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OBJETIVOS

Determinar el ambiente ms contaminado de la Facultad de Ingeniera Ambiental de la


Universidad Nacional de Ingeniera
Aprender las diferentes caractersticas de la morfologa colonial
Observar las principales caractersticas del cultivo: elevacin, margen, cromognesis,
etc.
Aprender cmo manejar correctamente los instrumentos: placa Petri, tubos de prueba,
pipetas, etc. As como el correcto manejo de los equipos utilizados en este laboratorio,
tales como autoclave, horno e incubadora.
Observar el desarrollo de microorganismos en medio de cultivos expuestos en
ambientes con diferentes niveles de contaminacin y diferente temperatura.
FUNDAMENTO TEORICO
MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes


que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad
metablica de los microorganismos es muy grande, por ello, la variedad de medios de cultivo
tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. Los
requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el ambiente
natural en el que se desarrollan.

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento.


Agar. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
El componente dominante en el agar es un polisacrido, al que acompaan algunas
impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Existe en rama o en polvo, se
solubiliza en agua a ebullicin (funde hacia los 98C) y al enfriarse forma un gel inodoro
e inspido (se gelifica alrededor de los 42C), dependiendo de su grado de pureza, por lo
que tiene la ventaja de ser slido a la temperatura de incubacin. Con la excepcin de
algunos microorganismos marinos, el agar no es empleado como nutriente. Para
preparar un medio slido se le agrega agar al 12-18 %. Si se desea visualizar movilidad
se usa agar blando se le agrega agar al 3 %.
Extractos. Para su preparacin, ciertos rganos o tejidos animales o vegetales (por
ejemplo carne, hgado, semillas, etc.) son extrados con agua y calor, y posteriormente
concentrado hasta la forma final de pasta o polvo.
Peptonas. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos nitrogenados y sales
minerales que carecen de identidad qumica definida; se obtienen por digestin
enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, casena,
etc.). Las peptonas son muy ricas en pptidos y aminocidos, pero pueden ser
deficientes en determinadas vitaminas y sales. Proveen proteosas, peptonas,
polipptidos y aminocidos.
Fluidos Corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo
son frecuentemente aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
patgenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en
condiciones aspticas directamente de un animal sano. Los fluidos corporales no
solamente contribuyen con factores de crecimiento, sino tambin con sustancias que
neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.
Sistemas amortiguadores. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo
para mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Los
microorganismos ms comunes son neutrfilos (el pH ptimo para su crecimiento est
prximo a la neutralidad), y sales como fosfatos bisdicos o bipotsicos, o sustancias
como las peptonas, previenen una desviacin del pH.
Indicadores de pH. Indicadores cido- base se aaden a menudo a los medios de cultivo
con objeto de detectar variaciones del pH.
Agentes reductores. Cistena, tioglicolato y otros son agentes reductores que se aaden
a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los
grmenes microaerfilos o anaerobios.
Agentes selectivos. La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo puede
convertirlo en selectivo (ver ms adelante, clasificacin de los medios de cultivo). Por
ejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sdica, telurito potsico, antibiticos, etc., a
la concentracin adecuada, actan como agentes selectivos frente a determinados
microorganismos.

Caldo nutritivo (Caldo carne).-Es el medio complejo ms comn para el cultivo de


microorganismos.

Frmula:

1. Peptona 5g
2. Extracto de carne 3g
3. Agua c.s.p 1000 ml
4. pH 7,2

Agar nutritivo

Frmula:

1. Agar 20 g
2. Caldo nutritivo 1000 ml

Tipos de medios

Medios enriquecidos: son medios en el que se le adiciona componentes como sangre,


suero o extracto de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar.
Medios de prueba: son medios para el ensayo de vitaminas, aminocidos y antibiticos,
se utilizan medios de cultivos de composicin conocida. As mismo, se recurre a medios
de composicin especial para probar desinfectantes.
Medios para cuenta de bacterias: son medios para determinar el contenido bacteriano
de sustancias tales como la leche y el agua, se emplean ciertos tipos especficos de
medios de cultivos. Se debe sealar su frmula, as como las especificaciones prescritas.
Medios para caracterizar bacterias: son medios para determinar el tipo de crecimiento
producido por los organismos, as como la capacidad de las bacterias para producir
cambios qumicos, se utiliza de manera convencional una amplia variedad de medios de
cultivos.
Medios de mantenimiento: son medios para preservar las caractersticas fisiolgicas y
la viabilidad de un cultivo, quizs se requiera de un medio diferente de aquellos que son
ptimos para el crecimiento. El crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte
rpida de clulas. En relacin con su estado fsico se puede establecer diferencias ms
amplas entre los medios. Se emplea ocasionalmente. Medios slidos tales como
rebanadas de papas, para cultivos especiales de bacterias. Medios slidos - reversibles
a lquidos se ejemplifican con el agar nutritivo. Los medios semislidos contienen
pequeas
MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS

Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin de una Unidad
Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio slido; aunque vara de tamao generalmente es
visible a simple vista. Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien un grupo de
microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que tienen tendencia a
permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos. La morfologa colonial es
comparable a una estadstica ya que se deriva de una clula individual pero es la caracterstica
de la masa celular. As pues, por ejemplo, la pigmentacin es aparente en la colonia, pero no en
la clula individual, en el caso de la consistencia mucosa de algunas colonias esta se deriva de la
sustancia capsular en aquellas bacterias con cpsula muy grande.

