Manual de Analisis de Aguas Residuales

MANUAL PARA EL ANLISIS DE AGUAS
RESIDUALES Y LODOS
I.C. DAYANA KATERINE GRISALES PENAGOS

I.M. LINDA JOELA ORTEGA LPEZ
SERGIO ANDRS BLANCO LONDOO, ESP
TATIANA RODRGUEZ CHAPARRO, PhD.
CARLOS EDUARDO MUOZ ORTIZ, ESP
I.C. ANGLICA ANDREA MNDEZ REVOLLO
I.C. DIANA MARGARITA HERNNDEZ
I.C. YULY VANESSA TORRES ARVALO
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA INGENIERA CIVIL
UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA
BOGOT 2014
CONTENIDO
Pg.
PRESENTACIN.......................................................................................11
PREPARACIN DE SOLUCIONES...............................................................12
A. SOLUCIN H2SO4 1.0N.....................................................................12
B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N........................................................12
C. FACTOR DE DILUCIN......................................................................13
ANLISIS FSICOS....................................................................................15
1. COLOR MTODO N 2120............................................................15
A. CONCEPTO.............................................................................................. 15
B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................15
C. EQUIPOS Y MATERIALES..........................................................................15
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 16
E. CLCULOS............................................................................................... 17
2. SLIDOS MTODO N 2540..........................................................17
A. CONCEPTO.............................................................................................. 17
B. PRINCIPIO DEL METODO.........................................................................17
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 18
ANLISIS QUMICOS................................................................................21
3. ALCALINIDAD Y CIDOS VOLTILES TOTALES MTODO N 2320. 21
A. CONCEPTO.............................................................................................. 21
2
E. PREPARACIN DE REACTIVOS.................................................................21
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 23
G. Calibracin medidor de pH.....................................................................23
H. CLCULOS.............................................................................................. 25
4. DUREZA...........................................................................................26
A. CONCEPTO............................................................................................ 26
B. MATERIALES.......................................................................................... 26
C. REACTIVOS........................................................................................... 27
D. PROCEDIMIENTO...................................................................................27
E. CALCULOS............................................................................................ 28
5. REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE MTODO N 2350.....28
A. CONCEPTO.............................................................................................. 28
D. REACTIVOS............................................................................................. 29
E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS..........................................................29
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 30
G. CLCULOS.............................................................................................. 30
6. MTODO PARA DETERMINACIN DE OZONO FASE LQUIDA (AccuVac)

No. 454-456.........................................................................................32
A. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................32
B. EQUIPOS Y MATERIALES..........................................................................32
C. REACTIVOS............................................................................................. 32
3
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 32
E. CLCULOS............................................................................................... 34
7. CLORUROS MTODO N 4500-Cl-.................................................34
A. CONCEPTO.............................................................................................. 34
D. REACTIVOS............................................................................................. 35
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 35
G. CLCULOS.............................................................................................. 36
8. FSFORO ORTOFOSFATOS (PO4-2) MTODO N 4500-P..............37
A. CONCEPTO.............................................................................................. 37
D. REACTIVOS............................................................................................. 37
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 38
G. CALCULOS.............................................................................................. 41
8 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE FOSFORO- UTILIZANDO EL

ESPECTOFOTOMETRO DR 5000...........................................................41
C. REACTIVOS............................................................................................. 42
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 42
E. CLCULOS............................................................................................... 44
4
9. SULFATOS MTODO N 4500-SO42-...............................................44
A. CONCEPTO.............................................................................................. 44
D. REACTIVOS............................................................................................. 44
E. PREPARACION DE REACTIVOS.................................................................45
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 45
G. CALCULOS.............................................................................................. 47
10. NITRGENO MTODO N 4500-Norg...........................................48
A. CONCEPTO.............................................................................................. 48
D. PREPARACIN DE REACTIVOS.................................................................49
E. PROCEDIMIENTO..................................................................................... 49
F. CLCULOS............................................................................................... 51
10 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE NITROGENO TOTAL (2 a 150

mg/L N), MTODO DIGESTIN DE PERSULFATO...................................51
A.PRINCIPIO DEL MTODO..........................................................................51
C. REACTIVOS............................................................................................. 52
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 52
E. CLCULOS............................................................................................... 54
11. DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220

RANGO MEDIO -800 mg/L....................................................................55
5
A. CONCEPTO.............................................................................................. 55
D. REACTIVOS............................................................................................. 55
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 56
12. MTODO PARA DETERMINACIN DE OXGENO DISUELTO (Utilizando

el equipo porttil Hanna HI 9146)........................................................63
C. REACTIVOS............................................................................................. 63
D. PROCEDIMIENTO PARA MEDIR OXGENO DISUELTO................................64
13. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 MTODO N 5210...65
A. CONCEPTO.............................................................................................. 65
B.PRINCIPIO DEL METODO..........................................................................65
C. REACTIVOS............................................................................................. 66
D. PREPARACIN DE REACTIVOS.................................................................66
E. PROCEDIMIENTO..................................................................................... 69
F. CLCULOS............................................................................................... 71
14. RESIDUAL DE PEROXIDO DE HIDROGENO.....................................72
A. CONCEPTO............................................................................................ 72
B. EQUIPOS Y MATERIALES........................................................................72
C. REACTIVOS........................................................................................... 72
6
D. PROCEDIMIENTO...................................................................................73
15. CONSTITUYENTES ORGNICOS ABSORCIN-UV MTODO N

5910 75
A. CONCEPTO.............................................................................................. 75
C. PROCEDIMENTO...................................................................................... 75
D. CLCULOS.............................................................................................. 76
16. MEDIDA DE LA ABSORCIN EN LA REGION DEL ESPECTRO UV-VIS

............................................................................................................77
B.EQUIPOS Y MATERIALES...........................................................................77
C.PROCEDIMIENTO...................................................................................... 78
2. Preparacin de la muestra......................................................................78
17. MTODO PARA DETERMINACIN DE CARBONO ORGNICO TOTAL

(COT), MTODO DIRECTO....................................................................82
C. REACTIVOS............................................................................................. 82
D. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 83
E. CLCULOS............................................................................................... 85
18. MTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO....85
C. REACTIVOS............................................................................................. 85
7
E. ESQUEMA DEL MONTAJE.........................................................................86
F. PROCEDIMENTO....................................................................................... 86
19. ENSAYO DE ACTIVIDAD METANOGNICA ESPECFICA.....................88
A. CONCEPTO.............................................................................................. 88
D. REACTIVOS............................................................................................. 90
F. PROCEDIMIENTO...................................................................................... 92
G. CLCULOS.............................................................................................. 94
CALCULO DE LA AME...........................................................................95
20. MTODO PARA DETERMINACIN DE AZCAR..............................100
A. PRINCIPIO DEL MTODO.......................................................................100
C. REACTIVOS........................................................................................... 101
D. PREPARACION DE REACTIVOS...............................................................101
E. PROCEDIMIENTO................................................................................... 101
F. CLCULOS............................................................................................. 102
21. HIDROGENO Y METANO POR CROMATOGRAFIA GASEOSA..........102
A.CONCEPTO............................................................................................. 102
C. PROCEDIMIENTO...................................................................................103
D. CALCULOS............................................................................................ 133
ANLISIS DE SUELOS............................................................................136
8
21. MTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES EN
SUELO................................................................................................136
A. MTODO CUANTIFICACIN COMPLEXOMTRICA...................................136
C. REACTIVOS........................................................................................... 136
D. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................136
E. PROCEDIMIENTO................................................................................... 137
F. CLCULOS............................................................................................. 137
22. MTODO PARA LA MEDICIN DE pH EN SUELOS..........................139
A. EQUIPOS Y MATERIALES........................................................................139
B. REACTIVOS........................................................................................... 139
C. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................139
D. PROCEDIMIENTO..................................................................................139
23. MTODO PARA LA MEDICIN DE LA MATERIA ORGNICA EN

SUELOS..............................................................................................140
A. EQUIPOS Y MATERIALES........................................................................140
B. PROCEDIMIENTO................................................................................... 140
C. CLCULOS............................................................................................ 140
ANALISIS MICROBIOLGICO..................................................................141
A.CONCEPTO............................................................................................. 141
B.PRINCIPIO DEL MTODO........................................................................141
24. TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO

COLIFORME........................................................................................142
A. PRINCIPIO DEL METODO.......................................................................142
9
C. REACTIVOS........................................................................................... 142
D. PREPARACIN DE REACTIVOS...............................................................142
E. PROCEDIMIENTO................................................................................... 143
F. CLCULO............................................................................................... 144
ANLISIS DE TOXICIDAD.....................................................................146
25. ENSAYO DE TOXICIDAD TOTAL CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM

CEPA L................................................................................................146
A. CONCEPTO............................................................................................ 146
D. REACTIVOS........................................................................................... 146
E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................146
F. PROCEDIMIENTO.................................................................................... 147
G. CLCULOS............................................................................................ 149
10
PRESENTACIN
El Laboratorio de Saneamiento Ambiental de la Universidad Militar

Nueva Granada presenta en este documento las tcnicas de laboratorio
para el anlisis de la calidad del agua residual, lodos y suelos con el
objetivo de unificar los procesos seguidos por los usuarios del laboratorio
en el desarrollo de las diferentes prcticas.
Para la elaboracin de este manual se consultaron las normas del

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater de
AWWA, APHA y WEF ao 2005, as como el Manual Prctico de Anlise de
gua de Funasa Brasil ao 2006 y el manual de Mtodos Analticos del
Laboratorio de Suelos del IGAC 2006.
El manual aborda anlisis fsicos, qumicos y microbiolgicos en aguas

residuales y suelos. En la primera parte se abordan los anlisis fsicos,
en la segunda parte se tratan parmetros de anlisis qumicos de
compuesto inorgnicos y orgnicos presentes en las aguas residuales y
gases. En la tercera parte se presentan anlisis para suelos y extractos
de suelo. En la cuarta y quinta parte se presenta una metodologa para
la determinacin de microorganismos del grupo Coliforme tanto en
aguas como en suelos y un ensayo biolgico para la determinacin de
toxicidad en aguas.
De acuerdo con lo anterior deseamos que este documento se utilidad

para aquellas personas que deseen realizar ensayos de calidad del agua
residual y suelos.
11
PREPARACIN DE SOLUCIONES
A. SOLUCIN H2SO4 1.0N
Para preparar una solucin de H 2SO4 1N diluir cuidadosamente 30mL de

H2SO4 concentrado en un baln de 1000mL con agua destilada.
B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N
A partir de la solucin de H 2SO4 normalizada se obtienen las respectivas

soluciones empleado la siguiente ecuacin:
V 1 C1=V 2 C 2
Donde:
V1 = Volumen a tomar
C1 = Concentracin conocida
V2 = Volumen a preparar
C2 = Concentracin esperada
Como ejemplo para concentraciones de 0.5N se requiere diluir 500mL de

solucin 1N en un baln de 1.0L con agua destilada de acuerdo con lo
siguiente:
V 2 C2 1000 0.5
V 1= = =500 mL
C1 1.0
Como ejemplo para concentraciones de 0.05N se requiere diluir 25mL de

solucin 1N en 500mL de agua destilada de acuerdo con lo siguiente:
V 2 C2 500 0.05
V 1= = =25 mL
C1 1.0
12
C. FACTOR DE DILUCIN
Para obtener diferentes concentraciones de muestras se requiere

realizar diluciones de la misma para esto se emplea el Factor de
Dilucin, el cual se presenta en la siguiente ecuacin:
VT
F . D=
Vf
Donde:
F.D = Factor de Dilucin
VF = Volumen final que se coloca de la muestra
VT = Volumen total (VF + Vrestante para completar)
C= Concentracin
D. PREPARAR SOLUCIONES HCL (10 mol/L)
Peso molecular HCL
H= 1 gr/mol O=16 gr/mol Cl=35,5 gr/mol
Densidad HCL = 1,175 gr/cm3
Masa = densidad x volumen
= 1,175 gr/cm3 x 1000 cm3
= 1175 gr de HCL en 1L de solucin
Como la solucin es de 37% de HCL, las cantidades de soluto y solvente

que ah en un litro son:
100 gr solucion 1175 1175 X 37 gr

= X=
37 gr HCL X 100 gr
X =434,75 gr de HCL en1 L
13
Ahora :1175 gr de solucin434,75 gr de HCL
740,25 gr de H 2 O
435,75 gr
Luego se pasa a moles : =11,9 mol en 1 L de HCL
36.5 gr /mol
Como preparar una solucin 10 mol/ L ?
11.9 mol 10 mol

=
1000 cm3 X
X =840 ml de HCL en 1 L 84 ml de HCL en100 ml
14
ANLISIS FSICOS
1. COLOR MTODO N 2120
A. CONCEPTO
Usualmente cuando se examina el agua, las primeras propiedades que

se suelen considerar son las siguientes: color, sabor y olor,
caractersticas inherentes a ella. El agua de uso domstico e industrial
tiene como parmetro de aceptacin la de ser incolora, pero en la
actualidad, gran cantidad del agua disponible se encuentra coloreada y
se tiene el problema de que no puede ser utilizada hasta que no se le
trata removiendo dicha coloracin.
Las aguas superficiales pueden estar coloreadas debido a la presencia

de iones metlicos naturales (hierro y manganeso), humus, materia
orgnica y contaminantes domsticos e industriales como en el caso de
las industrias de papel, curtido y textil; esta ltima causa coloracin por
medio de los desechos de teido los cuales imparten colores en una
amplia variedad y son fcilmente reconocidos y rastreados
B. PRINCIPIO DEL MTODO
Se pueden efectuar dos medidas de color en el agua: real y aparente. El

color real del agua natural es el que presenta cuando se ha eliminado la
turbidez (filtrando o centrifugando), siendo principalmente causado por
materiales hmicos coloidales. Por el contrario, el color aparente es
determinado directamente de la muestra original (sin filtracin ni
centrifugacin), es debido a la existencia de slidos en suspensin.
Para la determinacin de color en el agua existe el mtodo

espectrofotomtrico, el cual se usa principalmente en aguas industriales
contaminadas que tienen colores poco usuales, y que no pueden ser
igualados por el mtodo colorimtrico. El color se determina mediante
un espectrofotmetro, cuyo esquema de funcionamiento se recoge en la
figura, a tres longitudes de onda distribuidas por el conjunto del
espectro visible: 1 = 436nm; 2= 525nm y 3 = 620 nm, de acuerdo
con lo sugerido por een (1999).
C. EQUIPOS Y MATERIALES
Espectrofotmetro DR 2800 o DR 5000.
15
Bomba de vaco.
Membrana de filtracin de 1.2 m de fibra de vidrio o centrifugar
por 5 min a 1500 rpm.
Probeta 50mL.
D. PROCEDIMIENTO
I. Para determinar el color real se debe filtrar la muestra en filtro de fibra

de vidrio de 1,2 m o en filtro de acetato de celulosa de 0,45 m y para
color aparente tomar la muestra de agua directamente de la original.
a. Encender el espectrofotmetro y seleccionar la longitud de onda

en 436nm.
b. Calibrar el equipo con la lectura inicial del blanco.
c. Realizar la lectura de la absorbancia de la muestras de agua.
a) Paso 1 b) Paso 2 a 3 c) Paso 4
Figura 1. Pasos para el procedimiento de medicin de color
II. Si se utiliza el espectrofotmetro DR 2800 O DR 5000, las

unidades de medida son directamente UPC, as:
a. Seleccionar el programa correspondiente a color 455 nm o 465

nm.
b. Insertar la multiadaptador usando el portacelda respectivo frente

al usuario.
c. Para preparar el blanco se llena un recipiente de 10 ml de agua

destilada hasta el borde indicado.
16
d. Llenar el segundo recipiente hasta el aforo de la muestra a
analizar.
e. Limpiar los recipientes de tal manera que estn mojados ni que

queden rastro de huellas; luego, insertar el blanco pulsar
<<ZERO>>, y retirar una vez salga <<0 unidades PtCo>>.
f. Realizar los mismos con el recipiente que contiene la muestra y

pulsar <<MEDIR>>.
E. CLCULOS
Para el numeral (a) el color se expresa en trminos de absorbancia (cm-1)

en la longitud de onda 436 nm.
2. SLIDOS MTODO N 2540
A. CONCEPTO
Los slidos se refiere a la materia en suspensin o disuelta en agua o

agua residuales. Los slidos pueden afectar el agua o adversamente la
calidad del efluente. Aguas con alto contenido de slidos disueltos en
general son de menor potabilidad y pueden inducir a reacciones
fisiolgicas en el consumidor. Por estas razones, un lmite de 500mg de
slidos disueltos/l es el deseado para el consumo en aguas.
B. PRINCIPIO DEL METODO
Son los materiales suspendidos y disueltos en un agua. Se obtienen

despus de someter al agua a un proceso de evaporacin a
temperaturas comprendidas entre 103 y 105C. La porcin filtrable
representa a los Slidos Coloidales Totales Disueltos y la no-filtrable son
los Slidos Totales en Suspensin.
El contenido de slidos voltiles se interpreta en trminos de materia

orgnica, teniendo en cuenta que a 55050C la materia orgnica se
oxida formando el gas carbnico y agua que se volatilizan. Sin embargo,
la interpretacin no es exacta puesto que la prdida de peso incluye
tambin prdidas debido a descomposicin o volatilizacin de ciertas
sales minerales como por ejemplo las sales de amonio o carbonato de
magnesio.
17
Desecador
Bomba de vaco.
Balanza analtica.
Horno tipo mufla 550C.
Horno (103C y 105C).
Embudo tipo Buchner para membrana con dimetro de 47mm.
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio, con tamao nominal
de abertura de 0,45m o 1,2m.
Capsulas de porcelana.
Pinza metlica.
Probeta de 50mL.
Guantes para mufla.
D. PROCEDIMIENTO
PREPARACIN DE CPSULA Y MEMBRANA PARA ST - SST
a. Lavar la capsula de porcelana previamente y calcinarla en mufla a

550C durante 15 minutos. Apagar la mufla, abrirla levemente y
esperar hasta que llegue a una temperatura de 150C (1 hora y 20
minutos aproximadamente) para despus ser puesta en el horno a
105C por 15 minutos. Luego transferirla al desecador para que
se enfri a temperatura ambiente.
b. Para preparacin de solidos suspendidos colocar una membrana
filtrante en el sistema de filtracin.
c. Hacer 3 lavados a la membrana con el sistema de filtracin
utilizando 20mL de agua destilada para cada lavado (total de
60mL) que deben ser despreciados.
d. Colocar la membrana en la capsula de porcelana y calcinar en la
mufla por 15 minutos, luego transferirla al desecador para que se
enfri a temperatura ambiente.
I. DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES (ST)
Este procedimiento es limitado a una cantidad de slidos secos

de 200mg, debido a la posibilidad de la formacin
de una capa que impide el secado de los residuos.
a. Preparar una cpsula de porcelana como se nombr anteriormente

en el paso a.
b. Determinar la masa M1 en gramos en la balanza analtica.
18
c. Transferir un volumen de la muestra V1 (en mililitros).
d. Secar la muestra en el horno a 103C-105 C con tiempo
suficiente para lograr una masa constante (24 horas) y determinar
la masa despus de enfriar en el desecador M2.
M 2M 1 ) 1000000
Slidos totales ( ST ) ( mgL )= ( V 1 ( mL ) Ecuacin 1
II. DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES FIJOS Y VOLTILES

(STF STV)
a. Despus de determinar la concentracin de los slidos totales,

colocar la cpsula con la muestra en la mufla a 550C para
alcanzar masa constante (en este caso, 15 minutos para una nica
muestra y, no ms de 2 horas cuando son varias muestras).
b. Determinar la masa despus del enfriamiento en el desecador
(M3, en g) en la balanza analtica y calcular STF con la Ecuacin 2 y
STV con la Ecuacin 3:
mg ( M 3M 1 ) 1000000
Slidos Totales Fijos(STF ) ( )
L
=
V 1 ( mL ) Ecuacin 2
mg ( M 2M 3 ) 1000000
Slidos Totales Voltiles(STV ) ( ) L
=
V 1 ( mL ) Ecuacin 3
III. DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST)
Este procedimiento es limitado a una cantidad de slidos secos

de 200mg debido a la posibilidad de la formacin de una capa
que dificulta el secado.
a. Preparar una cpsula con membrana para el ensayo como se

nombr anteriormente.
b. Determinar la masa del conjunto (membrana + cpsula) M 4 en
(g).
c. Colocar con una pinza metlica la membrana calcinada en el
sistema de filtracin.
d. Filtrar un volumen conocido (V2) de muestra, utilizando el sistema
de filtracin. se recomienda un volumen que casi colmate la
membrana. Para muestras con poco material en suspensin se
recomida mnimo 100 ml.
19
e. Transferir la membrana que contiene el residuo a la cpsula de
porcelana.
f. Secar el conjunto (membrana + cpsula) a 103C 105C hasta
conseguir una masa constante (por 24 horas) y despus enfriar en
el desecador.
g. Determinar la masa M5 en (g) y calcular con la Ecuacin 4.
( M 5 M 4 ) 1000000
Slidos suspendidos totales mg/L= Ecuacin 4
V 2 ( mL )
Figura 2. Paso d a f
IV. DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS FIJOS Y

VOLTILES (SSF SSV)
a. Despus de la determinacin de la concentracin de slidos

suspendidos totales, colocar el conjunto en la mufla, a 550C por
un tiempo suficiente hasta conseguir una masa constante
(aproximadamente 15 minutos) y despus de enfriar en desecador
determinar la masa M6 en (mg).
b. Calcular SSF con la Ecuacin 5 y SSV con la Ecuacin 6
( M 6 M 4 ) 1000000
mg de slidos suspendidos fijos/ L= Ecuacin 5
V 2 ( mL )
( M 5 M 6 ) 1000000
mg de slidos voltiles /L= Ecuacin 6
V 2 ( mL )
V. DETERMINACIN DE SLIDOS DISUELTOS TOTALES, FIJOS Y

VOLTILES (SDT, SDF Y SDV)
Los valores de las concentraciones de slidos disueltos se pueden

obtener por la diferencia entre las masas de los slidos totales y de los
20
slidos suspendidos, considerando las respectivas fracciones (totales,
fijos y voltiles) como se observa en la Figura 3.
ST = SST + SDT = SSV +SSF + SDV + SDF = SVT + SFT;
SVT = SSV + SDV y SFT = SSF + SDF;
SST = SSV + SSF y SDT = SDV + SDF;
Figura 3. Clasificacin de los slidos
21
ANLISIS QUMICOS
3. ALCALINIDAD Y CIDOS VOLTILES TOTALES

MTODO N 2320
A. CONCEPTO
La alcalinidad de un agua es su capacidad de neutralizar cidos. Las

sustancias ms comnmente encontradas en aguas superficiales
causadoras de alcalinidad son los carbonatos (CO 3-2), bicarbonatos
(HCO3-) e hidrxidos (OH-). No obstante, algunas sales de cidos dbiles
como boratos, silicatos, nitratos y fosfatos pueden tambin contribuir a
la alcalinidad de estar tambin presentes. Estos iones negativos en
solucin estn comnmente asociados con iones positivos de calcio,
magnesio, potasio, sodio y otros cationes. El bicarbonato constituye la
forma qumica de mayor contribucin a la alcalinidad. Dicha especie
inica y el hidrxido son particularmente importantes cuando hay gran
actividad fotosinttica de algas o cuando hay descargas industriales en
un cuerpo de agua (APHA, 2005).
La alcalinidad se expresa como la concentracin equivalentes de iones

hidroxilo, mg/l o como la cantidad equivalente de CaCO3 en mg/l.
Los iones relacionados a la alcalinidad presentes en una muestra como

resultado de la disociacin o la hidrlisis de solutos, reacciona con la
adicin de un cido patrn. La alcalinidad como la acidez depende del
valor del punto final del pH fijado.
Medidor de pH, precisin 0.01

