IFCE - Campus Maracana

Curso Engenharia Ambiental

Disciplina Microbiologia Bsica
Profa. Cynara Reis Aguiar

Unid. IV Reproduo e Crescimento

Microbiano
O que crescimento???

Aumento ordenado de todos os componentes do sistema

biolgico;

Aumento da massa celular;

Multiplicao celular;

Aumento do nmero de indivduos;

Microbiologia: aumento de populao;

Crescimento populacional: aumento da massa microbiana.

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Crescimento

Qual a importncia de se estudar o crescimento???

Microrganismos desejveis - melhoria nos processos de

produo;
 Produo de compostos de interesse;
 Tratamento de efluentes.

Microrganismos indesejveis - favorecer inibio e

eliminao;
 Patgenos;
 Deteriorantes.
3
Diviso bacteriana

Diviso Bacteriana

As bactrias dividem-se
por fisso binria
transversa, e aumentam o
seu nmero de forma
geomtrica: populao
duplica a cada tempo de
gerao.

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Crescimento microbiano
Outras formas de crescimento microbiano

5
Crescimento bacteriano
Iniciando com 1 nica bactria, temos:

1 2 4 8 16 32 ...

Aumento expresso em progresso geomtrica

1 21 22 23 24 25 ... 2n

n n de geraes (duplicaes)

N = 2n n total de clulas aps crescimento ativo

Crescimento exponencial crescimento ativo sem morte

celular

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Crescimento bacteriano

Tempo de gerao (g) - intervalo de tempo necessrio

para que uma clula se duplique;

 Bactrias g de 1 a 3 ou mais de 24 h;

 Varia de acordo com a espcie;

 fortemente influenciado:

Composio nutricional do meio;

Condies fsicas de cultivo.

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Crescimento bacteriano

8
Crescimento bacteriano

Expresses matemticas do crescimento

Crescimento populacional - Aumento do nmero ou massa
microbiana;
 Pode ser quantificado atravs do n de geraes em um
perodo de incubao.

Taxa de crescimento - variao do nmero ou massa por
unidade de tempo n geraes/h.

Importncia:
 Utilizao dos microrganismos em pesquisas e
aplicaes industriais;
 Predizer e controlar a quantidade de crescimento.

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Crescimento bacteriano

A E. coli tem tempo de gerao

(g) de 20 min. Aps 20
geraes em quanto o n de
clulas vai aumentar??? Em
quanto tempo???

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Crescimento bacteriano

Populao Total (N)

(1) N= 1 x 2n , mas o n inicial clulas inoculadas no tempo
zero >1, ento:
(2) N= No x 2n , onde:
N= nmero final de clulas
No= nmero inicial de clulas
n= nmero de geraes
Aplicando logaritmo (log10):
(3) log N= log No + n log 2
n = (log N log No) / log 2
n = (log N - log No) / 0,301
(4) n = 3,3 (log N - log No)
11
 Crescimento bacteriano

A partir da equao 4 possvel calcular o nmero de geraes

(n) que ocorreram em uma cultura se o n inicial e final de
clulas for conhecido;

Ex: No = 1.000 clulas e N = 100.000.000 clulas
n = 3,3 (log 100.000.000 log 1.000)
n = 3,3 (8 3) = 16,5 geraes

Tendo-se o valor de n pode-se calcular o tempo de gerao (g)

g = t/n (5)

Ex: 16,5 geraes ocorreram em 5h, ento:

g = 5h/16,5 g = 0,3 h para duplicao da populao.
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Crescimento bacteriano

Taxa de crescimento (R) geraes por hora durante o

crescimento exponencial:

R = n/t = 1/g (6)

Ex: se o tempo de gerao 0,3 h, ento:

R = 1/0,3 = 3,33 geraes/h

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Crescimento bacteriano

Escherichia coli

Tempo de gerao 20 min condies ideais de cultivo

Aps 20 geraes 1.000.000 de clulas em g = 7 horas

Aps 30 geraes 1.000.000.000 de clulas em g = 10 h

Aps g = 24 h 1.000.000.000.000.000.000.000

Dificuldade na representao grfica

Uso de escalas logartmicas

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 Crescimento bacteriano

Representao grfica logartmica e

aritmtica da curva de crescimento
de uma populao em fase de
crescimento exponencial.

-------- logartmica
_____ aritmtica

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 Crescimento bacteriano
Curva de crescimento de
bacteriano em sistema
fechado

Clulas microbianas crescem
em sistema fechado (frasco,
tubo);
 Nenhum novo nutriente
adicionado;
 Produtos metablicos no
so removidos.

Fases de crescimento:
representao grfica em
escala logaritmica do n de
clulas viveis x t.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase Lag

Fase de adaptao das bactrias quando inoculadas num
novo meio;

Pouca ou ausncia de diviso celular;

Taxa de crescimento igual a zero;

Clulas em estado de latncia fisiologicamente ativas

Intensa atividade metablica

- Sntese de enzimas e molculas variadas.

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Fase Lag

Importncia

Recuperao de clulas envelhecidas depleo de ATP,
co-fatores essenciais, enzimas e ribossomos.
 Estes compostos tm de ser sintetizados antes que o
crescimento possa comear.

Tempo de recuperao relao entre condio do
microrganismo e natureza do meio;
 Longo culturas velhas ou meio muito diferente do que
estavam inoculadas;
 Curto transferncia de cultura jovem em fase de
crescimento exponencial para meio fresco de igual
composio.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase Log ou Crescimento exponencial

Aps adaptao crescimento populacional em escala

exponencial ou logartmica;

Clulas uniformes em composio qumica;

Reproduo celular extremamente ativa;

Tempo de gerao atinge valor constante reta no grfico;

Perodo de maior atividade metablica da clula

 Estgio ideal para fins industriais produtividade.