Medida de las colonias. sta caracterstica es bastante constante dentro de las especies y puede
ir desde colonias muy diminutas hasta un dimetro de varios milmetros.

Forma. Est determinada por su borde y su espesor. En la figura 2 se pueden observar varias
formas, elevaciones y bordes de colonias bacterianas.

Consistencia y textura. La consistencia de las colonias puede variar desde una colonia seca que
puede moverse sobre el agar con el asa, hasta una colonia viscosa que se pega al asa y forma
filamentos o hilos mucosos cuando se trata de separarla del agar.

Pigmentacin. Esta caracterstica es muy comn en la bacteria saprfita en las que las colonias
aparecen rojas, anaranjadas, amarillas, etc. Entonces tenemos.

Tamao: Dimetro en mm.


Forma: Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme.
Elevacin: Plana, elevada, convexa, pulvinada, embonada, umbilicada.
Borde o Margen: Entero, ondulado, lobulado, erosionado o lacerado, filamentoso, rizado.
Color: Blanco, amarillo, negro, marrn, anaranjado, beige, otros.
Superficie: Lisa, rugosa o granular, brillante, opaca.

METOFOLOGIA
MATERIALES Y EQUIPO
Tubos de prueba.
Placas petri.
Pipetas
Trpode con rejilla.
Algodn.
Par de guantes
Mechero.
Vaso de precipitado
Agua destilada.
Baqueta.
Esptula.
Papel kraft
Autoclave.
Incubadora.
Horno.

PROCEDIMIENTO

Procedimiento A (grupo 1 y 3): Crecimiento y caracteres de cultivo en agar nutritivo.


1. Tenemos 4 tubos con agar nutritivo fundido de 45C y esterilizados

2. Retiramos el algodn y flameamos la parte superior de los tubos para luego colocar
el contenido de cada tubo en la placa petri correspondiente. Luego esperamos que
se solidifique por 15 minutos.
3. Exponemos la placa N1 durante 15 minutos para el grupo N1, ambiente: bao FIA;
para el grupo N 3 ambiente: CEIA.
4. La placa N 2 la dividimos en 4 zonas.

GRUPO 1 GRUPO 3
A: Pelo A: Huella digital
B: Huella Digital B: Pelo
C: Inoculador no estril C: Inoculador no estril
D: Inoculador estril D: Inoculador estril

5. Las Placas N 3 y N 4 se
mantienen totalmente esterilizadas. Ahora todas las placas se incuban entre 35 a
37C por 48 horas, despus de cumplido esto se sacan los tubos de la incubadora y
se colocan en la refrigeradora para mantener en estado latente el nmero de
microorganismos.
Procedimiento b (grupo 2 y 4): Crecimiento y caracteres de cultivo en caldo nutritivo
1. Tener 3 tubos con caldo nutritivo y extraer el caldo de cada uno de los tubos
utilizando pipetas previamente flameadas la punta.

2. Lo vertemos en otros tubos y despus los incubamos a 37C por 48 horas. Cumplido
el plazo se retiran de la incubadora y se colocan en la refrigeradora para mantener
en estado latente el nmero de microorganismos.
Procedimiento c (grupo 5): Crecimiento y caracteres de cultivo en agar sabouroud.
1. Tenemos 3 tubos de agar sabouroud fundido de 45C y esterilizado.

2. Flameamos la parte superior de los tubos y colocamos al agar en las placas Petri;
despus esperamos que se solidifique.
3. Llevamos las placas a los ambientes escogidos:
Grupo N1: Bao de varones FIA
Grupo N2: Laboratorio de fisicoqumica
Grupo N3: CEIA
Grupo N4: Biblioteca
RESULTADOS
PROCEDIMIENTO A:

Plac
a
Placa
Nro. Placa Nro. 4
GRUPO Nro. 1 Placa Nro. 2 estril
3 no estril
estril
est
ril
Sector
C Sector D
Bao varones Sector A Sector B (huella NO
(inocul (inoculador NO ABRIR
FIA ( Pelo) dactilar) ABRIR
1 ador
estril)
no estril)