Buretas digitales o vidrio, 10, 25mL
Pipeta volumtrica
Beaker, 80mL
Centrfuga
cido sulfrico (H2SO4) concentrado, p. a.
Hidrxido de Sodio (NaOH) en lentejas, p. a.
22
E. PREPARACIN DE REACTIVOS
Solucin normalizada de cido sulfrico (H2SO4) 0.05N
Pipetear 1,375 mL (1375l) de H 2SO4 concentrado y transferir

lentamente a un baln volumtrico de 1L con agua destilada y
completar el volumen del baln hasta aforo.
La normalizacin de la solucin de H2SO4 se realiza con patrn primario

de Tetra Borato de Sodio decahidratado (Brax), Na2B4O7.10H2O.
La normalizacin debe ser hecha por triplicado, con masas conocidas del
patrn en torno de 0,1900 g, disueltas en cerca de 50mL de agua
destilada. Se deben usar 2 gotas de solucin de azul de bromotinol como
indicador de punto final (color amarillo) o metil naranja hasta un punto
final incoloro, el clculo de la concentracin normalizada es:
masa( g )boraxx1000
M H 2 SO4
volumenH2 SO4 (mL) x381,42
Teniendo en cuenta que 0.5N=1M se multiplica el valor por dos para

obtener el valor en N.
Solucin normalizada de Hidrxido de sodio (NaOH) 0.02N
En un beaker limpio disolver 0.8 g de NaOH con agua destilada. Dejar

enfriar y transferir la solucin cuantitativamente para el baln
volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen del baln hasta la marca
con agua destilada, agitar para homogenizar y transferir para la bureta.
La solucin de NaOH es inestable: la reaccin con CO 2 atmosfrico exige

normalizacin semanal.
La normalizacin de NaOH debe ser hecha utilizando como patrn

primario Biftalato cido de Potasio (KPH).
El KPH se debe secar previamente en el horno a 120 C, por 24 horas y

enfriar en desecador. La normalizacin deber ser realizada por triplicado.
Se deben determinar masas de KPH prximas de 0,1022 g para
normalidades menores o iguales de 0.05N pesar 0,01022g, y debe
anotarse el valor exacto de cada una. Posteriormente, se disuelven en
cerca de 25 ml de agua destilada, en frascos erlenmeyer.
23
En los frascos erlenmeyer que contienen la solucin de KPH, adicionar 2
gotas de solucin de fenolftalena, trabajar en fondo blanco, luego
entonces, adicionar la solucin de NaOH hasta alcanzar una leve
coloracin rosada que persista, anotar cada volumen.
La molaridad o normalidad de la solucin normalizada se calcula con la

ecuacin 7:
massaKPH ( g ) x1000
M NaOH
volumeNaOHx 204,22
Ecuacin 7
La solucin del indicador de fenolftalena se prepara, disolvindose 80

mg de fenolftalena en 60 ml de Etanol p.a., y completar con agua
destilada hasta 100 ml en un baln volumtrico.
NOTA: Cuando el indicador es la solucin de fenolftalena se tiene una

solucin trasparente para la regin cida y rosa en la regin alcalina.
F. PROCEDIMIENTO
G. Calibracin medidor de pH
Calibrar el medidor de pH marca Schott con las soluciones buffer de pH

7,0 y 4,0 a temperatura ambiente. De la siguiente manera.
a. Lavar la sonda (sensor) y secarlo.

b. Presionar la tecla Cal en modo Ct 1 y sumergir en la solucin buffer
de pH 7,0.
c. Presionar la tecla run/enter en modo Ct 1 AR parpadea y esperar a
que se estabilice el valor de milivoltaje (el valor es estable cuando
aparece modo Ct 2).
d. Lavar la sonda (sensor) y secarlo.
e. Sumergir la sonda en la solucin buffer de pH 4,0.
f. Presionar la tecla run/enter AR parpadea y esperar a que se
estabilice el valor de milivoltaje.
g. Presionar la tecla pH.
Calibrar el medidor de pH marca Ezoda PL-700AL con las soluciones

buffer de pH 7,0 y 4,0 a temperatura ambiente. De la siguiente manera.
a. Asegurarse que el sensor es el electrodo de pH. Este equipo es

multiparamtrico y hay sensores de oxgeno disuelto y
conductividad.
24
b. Sumergir el electrodo dentro de la solucin buffer pH 7.00. Agitar
suavemente y esperar hasta que la lectura sea estable. Presionar
y mantener la tecla /CAL por 3 segundos. Aparecer en la
pantalla CAL y parpadea el valor 7.00. cuando la pantalla deje de
parpadear e indique SA, luego END mientras la calibracin
termina, y regresara al modo de medicin.
c. Enjuagar el electrodo con agua limpia y secarlo con un pao seco
o con papel scott. Sumergir el electrodo dentro de la solucin
buffer pH 4.00 como en los pasos anteriores
d. Despus de la calibracin realizada con el buffer pH 4.00, la
pantalla indicara el porcentaje de pendiente (PTS) para mostrar el
estado del electrodo. Si el PTS est por debajo de 70% o por
encima de 130%, el electrodo debe ser sustituido. Una pendiente
con un valor 100% es Lo ideal.
NOTA:
a. Aparecer el icono indicador de error de calibracin, y Err en
lugar de SA, si la calibracin fallo.
b. Al hacer 2 o 3 puntos de calibracin, calibrar primero con el buffer
para pH 7 y en seguida con el buffer para el pH 4 0 10.
c. Calibracin del pH tipo USA o NIST se puede cambiar en la
configuracin avanzada.
d. Los puntos de calibracin de USA son 1.68, 4.01, 7.00, 10.01 y
12.45.
e. Los puntos de calibracin de NIST son 1.68, 4.01, 6.86, 9.18 y
12.45
NOTA PARA TODOS LOS USUARIOS
*El agitador del medidor de pH solo se puede usar con beaker o

Erlenmeyer con capacidad hasta de 1000ml.
I. ALCALINIDAD PARCIAL
a. Filtrar aproximadamente 60 ml de la muestra en el sistema de

filtracin. La filtracin se puede obviar si la muestra no presenta
un contenido considerable de slidos en suspensin.
b. Homogenizar el contenido del frasco de la muestra.
c. Medir 50mL de la muestra y transferir para un beaker de 100mL.
d. Colocar una barra magntica y acomodar el beaker en un agitador
magntico.
e. Introducir el electrodo del potencimetro en el contenido del
beaker y dejar en agitacin.
f. Esperar hasta que se estabilice el pH original de la muestra.
25
g. Iniciar la titulacin con la solucin normalizada de H 2SO4 0,05N
hasta que se obtenga un pH de 5.75 y anotar el volumen gastado
(V1).
II. ALCALINIDAD TOTAL
a. Continuar titulando hasta un pH de 4.3, el volumen gastado (V 2) es

el volumen total y con este se calcula la alcalinidad total.
III. CIDOS VOLTILES TOTALES
a. Al terminar el ensayo de alcalinidad en pH 4,3 bajar el pH hasta

3,0 con H2SO4 sin contabilizar el volumen gastado.
b. Agregar pocas perlas de vidrio y calentar en una plancha de
calentamiento hasta que salga vapor y dejar por 3min, hacer esto
en un lugar aireado preferiblemente con campana extractora y no
aspirar los vapores.
c. Dejar enfriar en un lugar y luego subir el pH hasta 4,0 con solucin
normalizada 0,02N de NaOH, colocar en cero la bureta y titular el
volumen gastado de un ph 4,0 hasta pH 7,0.
H. CLCULOS
I. ALCALINIDAD PARCIAL
N H h SO V 1 H h SO 50000
AP( mgCa CO3 / L)= 2 4 2 4
, Ecuacin 8
V muestra
Donde:
N=Normalidad de H2SO4.
V 1H 2 SO 4
=Volumen gastado en la titulacin de H2SO4 (ml)
V muestra
=Volumen de muestra, (ml)
II. ALCALINIDAD TOTAL
26
NH SO4 V 2 H SO 50000
AT ( mgCaCO 3 / L)= 2 2 4
, Ecuacin 9
V muestra
Donde:
N=Normalidad de H2SO4
V 2H 2 SO4
=Volumen gastado en la titulacin de H2SO4,(ml)
V muestra
=Volumen de muestra, (ml)
III. ALCALINIDAD INTEMEDIA
AI (mgCa CO 3 / L)= Alcalinidad total Alcalinidad parcial , Ecuacin 10
IV. CIDOS VOLTILES TOTALES
V titulado N NaOH 60000

AVT ( mgHAc/ L )= , Ecuacin 11
V muestra
Donde:
Vtitulado= Volumen de la muestra titulada, (ml)
NNaOH = Normalidad del Hidrxido de Sodio
Vmuestra = Volumen de la muestra, (ml)
4. DUREZA
A. CONCEPTO
La dureza es una propiedad qumica del agua caracterizada por la

presencia de carbonatos, bicarbonatos, cloruros, sulfatos y
ocasionalmente nitratos de calcio y magnesio. Desde el punto de vista
domstico e industrial, la dureza es indeseable, en procesos como el
lavado de ropa, pisos y losa, adems de algunos procesos industriales de
27
limpieza, puesto que genera un mayor consumo de jabn, al producirse
sales insolubles. En calderas y sistemas enfriados por agua, se producen
incrustaciones en las tuberas y una prdida en la eficiencia de la
transferencia de calor. Importantes concentraciones de dureza son
indeseables y deben ser removidas antes de que el agua tenga uso
apropiado para las industrias de bebidas, lavanderas, acabados
metlicos, teidos y textiles. Igualmente adiciona un sabor indeseable al
agua potable, por lo tanto en este sentido, ms que un parmetro de
riesgo potencial, representa un parmetro de calidad del recurso. La
mayora de los suministros de agua potable tienen un promedio de 250
mg/l de dureza. Niveles superiores a 500 mg/l son indeseables para uso
domstico. La dureza es caracterizada comnmente por el contenido de
calcio y magnesio y expresada como carbonato de calcio equivalente. Es
importante aclarar que existen dos tipos de dureza:
Dureza Temporal o Clcica: La cual est determinada por el contenido

de carbonatos y bicarbonatos de calcio y magnesio. Esta puede ser
eliminada mediante ebullicin del agua y posterior eliminacin de
precipitados formados por filtracin.
Dureza Permanente o Total: Est determinada por todas las sales de

calcio y magnesio excepto carbonatos y bicarbonatos. No puede ser
eliminada por ebullicin del agua.
B. MATERIALES
2 Erlenmeyer de 250ml
1 Beaker de 250ml
Probeta aforada de 50ml
Goteros
Bureta dosificadora
Agua destilada
Plancha agitadora
Barra magntica
C. REACTIVOS
Solucin Buffer pH=10 (Disolver 6.56 gr. de NH4Cl y 57 ml de NH4OH

en agua destilada y aforar a 100 ml.)
Solucin Buffer pH=12
28
Solucin indicadora Negro de Ericromo (Disolver 0.5 g de Eriocromo
negro T y 4.5 gr de clorhidrato de hidroxilamina en 100 ml de
etanol).
Solucin indicadora Murexide
Solucin Titulante EDTA (Disolver 2 gr de EDTA (sal disdica) ms
0.05 gr de MgCl2.6H2O en agua destilada y aforar a 1000 ml).
D. PROCEDIMIENTO
I. Dureza Total
a. Preparar 50ml la muestra a evaluar, depositndola en el respectivo

erlenmeyer, adems introduciendo la barra magntica y poniendo
este conjunto sobre la plancha, para comenzar con la agitacin.
b. A continuacin, colocar 10 gotas de solucin Buffer pH=10, en el
erlenmeyer.
c. Adicionar 3 gotas de solucin indicadora Negro de Ericromo.
d. Finalmente, realizar la titulacin con solucin titulante EDTA, desde
el color morado hasta un tono azul, donde se realiza la respectiva
lectura de EDTA, empleado.
II. Dureza Clcica
I. Se prepara la muestra de 50ml, tal y como se present en el

tem 1, de la dureza total.
II. Luego, se agregan 12 gotas de solucin Buffer pH=12, en el
erlenmeyer.
III. Introducir 5 gotas de solucin indicadora Murexide.
IV. Titular con solucin titulante EDTA, desde el color rosado hasta
violeta, momento en el que se realiza la medicin de EDTA,
gastado.
Nota: Antes de empezar el ensayo, se debe preparar el montaje, el cual

consiste en la plancha y la barra agitadora, adems de la bureta para
adicionar EDTA.
29
E. CALCULOS
mg VxNx 50000
de CaC O3=
l ml de muestra , Ecuacion 12
Donde:
V=ml Gastados de EDTA, N=Normalidad del EDTA
5. REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE MTODO N

2350
A. CONCEPTO
Los oxidantes se adicionan al agua potable y al agua residual para

desinfectar. Otro beneficio incluye remocin de limos, la oxidacin de
especies inorgnicas no deseables (e.g. iones de hierro, reduccin de
manganeso, sulfuros, y amonio) y la oxidacin de constituyentes
orgnicos (e.g. compuestos productores de olor y sabor). La demanda
oxidante se refiere a la diferencia entre la dosis oxidante agregada y la
concentracin oxidante residual medida despus de un tiempo de
contacto prescrito a un pH y temperatura dado.
La demanda oxidante y los requerimientos de oxidacin estn

significativamente afectados por las caractersticas fsicas y qumicas de
la muestra y la manera en la cual se mide el consumo del oxidante.
Particularmente, la reactividad oxidante est influenciada por la
temperatura, el pH, el tiempo de contacto, y la dosis oxidante. La
temperatura de la muestra afecta fuertemente las reacciones cinticas y
por ende la demanda a un tiempo de contacto dado. El pH de la muestra
afecta la forma y naturaleza del oxidante y el grado de demanda. El
ozono es inestable a valores de pH muy altos y la demanda de ozono es
especialmente sensible al pH de la muestra. La demanda oxidante
incrementa con el tiempo y por lo tanto la demanda debe ser definida
para un tiempo de contacto dado. La demanda oxidante tambin es
independiente de la dosis oxidante pues al incrementar la dosis oxidante
usualmente se incrementa la demanda, pero es incorrecto que al
duplicar la dosis oxidante se duplicar la demanda oxidante.
Este mtodo semi-batch involucra la determinacin de la demanda de

ozono con una adicin contina de ozono gaseoso al reactor batch. Los
resultados obtenidos de este mtodo dependen de la transferencia de
30
masa y las caractersticas del reactor. En adicin, algunos componentes
que consumen el ozono se pueden volatilizar durante el ensayo.
Generador de ozono capaz de proveer por encima del 5% de ozono

gaseoso.
Botellas limpiadoras de gas, vidrio de borosilicato, con un volumen
mnimo 250ml.
Tubos, nicamente se deben usar tubos sin metal o un tubo TFE.
Vidriera: bureta de 50ml; beaker de 400ml; cilindro graduado de
250ml.
Botella de lavado 500ml.
Agitador magntico (opcional).
Balanza analtica.
D. REACTIVOS
Agua libre de demanda de ozono.

cido sulfrico H2SO4.
Yoduro de potasio.
Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.1N
Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.05N
Solucin indicadora de almidn
E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
cido sulfrico H2SO4 2N:
Con precaucin adicionar 56mL concentrado de H 2SO4 a 800mL de agua

libre de demanda de ozono en un frasco volumtrico de 1L. Mezclar a
fondo y adicionar hasta la marca con agua libre de demanda de ozono.
Yoduro de potasio (2%) KI:
Disolver 20 g de KI en 800mL de agua libre de demanda de ozono en un

beaker y agitar por 1minuto, transferir la mezcla a un baln volumtrico
de 1000mL y llenar hasta el aforo con agua libre de demanda de ozono.
Tiosulfato de sodio titulante estndar Na2S2O3 0.1N:
Disolver 25 g de Na2S2O3 * 5H2O en 1L de agua destilada hervida fresca,

almacenar por 24h y normalizar contra el bi-yodato de potasio o con
31
dicromato de potasio despus de dos semanas de almacenamiento. Este
almacenamiento inicial es necesario para permitir la oxidacin de
cualquier ion de bisulfito presente. Para minimizar la descomposicin
bacteriana adiciona agua destilada hervida y adiciona unos mililitros de
cloroformo (CHCL3).
Tiosulfato de sodio titulante estndar Na2S2O3 0.005N:
Diluir 50mL de la solucin de Tiosulfato de sodio 0.1N Na 2S2O3 en un 1L

de agua destilada.
Normalizacin del Tiosulfato de Sodio
Mtodo del Yodato: Disolver 3.249g de Bioyodato de Potasio anhidro KH

(IO3)2 o Yodato de Potasio KIO 3 seco a 103C por 1h en 1L de agua
destilada para mantener 0.1N.
En 80mL de agua destilada adicione en constante agitacin 1mL de

H2SO4concentrado, 10,0mL de 0.1N de KH (IO 3)2 y 1g de KI. Titular
inmediatamente con tiosulfato de sodio 0.1N, antes de que el color
amarillo desaparezca adicione 1mL de la solucin del almidn y contine
titulando hasta que el color azul desaparezca. Calcule la normalidad con
la ecuacin 13:
1
Normalidad=
mL Na 2 S2 O3 consumido , Ecuacin 13
Solucin indicadora de almidn:
1. Disolver 2g de almidn en 100ml de agua destilada caliente, adicionar

0.2g de cido saliclico y dejar enfriar.
F. PROCEDIMIENTO
1. Determina la salida del generador de ozono pasando el ozono en

fase gaseosa a travs de KI (2%) por unos 10 minutos. La solucin
de KI se mantiene en un recipiente aforado con volumen conocido
(mnimo 200mL).
2. Transferir cuantitativamente muestras del recipiente ozonizado en
un beaker, y titular con 0.1N Na2S2O3 normalizado hasta que el
color amarillo del yodo haya casi desaparecido.
32
3. Adiciona de 1 a 2ml de solucin indicadora de almidn y continuar
titulando hasta que desaparezca el color azul.
G. CLCULOS
Clculo de ozono residual:
( mg O 3 ) V N eq ( A+ B )N24
Ozono residual , = Ecuacion 14
min t T
Donde:
V =Volumen gastado en la titulacin de sodio (ml).
N= normalidad del Na2S2O3. =0.1N
eq = Numero del equivalente en gramos del Ozono = 24mg/m eq
t = Tiempo de ozonizacin (min)
I. Clculo de la produccin y dosis de ozono
g N V KI14.4
P( )= , Ecuacin 15
h V amt
= Volumen de tiosulfato gastado en la titulacin de la muestra
menos volumen gastado en la titulacin del blanco (ml).
V KI
= Volumen de yoduro de potasio ozonizado (ml).
V am
= Volumen de la muestra de yoduro de potasio titulado (ml).
t = Tiempo de contacto (min)
N = Normalidad del tiosulfato de sodio, preferible 0.025N normalizada.
33
D
Dosis aplicada ( ap)

D
Pt100
( ap)= Ecuacin 16
6V

g
( ) .
P = Produccin de ozono en la columna de ozonizacin h
t = Tiempo de contacto (min)
V = Volumen de agua ozonizada (ml)
mgO3
D ap
= Dosis aplicada de ozono l
Dosis efectiva
mg mg
D(
l ap
( )
)=D ( 2 )Ozono Residual
l
, Ecuacin7
6. MTODO PARA DETERMINACIN DE OZONO FASE LQUIDA

(AccuVac) No. 454-456
El ozono es un oxidante y agente germicida de virus muy fuerte, el

ozono se produce cuando las molculas de oxgeno (O2) son disociadas
por medio de una fuente de energa produciendo tomos de oxgeno que
posteriormente chocan con una molcula de oxgeno para formar un gas
inestable, el ozono (O3), que se utiliza para desinfeccin de las aguas
residuales. La mayora de las plantas de tratamiento de aguas residuales
generan ozono mediante la aplicacin de una corriente alterna de alto
voltaje (6 a 20 kilovoltios) a travs de una brecha entre placas
dielctricas de descarga en donde se encuentra un gas de alimentacin
que contiene el oxgeno. El ozono es generado en la planta debido a que
34
el gas es inestable y se descompone en oxgeno elemental en un
perodo corto de tiempo luego de su generacin.
A. PRINCIPIO DEL MTODO
B. EQUIPOS Y MATERIALES
Espectrofotmetro DR 5000
Beaker de plstico 50 ml (2)
C. REACTIVOS
Set de reactivos para determinar ozono marca HACH de acuerdo al

rango:
Bajo: 00.25 mg/L
Medio: 00.75 mg/L 2
Alto: 01.50 mg/L

Agua destilada
D. PROCEDIMIENTO
a. Prender el equipo, 30. Min aproximadamente antes de la medicin

permitiendo que este se caliente
b. Seleccione PROGRAMAS ALMACENADOS y Seleccionar el
programa de acuerdo al rango de medicin seleccionado de la
siguiente forma:
454 Rango Bajo

455 Rango Medio
456 Rango Alto
c. Presione INICIO.
d. Inserte el Adaptador con el soporte circular Multi-cell de una
pulgada en frente al usuario, tal como se muestra en la Figura 1.
35
Figura 1. Ubicacin del adaptador de celdas.
e. Preparacin de la muestra: En un beaker de 50 ml tomar 40 ml

de muestra, tomada de la fase lquida de la aplicacin del ozono
f. Inmediatamente tomada la muestra, sumerja el AccuVac y

quiebre la parte aguda en contra del fondo, espere mientras se
llena la ampolla y selle con el tapn (Ver Figura 2).
Figura 2. Procedimiento ampolla AccuVac
g. Invierta rpidamente las ampollas para mezclar de forma

homognea.
h. Preparacin en blanco: En un beaker de 50 ml tomar 40 ml de

agua destilada, y repita los procedimientos anteriores.
i. Una vez colocada la celda que contiene el blanco en el

espectrofotmetro y seleccionados el programa, presione ZERO,
el display debe indicar 0.00 mg/L O3.
j. Insertar la celda que contiene la muestra y presionar

MEDICIN, los resultados aparecen en mg/L O3.
36
E. CLCULOS
Los resultados se toman directamente del espectrofotmetro, si el

resultado aparece fuera del rango asegurarse de realizar dilucin. Si ha
realizado diluciones de la muestra, tener en cuenta el factor de dilucin
para el clculo final de la concentracin de ozono.
7. CLORUROS MTODO N 4500-Cl-
A. CONCEPTO
Los cloruros, en forma del in cloruro (Cl-), son unos de los mayores
aniones inorgnicos presentes en las aguas. En el agua potable, el sabor
salado producido por la concentracin de cloruros es variable e
independiente de la composicin qumica del agua. En algunas aguas
que contienen 250 mg Cl-/l se puede detectar sabor salado si el catin es
sodio. Por otro lado, el sabor salado tpico puede estar ausente en aguas
que contienen hasta 1000 mg/l cuando los cationes predominantes son
calcio y magnesio.
La concentracin de cloruros es mayor en aguas residuales que en agua

cruda por causa del cloruro de sodio (NaCl) el cual es un elemento
comn de la dieta alimenticia y pasa a travs del sistema digestivo sin
cambios. A lo largo de las costas, los cloruros pueden estar en altas
concentraciones por causa de la fuga del agua salada dentro de los
sistemas de alcantarillado. Este tambin puede aumentar por procesos
industriales.
Un alto contenido de cloruros puede daar las tuberas metlicas y las

estructuras, as como afectar el crecimiento de las plantas.
En una solucin neutra o ligeramente alcalina, el cromato de potasio

puede indicar el punto final de titulacin del nitrato de plata de los
cloruros. El cloruro de plata se precipita cuantitativamente antes de que
se vuelva rojo el cromato de plata.
Frasco erlenmeyer, (250ml).

Bureta, (50ml).
Probeta, (100 ml).
37
D. REACTIVOS
Solucin indicadora de cromato de potasio.

