manusia faktor VEGF dapat diekspresi melalui sel endothelial, sel tumor stromal
dan sel kanker prostat. VEGF yang dihasilkan dari sel neoplastik dapat stimulasi
angiogenesis dengan bertindak dalam mode parakrin di sekitar sel endotel. Namun, seperti
pertumbuhan endotel vaskular faktor reseptor VEGFR-1 dan VEGFR-2 juga dinyatakan
dalam berbagai genetik sel kanker manusia, termasuk kanker prostat sel, VEGF VEGF juga
bisa bertindak secara autokrin untuk modulasi pertumbuhan tumor. Kultur dari genetik sel
kanker prostat LNCaP dengan adanya VEGF165 di rekombinan manusia menghasilkan
peningkatan sebesar 50% [3H] timidin intake di sel dan rekruitmen sel statis ke dalam siklus
sel. Pada manusia, peningkatan ekspresi gen faktor VEGF pada sel ganas selama waktu
transisi dari tingkat tinggi intraepitel prostatic neoplasia ke invasif karsinoma menyebabkan
transisi epitel mesekim (EMT) melalui suatu lingkaran autokrin yang dapat mendukung
invasi sel tumor dan motilitas. Penulis turut menyatakan redistribusi -catenin di samping ada
peningkatan ekspresi marker mesenkim di sel kanker prostat, sehingga EMT dapat terjadi
saat pembentukan karsinoma prostatic anjing. Oleh karena itu, blokade terapeutik VEGF bisa
menjadi strategi untuk mengganggu angiogenesis tumor dan invasi dini sel ganas.

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa FGF-2 bisa menjadi salah satu kunci utama
induksi lesio hiperplastik dan perkembangan karsinoma prostat pada anjing, namun ia
mungkin tidak terlibat dalam homeostasis prostat normal. Pada manusia, ekspresi FGF-2
pada prostat normal dan patologis masih kontroversial, dengan reaksi positif yang
ditunjukkan oleh beberapa peneliti di prostat normal dan hiperplastik.di geneti sel kanker
prostat manusia dan tikus serta hasil kegagalan pewarnaan pada sel neoplastik prostat dalam
penelitian lain. Perbedaan antara imunoreaktivitas sampel kanker prostat antara beda
penelitian dapat dikaitkan dengan tahap neoplastik. Dua kelompok penelitian yang
menggunakan jaringan dari kanker yang lebih parah mampu mendeteksi ekspresi FGF-2 pada
sel epitel kanker prostat manusia pada kebanyakan kasus.

Tingkat ekspresi FGF-2 yang tinggi hadir pada kanker prostat PC3 dan Du145 sel,
dan kedua genetik sel ini berasal dari metastasis kanker prostat. Oleh karena itu, dapat
disarankan kemungkinan FGF-2 pada awalnya dinyatakan sebagai faktor parakrin dari sel
stroma di prostat lokal karsinoma nam un boleh beralih ke ekspresi autokrin selama
perkembangan tumor. Hipotesis ini didukung pada saat penemuan terkini dengan
pertimbangan bahwa karsinoma prostat bersifat biologis (neoplasma ganas) pada anjing, dan
hewan yang terdiagnosa tumor prostat sering memiliki kanker parah pada saat diagnosis.

Ekspresi PECAM-1 oleh sel kanker dan berkurangnya ekspresi pada epitel normal
atau hiperplastik berarti bahwa protein ini diperoleh dari sel epitel selama transformasi
neoplastik. Keberadaan PECAM-1 di sel epitel maglinant bisa dijelaskan dalam konteks
mimikri vaskulogenik (VM). Berdasarkan teori ini, unsur tumor yang spesifik dapat
membentuk saluran berisi darah dan menjadi sangat positif PECAM-1 dalam pengaturan
eksperiment uveal melanoma. Mimikri vaskulogenik sering terlihat pada beberapa kasus
tumor maglinant manusia di antaranya tumor payudara, tumor hati, glioma, tumor ovari,
melanoma, kanker prostat dan di 38 % tumor mamari anjing. Meskipun teori ini masih
menjadi topik diskusi pada kanker prostat, namun teori ini masih belum dibuktikan nyata.

Saluran yang terbentuk oleh sel tumor dideteksi pada karsinoma prostat manusia.
Mekanisme khusus yang memicu peningkatan jumlah reseoptor PECAM-1 pada sel
neoplastic masih belum diketahui. PECAM-1 ekspresi pada kanker prostat mungkin memicu
amplifikasi pada gen pada kanker tumor manusia yaitu pada gen 17q23 yang sering
diamplifikasi. Pada manusia, expresi ikatan-2 telah dilaporkan pada berbagai jenis tumor
antaranya leukemia, kanker prostat, sel tumor raksasa pada tendon, lambung, kolorektal dan
endometrial karsinoma. Meskipun fungsi khas ikatan-2 pada sel tumor masih belum
diketahui. Sebanyak 69 % kasus lambung karsinoma pada manusia ekspresi ikatan-2
berbanding balik dengan kadar differensiasi histologic, kadar reaksi stromal dan pola
pertumbuhan tumor. Namun, ekspresi ikatan-2 serta angiogenik faktor tidak ada hubungan
dengan tingkat tumor, kadar differensiasi dan subtipe histologis dalam penelitian ini.

Studi ini menunjukkan produksi dan ekspresi berlebihan dari faktor angiogenik oleh
sel epitel prostat neoplastik mungkin meningkatkan angiogenesis dan potensi proliferasi
tumor. Namun, masih banyak pertanyaan yang belum dijawab, termasuk mekanisme dimana
ekspresi faktor - faktor ini dipengaruhi sel kanker prostat. Ekspresi dari sel tersebut bisa
dimodulasi lewat transkripsional, post-transkripsional, dan mekanisme translasi. Namun,
sedikit yang diketahui tentang apa yang mendasari ekspresi tersebut sebagai faktor
pertumbuhan autokrin pada sel kanker prostat. Meskipun dari banyak faktor ini bersifat
pleiotropik dan barangkali tidak terkait dengan angiogenesis, sel-sel ini memiliki peranan
untuk memicu neovaskularisasi.Penemuan beberapa faktor angiogenik mempersulitkan lagi
pengendalian proses angiogenik pada prostat karsinoma. . Oleh karena itu, studi lebih lanjut
mengenai identifikasi jalur regulasi diperlukan untuk mengembangkan strategi
antiangiogenik.