Universidad Autnoma de Ciudad Jurez

Instituto de Ciencias Biomdicas

Lic. En Qumico Farmacutico Bilogo
Laboratorio de Microbiologa I
Ramrez Islas, Luis Alberto
Prctica #3: Estudio microscpico de las bacterias
Resumen
Para simplificar el estudio de las bacterias, a lo largo del tiempo, se ha
desarrollado y mejorado la forma de observarlos. Las tcnicas de tincin de
microorganismos no solo resaltan su forma y tamao; tambin, segn algunos
gneros y especies, pueden observarse otras caractersticas, como la presencia
de cpsula y endospora; adems de poder utilizar tinciones diferenciales para
poder concluir algunas caractersticas de la clula a partir de ellas. Se realizaron
cuatro tipos de tinciones a fin de identificar las propiedades de cada tincin.
Palabras clave: Tinciones, Gram, Ziehl-Neelsen modificada, cpsula, endospora.
Introduccin

La observacin de los puntos en los que se observa su

microorganismos surge desde la
invencin de los primeros
microscopios; en un principio, la
observacin se realizaba en fresco,
es decir, se tomaban muestras y se
observaban directamente al
microscopio. Con el desarrollo de las
tcnicas de microscopa y de las
tcnicas de tincin de clulas, se
pudo mejorar el reconocimiento
morfolgico de stas. Una de las
principales formas para clasificar
microorganismos es utilizando su
morfologa celular. Se reconocen: la
estructura de coco, que semeja a una
esfera, o, literalmente, un coco; la
forma de bacilo, que posee un
aspecto cilndrico con extremos
redondeados; los espirilos semejan a
los bacilos, mas stos no son rectos
como los bacilos; y la forma de
espiroqueta es baste ms alargada y
delgada con una mayor cantidad de
tendencia curvilnea. stas formas, a
su vez, pueden generar diferentes
conformaciones entre s, dando lugar
a los dilplo, estrepto, entre otras.
Aun as, est no es la mejor forma
para obtener informacin sobre la
fisiologa o filogenia de un
microorganismo, por ejemplo, entre
bacilos Archaea y Bacteria, es muy
posible no encontrar diferencias con
dicha observacin. [ CITATION
Mad09 \l 2058 ]
Paul Ehrlich, bacterilogo
alemn nacido en 1854, fue capaz de
demostrar cmo las tinciones mejoran
la identificacin de las clulas.
[ CITATION Cal06 \l 2058 ] Las
tinciones, actualmente, tras aos de
desarrollo, se puede clasificar segn
el tipo, ya sea una tincin simple,
como el azul de metileno, safranina y
cristal violeta, stas tres muestran el
tamao, forma y conformacin de las
clulas; las tinciones diferenciales
son aquellas que utilizan al menos
dos tintas que reaccionan de forma
diferente en diferentes partes de la
bacterias, lo que permite hacer
distinciones, ejemplo de ellas son la
tincin de Gram, la tincin de Ziehl-
Metodologa
Neelsen y la tincin negativa; las
tinciones especiales son aquellas que
permiten diferenciar diferentes
estructuras especializada, un claro
ejemplo es la tincin del flagelo, la
cual funciona construyendo lminas
de tinta en la superficie del flagelo.
[ CITATION Bla12 \l 2058 ]
Resultados
Se observaron diferentes especies a fin de representar a diversos gneros para
poder identificar cmo con qu gnero se puede utilizar tinciones especficas. Las
primeras cuatro imgenes muestran tinciones Gram (Imagen 1- Imagen 4). La
Imagen 5 muestra la tincin de Ziehl-Neelsen modificada; la Imagen 6, la tcnica
de tincin de endospora; y la Imagen 7, la tincin de cpsula.

Imagen 1 Tincin Gram (+) de una muestra de

estafilococo vista a 100x. Imagen 4 Tincin Gram (-) de E. coli vista a 100x

Imagen 2 Tincin Gram (+) de un bacilo vista a

100x Imagen 5 Tincin Zielh-Neesen modificada de M.
tuberculosis vista a 100x. Los puntos rojos es la
muestra.