Solucin titulante de nitrato de plata estndar 0.0141N.
Cloruro de sodio estndar 0.0141N.
Solucin indicadora de cromato de potasio
Disolver 50g de K2CrO4 en un litro de agua destilada. Adicionar solucin

de AgNO3 hasta que se forme un precipitado rojo. Esperar por 12h,
filtrar y diluir a 1.0l con agua destilada.
Solucin titulante estndar de nitrato de plata 0.0141N
Disolver 2395 g de AgNO3 en agua destilada y diluir hasta completar

1000 ml. Estandarizar con NaCl 0.0141 N; 1.00 ml = 500 g Cl -.
Almacenar en una botella caf.
Cloruro de sodio estndar 0.0141 N
Disolver 824mg de NaCl (secados a 140C) en agua destilada y diluir a

1000ml; 1.00ml = 500g Cl-.
F. PROCEDIMIENTO
a. Hacer un blanco por el mtodo de titulacin. No es usual un blanco

de 0.2 a 0.3ml.
b. Tomar 100 ml de muestra o una porcin diluida a 100ml.
c. Adicionar tres gotas de fenolftalena.
d. Ajustar el pH de la muestra entre 7 o 10 con H 2SO4 o NaOH si no
est en este rango.
e. Adicionar 1.0 ml de la solucin indicadora de K2CrO4.
f. Titular con la solucin estndar de AgNO3 hasta obtener un color
ladrillo.
38
Figura 3. Pasos 1 a 6
G. CLCULOS
( AB ) N 35450
Cl /l=
ml de muestra , Ecuacin 18
mg
Donde:
A = ml del titulante gastado para la muestra,
B = ml de titulante gastado para el blanco, y
N = Normalidad del AgNO3.
39
8. FSFORO ORTOFOSFATOS (PO4-2) MTODO N 4500-P
A. CONCEPTO
Los compuestos que contienen fsforo ocurren en aguas naturales y en

efluentes (domsticos e industriales) en forma de fosfatos. Estas formas
son clasificadas en: Orto fosfatos, fosfatos condensados (Poli fosfatos) y
fosfatos orgnicos; pueden presentarse en forma de solucin, de
partculas o de desechos o en la constitucin de organismo acuticos.
Los compuestos que contiene fosforo son esenciales para el crecimiento
de organismos y pueden ser considerados como nutrientes que limitan
la produccin de nuevas clulas.
Es un mtodo de reduccin con cloruro estagnoso. El fosfato reacciona

con el molibdato amnico y luego es reducido por el cloruro estagnoso
para formar un complejo azul. Los resultados se expresan en (mg/L) de P.
Fotmetro: Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Pipeta automtica de 10ml.
Balones volumtricos de 100ml.
Pipetas automticas de 200L y 1000l.
Campana de extraccin.
Agitador magntico.
Beaker.
Barras agitadoras.
Perlas de vidrio.
Erlenmeyers.
D. REACTIVOS
Fenolftalena.
Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4).
cido sulfrico (H2SO4).
Persulfato de Potasio (K2S2O8).
cido Ntrico (HNO3).
40
Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 4 H2O.
Cloruro estagnosodihidratado (SnCl2.2H2O).
Glicerol (C3H8O3).
Hidrxido de sodio (NaOH).
Solucin estndar de fosfato (KH2PO4):
Disolver 0.2195 g de Fosfato dihidrogeno de potasio (KH 2PO4) en 1L de

agua destilada.
Solucin cido Sulfrico (H2SO4) 1.59N:
Diluir 15mL de cido Sulfrico (H2SO4) en 35mL de Agua destilada.
Acida Fuerte
En un baln volumtrico adicionar a 60mL de agua destilada 30ml de

cido sulfrico concentrado (H2SO4), 0.4mL de cido Ntrico (HNO3) y
llenar hasta 100ml con agua destilada.
Solucin de Molibdato de amonio
Disuelva 25g de molibdato de amonio (NH 4)6Mo7O24 4 H2O.en 175ml de

agua destilada.
En 400mL de agua destilada agregar 280mL de cido sulfrico (H 2SO4)

concentrado, dejar enfriar y luego agregar la solucin del paso 1.
Cloruro estagnoso
Disuelva 2.5g de Cloruro estagnosodihidratado (SnCl2.2H2O) en 100ml de

glicerol (C3H8O3). Calentar la solucin al bao mara y revolver con varilla
de vidrio. Este reactivo es estable y no requiere preservativos ni
almacenamiento especial.
Hidrxido de sodio (NaOH) 1N.
Disuelva 40g de Hidrxido de sodio (NaOH) en 1l de agua destilada.
F. PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION
41
a. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar de
fosfato determinada (Tabla1) y llenar hasta 50mL con agua
destilada.
1ml de solucin estndar P = 0.05mg P
Tabla 1.Volmenes de la solucin estndar de fosforo para la curva de

calibracin
mg P ml (Sol. Estndar) mg P ml (Sol. Estndar)
0.00 0.0 0.20 4.0
0.01 0.2 0.25 5.0
0.05 1.0 0.30 6.0
0.08 1.6 0.40 8.0
0.10 2.0 0.50 10.0
0.15 3.0
b. Colocar en agitacin y adicionar 2 gotas de fenolftalena, 1mL de

Solucin Acido Sulfrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de Potasio
(K2S2O8) y 4 perlas de vidrio.
c. Llevar a digestin hasta que el volumen reduzca a 10mL y se deja
enfriar.
d. Agregar a cada erlenmeyer30mL de agua destilada y 2 gotas de
fenolftalena.
e. Adicionar gotas de Hidrxido de sodio (NaOH) hasta que cambie a
color rosado.
f. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado desaparezca.
g. Transferir las soluciones a balones volumtricos de 100mL y llenar
hasta el aforo con agua destilada.
h. Adicionar 4mL de Solucin de Molibdato de amonio y 10 gotas de
Cloruro estagnoso.
i. Despus de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de onda
de 690nm.
42
Figura 1. Pasos 1 a 7
Tabla 2. Medida de absorbancia
CURVA DE CALIBRACION FOSFORO
mg P ml Abs.cm-1 mg P ml Abs.cm-1
(Sol.Estndar) (690nm) (Sol.Estndar) (690nm)
0.00 0.0 0.000 0.20 4.0 0.160
0.01 0.2 0.039 0.25 5.0 0.250
0.05 1.0 0.045 0.30 6.0 0.300
0.08 1.6 0.055 0.40 8.0 0.400
0.10 2.0 0.085 0.50 10.0 0.600
0.15 3.0 0.140
Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia medida en el eje de

las abscisas, versus la cantidad de mg P/len el eje de las ordenadas y
determinar la ecuacin de la recta obtenida (Figura2).
43
0.60
0.50 f(x) = 0.87x + 0.02

R = 0.97
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700
Figura 2. Curva de calibracin P, Absorbancia vs mgP
Determinacin de concentracin de fsforo
a. Se toma 50ml de la muestra y 50ml de agua destilada (Blanco)

en dos erlenmeyers.
b. Colocar en agitacin y adicionar 2 gotas de fenolftalena, 1ml
de Solucin cido Sulfrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de
Potasio (K2S2O8) y 4 perlas de vidrio.
c. Llevar a digestin hasta que el volumen reduzca a 10ml y se
deja enfriar.
d. Agregar a cada erlenmeyer30ml de agua destilada y 2 gotas de
fenolftalena.
e. Adicionar gotas de Hidrxido de sodio (NaOH) hasta que cambie
a color rosado.
f. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado
desaparezca.
g. Transferir las soluciones a balones volumtricos de 100ml y
llenar hasta el aforo con agua destilada.
h. A cada muestra se le adicionar 4ml de Solucin de Molibdato de
amonio y 10 gotas de Cloruro estagnoso (al blanco no se le
agrega Cloruro estagnoso)
i. Despus de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de
onda de 690nm.
44
j. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la
concentracin de sulfatos.
*Tener en cuenta que la curva cambia constantemente por lo

tanto preguntar la curva actualizada a la hora de realizar el
ensayo.
G. CALCULOS
CONCENTRACIN DE FSFORO
Con el valor obtenido de concentracin de fsforo (P) en la curva

calcular:
PO 4 ( ( mgP ) 1000 )
mg = , Ecuacin 19
l Vm
mgP=Valor encontrado de la concentracin de fsforo P en la curva de

calibracin.
Vm= Volumen de la muestra, (ml).
8 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE FOSFORO- UTILIZANDO

EL ESPECTOFOTOMETRO DR 5000
Los fosfatos y compuestos de fsforo se encuentran en las aguas

naturales en pequeas concentraciones. Los compuestos de fosforo que
se encuentran en las aguas residuales o se vierten directamente a las
aguas superficiales provienen de fertilizantes eliminados del suelo por el
agua o el viento; excreciones humanas y animales; y detergentes y
productos de limpieza.
Los compuestos del fsforo (particularmente el orto-fosfato) se

consideran importantes nutrientes de las plantas, y conducen al
crecimiento de algas en las aguas superficiales, pudiendo llegar a
promover la eutrofizacin de las aguas.
La concentracin de fosfatos en un agua natural es fundamental para

evaluar el riesgo de eutrofizacin. Este elemento suele ser el factor
limitante en los ecosistemas para el crecimiento de los vegetales, y un
45
gran aumento de su concentracin puede provocar la eutrofizacin de
las aguas. As, Los fosfatos estn directamente relacionados con la
eutrofizacin de ros, pero especialmente de lagos y embalses. En lo
referente a las aguas de consumo humano, un contenido elevado
modifica las caractersticas organolpticas y dificulta la floculacin -
coagulacin en las plantas de tratamiento.
Pipeta 1.0 a 10.0 ml

Pipeta 100 a 1000 l
2 Celdas de vidrio - capacidad 10 ml
Espectrofotmetro
C. REACTIVOS
Reactivo molibdovanadato
Agua destilada
D. PROCEDIMIENTO
a. Seleccionar la prueba 480 en el espectrofotmetro DR 5000.
b. Inserte el Adaptador Multi-cell con 1 pulgada frente el usuario.
c. Preparacin en blanco: Llenar una de las celdas con 10 ml de agua

destilada, preferiblemente con la pipeta (1 a 10 ml) para mayor
precisin.
d. Ejemplo de preparacin: Llenar la segunda celda con 10 ml de

muestra, preferiblemente con la pipeta (1 a 10 ml) para mayor
precisin.
46
Figura 1. Procedimiento espectrofotmetro
e. Aadir 0,5 ml del reactivo molibdovanadato para cada muestra de

las celdas utilizando la pipeta (100 a 1000 l). Agite para mezclar.
f. Pulse el icono TIEMPO> OK. Un perodo de reaccin de 7 minutos

comenzar. Si la concentracin de la muestra es mayor que 30 mg
/ L PO4-3, leer exactamente siete minutos, o hacer una dilucin de
la muestra y repita la prueba.
g. Cuando el temporizador expira, limpiar la primera celda del agua

destilada e insertar de tal forma que la lnea de llenado quede de
frente al usuario. Pulse la tecla CERO. La pantalla mostrar: 0,0 mg
/ L PO4-3
h. Limpiar la segunda celda con la muestra e insertar de tal forma

que la lnea de llenado quede de frente al usuario. Pulse la tecla
MEDICIN. La pantalla mostrar el valor en mg /L PO4-3
Figura 2. Procedimiento espectrofotmetro
47
E. CLCULOS

para el clculo final de la concentracin de fosforo.
9. SULFATOS MTODO N 4500-SO42-
A. CONCEPTO
Los sulfatos (SO42-) estn altamente distribuidos en la naturaleza y

pueden estar presentes en el agua en concentraciones que varan de
pocos a cientos de miles de miligramos por litro. Los residuos del drenaje
de la minera pueden contribuir con grandes cantidades de SO 42- a travs
de la oxidacin de la pirita.
El Ion sulfato (SO42-) es precipitado en un medio de cido actico con

cloruro de Bario (BaCl2) para formar sulfato de bario (BaSO 4) en cristales
de tamao uniforme. La luz de absorbancia del (BaSO 4) es medida por
un fotmetro y la concentracin de sulfato (SO 42-) es determinada por la
comparacin de la lectura en la curva de calibracin.
Fotmetro: Espectrofotmetro.
Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Pipeta automtica de 10ml.
Balones volumtricos de 100ml.
Pipetas automticas de 200l y 1000l.
Agitador magntico.
D. REACTIVOS
Sulfato de Sodio (Na2SO4).

Cloruro de Magnesio (MgCl2).
48
Acetato de Sodio (CH3COONa).
Nitrato de potasio (KNO3).
cido actico (CH3-COOH) (C2H4O2).
Cloruro de Bario (BaCl2).
E. PREPARACION DE REACTIVOS
Solucin estndar de sulfato:
Disolver 0.1479 g de Sulfato de Sodio (Na2SO4) en 1l de agua destilada.
Solucin Buffer:
Disolver 30g de Cloruro de Magnesio (MgCl 2), 5g Acetato de Sodio

(CH3COONa), 1g de Nitrato de potasio (KNO3) y 20ml de cido actico
(CH3-COOH (C2H4O2).en 500ml de agua y completar a 1l en un baln
volumtrico.
F. PROCEDIMIENTO
a. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solucin estndar

determinada (Tabla 3) y completar a 100mL con agua destilada.
1ml de solucin estndar de sulfato = 0.1mg SO2
Tabla 3. Volmenes de la solucin estndar de sulfatos para la curva de

calibracin
mg SO4 ml mg SO4 ml
(Sol.Estndar) (Sol.Estndar)
0.0 0 2.0 20
0.1 1 2.5 25
0.5 5 3.0 30
1.0 10 3.5 35
1.5 15 4.0 40
49
b. Colocar en agitacin y adicionar 20ml de solucin buffer por 1
minuto, durante la agitacin aadir 1g de Cloruro de Bario
(BaCl2) y se deja agitar por 1 minuto.
c. Despus de 5 minutos medir la absorbancia y la turbidez.
Tabla 4. Medida de la absorbancia y turbidez.
Absorbanc Turbide
ia z mgSO4
0,025 0,3 0
0,03 4 1
0,035 42,5 5
0,045 55 10
0,07 78 15
0,165 110 20
0,19 120 25
0,235 140 30
0,29 145 35
0,32 160 40
Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia media en el eje de

las abscisas, versus la cantidad de mgSO 4 en el eje de las ordenadas y
determinar la ecuacin de la recta obtenida (Figura 1).
50
45
40
f(x) = 122.1x + 0.95
35
R = 0.96
30
25
mgSO4 20
15
10
5
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
Absorbancia cm-1
Figura 1. Curva de calibracin SO4, absorbancia vs mgSO4
DETERMINACIN DE CONCENTRACIN DE SULFATOS
a. Se toman 100mL de la muestra en dos erlenmeyer ms el

blanco.
b. Se agrega 20mL de buffer a las muestras y agitar por 1 minuto.
c. A una de las muestras agregar 1g Cloruro de Bario (BaCl 2)
agitar por 1 minuto y dejar en reposo por 5 minutos.
d. Calibrar el espectrofotmetro a 420nm con la muestra del
blanco o calibrar el turbidmetro con los patrones segn sea el
caso.
e. Medir a la muestra que tiene solo buffer la absorbancia o
turbidez (Lectura inicial).
f. A la muestra con Cloruro de Bario (BaCl2) medir la absorbancia
o turbidez (Lectura final).
g. Hacer diferencia de absorbancias.
=(Lf Li)
51
h. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la
concentracin de sulfatos.
*Tener en cuenta que la curva cambia constantemente por lo

tanto preguntar la curva actualizada a la hora de realizar el
ensayo.
G. CALCULOS
CONCENTRACIN DE SULFATOS
Con el valor obtenido de concentracin de sulfatos (SO 4) en la curva

calcular:
mgS O 4 ( ( mgS O 4 ) 1000 )

= , Ecuacin 20
l Vm
mgSO4=Valor encontrado de la Concentracin de sulfatos SO4 en la

curva de calibracin.
Vm= Volumen de la muestra, (ml).
52
10. NITRGENO MTODO N 4500-Norg
A. CONCEPTO
El Nitrgeno es uno de los nutrientes de mayor importancia en el vertido

de las aguas residuales tratadas. Un agua que contenga gran cantidad
de nitrgeno acelerar la eutrofizacin de embalses, ros y lagos, y
puede provocar el estmulo del crecimiento de algas y plantas en cursos
de agua poco profundos. La reduccin de la concentracin de oxgeno
disuelto en las aguas receptoras y la toxicidad para la vida acutica son
algunos de los efectos negativos de la elevada concentracin de
nitrgeno amoniacal en efluentes tratados.
El anlisis de este ensayo suele determinar el NTK (Nitrgeno Total

Kjeldahl) que incluye el nitrgeno orgnico y el amoniacal.
La suma de amonio libre y compuestos orgnicos nitrogenados que son

convertidos a una sal de amonio (NH4)2SO4 despus de la digestin de la
muestra en medio cido y en presencia de un catalizador. El amonio es
destilado en medio alcalino y recuperado nuevamente para su
cuantificacin.
La presencia de cido sulfrico (H2SO4), sulfato de potasio (K2SO4), y

sulfato de cobre (CuSO4), como catalizador, convierten el nitrgeno
amonio de cualquier material orgnico a amonio. El amoniaco liberado
tambin es convertido a amonio, despus se adiciona base y el
amoniaco es destilado del medio alcalino y absorbido en cido brico o
sulfrico. El amonio liberado es determinado titulando con una solucin
estndar de cido sulfrico (H2SO4). Los resultados se expresan en mgNT
/L.
Equipo de digestin con sistema de recoleccin de gases (Digestor

y Scrubber).
Equipo de destilacin con flujo de vapor.
Equipo titulador.
Potencimetro.
Erlenmeyer de 250 ml.
Vasos de precipitado.
Tubos de ensayo para nitrgeno (para digestor y destilador).
53
D. PREPARACIN DE REACTIVOS
Hidrxido de Sodio 6N (NaOH):
Diluir 320g en agua destilada y completar 1l.
Solucin de cido Brico:
Disolver 20g de reactivo analtico en agua y diluir a 1l.
Solucin indicadora de cido brico:
Disolver 20g de H3BO3 en agua, agregar 10ml de la solucin indicadora

mixta y diluir a 1l. Preparar mensualmente.
Solucin indicadora mixta:
Disolver 200mg de indicador rojo de metilo en 100ml de alcohol etlico

del 95%. Disolver 100mg de azul de metileno en 50ml de alcohol etlico
del 95%. Combinar las soluciones. Preparar mensualmente.
Solucin de cido sulfrico (H2SO4) al 0.02N para titulacin:
Diluir 3ml de cido sulfrico (H2SO4) concentrado en 1l con agua

destilada libre de CO2.Luego diluir 200ml de esta solucin a 1l con agua
destilada. Normalizar el cido 0.02N contra una solucin de Na 2CO3
0.02N (1.060g de Na2CO3 anhidro secado a 140C, diluido a 1000ml con
agua destilada).
E. PROCEDIMIENTO
Volumen de la muestra
a. El volumen de la muestra es 25ml. Para casos particulares de

muestras lquidas se puede seguir lo que indica la Tabla 5.
54
Tabla 5. Medida de la absorbancia y turbidez.
Nitrgeno Orgnico en la muestra, mg/l Volumen de muestra, ml
4-40 50
8-80 25
20-200 10
b. Para muestras de lodos y sedimentos, pesar una porcin de

muestra hmeda que contenga entre 0.2mg y 2mg de nitrgeno
orgnico. Transferir la muestra al tubo de digestin limpiando el
recipiente de pesaje varias veces con pequeas cantidades de
agua. Hacer esta operacin con la cantidad ms pequea posible
de agua, sin exceder un volumen de 50ml.
Digestin
a. Encender el digestor y scrubber 15min antes de iniciar el ensayo y

limpiarlos. En el tubo agregar: 25ml de la muestra, 15ml de cido
sulfrico (H2SO4), 3,0g de Sulfato de Potasio, 1,0g de Sulfato de
cobre.
b. Colocar el digestor en 60C-80C (temperatura). Colocar la
Flauta (tapa del digestor para desviar los gases) y conectar la
manguera de la flauta al scrubber.
c. Dejar en digestin aproximadamente 2 horas o hasta que las
muestras tengan un color azul claro.
d. Al alcanzar ese color se apaga el digestor y se deja enfriar 30min
con el scrubber prendido.
Destilacin
a. Encender la unidad de destilacin hasta que caliente

(aproximadamente 15min).
b. Transferir las muestras fras de los tubos de digestin a los tubos
de destilacin con mucho cuidado.
c. Agregar a los tubos poco a poco 30ml de agua destilada y agregar
Hidrxido de Sodio 6N (NaOH) con la vlvula dosificadora hasta
obtener un colar caf.
d. En los frascos erlenmeyers que recibirn el destilado adicionar
100ml de cido brico al 2% y de 3 a 4 gotas de indicador mixto.
e. Destilar entre 150-250mL en los erlenmeyer.
55
Titulacin
Tomar los erlenmeyers y titular entre 150-250mL de destilacin con

cido sulfrico H2SO40.02N hasta llegar al color rosado.
F. CLCULOS
N ( V ( H 2 SO 4 )VBlanco ) 280
mg =
l Vm
Donde:
V(H2SO4).= Volumen gastado de H2SO4en la muestra,(ml).
VBlanco= Volumen gastado de H2SO4en el blanco, (ml).
Vm= Volumen inicial de la muestra, (ml).
10 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE NITROGENO TOTAL (2 a

150 mg/L N), MTODO DIGESTIN DE PERSULFATO
A.PRINCIPIO DEL MTODO
El nitrgeno es uno de los constituyentes de la materia orgnica que

forma parte de las protenas de las clulas y es indispensable en el
crecimiento de los organismos fotosintticos. En la qumica del agua, los
compuestos de nitrgeno, NH4+, NO2-, NO3-, as como el nitrgeno
orgnico, juegan un papel importante, ya que son indispensables para el
desarrollo de la vida animal y vegetal en agua.
Los compuestos nitrogenados del agua provienen fundamentalmente de

los compuestos orgnicos o vegetales y en aguas naturales y sin
contaminar suele ser un elemento poco abundante. La mayor parte del
nitrgeno es de origen atmosfrico, pero asimilado gracias a las
bacterias y a ciertos vegetales, los cuales transforman el nitrgeno
molecular y el nitrgeno ntrico en nitrgeno orgnico.
56
Digestor a 105C
Gradilla para tubos
Embudo
C. REACTIVOS
Viales Total Nitrgeno (TN)- Hidrxido

Reactivo Persulfato TN
Viales cidos TN (Reactivo C)
Reactivo A TN
Reactivo B TN
Agua ultrapura
D. PROCEDIMIENTO
a. Encienda el digestor a una temperatura de 105 C.

b. Etiquetar dos tubos de digestin Hidrxido- Total Nitrgeno del set
de tubos nmero 40, uno para la muestra y otro para el blanco.
Usando un embudo, aadir el contenido del Reactivo de Persulfato
- Total Nitrgeno a cada uno de los tubos. Limpie el reactivo que
puede quedar en la tapa o en la rosca del tubo.
c. Aadir 0,5 ml de muestra a un tubo (use la muestra preparada) y
aadir 0,5 ml de agua desionizada al segundo tubo (use el agua
desionizada proporcionada en el kit de reactivos o agua libre de
orgnicos).
d. Tape ambos tubos de digestin y sacuda vigorosamente al menos

30 segundos para mezclar, esta prueba es sensible a la tcnica
por lo tanto Invierta los frascos como se describe aqu para evitar
resultados bajos: Mantener el vial en posicin vertical con la tapa
hacia arriba. Ponga el vial boca abajo. Esperar a que toda la
solucin fluya hacia abajo a la tapa. Pause. Devuelva el vial a una
posicin vertical. Esperar a que toda la solucin fluya hacia el
fondo del vial y as sucesivamente. Si el reactivo no se disuelve
completamente esto no afectara la precisin del ensayo.
57
Figura 1. Procedimiento Espectrofotmetro
e. Inserte los tubos en el digestor por un tiempo de 30 minutos.