25 alrededor
Nmero de del cabello
13 3
colonias 4 en el
12 cabello - -
(4) 0.1 cm
(4) 0.2cm
dimetro X1<1mm(19) X1<1mm(5)
(1) 0.4 cm X2 = 1mm(0) X2 = 1mm(1)
X1 =65mm (1)
(1) 0.6 cm X3 = 2mm(6) X3 = 2mm(2)
Tamao - X2 =4mm(1)
(1) 1.8 cm X4 = 3mm(1) X4 = 3mm(3)
X3 = 2mm(1)
(1) 2.2 cm X5 = 4mm(1) X5 = 13mm(1)
X6 = 5mm(2) X6 = 15mm(1)

Lobulado(1)L Liso(25) Liso(6)


(2) liso
Margen iso(10) Ondulado(2)L Lobulado(4) -
(1) Filamentoso
Ondulado(1) obulado(2) Ondulado(3)
Plana(10)
Convexo(1) Convexo(4) Plana(2)
Elevacin Elevado(1) -
Liso(24) Plano(9) Converso(1)
Convexo(1)
Amarillo(1)
Crema(10) Blanco(9) Blanco(9)
Cromognesis - crema
Amarillo(1) Crema(20) Negro(1)
Blanco(1) Crema(2)
Caracteres Opaco (1)
Opaco(12) Opaco(25) Opaco(13) -
pticos traslcida(2
PROCEDIMIENTO B:

Placa Placa Nro.


Placa Nro.
GRUPO Placa Nro. 2 estril Nro. 3 4 no
1 estril
estril estril
Sector
Sector B Sector C D
Sector A NO
CEIA (huella (inoculador (inocul -
( Pelo) ABRIR
3 dactilar) estril) ador no
estril)
Nmero de
5
colonias 29 4 1 1 1
(16) 0.1 cm
(3) 0.2cm
(2) 0.3 cm
(1) 0.4 cm
4mm = 1
(4) 0.5 cm 5mm =
Tamao (1) 4mm 3mm = 2 2mm = 1 4mm = 1
(1) 0.8 cm 1
(3) 2mm 2mm = 2
(1) 0.9cm
(1)0.7cm

Lobulado(4) Liso(13) Liso(4)


Margen Lobulado(1) Liso(1) Liso(1)
Liso(25) Lobulado(1) Ondulado(1)

Elevacin
Convexo(29)
Amarillo(1)
Crema(10) Blanco(3) Blanco(2) Crema Crema
Cromognesis Crema(1)
Amarillo(11) Crema(1) Negro() (1) (1)
Blanco(1) Crema(2)
Opaco Opaco
Opaco(0) Opaco(1) Opaco(0) (0) (0)
Caracteres Opaco(25)
Traslucida Translucida Translucida Translu Transluci
pticos Traslucida(3)
(4) (4) (1) cida da
(1) (1)
Grupo N 2 Tubo estril Tubo no estril Tubo estril
Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril

Cantidad de
Escaso escaso escaso
crecimiento
Distribucin de
Turbidez Sedimento Sedimento
crecimiento
Olor Ptrido Imperceptible Ptrido

Tubo estril Tubo no estril Tubo estril


Grupo N 4
Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril

Cantidad de
Escaso Escaso Abundante
crecimiento
Distribucin de Pequea
Sedimento Pelcula aerobia
crecimiento turbidez
Olor Aromtica Imperceptible Ptrido

PROCEDIMIENTO C:

Grupo 1 2 3 4
Bao de varones FIA Laboratorio de CEIA Biblioteca
Ambiente
fisocoquimica

N de hongos 16 16 15 10

Alternaria (2) Aspergillius(4) Alternaria(6) Aspergillus(4)


Rhizopus (0) Levadura (4) Rizopus(2) Penincillum(3)
Tipo de Aspersillius(1) Alternaria (2) Aspergillus(3) Alternaria(1)
hongo pennicillium(3) Rhizopus(3) Penincillum(1) Levadura (2)
Otros (3) Esporangiosporas
(3)
Verde azulado, verde Color verde Verde
Algunas
amarillento, verde amarillento negrusco, verde
caracterstica
negrusco claro, verde
s
amarillento
Grupo 5
Observaciones: estuvo expuesto al Ambiente: Laboratorio de microbiologa
ambiente por 6 das
N de hongos observados 9
Tipo de hongos Aspergillus(1)
Alternaria(2)
Esporangiusporas(1)
Penallium(5)

Caracteristicas

DISCUSION
Observamos que en los grupos, el numero de hongos no hay demasiada diferencia en
el conteo de hongos, ya que los ambientes analizados pertenecen a la facultad de
ingeniera ambiental
Grupo 1 : 16
Grupo 2 : 15
Grupo 3 : 14
Grupo 4 : 16
CONCLUSIONES

El desarrollo de las colonias de bacterias vara de acuerdo al ambiente donde se


toma la muestra.
Existen distintos tipos de Hongos segn las condiciones ambientales y de higiene.
La moderada presencia de bacterias tanto en el Bao FIA como en el CEIA
evidencian un cierto grado de contaminacin, aunque este no es tan perceptible.
Logramos evidenciar las distintas formas morfolgicas que tienen los
microorganismos, as como su cromogensis, su carcter ptico y los tamaos
que alcanzan luego de ciertos das de cultivo.