Imagen 3 Tincin Gram (-) de K. oxytoca vista a

100x

Imagen 6 Tincin de endospora de bacilos vista a

100x

Discusin
Las primeras cuatro imgenes
muestran tinciones de Gram, y un par
es Gram (+) y otro Gram (-). Las
Gram (+) son las tinciones de
estafilococos (Imagen 1) y bacilos
(Imagen 2); adems, los
estreptococos, enterococos
micoplasmas tambin pertenecen a
este grupo. Las tinciones Gram (-)
son las de K. oxytoca y E. coli,
imgenes 3 y 4, respectivamente.
Otras bacterias que pueden entrar en
este grupo son las pseudomonas,
enterobacterias y salmonela.
[ CITATION Mor12 \l 2058 ] Se puede
observar las variaciones en el color,
las Gram (+) muestran un color
morado debido al cristal violeta,
mientras que las Gram (-) deben su
color rojizo a la safranina del ltimo
paso de la tincin de Gram.
[ CITATION Bla12 \l 2058 ]
La segunda tincin, Ziehl-
Neelsen modificada fue utilizada para
M. tuberculosis, ste es el agente
etiolgico de la tuberculosis, es un
bacilo delgado y con propiedades
cido resistentes debido a que las
microbacterias presentan cidos
Imagen 7 Observacin de la tincin de cpsula de
K. oxytoca vista a 100x
miclicos y lipoarabinomanona que
se extienden a lo lago de la
membrana plasmtica. Para lograr la
tincin, es necesario calor y
sustancias lo suficientemente
penetrantes para teir, como la
fucsina. La tincin de Ziehl-Neelsen
se fundamente en teir a la clula y
y
utilizar el segundo colorante como
fondo para facilitar su observacin
mediante el contraste de colores.
Otra variante para la tincin de
bacterias cido-resistentes es utilizar
la tincin de fluorocromos, utilizando
auramina seguida de una
decoloracin cido-alcohol.
[ CITATION Rya11 \l 2058 ]
La tincin de endosporas se
facilita al calentar la muestra para
permitir la penetracin del colorante a
la clula. Utilizando esa misma
dificultad para el flujo libre del
colorante, se realiza la eliminacin del
exceso del colorante. La observacin
de endospora es posible en todas las
bacterias petenecients a los gneros
Bacillus y Clostridium. [ CITATION
Bro11 \l 2058 ]
La cpsula de las bacterias
confiera una mayor virulencia a la
bacteria, debido a que las hace
resistentes a la fagocitosis. Durante la Bibliografa
prctica, no se pudo observar la
Black, J. G. (2012). Microbiology.
preparacin hecha por el equipo,
Principles and explorations. United
posiblemente debido a la tinta china
States of America: Wiley. John
utilizada. Un mtodo alternativo es el
Wiley & Sons, inc.
mtodo de Welch, ste implica una
Brooks, G. F., Carroll, K. C., Butel,
tincin con cristal violeta y un lavado
J. S., Morse, S. A., & Mietzner, T.
son sulfato de cobre. El sulfato de
A. (2011). Jawetz, Melnick y
cobre funciona como eliminar del
Adelberg. MIcrobiologa mdica.
exceso de cristal violeta y como
China: McGraw-Hill Educacin.
medio de contraste para la
Calvo, A. (Marzo de 2006). Ehrlich
preparacin. [ CITATION Bro11 \l
y el concepto de bala mgica.
2058 ]
Sociedad Espaola de
Conclusin Quimioterapia, 19(1), 90-92.
Obtenido de
El estudio de los microorganismos no
http://www.seq.es/seq/0214-
solo puede emplear diferentes tipos
3429/19/1/Calvo-Historia.pdf
de microscopios; la utilizacin de
Madigan, M. T., Martinko, J. M.,
tinciones especial para diferentes
Dunlap, P. V., & Clark, D. P.
grupos de bacterias o propiedades
(2009). Brook. Microbiologa de
especficas de stas aumenta las
los microorganismos. Madrid:
posibilidades de observacin del
Pearson Educacin.
microscopio de campo claro. Aunque
Mora, X. (2012).
las estructuras celulares como las
DIFERENCIANDO BACTERIAS
capsulas, esporas y pared de cido-
GRAM+ y GRAM. Selecciones
resistentes, son inherentes a
avcolas, 25-27.
diferentes medios condiciones
Ryan, K. J., & Ray, C. G. (2011).
ambientales, aplicar calor y los
Sherris. Microbiologa Mdica.
reactivos necesarios permite penetrar
China: McGraw-Hill.
dichas estructuras para poder ser
observadas al microscopio.