Pasado el tiempo retire de inmediato los tubos y deje enfriar a
temperatura ambiente.
f. Seleccione la prueba 394 Nitrgeno total en el espectrofotmetro.
g. Retire las tapas de los tubos y aada el contenido del Reactivo A

(TN) encontrado en el set de tubos nmero 21. Se tapan los tubos
y se agite durante 15 segundos.
h. Pulse el icono TIEMPO > OK. Una reaccin con un periodo de tres
minutos comenzar.
i. Despus de que expire el temporizador, retire las tapas de los

tubos y aada el contenido del Reactivo B (TN) encontrado en el
set de tubos nmero 21. Se tapan los tubos y se agite durante 15
segundos teniendo en cuenta las recomendaciones nombradas
anteriormente. El reactivo no se disuelve completamente, lo cual
no afectara la precisin. La solucin comenzar a girar en torno a
un color amarillo.
58
j. Pulse el icono TIEMPO > OK. Una reaccin con un periodo de dos
minutos comenzar.
k. Despus de que expire el temporizador, tomar dos tubos de

digestin acida TN reactivo C del set nmero 21, a los cuales se le
aaden 2ml de cada tubo preparado (muestra tratada y blanco).
l. Tapar los tubos e invertir diez veces para mezclar, hacerlo

lentamente. Los tubos se calientan por lo que hay que evitar el
contacto directo tomndolos cuidadosamente por la parte superior
del tubo.
m. Pulse el icono de TIEMPO > OK. Una reaccin con un periodo de

cinco minutos comenzar. El color amarillo se intensifica.
n. Limpie el reactivo en blanco e insrtelo en el titular de celdas

redondas de 16mm. Pulse la tecla CERO. La pantalla mostrar: 0,0
mg / L N
59
o. Limpie el frasco de reactivo de la muestra e insrtelo en el titular
de celdas redondas de 16mm. Pulse la tecla MEDICION. La
pantalla mostrar el valor de nitrgeno total en mgN / L .
E. CLCULOS

para el clculo final de la concentracin de nitrgeno.
11. DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220

RANGO MEDIO -800 mg/L
A. CONCEPTO
La demanda qumica de oxigeno es la medida del oxgeno necesario

para oxidar la materia orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin,
contenida en una muestra bajo condiciones de un agente especifico,
temperatura y tiempo. Los valores de este parmetro estn asociados
al grado de avance de la oxidacin de los contaminantes.
Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la

muestra, se oxidan mediante reflujo en solucin fuertemente cida
(H2SO4) con un exceso conocido de dicromato de potasio (K 2Cr2O7) en
presencia de sulfato de plata (AgSO4) que acta como agente
catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO 4) adicionado para remover la
interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el remanente de
K2Cr2O7 sin reducir se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como
indicador de punto final el complejo ferroso de ortofenantrolina
(ferroina). La materia orgnica oxidable se calcula en trminos de
oxgeno equivalente.
60
Espectrofotmetro DR 2800 o DR 5000.

Bomba de vaco.
Balanza Analtica.
Digestor de DQO.
Dispensadores de 5.0ml.
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio de 1,2 m.
Balones volumtricos de 10.0ml, 500ml, y 1000ml.
Beaker de 500ml y 1000ml.
Pipetas automticas de 200l y 1000l.
Tubos DQO.
D. REACTIVOS
Sulfato de plata (Ag2SO4).

cido sulfrico (H2SO4, 96-97% Pureza).
Sulfato de mercurio (HgSO4).
Dicromato de potasio (K2Cr2O7).
Hidrogenoftalato cido de Potasio (KPH) HOOCC6H4COOK.
Solucin de sulfato de plata en cido sulfrico
Solucin de 5.5g/Kg de H2SO4 ,96-97% Pureza. ATENCION: Trabajar en la

campana.
Triturar con bastn de vidrio 10.12g de sulfato de Plata (Ag 2SO4) y

transferir para un frasco con un contenido de 1l de cido sulfrico
(H2SO4, 96-97% Pureza), adicionar ene le mismo frasco de origen del
cido). Cerrar el frasco hermticamente. La mezcla deber ser
mantenida en oscuro durante dos das antes de ser utilizada.
Solucin de Digestin (2l)
Solucin de K2Cr2O7 + HgSO4. ATENCIN: Trabajar en campana y con

guantes. Secar cerca de 25g de K 2Cr2O7 a 103C en una estufa durante
24 horas. Enfriar en el desecador. Transferir 1.5L de agua destilada para
61
un beaker de 2.0 L. Adicionar cuidadosamente 334mL de cido sulfrico
(H2SO4) sobre un bao de hielo. Retirar del bao, adicionar 66.6g de
HgSO4 y agitar para disolver. Adicionar 20.432g de K 2Cr2O7 previamente
seco a 105C por 2 horas y mantener en agitacin. Dejar Enfriar y
transferir a un baln volumtrico de 2.0L y completar el volumen con
agua destilada.
La utilizacin de una nueva solucin de digestin exige una nueva

preparacin de una recta de calibracin.
F. PROCEDIMIENTO
1000mg de Hidrogenoftalato de Potasio (KHP)= 1.176mg DQO
a. Secar aproximadamente 500mg de KHP en capsulas de porcelana

a 120C en horno hasta que la masa sea constante (24h) y enfriar
el KHP en desecador.
b. Disolver cerca de 0.425g aproximadamente de KHP en agua
destilada, transferir cuantitativamente al baln volumtrico de
500ml y completar el volumen con agua destilada.
Entonces como ejemplo:
Tomamos 0.4639g KHP
436.9mg KHP
1000mg KHP1176mgDQO
436.9mg KHP X
X=513.79mgDQO
Lo llevamos a Litros:
513.79mgDQO500mL
62
X1000mL
X=1027.58mgDQO/L
X=1.02758mgDQO/ml
Luego aplicar C1V1=C2V2 para determinar DQOTeorica.
(1.02758mgDQO/ml)V1= DQOTeorica2.5mL
(1.02758 mgDQO/ L)V 1(ul)

DQOTeorica= 2.5 mL1000
Hacer la curva de calibracin con concentraciones conforme a los

volmenes deseados para el procedimiento de la determinacin de
concentracin de DQOTeorica.(Tabla 6) y completarlos con agua destilada
para un volumen total de 2.5mL.
Tabla 6. Curva de calibracin para hallar la DQOTeorica
CURVA DE CALIBRACION DQO
V1 Sol.KHP DQOTeoric ABS.1 ABS.2 ABS

a (Xmed)
[uL] [cm-1] [cm-1]
[mg/L]
100 41.10 0 0.006 0.003
200 82.21 0.016 0.016 0.016
63
CURVA DE CALIBRACION DQO
V1 Sol.KHP DQOTeoric ABS.1 ABS.2 ABS

a (Xmed)
[uL] [cm-1] [cm-1]
[mg/L]
400 164.41 0.04 0.040 0.040
600 246.62 0.063 0.080 0.072
1000 411.03 0.119 0.119 0.119
1600 657.65 0.177 0.172 0.175
1800 739.86 0.199 0.198 0.199
2000 822.06 0.228 0.216 0.222
2200 904.27 0.238 0.241 0.240
2400 986.48 0.268 0.283 0.276
2500 1027.5 0.273 0.276 0.275

8
Para la curva de calibracin, dibujar la absorbancia media en el eje

abscisas, versus la DQOTeorica en el eje de las ordenadas y determinar la
ecuacin de la recta (Figura 1).
64
1200
1000 f(x) = 3630.82x + 13.68

R = 1
800
600
400
200
0
0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 0.300
Figura 1. Curva de calibracin DQO, absorbancia vs DQOTeorica.
65
DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220
RANGO ALTO -100 5000 mg/L
Para realizar la medicin de la DQO de alto rango, es decir, valores de la

curva hasta de 5000 mg/L, el procedimiento es igual al de la DQO de
medio rango, excepto en la preparacin del Dicromato de Potasio y la
preparacin de la curva.
Solucin de sulfato de plata en cido sulfrico: Igual que para la DQO de

medio rango.
Solucin de Digestin (2l)
Solucin de K2Cr2O7 + HgSO4. ATENCIN: Trabajar en campana y con

guantes. Secar cerca de 65g de K 2Cr2O7 a 103C en una estufa durante
24 horas. Enfriar en el desecador. Transferir 1.5L de agua destilada para
un beaker de 2.0 L. Adicionar cuidadosamente 334mL de cido sulfrico
(H2SO4) sobre un bao de hielo. Retirar del bao, adicionar 66.6g de
HgSO4 y agitar para disolver. Adicionar 64g de K2Cr2O7 previamente
seco a 105C por 2 horas y mantener en agitacin. Dejar Enfriar y
transferir a un baln volumtrico de 2.0L y completar el volumen con
agua destilada.
66
Preparacin de la curva
4,532 g/L de Hidrogenoftalato de Potasio (KHP)= 5329 mg/L de DQO
c. Secar aproximadamente 5 g de KHP en capsulas de porcelana a

120C en horno hasta que la masa sea constante (24h) y enfriar el
KHP en desecador.
d. Disolver cerca de 0,4532g de KHP en agua destilada, transferir
cuantitativamente al baln volumtrico de 100 ml y completar el
volumen con agua destilada.
Tomar de la solucin stock diferentes volmenes para construir la curva

de calibracin. En la Tabla 7 se presenta un ejemplo de clculo y en la
Figura 2 un ejemplo de curva de calibracin. Para este caso se utilizaron
alcuotas desde 200 uL hasta 9500 uL en volumen final de 10 mL y de
ah se tom 1.5 mL para realizar el ensayo de la DQO.
Tabla 7. Datos para la curva de calibracin terica.
Solucin KPH Absorbancia DQO

teri
ca
uL de m F ml en uL* DQO Abs Abs Abs mg/l

la l D 1.5ml 1 2 promedi
soluci o
n
stock
de
KPH
200 0, 2 0,03 30 0,0 0,0 0,061 106,5
67
2 67 55 8
400 0, 4 0,06 60 106, 0,0 0,0 0,089 213,1

4 6 94 84 6
800 0, 8 0,12 120 213, 0,1 0,1 0,1545 426,3

8 2 54 55 2
1000 1 10 0,15 150 532, 0,1 0,1 0,158 532,9

9 68 48
2000 2 20 0,3 300 1065 0,3 0,3 0,3245 1065,

,8 25 24 8
4000 4 40 0,6 600 2131 0,5 0,6 0,591 2131,

,6 82 00 6
6000 6 60 0,9 900 3197 0,8 0,8 0,825 3197,

,4 16 34 4
8000 8 80 1,2 1200 4263 1,0 1,0 1,064 4263,

,2 66 62 2
9500 9, 95 1,425 1425 5062 1,2 1,2 1,2855 5062,

5 ,6 99 72 55
uL

Ejemplo de calculo: DQOterica: 5329V

68
Figura 2. Curva de calibracin para DQO de alto rango. (Todo lo dems
como el mtodo de DQO de medio rango)
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE DQO.
a. En tubos de borosilicato con tapa de rosca, adicionar 2.5ml de la

muestra concentrada o diluida (la dilucin de la muestra se hace
necesaria cuando la DQO esperada es mayor que 800mg/l) o 2.5ml
de agua destilada (para el blanco) o de las soluciones patrn
preparadas para la curva de calibracin.
b. Adicionar enseguida con ayuda de dispensadores 1.5ml de
solucin de digestin y vigorosamente 3.5ml de la solucin de
sulfato de plata en cido sulfrico.
c. Cerrar hermticamente los tubos y agitar.
d. Colocar los tubos en el digestor a temperatura de 150C y dejarlos
calentando por un periodo de 120minutos.
e. Despus enfriar y limpiar los tubos con papel absorbente
humedecido con alcohol y en seguida secar.
f. Observar el espectrofotmetro hora antes de la lectura y fijar la
longitud de onda en 620m.
g. Reiniciar el equipo con la solucin de la muestra para el blanco.
Leer la absorbancia de la solucin patrn y de las muestras.
69
12. MTODO PARA DETERMINACIN DE OXGENO DISUELTO
(Utilizando el equipo porttil Hanna HI 9146)
El oxgeno disuelto (OD) es necesario para la respiracin de los

microorganismos aerobios as como para otras formas de vida aerobia.
No obstante, el oxgeno es slo ligeramente soluble en el agua; la
cantidad real de oxgeno que puede estar presente en la solucin est
determinada por a) la solubilidad del gas, b) la presin parcial del gas en
la atmsfera, c) la temperatura, y d) la pureza del agua (salinidad,
slidos suspendidos).
Las concentraciones de OD en aguas naturales dependen de las

caractersticas fisicoqumicas y la actividad bioqumica de los
organismos en los cuerpos de agua. El anlisis del OD es clave en el
control de la contaminacin en las aguas naturales y en los procesos de
tratamiento de las aguas residuales industriales o domsticas.
Existen electrodos de membrana polarogrficos o galvnicos, y por ser

sumergibles, portables y fciles de operar, son apropiados para anlisis
en campo.
Botella winkler 300 ml (Segn cantidad de diluciones)

Medidor de oxgeno Hanna HI 9146
C. REACTIVOS
Agua Ultrapura
Solucin HI 7040 oxgeno disuelto = 0.0
CALIBRACIN DEL EQUIPO
El equipo puede ser calibrado en mximo dos (2) puntos 0.0%

(calibracin del Cero) y 100.0% (calibracin de la pendiente).
Nota: Antes de realizar la calibracin, revisar que el equipo est listo

para mediciones.
Calibracin del Cero
70
Sumerja la sonda en un beaker con 40 ml. de la solucin HI 7040
(solucin cero oxgeno), y espere durante tres minutos.
Presione CAL, habr un reloj de arena y el mensaje NOT
READY parpadeando en el LCD, hasta que la lectura sea estable.
Cuando la lectura sea estable y dentro de los lmites (15% f.s.)
CFM, empieza a parpadear. Presione CFM, para confirmar la
calibracin de 0.00% de oxgeno disuelto.
Presione CAL, y el instrumento volver al modo de medicin
habiendo almacenado el valor del cero.
Calibracin de la pendiente
Nota: Se recomienda realizar este procedimiento de la calibracin al

aire libre.
Enjuague la sonda con agua destilada para remover cualquier

residual de la solucin cero oxgeno disuelto.
Presione CAL, y luego use la FLECHA y seleccione 100% DO
Calibration Point.
Seque la sonda con una toalla de papel, habr un reloj de arena y
el mensaje NOT READY parpadeando en el LCD, hasta que la
lectura sea estable.
Cuando la lectura sea estable y dentro de los lmites (15% f.s.)
CFM, empieza a parpadear. Presione CFM, para confirmar la
calibracin de 100% de oxgeno disuelto.
Presione CAL, y el instrumento volver al modo de medicin
habiendo almacenado el valor del 100%.
D. PROCEDIMIENTO PARA MEDIR OXGENO DISUELTO.
a. Sumergir el medidor en la botella del cero.
b. Espere durante aproximadamente un (1) minuto para que la

lectura se estabilice.
c. El valor de oxgeno disuelto es mostrado en la parte superior en

ppm (mg/l), y la temperatura en la parte inferior C. Presione
RANGE para cambiar la lectura de ppm a % y viceversa.
71
Figura 1. Ilustracin Medidor de Oxgeno
13. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 MTODO N

5210
A. CONCEPTO
La Demanda Bioqumica de Oxigeno (DBO) es un mtodo emprico en el

cual su procedimiento es usado para determinar la cantidad de oxigeno
relativo en aguas naturales, efluentes domsticos e industriales.
El test de DBO es empleado para determinar los niveles de

contaminacin, evaluar cargas contaminantes y para evaluar la
eficiencia de un determinado sistema de tratamiento.
B.PRINCIPIO DEL METODO
Gran parte de los organismos vivos dependen, directa o indirectamente

del oxgeno para mantener su proceso metablicos que producen la
energa necesaria para su crecimiento y reproduccin.
Se le llaman organismos aerobios a aquellos que dependen

exclusivamente del oxgeno de forma libre para la mineralizacin de
materia orgnica, resultando como producto final substancias
inorgnicas ms simples, tales como CO2, NH3, H2O, etc.
La materia orgnica presente en aguas naturales y en los efluentes

domsticos e industriales, tiene la tendencia a ser mineralizadas
naturalmente por los microorganismos aerobios existentes, consumiendo
oxgeno disuelto en el medio acuoso. El test de DBO tiene por objetivo,
determinar esas cantidades de oxigeno consumido, y as mismo,
relacionar con las cantidades de materia orgnica biodegradable
presente en una muestra.
72
Los mtodos usualmente empleados para la determinacin de la DBO es
el de la dilucin, incubacin por un periodo de 5 das a 20C, con una
determinacin de los niveles inciales y finales de oxgeno a travs del
mtodo de Azida modificado.
Para garantizar una mejor eficiencia en el metabolismo de los

microorganismos desarrollados en el test es adicionado a el frasco de
incubacin, soluciones nutritivas y una solucin buffer, con el fin de
garantizar un pH neutro de 6.5 a 7.5 (Llamada agua de dilucin).
Es importante que durante los 5 das del test, la muestra se encuentre

en un ambiente sin luz, a fin de evitar el aparecimiento de seres
clorofilados fotosintticos.
Incubadora (Termo regulable).

Frascos DBO.
Pipetas volumtricas.
Balones Volumtricos.
Beaker.
Erlenmeyer.
Equipo de titulacin (Bureta de 50mL).
C. REACTIVOS
Solucin Buffer de Fosfato.

Solucin de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O).
Solucin de Cloruro de calcio (CaCl2).
Solucin de Cloruro Frrico (FeCl3).
Agua de dilucin.
Inhibidor de Nitrificacin Sulfito de Sodio.
Cloruro de Cobalto.
Solucin Patrn de cido glutmico/glucosa.
Solucin de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O)
Solucin de lcali Ioduro-Azida (AIA).
cido Sulfrico Concentrado.
Solucin Indicadora de Almidn.
Solucin Buffer de Fosfato
73
Disolver en aproximadamente 600mLde agua destilada, 8.5g de fosfato
monobsico de Potasio (KH2PO4), 21.75g de fosfato bibsico de Potasio
(KHPO4), 33.4g de Fosfato bibsico de sodio heptahidratado
(Na2HPO4.7H2O) y 1.7g de Cloruro de Amonio (NH4Cl).
Transferir para un baln volumtrico de 1L y completar el volumen con

agua destilada, tal solucin debe ser guardada en baja temperatura y en
ausencia de luz.
Solucin de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O)
Disolver 22.5g de sulfato de magnesio heptahidratado en

aproximadamente 800ml de agua, transferir para un baln volumtrico
de 1l y completar el volumen; tal solucin debe ser guardada en baja
temperatura y en ausencia de luz.
Solucin de Cloruro de Calcio (CaCl2)
Disolver 27.5g de Cloruro de Calcio anhidro en aproximadamente 800ml

de agua, transferir para un baln volumtrico de 1L y completar el
volumen; tal solucin debe ser guardada en baja temperatura y en
ausencia de luz.
Solucin de Cloruro Frrico (FeCl3)
Disolver 0.25g de Cloruro Frrico hexahidratado en aproximadamente

800ml de agua, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el
volumen; tal solucin debe ser guardad en bajas temperaturas y en
ausencia de luz.
Agua de dilucin
Adicionar en una botella ojala de vidrio previamente limpio un volumen

adecuado para la prueba que se va a realizar. Mantener el contenido de
esta botella en aireacin por un mnimo de 24 horas y dejar en reposo
por aproximadamente 30 minutos antes de hacer el ensayo.
Posteriormente aadir al agua 1ml de cada una de las soluciones
mencionadas anteriormente para cada litro de agua destilada usado.
74
Solucin Patrn de cido glutmico/glucosa
Disolver, previamente seco en estufa a 103C por 1hora, 150mg de

glucosa y 150mg de cido glutmico, en aproximadamente 800mL de
agua destilada. Transferir para un baln volumtrico de 1L. Preparar
semanalmente. Tal solucin debe presentar una DBO terica de 194mg/L
(Siendo tolerado un desvi patrn de hasta +/-15%).
Solucin de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O)
Disolver 364g de sulfato Manganoso monohidratado (MnSO4.H2O) en

aproximadamente 800mL de agua destilada, filtrar en papel de filtro
Wattman N4 y diluir en baln volumtrico de 1l.
Solucin de lcali Ioduro-Azida (AIA).
Disolver en aproximadamente 800mL de agua, 500g de Hidrxido de

Sodio (NaOH), 135g de Iodeto de sodio (NaI) y diluir en 1L de agua
destilada; adicionar 10g de Azida Sdica (NaN3), previamente disuelta
en 40mL de agua destilada. Guardar en un frasco de PVC.
Solucin Patrn de Tiosulfato de Sodio (Na2S2O3.5H2O) 0.025N
Disolver 6.205g de Tiosulfato de sodio pentahidratado con 1.5ml de

Hidrxido de sodio 6N (o 0.4g de NaOH), en aproximadamente 800ml de
agua destilada, transferir para un baln volumtrico de 1l y completar el
volumen.
Normalizacin: Normalizar con 10ml de solucin de Dicromato de Potasio

(K2Cr2O7) 0.1N, 1ml de cido sulfrico concentrado y cerca de 80ml de
agua destilada. Se debe dejar por 6 minutos y en la oscuridad, en
seguida adicionar con una esptula (+/-1g) de KI y titular la solucin de
Tiosulfato hasta que aparezca una coloracin amarillo paja, en ese punto
adicionar almidn y proseguir la titulacin hasta que cambie de azul a
incoloro. Calcular la normalidad real del tiosulfato con la ecuacin 22:
75
N K Cr O7 V K Cr
, Ecuacin 22
2 2 2 2
O7
Na2S2O3= V Na S O gastado
2 2 3
Solucin Indicadora de Almidn
Disolver 2g de almidn en 100 ml de agua destilada hervida, mezclar y

dejarla sedimentar por una noche.
E. PROCEDIMIENTO
Preparacin de los frascos DBO
a. Dejar con jabn extran alcalino por 1 da.

b. Enjuagar varias veces con agua del grifo y en seguida con agua
destilada.
c. Autoclavar los frascos a una temperatura de 120C y 1kg/cm 2 de
presin, por 30 minutos.
d. Dejar enfriar en lugar limpio y seco.
e. Almacenar en lugar limpio y seco.
Procedimiento DBO sin inculo
a. Adicionar una muestra a los frascos preparados de DBO y

completar hasta la tasa de dilucin de acuerdo con la Tabla 7,
hacer por lo menos 4 diluciones diferentes.
b. Anotar el nmero N y el volumen del frasco.
c. Adicionar si es necesario inhibidor de nitrificacin.
d. Completar el volumen del frasco con agua de dilucin evitando la
formacin de bolas y turbulencia.
e. Agregar a cada botella 1 ml de sulfato manganoso y
posteriormente 1 ml de reactivo alcalina.
f. Tapar la botella y agitar 20 veces, luego agregar 1mL de cido
sulfrico concentrado (H2SO4) alrededor del cuello de la botella con
mucho cuidado y volver a agitar por 20 veces.
g. Transferir 200mL de la muestra que se encuentra en la botella
Winkler a un beaker y poner en agitacin.
Tabla 7. Tabla de Diluciones.
76
Tasa de dilucin Rango de DQO Tasa de dilucin Rango de DQO
(ml) (ml)
0.001 128000-130000 2 300-1050
0.002 118000-125000 5 120-420
0.005 60000-115000 10 60-210
0.02 12000-42000 20 30-105
0.1 6000-21000 50 12-42
0.2 300-10000 100 6-21
1 600-2100 300 0-7
ODi - ODf 2mg/L;
1 ODf 6 mg/L.
h. Titular la muestra con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que la

muestra tenga un color amarillo paja y agregar 1mL de almidn.
i. Seguir titulando con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que el color
cambie de azul oscuro a transparente.
j. Medir el OD inicial.
k. Llevar a la incubadora la rplica de las botellas y despus de 5
das de encubar medir OD final. Envolver las botellas que se dejan
en la incubadora en papel aluminio.
Procedimiento DBO con inculo
a. Oxigenar hasta saturacin (por lo menos 24 horas) un volumen de

agua suficiente para realizar las diluciones y el blanco, agregando
previamente 1ml/L de agua residual como inculo.
b. Adicionar una muestra a los frascos preparados de DBO y
completar hasta la tasa de dilucin de acuerdo con la Tabla 7,
hacer por lo menos 4 diluciones diferentes de cada botella.
c. Anotar el nmero N y el volumen del frasco.
d. Adicionar si es necesario inhibidor de nitrificacin.
e. Completar el volumen del frasco con agua de dilucin evitando la
formacin de bolas y turbulencia.
77
f. Agregar a cada botella 1 ml de sulfato manganoso y
posteriormente 1 ml de reactivo alcalina.
g. Tapar la botella y agitar 20 veces, luego agregar 1mL de cido
sulfrico concentrado (H2SO4) alrededor del cuello de la botella con
mucho cuidado y volver a agitar por 20 veces.
h. Transferir 200mL de la muestra que se encuentra en la botella
Winkler a un beaker y poner en agitacin.
F. CLCULOS
Oxgeno disuelto
Si la normalidad del Tiosulfato de Sodio es 0.025N el volumen

gastado es la misma concentracin de OD. Caso contrario,
utilizar la ecuacin 23.
mgO 2 (Vol . Tiosulfato )( N Tiosulfato ) ( 8000 )