RECOMENDACIONES

Pasar el agar nutritivo de los tubos de ensayo a las placas petri, previa
esterilizacin de la cabeza del tubo para eliminar cualquier microorganismo que
se pudiera encontrar que altere el experimento.
Tener especial cuidado al momento de esterilizar el inoculador, ya que una mala
esterilizacin no garantiza que solo las colonias crezcan sino tambin otro tipo
de microorganismos fuera de estudio.
Recoger las placas para sacar resultados a las 48 horas, pues si pasa ms tiempo,
las colonias tendern a aumentar o disminuir de forma mucho ms rpida;
adems pueden proliferar otro tipo de microorganismos ajenos al estudio.
Para realizar una buena desinfeccin del inoculador se le debe calentar con el
mechero hasta que est cerca al rojo vivo, de manera que los microorganismos
mueran al no soportar tan altas temperaturas.
Se puede utilizar la misma pipeta en el pipeteo del agar y caldo nutritivo.
Al observar los resultados manejar las muestras con mucho cuidado, ya que un mal
manejo de estas puede confundir en la deduccin de la morfologa de las colonias
formadas.

BIBLIOGRAFIA
1- Michael Madigan,John Martinko,Jack Parker ,Biologa de los
microorganismos ,Madrid,Editorial Pearson ,2004.
2- Michael J.Pelczar ,Elementos de Microbiologa ,Mxico,Editorial Mc-Graw
Hill,1984
ANEXOS
www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r6282.DOC
http://www.elergonomista.com/microbiologia/loscultivos.htm
es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo

CUESTIONARIO
Que factores influyen en la microbiologa del aire, explique?

Temperatura
Humedad
Partculas en suspensin
Radiacin
Ventilacin

Caractersticas principales de los siguientes hongos, aspergillus, rhizobium. penicilium,


levadura

ASPERGILUS

Dominio: Eucariota
Reino: Fungi
Phylum: Ascomycota
Subphylum: Pezizomycotina
Clase: Eurotiomycetes
Orden: Eurotiales
Familia: Trichocomaceae
Gnero: Aspergillus
Especie: Aspergillus niger
Nombre vulgar: Carbonillo
RHIZOBIUM

Las bacterias Rhizobium son organismos de vida libre que habitan en la rizosfera y se alimenta
de los restos de organismos muertos. Estas contienen un plsmido que codifica informacin
que es vital para la infeccin y la nodulacin de la planta hospedadora correspondiente. Son
bacilos mviles, Gram-negativos, con dos capas de pared celular (la primera capa esta hecha
por carbohidratos y protenas, y la segunda capa por lpidos y carbohidratos), procariotas,
aerobios (necesita oxgeno para crecer), mviles (al hacerse el test de motilidad, el agar se
vuelve amarillo y no de su color original morado-), beta (digiere la hemoglobina), crece casi
en cualquier temperatura, pero su desarrollo es ms ptimo a una temperatura de 25 C
(77 F), sus dimensiones son de 0.5-0.9 x 1.2-3.0 m, y cuenta con flagelos.

PENICILIUM

Se caracterizan por formar conidios mediante una estructura ramificada que recuerda la forma
de un pincel, las ramificaciones terminan en unas clulas que se conocen como fialides. Las
filides originan las esporas.
Cuando existe solamente un verticilo se denomina monoverticilado y si existen varios
biverticilado, terverticilado o poliverticilado
LEVADURA

Son organismos unicelulares eucariotas

Se nutren por absorcin

Presentan pared celular con quitina

Realizan fermentacin

Tienen una reproduccin por gemacin o brotacin

QUE INGREDIENTES CONTIENE EL CALDO NUTRITIVO AGAR NUTRITIBO Y AGAR SABOURAUD

Agar Sabouraud

Contiene:

40 g/L glucosa
10 g/L pluripeptona
15 g/L agar
0,05 g/L [cloranfenicol]
pH 5.6

Agar Nutritivo

Contiene:

0,5% de peptona;
0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5% de agar;
0,5% de cloruro de sodio;
agua destilada;
pH casi neutro (6,8) a 25 C.

Caldo Nutritivo
Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que constituye la

fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.


Puede ser utilizado adems, como pre enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. A
partir
de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias
inhibitorias