= , Ecuacin 23
l 100
Porcentaje de reduccin oxgeno disuelto
(ODi )(ODf )
%Red.OD= 100, Ecuacin 24
ODi
En la Tabla 8 se observa un ejemplo de clculo:
Tabla 8. Ejemplo de clculo de la DBO
El porcentaje de reduccin de oxgeno disuelto debe estar entre 40 y

70% para que el ensayo de la DBO se considere vlido. Del ejemplo de la
Tabla 8 se obtiene el promedio de las botellas 4, 10 y 13 y este es el
valor final de la DBO.
78
Nota: Se debe calcular la diferencia entre el oxgeno disuelto inicial y el
oxgeno disuelto final del blanco. En lo posible este valor debe ser
mnimo. Esta diferencia debe ser restada a todos los valores de oxgeno
disuelto final de las botellas analizadas y luego si se debe calcular el
porcentaje de reduccin citado anteriormente.
La DBO finalmente se calcula con la ecuacin 25
DBOmg O2 ( ODi )( ODf )

= , Ecuacin 25
l f
Donde:
ml de lamuestra
f=
VolumendelfrascodeDBO
14. RESIDUAL DE PEROXIDO DE HIDROGENO
A. CONCEPTO
El perxido de hidrgeno ha sido utilizado durante muchos aos en el

tratamiento de aguas residuales industriales y de abastecimiento de
agua, principalmente para la remocin de materia orgnica. El H2O2 se
considera un oxidante verstil ms que el cloro. Cabe sealar que la
aplicacin en exceso de perxido de hidrgeno puede conducir a
reacciones competitivas con los radicales OH , causando un efecto
inhibitorio sobre la degradacin de contaminantes.
Es muy importante determinar la presencia de perxido de hidrgeno

residual que queda despus del tratamiento de efluentes, ya que
interfiere principalmente en anlisis de DBO5 y DQO de aguas residuales
tratadas.
Becker 1000ml
Micro pipeta (100-1000 L)
79
Plancha agitadora.
Balanza analtica.
Indicadores Quantofix Perxido 25 (0.5-25 mg/L H2O2)
C. REACTIVOS
Perxido de hidrogeno 30% m/m.
Sulfito de sodio, P.A.
Figura 1. Reactivos determinacin residual de perxido de hidrogeno.
D. PROCEDIMIENTO
CALCULO DE LA DOSIS EFECTIVA DE PERXIDO DE H2O2
Debido a que el perxido viene lquido se debe realizar la siguiente

operacin para saber el volumen que se debe tomar, para calcular la
dosis efectiva en mg/L, se debe utilizar la ecuacin 26, de la siguiente
forma:
De
1000
V ( ml ) H 2 0 2= , Ecuacin 26

Donde:
De= dosis efectiva en mg/L

= densidad del perxido de hidrogeno (1.4 g/mL)
80
Se mide con ayuda de la Micropipeta (100-1000 L) la dosis efectiva de
perxido que se desea aplicar.
APLICACIN DE LA DOSIS EFECTIVA DE PERXIDO DE H2O2
Teniendo la dosis efectiva de H2O2 se adiciona al agua a tratar por el

tiempo que dure la reaccin. (Ejemplo: 1 hora).
MEDICIN DEL RESIDUAL DE PERXIDO DE H2O2
Posterior a esto con ayuda de los papeles indicadores se mide la

cantidad de perxido residual, de acuerdo a las indicaciones del
producto.
DETERMINACIN DE LA CANTIDAD DE SULFITO PARA PARAR LA

REACCIN DE PERXIDO DE HIDROGENO
Teniendo el residual de perxido (mg/L) se procede a calcular la cantidad

de Na2SO3 realizando una regla de tres que se obtiene de la relacin
estequiometria de la ecuacin 1:
126.0422 g Na2SO3 33.9988 g H202
X
Y Na2SO3 1000 g H202
Donde:
X = es la cantidad de perxido residual obtenida del papel indicador en
mg/L (Ver Figura 9)
Y= cantidad de sulfito de sodio para neutralizar el perxido.
81
Figura 2: Determinacin residual H202 .
Se pesa esta cantidad de sulfito en la balanza analtica, se agrega al

agua tratada con H202 y se deja agitando aproximadamente 30
minutos.
Al finalizar estos 30 minutos se vuelve a medir con otro papel indicador

el perxido residual cuyo resultado debe dar cero.
En caso contrario se vuelve a calcular la cantidad de sulfito de sodio con

el valor que arroje el indicador.
Se repite el proceso desde el paso 4 hasta que el perxido residual sea

cero.
15. CONSTITUYENTES ORGNICOS ABSORCIN-UV MTODO

N 5910
A. CONCEPTO
Algunos compuestos orgnicos comunmente encontrados en agua y

aguas residuales, tales como la lignina, tanino, sustancias hmicas, y
varios compuestos aromticos, fuertemente absorbidos por la radiacin
ultravioleta (UV). Puede existir una fuerte correlacin entre la absorcin
82
UV y el contenido de carbn orgnico, color y precursores de
trihalometanos (THM) y otros productos de la desinfeccin.
Este mtodo se pretende ser empleado como una indicacin de la

concentracin de los constituyentes orgnicos de abdorcin-UV.
Los constituyentes orgnicos de absorcin-UV de una muestra absorben

la luz UV en proporcin a su concentracin. Las muestras son filtradas
para controlar las variaciones en absorcin UV causadas por partculas.
El ajuste del pH es opcional.La absorcin UV se mide a 253.7 nm (a
menudo redondeado hasta 254 nm).
Filtro de fibra de vidrio de 1,2 m o 0, 45 m
Bomba de vacio.
C. PROCEDIMENTO
1. Filtrar al menos 50mL de muestra a travs de la membrana

filtrante.
2. Preparar un blanco con agua destilada.
3. Encender el espectrofotmetro 15min antes de iniciar el ensayo.
4. Ajustar a una longitud de onda de 254nm y ajustar en cero de

absorbancia con el blanco de agua destilada.
5. Medir la absorbancia UV a 250nm al menos a dos porciones de la

muestra filtrada a temperatura ambiente.
D. CLCULOS
Reportar el valor medio de absorcin UV en unidades de cm -1empleando

la siguiente notacin. Para reportar unidades en m-1 multiplicar la
expresin por cien.
83
UV pH
= [ ]

b
D
Donde:
UVpH =Valor medio de absorcin UV, cm-1 (el subndice denota la

longitud de onda, nm, y
denota el pH empleado si es diferente de 7.0).
b= longitud de la celda, cm. (generalmente es 1.0 cm)
= absorbacia media medida, y
D = factor de dilucin resultante del ajuste con agua destilada, ver

pgina xxxx
84
16. MEDIDA DE LA ABSORCIN EN LA REGION DEL ESPECTRO UV-
VIS
La medida de la absorcin UV es un indicador de la concentracin de

compuestos orgnicos comnmente encontrados en aguas tales como
lignina, tanino, sustancias hmicas y varios compuestos aromticos los
cuales son absorbidos por la radiacin ultravioleta (UV), el contenido de
carbn orgnico, color y precursores de trihalometanos (THM) y otros
productos de la desinfeccin estn relacionados con la absorcin UV.
El espectrofotmetro DR5000 (Figura 1) es un equipo utilizado para

medir la absorbancia de la luz en una solucin durante un espectro de
longitud de onda definido. Los resultados de la medicin pueden
visualizarse como valores nicos de absorbancia o como el espectro
total en longitudes de onda definidas, adicional a esto los datos pueden
imprimirse en formato de tabla o de curva.
Figura 1. Fotografa del espectrofotmetro DR 5000.
B.EQUIPOS Y MATERIALES
Mortero de porcelana
Pastillas anticonceptivas con composicin 0.15 mg de
Levonorgestrel y 0.03mg de Etinilestradiol (o cualquier otra
sustancia que se quiera determinar)
Cpsulas de porcelana
Membrana
Desecador
85
Bomba de vaco.
Balanza analtica.
Horno tipo mufla 550C.
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio, con tamao nominal
de abertura de 0,45m-1,2m.
Capsulas de porcelana.
Pinza metlica.
Probeta
Beaker de 1000 Ml
Agitador magntico
Barra magntica
Guantes para mufla
C.PROCEDIMIENTO
EJEMPLO:
Medicin indirecta del contenido de las hormonas levonorgestrel

y etinilestradiol en el agua.
1. Preparacin para cpsula y membrana para determinacin de slidos

suspendidos.
a. Calcinar la cpsula de porcelana en mufla a 550C hasta que la
masa sea constante (aproximadamente 15 minutos) y dejar enfriar
en el desecador.
b. Colocar una membrana filtrante en el sistema de filtracin.
c. Hacer 3 lavados a la membrana con el sistema de filtracin
utilizando 20mL de agua destilada para cada lavado (total de 60mL)
que deben ser despreciados.
d. Colocar la membrana en la cpsula de porcelana y calcinar en la
mufla por 15minutos y dejar enfriar.
2. Preparacin de la muestra
a. Medir 500 mL de agua ultrapura y transferir a un beaker de 1000
mL.
86
b. Colocar una barra magntica y acomodar el beaker en un agitador
magntico.
c. Tomar 5 pastillas anticonceptivas que contengan 0.15 mg de
Levonorgestrel y 0.03mg de Etinilestradiol, medir la masa de cada
una - M1
d. Colocar las 5 pastillas anticonceptivas en el mortero de porcelana y
triturar.
e. Agregar el polvo que quedo de las pastillas al agua ultrapura y dejar
agitando por 15 minutos.
Determinacin de slidos
a. Preparar una cpsula y una membrana para el ensayo.

b. Determinar la masa del conjunto (membrana + cpsula) - M2 en g.
c. Colocar con una pinza metlica la membrana calcinada en el
sistema de filtracin.
d. Filtrar un volumen conocido (V) de la muestra de agua ultrapura con
las pastillas anticonceptivas anteriormente mezclada, utilizando el
sistema de filtracin o vaco.
e. Transferir la membrana que contiene el residuo a la cpsula de
porcelana.
f. Secar el conjunto (membrana + cpsula) a 103C por 15 minutos
y despus enfriar en el desecador.
g. Determinar la masa M3 en (g) y calcular con la ecuacin 27:
mg ( M 3M 2 )1000000
Slidos suspendidos Totales ( )= , Ecuacin 27
L V ( mL )
h. Para encontrar la solucin de hormonas en el agua utilice la

ecuacin 28:
M 11000
Solucin ( g/ L )= Slidos suspendidos totales/ L , Ecuacin, 28
500 mL
Aplicacin de ozono
87
Realizar el ensayo N 4. Requerimiento en demanda oxidante Mtodo
N 2350 que se encuentra en la pgina N 22 de este manual durante 30
minutos, tomando muestras antes y despus de la ozonizacin y a los 10
y 20 minutos de la reaccin.
Medicin de la absorcin ultravioleta (UV)

a. Encender el espectrofotmetro DR 5000 en la parte posterior y
esperar la autocomprobacin.
b. En el men principal seleccione la opcin escanear longitud de

onda.
c. Pulse Opciones para acceder a las opciones de configuracin.
d. Pulse la tecla para seleccionar el rango de longitud de onda y el

intervalo de longitud de onda.
e. Pulse la tecla superior izquierda para seleccionar la longitud de

onda mnima.
f. Pulse la tecla superior derecha para seleccionar la longitud de onda

mxima.
g. Pulse OK para confirmar
h. Seleccione el intervalo de longitud de onda que desee, se pueden

elegir intervalos entre 0.1 y 5 nm.
i. Pulse OK para volver al modo de escaneado. Los parmetros

seleccionados se visualizarn a lo largo del eje x de la figura.
j. En la celda de cuarzo agregue agua ultrapura para el blanco.
k. Limpie la celda cuidadosamente con un trapo seco.
l. Ingrese la celda con el agua ultrapura en el porta celdas de 10 mm

con la cara transparente paralela al haz de luz.
m. Cierre el compartimiento de cubetas.
n. Pulse Cero y espere mientras se ajusta el cero, abajo aparece el

mensaje Ajust. Cero. La lmpara UV no se enciende hasta que
se ha introducido una longitud de onda del espectro UV y se ha
iniciado la medida del blanco, por esto la primera vez que
88
establezca el blanco el equipo muestra el mensaje Calent.
Lmpara
o. Una vez finalizado el ajuste del cero, retire la celda y ponga en ella
la muestra de agua que se desea medir. Se mide la absorbancia
para cada una de las 4 muestras correspondientes a los 0, 10, 20 y
30 minutos de la ozonizacin
p. Pulse Medicin y espere la lectura del equipo. Debajo del grfico

aparece el mensaje Midiendo y la pantalla mostrar un grfico
de forma continua de los valores de absorbancia en las longitudes
de onda escaneadas.
q. Una vez finalizado el escaneado de longitudes de onda se muestra

el grfico a tamao completo como el que se muestra a
continuacin:
Figura 2. Representacin grfica Escaneo longitud de onda
Pulse las teclas de flecha derecha e izquierda para mover el cursor

de modo que pueda visualizar para cada longitud de onda el
respectivo valor de absorbancia.
r. Tambin puede visualizar una tabla que le mostrar para cada

longitud de onda el respectivo valor de absorbancia, pulse en el
men Opciones y luego Ver Tabla, de inmediato aparecer una
tabla como la que est a continuacin:
89
Figura 3. Representacin en tabla escaneo longitud de onda.
s. Para volver al grfico, pulse Opciones y a continuacin, Ver

Grfico.
Como extraer datos a una USB.

a. Una vez realizada la medicin conecte una memoria USB en la parte
posterior del equipo.
b. Pulse Opciones a continuacin, ms y luego Enviar Datos.
c. Saque la memoria y conctela a su PC.
d. El equipo automticamente crea una carpeta en la USB llamada

WLData.
e. Abra Microsoft Office Excel.
f. Haga click en la pestaa Datos, luego en el men Obtener datos

externos haga click en la opcin Desde texto, busque el archivo y
de click en importar.
g. Seleccione la opcin Delimitados, luego de click en Siguiente.
h. Selecciones en Separadores las casillas Tabulacin y Coma, de

click en Siguiente
i. Luego de click en Finalizar y luego en Aceptar, inmediatamente

aparecern los valores de absorbancia para cada longitud de onda.
90
17. MTODO PARA DETERMINACIN DE CARBONO ORGNICO
TOTAL (COT), MTODO DIRECTO
Es una medida auxiliar de los ensayos de la Demanda Bioqumica y

Qumica de Oxgeno acerca de la cantidad de materia orgnica presente
en el agua, este puede llegar a expresar menores cantidades de materia
orgnica, pues hay algunos compuestos que no logran oxidarse. El
Carbono Orgnico Total es el material que se deriva en aguas residuales
a partir de diferentes factores como: la descomposicin de plantas, el
crecimiento bacteriano y actividades metablicas de compuestos vivos o
qumicos.
El mtodo a realizar establece tres rangos de COT, bajo, medio y alto,
dependiendo del compuesto a analizar y de su concentracin. El carbono
orgnico total es determinado por el burbujeo de la muestra bajo ligeras
condiciones cidas para remover el carbono inorgnico. Por otro lado, el
Carbono Orgnico Total en la muestra es degradado por el Persulfato y el
cido para formar Dixido de Carbono. Durante la degradacin, el
Dixido de Carbono se difunde en un agente indicador de pH dentro de
la ampolleta. La adsorcin de Dixido de Carbono en el agente indicador
forma cido carbnico. El cido carbnico cambia el pH de la solucin
indicadora, la cual experimenta un cambio de color. La magnitud del
cambio de color est relacionada con la cantidad original de Carbono
presente en la muestra.
Probeta graduada 10 ml
Digestor a 105C
Medidor de pH
Erlenmeyer 50 ml
Agitadores magnticos
Pipeta 0.1 a 1.0 ml
Plancha agitadora
Gradilla para tubos
Embudo
91
C. REACTIVOS
Solucin de digestin cida dependiendo del rango

Solucin buffer de Sulfato
Ampolletas indicadoras dependiendo del rango (Bajo LR, Medio MR, Alto
HR)
Almohadillas de Persulfato en polvo
Agua destilada
D. PROCEDIMIENTO
a. Agregar 10 ml de muestra en un Erlenmeyer de 50 ml que

contenga una barra de agitacin.
b. Adicionar solucin buffer de Sulfato hasta obtener un pH 2.0

(asegurarse que el pH de la muestra sea de 2, agregue
aproximadamente 0.4ml de la solucin buffer; si es necesario
agregue mayor cantidad).
c. Agitar continuamente en la plancha agitadora durante 10 min.
a. b. c.
d. Etiquetar dos frascos de solucin de digestin cida dependiendo

del rango que se vaya a medir (LR, MR, HR), uno para la muestra y
otro para el blanco.
92
e. Usar un embudo para agregar el polvo de Persulfato. Adicionar una
almohadilla en cada uno de los dos tubos de la solucin de
digestin cida previamente etiquetados.
f. Usar la pipeta para adicionar 1.0 ml de agua destilada al tubo para

el blanco y 1.0 ml de la muestra preparada en el tubo etiquetado.
g. Enjuagar dos ampolletas indicadoras (tener en cuenta el rango de

medida LR, MR, HR) con agua destilada y secarlas con un pao
que no deje residuos. No tocar las ampollas despus de secarlas,
tomarlos nicamente por la parte de arriba.
h. Colocar una ampolleta indicadora en cada uno de los tubos

etiquetados. Cuando la marca de la ampolla este a nivel con el
borde del frasco romper la parte superior de la ampolleta y dejarla
caer en la mezcla. No revolver o invertir el frasco despus de
poner la ampolleta.
d,e f. g,h
. .
i. Colocar las muestras en el digestor por dos horas a 103-105 C

aprox.
j. Remover las muestras del digestor y dejarlas enfriar durante una

hora para luego tomar resultados, el lquido en el tubo del blanco
debe estar de color azul oscuro.
k. Seleccionar la prueba COT en el espectrofotmetro, dependiendo

del rango a utilizar (LR, MR, HR).
93
i. j. k.
l. Poner el frasco del blanco en la ranura del espectrofotmetro.
m. Seleccionar cero, la pantalla debe mostrar: 0 mg/L C
n. Colocar la muestra preparada en el espectrofotmetro, los

resultados se dan en mg/L C. La pantalla mostrar fuera de rango
cuando el valor est fuera de los lmites del mtodo.
E. CLCULOS

resultado aparece fuera del rango asegurarse de que se est usando el
rango adecuado. Si ha realizado diluciones de la muestra, tener en
cuenta el factor de dilucin para el clculo fina de la concentracin de
COT.
94
18. MTODO PARA DETERMINAR METANO POR
DESPLAZAMIENTO
Equipos para venoclisis

Botellas para digestin
Recipientes de plstico
Manguera
Agujas
Soportes
Mallas
C. REACTIVOS
Hidrxido de Sodio (NaOH o KOH) 1N (la solucin debe tene un pH de 12)

Fenolftaleina
D. MONTAJE Y PREPARACION DE REACTIVOS
Solucin de Hidrxido de sodio (NaOH) N
En un Becker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar

enfriar y transferir la solucin cuantitativamente para el baln
volumtrico de 1000 ml. Completar el volumen del baln hasta la marca
con agua destilada.
E. ESQUEMA DEL MONTAJE
95
Figura 1. Montaje mtodo por
desplazamiento
F. PROCEDIMENTO
MTODO PARA DETERMINAR

METANO POR
DESPLAZAMIENTO
Agregar la solucin de hidrxido

de sodio 1 N en una botella para
digestin.
Agregar 10 gotas de
fenolftaleina.
Instalar el equipo para venoclisis en las

botellas con la solucin de NaOH y
unirlas al biodigestor.
Unir con la ayuda de una

manguera y aguja la botella
para digestin con el
recipiente plstico.
Colocar las botellas en las mallas y

colgarlas de forma invertida en el
soporte.
El volumen atrapado en el
recipiente de plstico ser el
volumen de metano.
96
Nota: Cuando la solucin de NaOH

cambie a incolora, se debe
reemplazar por una nueva.
Figura 2. Esquema procedimiento determinacin de
19. gas metano por desplazamiento.
ENSAYO DE ACTIVIDAD METANOGNICA ESPECFICA
A. CONCEPTO
La actividad metanognica especfica o AME por sus siglas, hace parte

de los bioensayos anaerobios, realizados con el fin de cuantificar la
mxima capacidad de produccin de metano generada por un grupo de
microorganismos que se encuentran en lodos anaerobios y condiciones
controladas de laboratorio.
La actividad metanognica es un aspecto importante en el monitoreo de

la poblacin de bacterias metanognicas presentes en el reactor
biolgico, razn por la cual se considera una herramienta de control y
operacin de los reactores. El conocimiento de la AME de un lodo
permite conocer la capacidad mxima de remocin de DQO y por
consiguiente la carga orgnica mxima que puede ser aplicada sin correr
el riesgo de desbalancear el equilibrio del proceso anaerobio.
El ensayo AME considera diferentes parmetros como son: el inoculo que

corresponde al lodo, el tipo de sustrato, que puede ser un agua residual
de un tipo en especfico o soluciones de cidos orgnicos como el cido
actico, el propinico o el butrico, segn lo que se pretenda identificar
con el ensayo y la solucin de nutrientes que es una mezcla de
diferentes compuestos que ayudan a la alimentacin de los
microorganismo presentes en el inoculo.
Para la cuantificacin del metano producido durante el ensayo se

pueden utilizar mtodos volumtricos o la cromatografa de gases, el
primero se basa en la cuantificacin del volumen de metano mediante el
uso de una sustancia como hidrxido de sodio por su propiedad de
reaccionar con el dixido de carbono presente en el biogs. El segundo
mtodo, requiere el uso del cromatgrafo de gases y permite una
medicin ms exacta de la composicin y biogs producido, en ambas
determinaciones se debe garantizar que el montaje realizado no
presente fugas.
97
En este ensayo se determina la produccin de metano por medio de la

cromatografa de gases y se utilizan botellas serolgicas selladas con
tapones de caucho y agrafes metlicos, para evitar las fugas. Las
mediciones se pueden realizar cada 24 horas, hasta que la produccin
de metano se mantenga constante. Es necesario realizar ensayos de
solidos totales voltiles, cidos voltiles totales, demanda qumica de
oxgeno y medicin de pH, tanto al inicio como al final del ensayo, con el
objetivo de evaluar la estabilidad del proceso.
Botellas serolgicas con boquilla de 20mm

Tapones de caucho y agrafes metlicos
Pinzas para sellar y abrir agrafes metlicos
Agitador magntico (opcional)
Cromatgrafo de gases AGILENT 7890
Cmara termocontrolada
jeringa de 0.5 ml con sistema luer-gas tight
Figura 1. Botellas serologicas, tapones de caucho, agrafes metalicos y

pinzas para sellar y abrir los agrafes
98
Figura 2. Toma de la muestra de
gas con jeringa
D. REACTIVOS
Solucin de nutrientes (medio mineral)

Solucin de etanol, cido actico o acetato de sodio
Solucin de nutrientes
La solucin de nutrientes se prepara siguiendo las recomendaciones de

Chernicharo (2007). Esta se compone a su vez de dos soluciones asi:
solucin 1: NaHCO3 (1000mg/L), KH2PO4 (650mg/L), K2HPO4 (150mg/L),
NH4Cl (500mg/L), MgCl2 (100mg/L), CaCl2.2H2O (100mg/L), Na2S.7H2O
(50mg/L), Extracto de levadura (50mg/L), solucin 2:FeCl3.6H2O (2mg/L),
ZnCl2 (0.05mg/L), CuCl2.2H2O (0.03mg/L), MnCl2.4H2O (0.5 mg/L),
(NH4)6Mo7O24.4H2O (0.05 mg/L), AlCl3.6H2O (0.05 mg/L), CoCL2. 6H2O (2
mg/L), NiCl2.6H2O (0.05 mg/L) y H3BO3 (0.01 mg/L). De la solucin 2 se
debe tomar 1mL y adicionarlo a 1L de la solucin 1.
Solucin de etanol, cido actico o acetato de sodio
Estas soluciones se utilizaran en el ensayo AME, como sustrato para el

reactor denominado control. Para determinar la DQO que genera la
solucin del reactor control se sigue el siguiente procedimiento:
C2 H 6 O
Etanol
C2 H 6 O+O2 CO 2 + H 2 O
99
Al balancear la ecuacin se tiene:
C2 H 6 O+3 O2 2 CO2 +3 H 2 O
El peso molecular es:
C2 2 12.011=24.022 g /mol
H 6 6 1.008=6.048 g /mol
0 1 15.999=15.999 g /mol
C2 H 6 O 46.07 g/mol
3 O2 3 2 15.999=96 g /mol
Esto indica que:
46.07 g/mol Etanol 96 g DQO /mol
Para determinar cuntos gramos de Etanol se necesitan para hacer una

solucin con una DQO de 100 gDQO/L, se realiza una regla de tres, lo
que indica que se necesitan 47.99 g/mol.
C2 H 6 O
Como el est en presentacin liquida, se necesita la densidad
para poder determinar el volumen que dan una DQO de 100 gDQO/L.
C2 H 6 O=0.79 g /cm3
m m
= ,V =
V
100
m 47.99 3
V= = =60.75 cm =60.75 mL
0.79
Es necesario adicionar 60.75 ml de etanol en 1 litro de agua destilada,

para obtener una solucin con la DQO deseada.
C2 H 4 O 2
cido actico
Para la preparacin de la solucin de cido actico de 100gDQO/L, se

deben adicionar 89.37 ml de cido actico en 1 litro de agua destilada,
para obtener una solucin con la DQO deseada.
NaC 2 H 3 O2
Acetato de sodio
NaC 2 H 3 O2+O2 CO 2 + H 2 O+ Na
Al balancear la ecuacin se tiene:
7
2 Na C2 H 3 O 2 + O2 4 CO2 +3 H 2 O+ 2 Na
2
El peso molecular es:
C2 2 12.011=24.022 g /mol
H 3 3 1.008=3.024 g /mol
O2 2 15.999=31.998 g/mol
Na 1 22.989=22.989 g/mol
2 Na C2 H 3 O2 82.033 g/mol
101
7 7
O2 2 15.999=111.99 g /mol
2 2
Esto indica que:
g
82.033 Acetato de sodio 111.99 g DQO/mol
mol
Sin embargo este valor corresponde a lo que producen dos moles de

acetato de sodio, lo producido por un solo mol es:
111.99 g/mol
=0.6826 g DQO/mol
282.033 g/mol
Se debe preparar una solucin de 146,4 g de acetato de sodio en 1 L de

agua destilada para garantizar una concentracin de 100 g DQO/L.
F. PROCEDIMIENTO
En la Figura 3 se presenta el procedimiento detallado para realizar el

ensayo AME.
102
103
Figura 3. Procedimiento para ensayo AME
G. CLCULOS
Volumen total de la mezcla: este volumen se determina segn la

capacidad de las botellas serolgicas, aunque se recomienda
aumentar este volumen aproximadamente 115 mL, volumen que
se utiliza en la realizacin de los ensayos de AVT, DQO, STV y pH,
al realizar este aumento se garantiza tener muestra suficiente
para ensayos y para agregar a cada reactor.
1
V mezcla =V Botella V Botella Ecuacin 1
3
Volumen de lodo para cada botella: se debe conocer la

C
concentracin de slidos totales voltiles del lodo ( lodo y la
concentracin deseada y segn las condiciones de agitacin (
Cmezcla
V mezclaC mezcla
V lodo= Ecuacin 2
Clodo
Volumen de lodo para cada botella:
V mezclaC mezcla
V lodo= Ecuacin 3
Clodo
Masa de microorganismos en cada botella:
M lodo=V lodoC lodo Ecuacin 4
Volumen de sustrato: este volumen corresponde a la cantidad de

solucin que se debe adicionar a cada reactor para obtener la DQO
104
DQOdeseada
deseada ( . Depende la de demanda qumica de
DQO soluci n madre
oxigeno de la solucin madre ( y el volumen de
V mezcla
mezcla (
DQOdeseadaV mezcla
V sustrato = Ecuacin 5
DQOsolucin madre
Volumen de solucin de nutrientes:
V

sustrato
lodo+V

V nutrientes =V mezcla
H.CALCULO DE LA AME
La produccin de metano debe ser calculada teniendo en cuenta las

condiciones de temperatura y presin atmosfrica bajo las cuales se
desarrolla el ensayo y se expresa como gDQOCH4/gSTVda.
Para su clculo es necesario identificar las variables iniciales:

V Lodo =
Volumen del lodo adicionado en el reactor (mL)
C Lodo=
Concentracin de solidos voltiles del lodo (gSVT/mL)
Temperatura del ensayo expresada en Kelvin
Atmosferas del ensayo
105
Produccin de metano en el rango de tiempo estudiado
M Lodo
= Masa de microorganismo (gSTV)
Con la informacin de las variables iniciales se realizan los siguientes

clculos y se realizan las grficas indicadas a continuacin:
Grfica produccin acumulativa de metano, en la cual se indica el

volumen de CH4 producido en los diferentes periodos de tiempo.
Esta grafica por lo general es como la mostrada en la Figura 4 y de
la que se obtiene la tasa de produccin de volumen de metano (
dV CH 4
.
dt
Figura 4. Produccin acumulada de metano
Clculo de la velocidad de produccin de masa

dV CH 4
PK
dM CH 4 g CH 4
dt (
h )
=
dt
RT
Ecuacin7
Donde:
106
P =Presin atmosfrica
K = Carga orgnica digerida correspondiente a un mol de metano.
R = Constante de los gases
T = Temperatura
Clculo de la DQO ejercida por el metano producido
CH 4 +2O2 CO 2 +2 H 2 O
Considerando la reaccin del metano , en la
que una mol de metano consume dos de oxgeno.
dM CH 4
64 g O2
dDQO O2
dt
g( )
h
=
dt
16 g CH 4
Ecuacin 8
Clculo del valor de actividad metanognica especifica
dDQO
24
dt
AME ( gDQO/gSTV . da)= Ecuacin 9
C Lodo
Ejemplo de clculo:
Variables iniciales:
Volumen del lodo adicionado: 22 mL
Slidos voltiles en el lodo: 0.01725 gSTV/mL
Concentracin del lodo en la mezcla: 5 gSTV/L
Masa de microorganismos: 0.380 g
Temperatura del ensayo: 305 K
107
Tabla 1. Produccin de metano
Tiempo
Volumen
acumulado
CH4 (mL)
(Horas)
0 0,001
24 0,170
96 0,814
120 0,857
144 0,835
264 0,685
288 0,482
312 0,494
360 0,522
432 0,502
480 0,470
Evolucin temporal del CH4

0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
Volumen (mL) 0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 100 200 300 400 500 600
Tiempo (Horas)
108
Figura 5. Produccin acumulativa de metano
Como se identifica en la Figura 5 el comportamiento no es estrictamente

igual al mostrado en la Figura 4, si se considera necesario se puede
hacer un tratamiento a las datos, considerando aspectos como, si hubo
un tiempo muy prolongado entre alguna toma de muestra, variaciones
con los cromatogramas entre otros aspectos.
El clculo de la AME, corresponde a la pendiente del tramo ms

empinado de la curva, seleccionado estos datos se realiza la Figura 6:
Evo l uci n t emp or al del CH4
Figura 6 Evolucin temporal del metano
El clculo de la velocidad de produccin de masa, se realiza con la

Ecuacin 7, y se obtiene
109
dV CH 4=7.568 x 109 m3 CH 4 /h
dM CH 4 g CH 4 g CH 4
dt ( h )
=7.568
x 1099840016000
8.14472305
0.00479
h
El clculo de la DQO ejercida por el metano producido, segn la Ecuacin

8 es:
dDQO O2 0.0047964 g O2 O
dt
g ( )
h
=
16 g CH 4
0.019 g 2
h
El clculo del valor de actividad metanognica especfica, segn la

Ecuacin 9 es:
gDQO 0.01924 gDQO

AME ( gSTV da )
=
0.380
=1.213
gSTV da
20. MTODO PARA DETERMINACIN DE AZCAR
El contenido total de hidratos de carbono en medios lquidos como

extractos y alimentos puede ser determinado en forma de azcares
simples, ya que todos los azcares como oligosacridos y polisacridos
pueden ser determinados recordando que estos bajo hidrlisis cida
producen monosacridos. Es importante recordar que los carbohidratos
son particularmente sensibles a cidos fuertes y altas temperaturas.
Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar

empezando con una deshidratacin simple, si se contina con un
110
calentamiento, con la catlisis cida y se aade fenol se producen
derivados del furano que se condensan consigo mismo y con otros
subproductos para producir compuestos coloridos producto de la
condensacin de compuestos fenlicos y heterocclicos.
Los compuestos coloridos formados son aquellos que van a ser

cuantificados (mtodo colorimtrico). Por medio de este mtodo, se
determinan azcares simples, oligosacridos, polisacridos y sus
derivados; que presentarn un color amarillo-naranja muy estable luego
de que reaccionan con el fenol en presencia de cido sulfrico
concentrado.
La intensidad del color naranja es proporcional a la cantidad de

carbohidratos presente. La forma en que procede la reaccin no es
estequiomtrica y depende de la estructura del azcar, por lo que es
necesario realizar una curva patrn.
Baln aforado 100 mL
Pipeta 10 mL
Tubos de ensayo
Pipeta automtica 10 -100 L
Pipeta automtica 100 1000 L
Balanza analtica
Cmara de extraccin de humos y vapores txicos
Espectrofotmetro DR5000
C. REACTIVOS
cido sulfrico concentrado (H2SO4) 95%
Fenol al 5% (m/v)
Agua destilada
111
Solucin Patrn: Glucosa: 400mg/L
D. PREPARACION DE REACTIVOS
Preparacin de la solucin de Fenol al 5%(m/v)
Pesar 5.0 g de fenol grado reactivo y colocar en un baln de aforo de

100 mL, aforar con agua destilada hasta la seal del baln,
homogenizar, preparar el reactivo en la cmara de extraccin de humos
y vapores txicos. Almacenar en frasco mbar, rotular correctamente,
ste reactivo es muy estable y debe ser mantenido a la temperatura del
laboratorio.
Preparacin del Stock de azcar (400 mg/L)
El azcar utilizado para la preparacin de la curva de calibracin

depender del azcar presente en las muestras que van a ser
analizadas. Pesar 0,04 g de Sacarosa con exactitud hasta la dcima de
mg, disolver, ajustar a aforo de 100 mL con agua destilada, rotular
correctamente y almacenar en nevera (4.0C) para su posterior uso.
E. PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN
La curva de calibracin se realiza preparando varias concentraciones, en

la Tabla. 1 se muestra las diferentes diluciones para la obtencin de
estas.
Tabla 1. Preparacin de la curva de Calibracin siguiendo

recomendaciones de Dubois (1956).
N Dilucin 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Stock glucosa o 12. 15. 17.

0 2.5 5 7.5 10 20 25
sacarosa (mL) 5 0 5
Agua destilada 10 97. 95. 92. 90. 87. 85. 82. 80. 75.
(mL) 0 5 0 5 0 5 0 5 0 0
Glucosa o 10
0 10 20 30 40 50 60 70 80
sacarosa (mg/L) 0
112
Para la curva de calibracin de concentraciones de azucares altas
mayores de 100 mg/L se cambia la concentracin Stock de azcar, y se
halla de la siguiente manera:
C1 V 1=C 2 V 2
(400 mg/ L)25 ml=C 22.5 ml
40025
C2 = =4000 mg/ L
2.5
Se necesita una concentracin de 4000mg/L para obtener con 2.5 ml de

volumen una concentracin de 100 mg/L de Azcar; a continuacin se
muestra las diferentes concentraciones para la realizacin de la curva de
calibracin:
Tabla 2. Preparacin de la curva de Calibracin de alta

concentracin
N Dilucin 1 2 3 4 5 6
Stock glucosa o 12.

0 2.5 5 7.5 10
sacarosa (mL) 5
Agua destilada 10 97. 95. 92. 90. 87.

(mL) 0 5 0 5 0 5
Glucosa o 10 20 30 40 50
0
sacarosa (mg/L) 0 0 0 0 0
Las concentraciones mayores a 500mg/L presentan absorbancias

mayores de 3.5 que no lee el espectrofotmetro.
Se realiza el siguiente procedimiento ya teniendo las muestras

preparadas:
En tubos de borosilicato con tapa rosca, aadir 1 ml de cada

concentracin preparada y 1 ml de agua destilada para el blanco.
Adicionar 0.5 mL del reactivo de fenol al 5%.
113
Rpidamente adicionar de una sola vez 2.5 mL de cido sulfrico
concentrado tratando de no deslizarlo por las paredes del tubo.
Agitar inmediatamente tubo por tubo despus de cada adicin

para capturar algunos restos de cido por las paredes del tubo.
Dejar incubar de 10 a 15 minutos fuera de la luz directa del sol.
Poner en bao de agua a temperatura ambiente por 30 minutos.
Leer la Absorbancia a longitud de onda de 490 nm o 492nm y

realizar las curvas de Absorbancia Vs. Concentracin
La curva se debe realizar cada vez la solucin de fenol se haya

terminado.
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE AZCARES
Se realiza el mismo procedimiento nombrado para la curva de

calibracin, si es necesario se hace dilucin de la muestra cuando las
contracciones sobrepasan el valor mximo de la curva.
F. CLCULOS
Los resultados se toman directamente del espectrofotmetro una vez se

haya subido la curva hallada a este, si el resultado aparece fuera del
rango asegurarse de realizar dilucin. Si ha realizado diluciones de la
muestra, tener en cuenta el factor de dilucin para el clculo final de la
concentracin de fosforo.
21. HIDROGENO Y METANO POR CROMATOGRAFIA GASEOSA
A.CONCEPTO
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la

distribucin de la muestra entre dos fases. Una fase es el lecho
estacionario de extensa superficie empacada apretadamente dentro de
una columna. Esta es la fase estacionaria y puede ser un slido o una
114
delgada pelcula que recubre al slido. La otra fase consiste en un gas o
lquido que percola sobre la fase estacionaria denominada fase mvil.
En la cromatografa de gases, la fase mvil se denomina gas portador,

ya que es un gas inerte cuya finalidad es transportar las molculas a
travs de la columna. Los adsorbentes, tales como carbn vegetal, gel
de slice y tamices moleculares (zeolitas sintticas) son las fases
estacionarias en la cromatografa gaseosa. La adsorcin diferencial
sobre la superficie solida es la base para la separacin en la
cromatografa gas-solido.
Cromatgrafo de gases AGILENT 7890A con la siguiente configuracin:
Columna capilar Carboxen 1010 plot

Flujo del Carrier, de Referencia y de Makeup: Argn.
Jeringa de cromatografa de 0.5 mL, en lo posible con
sistema luer-gas tight.
Filamento: activo
Polaridad: Sin polaridad
C. PROCEDIMIENTO
1. USO DE LAS VLVULAS CILINDRO DE GAS
El gas de arrastre que emplea el cromatgrafo para medicin de

hidrogeno es el Argn, debido a que es el gas ideal para usar como
gas de arrastre por su valor de conductividad. Los cilindros se
encuentran ubicados en la caseta de gases cerca del laboratorio de
calidad de aguas. Las llaves estn encima del mesn del cromatgrafo
(Llavero morado central de gases), ver Figura 1.
115
Figura 1. Llaves de la central de gases.
El cilindro cuenta con una vlvula la cual controla la salida del gas
como se observa en la Figura 2 (a), brala totalmente en la direccin
que indica la vlvula.
El cilindro viene acompaado de una vlvula y dos indicadores de

presin como se ve en la Figura 2 (b). La presin que sale del cilindro
a travs de la tubera es regulada por la vlvula central.
El indicador de la derecha o nmero 1 muestra la presin en el cilindro

de gas reflejando la capacidad que tiene. El indicador de la izquierda o
nmero 2 muestra la presin que llega a la vlvula ubicada en el
laboratorio y que controla la cantidad de flujo que utiliza el
cromatgrafo.
Gire la vlvula 1 hacia la derecha (increase) hasta alcanzar un presin

mayor de 80, si desde un principio indica un valor mayor a 80 gire
hasta que el indicador 2 muestre un leve movimiento (La presin del
indicador nmero 2 debe estar por el orden de los 100 psi), despus
de esto realice una purga del gas abriendo la vlvula 2 dejando
escapar la menor cantidad de gas y cierre nuevamente.
l
(a) (b)
Figura 2. (a) Vlvula del cilindro y (b) Vlvula e indicador de la primera

estacin.
Dentro del laboratorio en la cabina donde se encuentra el

Espectrofotmetro de Absorcin Atmica se encuentra una
116
estacin con una vlvula que regula para cada gas la presin de
entrada al aparato como se muestra en la Figura 3.
Esta estacin contiene dos vlvulas y un indicador. La vlvula grande

controla la presin de entrada al cromatgrafo mientras la vlvula
pequea sirve para abrir los gases hacia el equipo. Como se ve en la
Figura 3, el indicador nmero 3 muestra la presin de entrada al
cromatgrafo para el gas Argn, el cual debe estar por el orden de 80
psi. Abra la vlvula pequea, debe estar completamente abierta antes
de manejar el cromatgrafo y tambin abrir la vlvula 3, de tal
manera que su extremo apunte hacia abajo.
Figura 3. Vlvulas e indicador de la segunda estacin.
2. CREACIN DE LA TCNICA DE DETECCIN DE GASES CON

ARGN
a. Creacin de un proyecto
Un proyecto es una carpeta donde se guardan distintos mtodos

cromatogrficos. Adems de estos mtodos tambin se guardan los
cronogramas , secuencias, conjuntos de resultados y toda la
informacin obtenida al trabajar los mtodos incluidos en el proyecto.
Para crear un proyecto se empieza ingresando al icono OpenLab

Control Panel en el escritorio, luego click en proyects al lado
117
izquierdo de la pantalla, posteriormente se da click en create en la
parte superior, como se ve en la Figura 4.
Figura 4. Creacin de un proyecto 1.
Cuando se ingresa a la ventana create Project se coloca en name el

nombre del proyecto, en Proyect Folder Path se coloca el mismo
nombre del proyecto en la siguiente forma,
C:\Enterprise\Proyects\nombre del proyecto. Se presiona OK,
como se ve en la Figura 5.
118
Figura 5. Creacin de un proyecto 2.
Finalmente, hacer click en la opcin Instruments (parte inferior

izquierda) y luego Instrument-PC, para luego seleccionar el
proyecto donde que se quiere trabajar.
b. Abrir el proyecto
Ingresar al OpenLab Control Panel para seleccionar el proyecto

sobre el cual se va a trabajar y sobre el cual va quedar guardado el
mtodo y sus respectivos resultados. Haga clic en Browse,
seleccionar Hidrogeno con Argn, y luego en Launch. Espere
unos segundos a que se realice la conexin. Ver Figura 6.
119
Figura 6. Iconos para abrir el proyecto.
c. Creacin del mtodo
2.c.1 Pasos iniciales
Seleccionar en la barra de herramientas el men Method, y

luego la opcin Instrument setup, ver la Figura 7.
Figura 7. Creacin del mtodo.
120
En el siguiente cuadro seleccionar la opcin Create a new
method, ver Figura 8.
Figura 8. Creacin de un nuevo mtodo.

2.c.2 Inyector
Una vez que aparezca el siguiente cuadro, seleccionar el icono

inlets para modificar los parmetros de operacin, ver Figura
9.
Figura 9. Ventana del inyector en modo Split.
121
Parmetros:
Los parmetros para el mtodo de deteccin de gases con gas

Argn son:
Heater (activado): Temperatura del horno de 200 C.

Preassure (activado): Presin del inyector de 8.0151 psi.
Septum purge flow (activado): Flujo que purga la septa
de 3 mL/min.
Gas saber (On activado): Flujo del venteo del Split de
15 mL/min; tiempo de espera para la dilucin de la
muestra en la columna de 2 min.
Mode (activado): Modo de inyeccin tipo Split; la
relacin de dilucin en el Split Ratio de 50:1; y flujo del
Split de 75 mL/min.
2.c.3 Columna
Seleccionar el icono Columns para modificar los parmetros

de esta, ver Figura 10:
Figura 10. Ventana de la columna.
Se debe tener en cuenta que para hacer las respectivas

modificaciones se debe seleccionar el tipo de columna en la
parte superior izquierda (figura 10).
122
En la parte derecha se deben ingresar los siguientes
parmetros.
Los parmetros a modificar en la columna son:

Flow: El flujo que pasa a travs de la columna es de 1.5
ml/min.
Pressure: La presin que pasa a travs de la columna
es de 8.0151 psi.
Average Velocity: La velocidad de flujo en la columna
es de 25.267 cm/sec.
Holdup time: El tiempo de retencin es de 1.9789 min.
Constant flow: Para un flujo constante que garantiza la
presin necesaria.
Post run: La velocidad de la circulacin del gas es de
4.6758 mL/min.
Si la columna tiene especificaciones diferentes se debe ingresar estas

en la opcin Change Column, aparecer una ventana como se
muestra en la figura 11 donde podr ingresar dichos parmetros.
123
Figura 11. Especificacin de Columna
Para poder seleccionar el gas de arrastre, se selecciona el icono

Configuration, en la pestaa Modules en la cual se encuentra las
opciones para activar los gases (Figura 12).
Figura 12. Seleccin gas de arrastre
Aqu se encuentran las siguientes opciones donde se debe seleccionar el

gas con el cual se va a trabajar en este caso el Argon:
Front Inlet: Se selecciona el gas ArMe
Front Detector: Como no se encuentra la opcin de ArMe se selecciona el

He por su similitud
Back Detector: Como no se encuentra la opcin de ArMe se selecciona el

He por su similitud
En la figura 13 se observa como deben quedar estos parmetros.
124
Figura 13. Seleccin gases
NOTA: Al finalizar el mtodo y cargarlo al cromatgrafo, para

verificar que el gas de arrastre se encuentre activo en el equipo se
puede realizar el siguiente procedimiento.
Pulsar el botn [Config], ubicado en la esquina inferior izquierda

en el cromatgrafo, seguido seleccione en el display la opcin
Front Inlet con el botn [Enter].
Figura 14. Acceso a la seleccin

del gas de arrastre
Al seleccionar la opcin Front Inlet aparecer en el display las

opciones Configured, Ignore Ready y Gas type, seleccione esta
ltima opcin con el botn [Mode/Type] ver figura 15, seguido
busque el tipo de gas de arrastre que en este caso es el Argon
methane 5% el cual tendr un asterisco si es el adecuado (Figura
15).
125
Figura 15. Acceso a la seleccin del
gas de arrastre
Si se quiere cambiar el gas de arrastre desde el cromatgrafo, se

selecciona el gas deseado con la tecla Enter, y para finalizar el
proceso se hace clic derecho en la pantalla escogiendo la opcin
Upload Method From GC (figura 16).
Figura 16. Envo del mtodo del cromatgrafo al computador
Antes de descargar el mtodo al cromatgrafo, verifique en la

seccin Signals, que se encuentre activa la opcin Front Signal
(TCD), ver figura 17. Tener activa esta opcin permite que el
cromatograma se active en el momento de hacer la inyeccin y se
pueda registrar los resultados de lo contrario no guardara
informacin de los resultados de la inyeccin.
126
Figura 17. Envo del mtodo del cromatgrafo al computador
2.c.4 Horno
Seleccionar el icono oven para modificar los parmetros en

los que va a trabajar el horno en el nuevo mtodo, ver Figura
18.
Figura 18. Ventana del horno.
Parmetros:
Revisar las siguientes opciones:
127
Oven temp on (activada): Primera temperatura de la
rampa de temperaturas es de 40 C.
Equilibration time: Tiempo en que se equilibra el horno
antes de colocar otra muestra es de 1 min.
Maximun oven temperatura: Temperatura mxima que
soporta la columna es de 250 C.
Programacin de temperatura:
A la derecha de la ventana aparece un cuadro que permite

hacer la rampa de temperaturas segn el mtodo que se va a
trabajar.
Fase inicial (initial):

o Value C: Colocar 40 C.
o Hold Time: Colocar 2 min.
o Run time: Colocar 2 min.
Rampa 1:
o Rate: Colocar 5 C/min.
o Run time: Colocar 6 min.
Rampa 2:
o Run time: Colocar 12.4 min.
Rampa 3:
o Run time: Colocar 23.025 min.
128
2.c.5 Detectores
Seleccionar el icono detectors para modificar sus parmetros

de funcionamiento, ver Figura 19.
Figura 19. Ventana del Detector.
En el icono TCD-Front se verifica el estado de los siguientes

parmetros:
Heater (activado): Temperatura de 250 C.

Reference Flow (activado): El flujo de la referencia es de
27 mL/min.
Makeup Flow (activado): El flujo es de 12 mL/min.
Filament: Seleccionar la opcin para activarlo.
Negative Polarity: Seleccionar la opcin para activarlo.
En el icono FID-Back se verifica el estado de los siguientes

parmetros:
Heater: Temperatura del detector no activado.

H2 flow: Flujo de hidrogeno a travs del detector no
activado.
Air flow: Flujo de aire a travs del detector no activado.
Makeup flow: No activado.
129
Flame: Llama que quema los hidrocarburos, siempre
debe estar activada.
d. Guardar el mtodo
Una vez que se han modificado todos los parmetros del mtodo a
desarrollar se procede a guardarlo en su respectivo proyecto, se va
a file>save as >method.
e. Descargar el mtodo
Para descargar el mtodo al cromatografo, hacer click boton

izquierdo del mouse>Download method to GC. Luego oprima
OK.
Figura 20. Opcin descargar mtodo.
Espere 5 minutos hasta que el cromatgrafo llegue a las

condiciones del mtodo, pulse [Status] para ver qu parmetros
no estn listos, el mtodo estar listo cuando en el display
aparezca Waiting for prep run-Front inlet purging.
f. Analizar las muestras de gas patrn
Una vez descargado el mtodo al cromatgrafo, se deben realizar

las inyecciones manuales del gas patrn (25% de Hidrogeno, 25%
Nitrgeno, 25% Metano y 25% Dixido de Carbono), con
concentraciones de 0.3 ml, 0.4 ml y 0.5 ml (realizar tres replicas
por cada concentracin). Luego se presiona el icono single run,
ver Figura 21.
130
Figura 21. Cilindro gas patrn, jeringa e icono de single run.
A continuacin aparece un recuadro, ver Figura 22, en el que se

tiene que completar la siguiente informacin:
Sample ID: Colocar el nombre de la muestra que ser

inyectada, ejemplo: R1.0.3 ml, R2.0.3ml, R3.0.3ml, R1.0.4ml,
R2.0.4ml, R3.0.4ml, R1.0.5ml, R2.0.5ml, R3.0.5ml.
Method: Aparece el mtodo por defecto.
Data File: Colocar el mismo nombre de Sample ID.
Result Path: Seleccionar la carpeta donde se van a guardar

los resultados.
Result Name: Colocar el mismo nombre de Sample ID y de

Data File.
Number of resp: Recomendable dejar el valor de 1.
131
Figura 22. Ventana de single run.
Una vez completada la informacin se presiona start. Luego de

oprimir el botn Status y que el display del cromatografo muestre
ready for inyection, se realiza la inyeccin y se presiona start en
el cromatografo en el menor tiempo posible ver Figura 23.
Figura 23. Mtodo de Inyeccin
132
Este mtodo tiene una duracin de 25 minutos el cual se puede
verificar pulsando [Status] donde se muestra el tiempo de
anlisis.
Al finalizar el anlisis en la pantalla aparece una ventana la cual

indica si quiere guardar los cambios en el mtodo, a lo cual
siempre debe pulsar NO, ver Figura 24.
Figura 24. Ventana para aceptar cambios en el mtodo.
En seguida se mostrara el cromatograma con los picos con el

nombre de cada gas (Figura 25).
Figura 25. Cromatograma.
Si desea realizar otra inyeccin presione nuevamente el icono

single run y siga los pasos ya descritos.
g. Abrir los resultados
133
Para abrir los resultados se debe hacer click en File>Open>Data.
Luego se busca el resultado en la ventana open data file y una vez
seleccionado se da click en open, ver Figura 26.
Figura 26. Ventana de open data.

h. Proceso de integracin
2.h.1 Ingreso a los eventos de integracin
Una vez se abre el cromatograma o el dato, el primer paso es

analizar los resultados y ubicar los picos de inters que suelen
ser los ms sobresalientes.
Para empezar a hacer la integracin es necesario hacer click

en integratin events en la hoja de navegacin donde nos
aparece un cuadro como el de la figura 27 con los parmetros
de integracin threshold y widht.
134
Figura 27. Integration events.
2.h.2 Zoom y full unZoom
Para observar los picos de los analitos que suelen ser

pequeos con respecto a la totalidad del cromatograma, se
deben realizar acercamientos a la lnea que traza el
cromatograma. Para esto, se dibuja un cuadro negro con el
click izquierdo del mouse sobre el sector que se quiere
analizar como se ve en la Figura 28.
Figura 28. Zoom en el cromatograma.
Para volver a ver la totalidad del cromatograma se presiona

sobre el resultado click derecho > full unZoom.
2.h.3 Programacin grafica
Para realizar la integracin de los picos de inters (Hidrogeno,

Nitrgeno, Metano y dixido de Carbono), primero se debe
escoger el cromatograma que presente mayor ruido; luego se
presiona click derecho sobre el cromatograma>Grafical
Programming, como se ve en la figura 29.
135
Figura 29. Herramientas del grafical programming.
Grafical programming nos permite obtener todas las

herramientas o eventos para realizar la integracin que se
requiere, se recomienda usar las 5 ms comunes en el
siguiente orden:
Width: Se indica el ancho mnimo de los picos que

detecta el programa en el cromatograma. Para el caso
del ancho es recomendable seleccionar el punto inicial
y el punto final del pico ms pequeo que se quiere
analizar cuando el programa nos lo pregunta una vez
abrimos la herramienta, ver Figura XX.
Figura 30. Herramientas del grafical programming.
Luego aparece la siguiente ventana, ver Figura 30, la cual

pregunta Add to table y Analyze now; es recomendable
hacer click en Analyze now.
136
Figura 31. Configuracin Evento Width.
Threshold: Sirve para detectar en la lnea base el inicio

y el final de un pico, con el fin de decidir que es ruido y
que es seal. Primero se define con el punto inicial y el
punto final una regin de la lnea base donde no haya
picos de inters. Posteriormente ir aumentando el valor
para que el programa reconozca los picos ms
pequeos como ruido y solo se obtengan los picos que
nos interesan.
Negative peak: Sirve para definir una regin donde

queremos que se detecte un pico negativo, Ver Figura
31.
Figura 32. Ejemplo de pico de Hidrgeno negativo y la

presencia de ruido en el cromatograma.
137
Integrafion off: Cuando se detectan picos fuera del
rea de inters es recomendable usar la herramienta
integratin off, donde se nos pregunta el tiempo
inicial y final de una regin que deseemos que no
tenga picos.
Minimum rea: Es una herramienta que abarca el

tiempo inicial y final todo el cromatograma, en la cual
se coloca un rea para que detecte solo los picos por
encima de esta misma. Esta opcin debe ser usada
cuando la opcin de Anotaciones este activada (ver
numeral 2.8.4), para que nos muestre las reas de
cada pico de inters.
Los valores de los eventos de integracin pueden ser

modificados en la tabla Integration Events Front Signal,
Figura 33, que se encuentra debajo del cromatograma. Cada
vez que se realice una modificacion, hacer click en la opcin
Analysis, de la barra de tareas, y luego click en Analyze.
Figura 33. Ejemplo de mtodo de integracin.
Recomendaciones en la integracin
o Es recomendable empezar las integraciones con

los estndares de ms baja concentracin y con
los picos ms pequeos y ms problemticos.
o Es importante eliminar los parmetros que sobran
desde la tabla de eventos de integracin para que
no afecte el anlisis, se dejan en blanco y se
analiza el cromatograma.
138
o Cuando en los parmetros de threshold y widht
hay un solo intervalo de tiempo, ese valor se
aplica para todo el cromatograma. Cuando esta
dos veces el mismo parmetro con distintos
intervalos de tiempo y diferentes valores, la
herramienta opera de forma distinta en los dos
intervalos del cromatograma.
Una vez se tiene la metodologa de integracin lista y se han

integrado los picos que queremos, se pueden abrir otros
resultados con distintas concentraciones y el mismo mtodo
para analizar todos los resultados. Finalmente se guarda el
mtodo.
2.h.4 Anotaciones
Es una opcin que nos permite visualizar en el cromatograma

la informacin que queremos, ya sea altura, rea, nombre del
pico, tiempo de retencin, platos tericos, resolucin, etc.
Se abre haciendo click derecho sobre el cromatograma y

luego click en annotations.
En el cuadro Trace Annotations Properties se elige la
informacin que se quieren ver y se pasa al lado derecho con
la flecha verde para luego dar OK, ver Figura 34.
Figura 34. Propiedades de anotaciones.
i. Creacin de una tabla de picos
139
Es una tabla donde se definen y organizan los picos de los
cromatogramas integrados para realizar las curvas de calibracin.
Inicialmente se hace click se hace click en peaks/groups table

en la hoja de navegacin. Se abre el primer dato de la secuencia
File>Data>Open, y se definen individualmente los picos con el
grafical programming, haciendo click derecho>grafical
programming>define single peak. Se obtiene un cuadro como
el de la Figura 35.
Figura 35. Creacin de una tabla de picos.
En el cuadro anterior, se asigna los tiempos de retencin a cada

pico. Tambin se introduce la informacin que se pide a
continuacin:
Peak name: Se coloca el nombre del compuesto o

analito que se est evaluando; Ej: Hidrgeno, Nitrgeno,
etc.
Conc level: Primero se indica el nivel (Ej: 1, 2, 3, etc) y
luego se coloca la concentracin o volumen en la que
est trabajando la muestra en ese cromatograma; Ej:
0.5 mL, 0.4 mL, etc.
Units: Se colocan las unidades del volumen puesto
anteriormente; Ej: L si se trabajan microlitros o mL si
se trabajan mililitros.
Retention time window: Es un porcentaje
recomendado para la ventana de retencin relativa;
valor recomendable de 2%.
140
Una vez se han colocado todos los parmetros en el cuadro se
presiona Next pasando al siguiente pico. El valor del tiempo de
retencin cambia automticamente cuando se ingresa al pico
siguiente. Cuando se llega al ltimo pico se presiona Done. Las
caractersticas de cada pico pueden ser modificadas en el cuadro
que se encuentra debajo del cromatograma, ver Figura 36.
Figura 36. Tabla picos.
En cada columna aparecen distintas caractersticas de cada pico

como son:
Name: Aparece el compuesto que representa cada pico.

Ret Time: Aparece el tiempo de retencin de cada
compuesto.
Window: Es el Retention time window previamente
definido, a medida que el tiempo de retencin es ms
grande la ventana es mayor y abarca ms espacio.
Ref ID#: Se utiliza cuando se emplean picos de referencia
para los tiempos de retencin. Su valor es 0.
ISTD ID#: Se utiliza cuando se est usando estndar
interno. Su valor es 0.
Resolution ID #: Sirve para calcular la resolucin o
separacin entre dos picos, por defecto su valor es 0.
Units: Aparecen las unidades empleadas en la
concentracin.
141
Rt Update: Actualiza los tiempos de retencin cuando se
mueven los picos. Por defecto aparece None.
LOD: Se definen los lmites de deteccin; valor estndar 0.
LOQ: Se definen los lmites de cuantificacin; valor estndar
0.
Quantitative: Se coloca la forma de cuantificar ya sea por
altura o por rea que es lo recomendable.
Fit Type: Indica cmo se ajusta la curva de calibracin, lo
ms adecuado es dejar este campo en Linear.
Zero: Se emplea para que la curva de calibracin comience
en el origen (0,0), es lo recomendado segn la teora
cromatogrfica.
Calibratin Flag: Indica con que inyecciones se realiza la
calibracin segn estas dos opciones:
o Replace: Para hacer la calibracin con la ltima

inyeccin.
o Wt Average: Para hacer la calibracin con el promedio de todas las
inyeccines lo cual es lo recomendado.
Calibratin Weight: Se asigna un factor de peso al

promedio de las inyecciones de las rplicas, pero va a
reemplazar el factor de respuesta que exista en el anterior
mtodo; el valor recomendado es de 100.
Level 1,2,3:Los niveles indican las concentraciones que

se colocan para realizar las curvas de calibracin, ver Figura
37.
Figura 37. Niveles de concentraciones en la tabla de picos.
142
Una vez revisadas todas las caractersticas, se procede a guardar
el mtodo.
j. Calibracin
El proceso de calibracin se realiza a partir de una secuencia de
las rplicas con diferentes concentraciones que se deben hacer
con el mtodo ya establecido, para la creacin de la secuencia se
oprime el icono mostrado en la figura # que se encuentra en la
parte superior izquierda de la pantalla, ah aparecer una ventana
para la creacin dela secuencia y se da doble clic al icono
Blank.seq (figura 38).
Figura 38. Creacin de nueva secuencia
Aparecer una ventana con una tabla donde se puede editar la

secuencia, a continuacin se mostrara cada una de las opciones que
deben ser editadas y que debe ponerse en cada parmetro:
Run Type: En esta columna al oprimir la flecha, aparecer una ventana

con varias opciones para elegir en este caso se elige la opcin Begin
Calibration (figura 39)
143
Level: Se coloca el nmero de nivel que corresponde a cada una de las
concentraciones que se va a utilizar empezando nivel 1 como la
concentracin ms baja.
Reps: Se coloca el nmero de replica que es para cada nivel
Vial: Se coloca el vial que se va inyectar
Sample: Se pone un nombre que especifique el proceso que se est
realizando que en este caso podra ser Calibracin.
Method: Se escoge el mtodo al cual se le va realizar la calibracin
Fliename: Se busca la inyeccin que corresponde al nivel y el nmero
de replica que se vaya a evaluar.
Al llenar la primera fila se da doble clic en la fila siguiente y se

habilitaran ms filas para seguir introduciendo los niveles restantes con
sus respectivas replicas. Despus de esto selecciones una serie de
lneas las cuales alcancen para el total de datos por la columna Run#,
clic derecho sobre esta seleccin y escoja la opcin Fill Down
(figura40). Aparecer una ventana como muestra la figura 41, en el
primer botn de flecha que aparece en Simple ID dele clic y escoja la
opcin Increment Number, oprima el botn Ok.
Figura 39. Opcion Begin Calibration
144
Figura 40. Fill Down
Figura 41. Increment Number
Al final debe quedar una ventana como en la figura 42, donde

aparecern todos los niveles.
Figura 42. Ventana final con la secuencia completa
145
Aparecern algunos valores y se modifican los niveles segn la inyeccin
que se haya cargado. Posteriormente se debe guardar la secuencia en
el icono de la figura 43, y se da la opcion Save Sequence
Figura 43. Salvar secuencia
Para analizar la secuencia se oprime en la opcin Sequence que se

encuentra ubicado en la parte superior, y se le da clic en Process
(figura 44). Aparecer una ventana como se muestra en la figura 45
donde se pone el nombre de la calibracin y se presiona Start.
Automticamente la secuencia empezara a correr.
Figura 44. Opcin para correr la secuencia
146
Figura 45. Ventana para empezar a correr la secuencia
Cuando el proceso est completo los resultados estarn

analizados.
Recomendacin en la calibracin:
Antes de realizar una calibracin con distintas replicas para un

mismo nivel, se recomienda desactivar la opcin Automatically
average consecutive replicates of the same level en el caso
que no se promedien las rplicas. La opcin se encuentra ubicada
en method>propierties>calibration, ver Figura 46.
147
Figura 46. Propiedades de la calibracin.
k. Revisin de la calibracin
Se da click en Review Calibration, en el men que se
encuentra al lado izquierdo, obtenindose una ventana como la
mostrada en la Figura 47.
Figura 47. Revisin de la calibracin.
Sobre esta ventana se pueden observar ciertas caractersticas de

la curva:
Zoom: Haciendo zoom sobre alguno de los puntos se observa

todos los puntos experimentales y el promedio en un diferente
color, observar Figura 48.
148
Figura 48. Zoom en la revisin de la calibracin.
Para volver al zoom original se presiona click derecho > full

unzoom.
Tabla de puntos: En el cuadro superior se puede observar toda

la informacin caracterstica de las muestras que se utilizaron
para la curva de calibracin. El componente correspondiente se
escoge en el cuadro de la parte derecha. Posteriormente
aparecen las reas de cada replica con cada concentracin, el
archivo donde est guardado y su hora de calibracin.
Para cada componente, la tabla contiene:

RF: Indica el factor de respuesta promedio.
Last Area: Indica el rea en la ltima calibracin.
Rep StDev: Desviacin estndar de la rplica.
Rep %RSD: Porcentaje de desviacin estndar de la rplica
dependiendo el volumen inyectado, normalmente debe estar
debajo de 2%.
Informacin estadstica: Toda la informacin estadstica
aparece en el cuadro de la derecha:
Average RF: Factor de respuesta promedio.
RF StDev: La desviacin estndar.
RF %RSD: El RSD que mide la precisin media de los
resultados.
Scaling: Indica si se aplic alguna escala.
LSQ weighting: Indica el factor de mnimos cuadrados
aplicada en la calibracin.
Force through zero: Indica si la curva de calibracin pasa
por el punto (0,0).
149
En el texto azul se indica la pendiente de la curva de calibracin
con a, el punto de corte con b, adems del coeficiente de
determinacin. Haciendo click derecho sobre el cuadro de
estadsticas se pueden cambiar todos los tipos de ajuste.
Una vez se realicen los ajustes recomendados, se guarda los
cambios en el mtodo.
1. USO DEL PROGRAMA
1.1 Mtodo de acondicionamiento
Para realizar el anlisis de la muestras primero se necesita realizar

una limpieza a la columna. Esto se hace abriendo el mtodo de
acondicionamiento.
Encienda el computador primero y luego el cromatgrafo con el

botn blanco que se encuentra en la parte inferior izquierda, Ver
Figura 49.
150
Figura 49. Cromatgrafo de gases y computador de control
Haga clic en el icono OpenLab Control

Panel>>Browse>>HidrogenoconArgon>>Launch. En la
nueva ventana, oprima file > open > Method y seleccione
Acondicionamiento Argon, y por ultimo oprima Open(Figura
50).
Figura 50: Apertura del mtodo de acondicionamiento.
NOTA: A lo largo del anlisis de muestras aparecer una ventana

la cual indica si quiere guardar los cambios, a lo cual siempre debe
pulsar NO.
Se abrir una ventana que muestra las condiciones del mtodo;

haga clic derecho y seleccione la opcin Download Method to
GC, el mtodo se empezara a descargar cuando en la pantalla
aparezca una confirmacin Download Method to GC y oprima
OK Figura 51.
Figura 51. Descargar un mtodo al cromatgrafo
151
Espere 5 minutos hasta que el cromatgrafo llegue a las
condiciones del mtodo, pulse [Status] para ver qu parmetros
no estn listos, el mtodo estar listo cuando en el display
aparezca Waiting for prep run-Front inlet purging
Figura 52. Mtodo descargado
A continuacin pulse [PREP RUN] el cual activa los procesos

necesarios para poner el cromatgrafo en las condiciones de inicio
que dicte el mtodo y cuando el display muestre Ready for
inyection pulse [START] para iniciar la limpieza.
Figura 53. Teclas Prep Run- Start
Este mtodo tiene una duracin de 38 minutos el cual se puede

verificar pulsando [Status] donde mostrara el tiempo de anlisis.
Figura 54. Tecla Status
1.2 Mtodo de anlisis
Para realizar el anlisis de la muestra Oprima file > open >

Method y seleccione MetodoHidrogeno, y por ultimo oprima
Open.
152
Se abrir una ventana que muestra las condiciones del mtodo,
haga clic derecho y seleccione la opcin Download Method to
GC, el mtodo se empezara a descargar cuando en la pantalla
aparezca una confirmacin y oprima Ok; siga las mismas
recomendaciones del anterior paso.
La toma de la muestra se realiza directamente en el reactor desde

la manguera por donde se libera el biogs producido, tomando
volmenes entre 0,4 a 0,7 ml segn se haya estipulado por un
tiempo de 30 segundos aproximadamente, mediante la jeringa
tipo luer-gas tight de capacidad 1 mL.
Cuando se descarga el mtodo al cromatgrafo y se tiene la

muestra preparada para ser inyectada manualmente, se presiona
el icono
Single Run, (Figura55).
Figura 55. Icono Single Run.
A continuacin aparece un recuadro, en el que se debe diligenciar

la siguiente informacin:
o Sample ID
o Data File
o Result Name
Una vez se ha llenado toda la informacin se presiona Start, y

luego cuando el display del cromatgrafo muestre ready for
inyection se inyecta la jeringa se desplaza la muestra, se retira
la jeringa, y en seguida se presiona [START] para iniciar el
anlisis despus de inyectar la muestra manualmente (Figura 56).
153
Figura 56. Confirmacin para la inyeccin
Al finalizar el anlisis (despus de 25 minutos) en la pantalla

aparece una ventana la cual indica si quiere guardar los cambios
en el mtodo, a lo cual siempre debe pulsar NO. En seguida se
mostrara el cromatograma con los picos con el nombre de cada
gas, el rea y tiempo de retencin.
Para obtener el reporte de los resultados pulse el icono reports

que aparece en la parte inferior y en seguida pulse external
estandard, aparecer un resumen de la concentracin de cada
gas como se muestra en la Figura 57. En la columna de
concentracin muestra el volumen de los cuatro gases y al final
muestra el total del gas que fue inyectado realmente.
Figura 57. Cromatograma de la muestra.
154
Figura 58. Reporte de estndar externo generado para la muestra.
Recomendacin: Para guardar los Reportes realizados, debe

ingresar al icono de imprimir (Figura 58); luego en la opcin
Name, seleccionar CDS PDF-XChange S-33 y despus OK.
Espere unos segundos para que cargue el proceso de impresin
para luego guardar el reporte en el destino deseado.
2.3 Mtodo de apagado
Para apagar el equipo cierre la ventana haga clic en el icono OpenLab

Control Panel>>Browse>>Induccion>>Launch. Espere mientras
carga y oprima file>>Open>> Method y seleccione el que dice Frio,
y por ultimo oprima Start.
Se abrir una ventana que muestra las condiciones del mtodo, haga
clic derecho y seleccione la opcin Dowlound method, el mtodo se
empezara a descargar cuando en la pantalla aparezca un mensaje de
confirmacin y oprima Ok.
Dejar entre 5 a 10 minutos que descargue el mtodo, en seguida apague

el computador, siempre se debe apagar primero el computador, luego
cierre la vlvula pequea y apague el cromatgrafo.
Por ultimo cierre las vlvulas de la caseta de gases.
155
D. CALCULOS
El clculo de la concentracin de los gases se realiza tomando como

base los resultados de la concentracin que aparecen en el reporte de
estndar que se observa en la Figura 33. Para expresar los datos en
unidades de % se hace el siguiente procedimiento:
a. En el reporte nos muestra la concentracin de cada gas y el total

de la muestra que fue analizada en esta caso los valores fueron:
Hidrogeno 0.003
Nitrgeno 0.269
Metano 0.046
Dixido de carbono 0.079
TOTAL 0.397
0.003100
H 2= =0.76
0.397
0.269100
N 2= =67.76
0.397
0.046100
CH 4 = =11.59
0.397
0.079100
CO 2= =19.90
0.397
Para expresar los resultados en unidades: mmol, mmol/L, umol, umol/L y

mg/L se debe usar una planilla en Excel . Estas concentraciones se
calculan con la ecuacin de los gases ideales con los valores de presin
y temperatura locales. El procedimiento es:
Para pasar a moles se utiliza la ecuacin de los gases ideales:
PV =nRT
156
P=Presin atmsferica de Bogot=560 mmHg 0.74 atm
V =Volumen de concentracin de hidrgeno=0.003 ml 0.000003 L
Latm
R=Constante uniersal de los gases ideales=0.082
Kmol
T =Temperatura ambiente=15 C 288K
0.740.003
n= =9.36E-08 mol
0.082288
Para pasar a mmol:
mmol=mol1000=9.36e-05
Para pasar a mmol/L:
mmol mMol 9.36E-05 mmol

= = =0.24
L Vmuestra en L 0.000397 L
Para pasar a mol:

mmol 9.36E-05
mol= = =0.09 mol
1000 1000
Para pasar a mol/L:
mol mol 0.09

= = =236 mol
L Vmuestra en L 0.000397
Para pasar a gr:

gr= peso molecularmol=29.36E-08=1.87E-04 gr
Para pasar a gr/L:
157
gr gr 1.87E-04
= = =4.72E-04
L Vmuestra en L 0.000397
Para pasar a mg/L:
mg gr
= 1000=0.47 mg/L
L L
ANLISIS DE SUELOS
21. MTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES

EN SUELO
A. MTODO CUANTIFICACIN COMPLEXOMTRICA.
Balanza analtica de 0.0001g de precisin.

Materiales.
Erlenmeyer de 125ml.
Pipetas aforadas de 1.5 y 20ml.
Microbureta de 10ml.
Soporte universal.
C. REACTIVOS
Solucin EDTA 0.02N.

Solucin patrn de Ca 0.02N.
Solucin amortiguadora cloruro de amino-hidrxido de amonio.
Hidrxido de sodio 6N.
Solucin de carbamato al 1.5%.
Indicador murexide.
158
Indicador Negro de Eriocromo T.
D. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
Solucin EDTA 0.02N
Pesar en un vaso de 250 ml 7.4448 g de sal disdica del cido etilen-

C H N Na O 2 H 2 O
diaminotetraactico ( 10 14 2 2 8 ), adicionar 100ml de agua
destilada y agitar. Transvasar a un baln aforado de 2l y completar el
volumen. Normalizar la solucin estndar de ZnO 0.02N.
Solucin patrn de Ca 0.02N
CaC O3
Pesar 1g de Cp., pasar cuidadosamente la muestra a un
erlenmeyer de 250 ml de forma alta. Tapar el vaso con un vidrio de reloj
y agregar poco a poco HCL al 10%. Hasta que cese la efervescencia.
Llevar a sequedad en plancha caliente y disolver luego el residuo con
HCL 0.01N. Pasar a un baln aforado de 1l y ajustar el volumen con el
mismo cido.
Solucin amortiguadora cloruro de amino-hidrxido de amonio
Disolver 67.5g de cloruro de amonio en 570ml de hidrxido de amonio

concentrado y llevar a 1l con agua destilada.
Hidrxido de sodio 6N
Disolver 240 g de NaOH, en 1l de agua destilada. Almacenar en frasco

de plstico.
Solucin de carbamato al 1.5%
Disolver 1.5g de sal del acidodietilditiocarbmatico en agua destilada y

llevar a volumen de 100ml con agua destilada.
E. PROCEDIMIENTO
1. Del filtrado proveniente de la muestra de agua tomar con una

pipeta aforada una alcuota de 5ml y colocar en un Erlenmeyer de
125ml. Llevar muestra a control y blanco de proceso.
2. Diluir con 20 ml de agua destilada y agregar 5ml de solucin de
carbamato.
159
3. Agregar 1ml de hidrxido de sodio 6N y mezclar bien. Agregar
0.05g de indicador murexide.
4. Titular con EDTA 0.02N hasta que cambien el color de rosado a
prpura.
5. Consignar el nmero de ml de EDTA gastados.
6. Tomar una alcuota de 5ml con una pipeta aforada en un
Erlenmeyer de 125ml.
7. Diluir con 20ml de agua destilada y agregar 1ml de solucin buffer.
8. Agregar 5 gotas de solucin de carbamato y agregar 0.05g de
indicador negro ericromo T.
9. Titular con EDTA hasta que desaparezca el color vinotinto y se
torne azul celeste o verde.
10. Anotar el nmero en ml de EDTA gastado.
F. CLCULOS
Se deben realizar los siguientes clculos:
meq V N1000
Ca+ Mg = , Ecuacin 29
l Alcuota
meq VN1000
Ca =
l Alcuota
meq meq
mg = ( Ca+ Mg )meq/ L(ca)
L L
Donde:
V = Volumen de EDTA gastados en la titulacin.
N = normalidad del EDTA
160
22. MTODO PARA LA MEDICIN DE pH EN SUELOS
A. EQUIPOS Y MATERIALES
Potencimetro.
B. REACTIVOS
Solucin amortiguadora (Buffer) de cido ftalato de potasio

(0.05M).
Solucin de cloruro de calcio.
Solucin de cloruro de calcio (0.01M).
C. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
Solucin amortiguadora (Buffer) de cido ftalato de potasio (0.05M)
Se disuelven 10.21g (secado por una hora) de ftalato en agua y se diluye

hasta 1l. El pH de esta solucin deber ser 4.0 a 20C. Se protege la
solucin contra la evaporacin y la contaminacin de mohos. Se debe
remplazar la solucin en presencia de mohos.
El efecto demuestra que el pH de la solucin no cambia en los lmites de

temperatura de 5 a 37C.
Solucin de cloruro de calcio
CaC l 22 H 2 O
Disolver 147 g de en agua, en un frasco volumtrico de
1l, enfriar, diluir su volumen con agua y mzclese.
Solucin de cloruro de calcio (0.01M)
CaC l 2
Diluir en 20ml de solucin de trabajo 1.0M a 2l de agua. El pH
de esta solucin deber estar entre 5 y 7.
D. PROCEDIMIENTO
1. Se coloca el suelo al aire para poder tamizarlo por un tamiz No. 10

(2mm).
2. Se pesan aproximadamente 10g de suelo seco al aire. Se coloca el
suelo en un recipiente de vidrio y se aaden aproximadamente
161
CaC l 2
20ml de 0.01M. se mezcla por 30 minutos y se deja
reposar por 30 minutos.
3. Leer el pH del medidor.
162
23. MTODO PARA LA MEDICIN DE LA MATERIA ORGNICA EN
SUELOS
A. EQUIPOS Y MATERIALES
Horno.
Balanza (sensibilidad de 0.01g).
Mufla.
Crisoles o platos de evaporacin.
Desecadores.
B. PROCEDIMIENTO
Preparacin de la muestra
1. Se deber tomar una muestra representativa, que pese al menos

100g, de una porcin de material que pase el tamiz de 2mm.
2. Se coloca la muestra en un recipiente y se lleva al horno a una
temperatura de 105C para secarla hasta peso contante.
Posteriormente se remueve la muestra del horno y se lleva a un
desecador y se permite su enfriamiento.
Medicin materia orgnica
1. Se coge una muestra que pese aproximadamente de 10 a 40g, se

coloca en crisoles tarados o en platos de evaporacin de porcelana
y se pesa.
2. Se coloca el crisol o el plato que contiene la muestra dentro de la
mufla durante 6 horas a 44510C. Se saca la muestra de la
mufla, se coloca en un desecador y se permite su enfriamiento.
3. Se remueve del desecador la muestra y se pesa.
C. CLCULOS
El contenido orgnico deber expresarse como un porcentaje del peso

del suelo en el horno de la siguiente forma
AB
de Materia Orgnica= x 100, Ecuacin 30
AC
Dnde:
A = Peso del crisol ms el suelo antes de la ignicin.
163
B = Peso del crisol o plato de evaporacin despus de la ignicin.
C = Peso del crisol.
ANALISIS MICROBIOLGICO
A.CONCEPTO
La evaluacin de calidad microbiolgica juega un papel importante

dentro de las caractersticas que le confieren la calidad a un tipo de
agua determinado, ya que su valoracin supone un riesgo para la salud
humana.
B.PRINCIPIO DEL MTODO
La filtracin con membrana se utiliza un con un medio preparado a una

temperatura de incubacin de 44.5 0.2 C, que permite diferenciar
las heces que provienen de las heces de animales de sangre caliente y
las procedentes de otras fuentes. El anlisis mediante la filtracin de
membrana lleva de cerca de 24 2horas. Este mtodo es capaz de
detectar coliformes que crecen pobremente o fermentan lentamente.
La cantidad de muestra deber ser escogida dependiendo del tipo de

agua filtrada. En general, se recomienda que la cantidad de muestra sea
de 100 ml. El siguiente cuadro muestra los volmenes sugeridos de
muestra para la cuanta de coliformes por la tcnica de filtracin de
membrana (Tabla 9).
Tabla 1 . Volmenes de muestra.
Volumen (ml)
Fuente de agua
100 50 10 1 0.1 0.01 0.001
Agua para consumo humano x
Agua de piscina X
Pozos X X X
Lagos X x X
Aguas marinas x x X
164
Agua de rio x X X x
efluentes x x X
24. TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL

GRUPO COLIFORME
A. PRINCIPIO DEL METODO
Este procedimiento se realiza para determinar la densidad de bacterias

fecales en una muestra de agua o suelo.
Se trata de separar los microorganismos del agua por filtracin a vaco a

travs de membranas filtrantes de 0.45 micras de tamao de poro, y
depositar las membranas con el residuo en cajas de Petri, que contienen
un medio de cultivo M-FC para el crecimiento de los microorganismos
que se desea determinar, en un soporte de papel de filtro.
Todo el material que se utiliza debe estar esterilizado con el objeto de

que no exista contaminacin externa.
El medio de cultivo propuesto es lquido ya que este medio tiene ms

facilidad para penetrar en los poros de las membranas y baar la
superficie de las mismas.
Placas de cultivo.
Unidades de filtracin.
Filtro de membrana dimetro de poro de 0.45 m
Almohadillas absorbentes (Pads).
Pinzas sin dientes esterilizados.
Incubadora.
Lupa para aumento.
C. REACTIVOS
Medio M-FC
165
Medio M-FC
La necesaria uniformidad obliga a emplear medios deshidratados. Nunca

se preparan medios a partir de sus ingredientes bsicos, si se dispone de
medios deshidratados adecuados.
Para la rehidratacin se siguen las instrucciones del fabricante. Para este

caso y de acuerdo al producto que se tiene, se disuelve el 3.7g del polvo
en 100ml de agua purificada o destilada, aadiendo 1ml de cido
roslico al 1 por 100. Se debe calentar hasta casi ebullicin y dejar
enfriar. Luego ajustar si es necesario el pH a 7.4.El medio debe ser
usado para un solo da, luego desecharlo.
E. PROCEDIMIENTO
a. En el caso del suelo, en el laboratorio se debe tomar 5g del mismo

en un tubo para centrifuga con 10ml de agua destilada y
centrifugar a 2000 revoluciones durante 5 minutos. Luego tomar el
sobrenadante como muestra para filtrar.
b. La seleccin del tamao de la muestra depender de la densidad
bacteriana que se espere, y estar limitada por el grado de
turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el medio. Un
volumen ideal de muestra es el que proporciona alrededor de 20 a
60 colonias fecales por membrana.
c. Se filtran 10 ml de cada muestra si la dilucin es menor a estos.
d. A cada caja Petri debidamente esterilizadas se pone un pad y se
impregna con la pipeta alrededor de 2 a 3 ml del medio M-FC,
preparado como se ha descrito, hasta saturar el pad.
e. Se coloca con pinzas estriles un filtro de membrana estril con la
trama hacia arriba sobre la placa porosa del receptculo, se sita
la unidad de embudo sobre el receptculo y se fija. Se filtra la
muestra diluida o no segn el caso y se hace un enjuague final con
un poco de agua destilada. La filtracin se lleva a cabo bajo un
vaco parcial.
f. Luego se desconecta el proceso de vaco, se desbloquea y retira el
embudo, inmediatamente se quita el filtro de membrana con unas
pinzas estriles colocndolo sobre el pad impregnado con el caldo
M-FC.
g. Se tapa cada caja y se voltea. Luego se llevan a incubacin
durante 24 2 horas a 44.5C 2C.
166
h. Las colonias producidas por bacterias Coliformes Fecales en el
medio M-FC presentan distintos matices de azul. Las colonias se
cuentan a simple vista o mediante la lupa.
Usando los Nutrepads, el procedimiento y los materiales cambiaran:
EQUIPOS Y MATERIALES:
Nutrepads medio M-FC
Equipo de incubacin.
Equipo de filtracin
Micropipeta de 100 a 1000 uL
Papel aluminio
Beaker
Membrana filtrante (manipularlas con pinzas estriles)
Mechero
Procedimiento:
a. El volumen estndar de la muestra a usar es de 100 ml; sin
embargo, esta puede variar usando diferentes diluciones, de
acuerdo al origen de la muestra y la cantidad de contaminantes
que pueda poseer.
b. Usando la membrana de filtracin se sigue el mismo

procedimiento descrito en el ensayo de slidos.
c. Para la preparacin de la placa de cultivo, primero se debe

adecuar un ambiente estril por medio del uso del mechero,
mientras dicha placa se satura con agua destilada entre 2 ml- 3
ml.
d. Una vez la muestra sea filtrada, se coloca la membrana sobre la

almohadilla que contiene la placa de cultivo, se tapa y a
continuacin se voltea, de tal manera que el caldo moje en su
totalidad la membrana.
167
e. Par la incubacin, se colocan las placas de cultivos ya preparadas
dentro de un beaker el cual ser sellada por medio de una papel
aluminio y evitar as la humedad dentro de las placas. La
incubadora hmeda debe encontrarse a una temperatura de 44.5
0.2 C, durante 24 2 horas.
Una vez pasado el tiempo requerido comienza con el conteo de

colonias; las colonias que presentan matices azules son bacterias
producidas por coliformes fecales; las colonias de color amarillos
pueden ser E.Coli; y las colonias de color gris o cremoso son
coliformes no fecales.
F. CLCULO
La densidad de Coliformes se presenta como el nmero total de colonias

de una caja petri por el valor reciproco de la dilucin empleada, es decir:
(ver Ecuacion 31)
( UFC /mL )=nmero de coloniasE , Ecuacin 31
Ejemplo:
a.Muestra sin duplicado
Dilucin: 104
No de colonias encontradas: 180
Luego, se tiene: 180 x 104.1.800.000 UFC/mL 1.8 x 106 UFC/mL
b. Muestra con duplicado.
Dilucin: 103
Caja 1: nmero de colonias contadas: 37
Caja 2: nmero de colonias contadas: 45
Caja 1: 37000 UFC/mL
168
Caja 2: 45000 UFC /mL
37000+ 45000
=41000
Valor medio: 2
Resultado: 41000 UFC/mL o 4,1 x 104 UFC/mL
169
ANLISIS DE TOXICIDAD
25. ENSAYO DE TOXICIDAD TOTAL CON BULBOS DE CEBOLLA

ALLIUM CEPA L
A. CONCEPTO
Cuando un bulbo de cebolla (Allium Sp.) se rehidrata se produce una

estimulacin del crecimiento de las clulas, lo cual permite la elongacin
de las races de la planta. Sin embargo, cuando la hidratacin se lleva a
cabo en presencia de sustancias txicas, la divisin celular de los
meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea retardando el proceso de
mitosis o destruyendo las clulas. Este tipo de alteraciones
generalmente impiden el crecimiento normal de la raz, y por tanto su
elongacin (Fiskesjo 1985,1993, 1997).
Medidor de pH.
Balanza analtica.
Tubos de ensayo esterilizados.
Gradilla.
Pipeta graduada.
Agitador.
D. REACTIVOS
cido clorhdrico HCl (3M).

Sulfato Cprico Pentahidratado CuSO45H2O. (Control positivo).
E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
Control negativo
El control negativo se realiz con una muestra de agua de llave.
Control positivo
Se preparan tres diferentes soluciones de sulfato de cobre (CuSO 45H2O)

diluidas en agua as:
170
Al 25% 25 mg/L
Al 15% 15 mg/L
Al 5% 5 mg/L
Preparacin de la muestra
El valor de pH de todas las muestras debe ser analizado y estandarizado

en 7. De esta forma se descarta, que la inhibicin en el crecimiento de la
raz pueda ser debido a que tan acida o bsica este el agua.
Se deben realizar dos tipos de controles, el positivo utilizando solucin

de sulfato de cobre con el fin de inhibir por completo el crecimiento de la
raz y por otro lado el control negativo, el cual no posee ningn
componente causante de inhibicin (ej. Agua destilada o agua
ultrapura).
Ambos controles se realizan con el fin de estandarizar la longitud de las

races y determinar la toxicidad total.
F. PROCEDIMIENTO
Seleccin de los individuos
1. Seleccionar los bulbos de las cebollas que estn libres de contacto

con pesticidas, con un dimetro aproximado de 20 mm.
2. Cortar las races muertas.
171
Figura 1. Seleccin de los bulbos de cebolla
MONTAJE DEL EXPERIMENTO
a. Retirar cuidadosamente la primera capa de piel de la cebolla,

tomando cuidado de no lastimar la superficie donde crece la raz.
Figura 2. Retirar cascara de la cebolla.
b. Determinar los dimetros de las cebollas hicimos uso de un

calibrador, con el fin de establecer una medida promedio y lograr
uniformidad.
c. Medir el pH de las muestras.
d. Se exponen 12 bulbos a las muestras correspondientes, situando
una por cada tubo con el rea radicular en contacto con la solucin
por 72 horas (3 das).
Positivo 1: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 25mg/L Efluente
Positivo 2: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 15mg/L Efluente
Positivo 3: Sulfato de cobre (CuSO45H2O) 5mg/L Afluente
172
Figura 3. Exposicin de bulbos con diferentes diluciones
e. Se debe reponer hasta 1.5mL por cada tubo cada 24 horas con la
muestra correspondiente (por que se pierde por evaporacin),
ayudados de una pipeta Pasteur manteniendo las races inmersas.
Los bulbos deben estar alejados de fuentes luminosas, adems de
permanecer a una temperatura constante de 200C.
f. Las races son medidas en papel milimetrado, aquellas que sean
muy largas o muy cortas deben ser descartadas.
G. CLCULOS
Porcentajes de inhibicin (Soluciones al 100%)
Longitud media control negativo Longitud media muestras

Inhibicin ( )= 100
Longitud media control negativo
Ecuacin 32
Calculo del CE50 ensayo de toxicidad con Allium cepa L.
De acuerdo con Fiskesjo (1993), el CE 50 en el ensayo de toxicidad con

Allium cepa L, significa, la dilucin de la sustancia estudiada que permite
el crecimiento de la raz del 50% cuando comparada con el control
negativo. El clculo se realiza con la ecuacin 33:
Longitud media de lasmuestras

Crecimiento de la raz ( )= 100 , Ecuacin 33
Longitud media control negativo
173
En la Tabla 8 se tiene un ejemplo de clculo para un experimento
realizado aplicando ozono en diferentes tiempos de reaccin.
Tabla 8. Datos para clculo del CE50
% crecimiento % crecimiento Dilucin tratamientos

tratamiento 1 tratamiento 2 (%)
38,78 64,24 100
44,90 65,31 50
67,35 89,90 25
61,25 80,61 12,5
La concentracin CE50 se obtiene de forma grfica as.
100
Trat 1
Trat 2
75
Crecimiento de la raiz (%)
50
25
CE50=45%
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Dilucion muestra (%)
Figura 4. Determinacin del CE50 para un ensayo de toxicidad utilizando

Allium cepa L.
174
BIBLIOGRAFA
APHA, AWWA, WEF. (2005). Standard methods for the examination of

water & wastewater (21st ed.). Baltimore: Port City Press.
BARROS DE MACEDO, J. (2005). Mtodos laboratoriais de anlises fsico-

qumicas e microbiolgicas. (2.ed).Belo Horizonte: CRQ-MG.
EEN, F. (1999). Investigation of sustrate degradation and

nonbiodegradable portion in several pulp bleaching wastes. Water
Science and Technology, 40(11-12), 305-312.
DUBOIS, M.; GILLES, K.; HAMILTON, J.; REBERS, P. & SMITH, F. (1956).
Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related
Substances. Analytical Chemistry, 28, 350-356
FUNASA. (2006). Manual prctico de anlise de gua (2a ed.). Braslia:

Fundao Nacional de Sade.
IGAC. (2006). Mtodos analticos del laboratorio de suelos (6a ed.).

Bogot: Instituto Geogrfico Agustn Codazzi.
MAUNGA, T. (2013). Determinacin de Azucares en Aguas Residuales.

Facultad de ingeniera. Univalle. (Gua de Laboratorio)
175

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MANUAL PARA EL ANLISIS DE AGUAS

I.C. DAYANA KATERINE GRISALES PENAGOS

A. SOLUCIN H2SO4 1.0N.....................................................................12

B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N........................................................12

1. COLOR MTODO N 2120............................................................15

B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................15

2. SLIDOS MTODO N 2540..........................................................17

B. PRINCIPIO DEL METODO.........................................................................17

3. ALCALINIDAD Y CIDOS VOLTILES TOTALES MTODO N 2320. 21

B. PRINCIPIO DEL METODO.........................................................................21

G. Calibracin medidor de pH.....................................................................23

5. REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE MTODO N 2350.....28

B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................28

E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS..........................................................29

6. MTODO PARA DETERMINACIN DE OZONO FASE LQUIDA (AccuVac)

A. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................32

7. CLORUROS MTODO N 4500-Cl-.................................................34

B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................34

8. FSFORO ORTOFOSFATOS (PO4-2) MTODO N 4500-P..............37

B. PRINCIPIO DEL METODO.........................................................................37

8 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE FOSFORO- UTILIZANDO EL

A. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................41

B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................44

10. NITRGENO MTODO N 4500-Norg...........................................48

B. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................48

10 A. MTODO PARA DETERMINACIN DE NITROGENO TOTAL (2 a 150

A.PRINCIPIO DEL MTODO..........................................................................51

11. DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (DQO) MTODO N 5220

B. PRINCIPIO DEL METODO.........................................................................55

12. MTODO PARA DETERMINACIN DE OXGENO DISUELTO (Utilizando

A. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................63

D. PROCEDIMIENTO PARA MEDIR OXGENO DISUELTO................................64

13. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 MTODO N 5210...65

B.PRINCIPIO DEL METODO..........................................................................65

14. RESIDUAL DE PEROXIDO DE HIDROGENO.....................................72

15. CONSTITUYENTES ORGNICOS ABSORCIN-UV MTODO N

16. MEDIDA DE LA ABSORCIN EN LA REGION DEL ESPECTRO UV-VIS

A.PRINCIPIO DEL MTODO..........................................................................77

17. MTODO PARA DETERMINACIN DE CARBONO ORGNICO TOTAL

A.PRINCIPIO DEL MTODO..........................................................................82

18. MTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO....85

A. PRINCIPIO DEL MTODO.........................................................................85

19. ENSAYO DE ACTIVIDAD METANOGNICA ESPECFICA.....................88

20. MTODO PARA DETERMINACIN DE AZCAR..............................100

A. PRINCIPIO DEL MTODO.......................................................................100

21. HIDROGENO Y METANO POR CROMATOGRAFIA GASEOSA..........102

A. MTODO CUANTIFICACIN COMPLEXOMTRICA...................................136

D. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................136

22. MTODO PARA LA MEDICIN DE pH EN SUELOS..........................139

C. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................139

23. MTODO PARA LA MEDICIN DE LA MATERIA ORGNICA EN

B.PRINCIPIO DEL MTODO........................................................................141

24. TCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO

A. PRINCIPIO DEL METODO.......................................................................142

25. ENSAYO DE TOXICIDAD TOTAL CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM

E. PREPARACIN DE LOS REACTIVOS........................................................146

El Laboratorio de Saneamiento Ambiental de la Universidad Militar

Para la elaboracin de este manual se consultaron las normas del

El manual aborda anlisis fsicos, qumicos y microbiolgicos en aguas

De acuerdo con lo anterior deseamos que este documento se utilidad

A. SOLUCIN H2SO4 1.0N

Para preparar una solucin de H 2SO4 1N diluir cuidadosamente 30mL de

B. SOLUCIN H2SO4 0.5N 0.05N