Microrganismos sensveis s mudanas ambientais ou

agentes antimicrobianos afetam desenvolvimento.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase estacionria

Diminuio da velocidade de crescimento

 Decrscimo da atividade metablica;

 N morte celular = n clulas novas taxa crescimento

zero;

 Populao estvel.

Porque isso acontece???

 Exausto de nutrientes;

 Acmulo de produtos metablicos txicos;

 Mudana de pH.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase de Morte Celular

Ocorre devido aumento dos produtos metablicos txicos e

ausncia de nutrientes;

 Taxa de morte acelerada taxa crescimento negativa

 Diminuio exponencial das clulas viveis, poucas

resistiro (fase senescente).

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Mtodos para determinao
do crescimento microbiano
Determinao do crescimento celular

Crescimento em culturas contnuas

Muito usada nos processos industriais de obteno de
produtos microbiolgicos;

Interesse em manter as clulas em fase log ou
estacionria.

Utilizam-se fermentadores ou quimiostatos:
 Permitem crescimento em equilbrio dinmico controle
da densidade populacional e da taxa de crescimento.
 Controlados pela concentrao do nutriente limitante
(fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluio).

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Quimiostato

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Determinao do crescimento celular

Quantificao indireta:
 Contagem proporcional de clulas;
 Turbidimetria;
 Atividade metablica;
 Peso seco.

Quantificao direta:
 Contagem em placas;
 Filtrao;
 Mtodo do nmero mais provvel (NMP);
 Contagem direta ao microscpio.
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Mtodos indiretos

Contagem Proporcional de Clulas

Anlise comparativa das culturas com suspenses padres;

Padro da escala de MacFarland, tubos contendo uma
suspenso de BaSO4, em diferentes concentraes
diferentes graus de turvao.

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Mtodos indiretos

Turbidimetria

Monitoramento do crescimento Turbidez da cultura;

 Aumento da densidade de clulas.

Quantificao em espectrofotmetro ou colormetro

 Absorbncia (comprimento de onda 660 nm);

Rpida confeco de uma curva padro;

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Mtodos indiretos

Turbidimetria

Baixa sensibilidade;

 Suspenso deve ter entre 10 e 100 milhes de cl/mL.

No h distino entre clulas viveis e clulas mortas;

Grficos de crescimento bacteriano

 Absorbncia x tempo;

 Absorbncia x n de clulas.

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Turbidimetria

-A quantidade de luz que atravessa o detector inversamente

proporcional ao n de bactrias;
- luz transmitida n de bactrias.

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Mtodos indiretos

Massa de Clulas (peso seco)

Estimativa atravs do peso seco;

Baixa sensibilidade;

Replicata diminuio da margem de erro;

Procedimento:

 Filtrao da cultura lquida, secagem (100-160C / 16

horas) e pesagem.

Utilizada para analisar crescimento de fungos filamentosos

e tambm para bactrias.

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Mtodos indiretos

Anlises Qumicas - Atividade metablica

A quantidade de um certo produto metablico (cido ou

CO2) pode ser relacionada diretamente com o n de
bactrias presentes;

Quantificao de protena, nitrognio ou atividade

metablica.

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Mtodos diretos

Contagem de Clulas Viveis - Contagem em placa e

diluio seriada

Coleta de alquotas de uma cultura microbiana ou amostra

ambiental;

Utilizao do mtodo da diluio seriada;

Inculo em meio slido (spread plate ou pour plate);

Contagem das colnias formadas (30 e 300 colnias);

Diminuio do erro triplicatas ou quintuplicatas

(validao estatstica).

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33
Mtodo contagem
de colnias em placa

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Contagem de viveis em placa

Spread plate
 Inculo 0,1 a 0,5 mL;
 Possibilita o uso de meios opacos;
 No existe choque trmico devido ao meio de cultura.

Pour-plate
 Inculo 1,0 a 5,0 mL;
 No possibilita o uso de meios opacos;
 Deteco difcil de culturas no interior do meio de
cultura;
 Existe choque trmico na adio do meio de cultura.
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Mtodos diretos

Filtrao

Amostras que contenham poucas clulas lagos e fontes

de gua;

Concentrao do microrganismo na membrana do filtro,

aps passagem de 100 ml de gua;

Filtro transferido para placa de Petri contendo um suporte

embebido em nutriente lquido que permite o crescimento
das colnias na superfcie da membrana;

Usado para deteco de coliformes.

36
Filtrao

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Mtodos diretos

Nmero Mais Provvel (NMP)

Amplamente utilizado em laboratrios de microbiologia;

Mtodo estatstico n de bactrias numa amostra ser
o n de diluies para eliminar o crescimento em tubos com
meio de cultura;

Utilizao de volumes decimais de uma dada amostra (10,
1 e 0.1 ml);

Rplicas correspondentes a 5 tubos, observando ou no
crescimento;

Contagem de tubos positivos clculo pela Tabela do NMP;

95% de confiabilidade estatstica.

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39
Mtodos diretos

Contagem Total de Clulas (microscpio)

Contagem direta no microscpio - cmaras de contagem
 Amostra fixada e corada ou a fresco 0,01 mL da
suspenso de clulas;
 Cmara de Petroff-Hausser.

No diferencia clula viva de clula morta;

Necessrios 10 milhes de clulas para permitir contagem;

Vantagem no h necessidade de incubao agilidade;

40
41
Reproduo de microrganismos
eucariontes
Reproduo de eucariontes

Na natureza a reproduo ocorre de 2 maneiras:

 Reproduo assexuada

Basicamente resulta em novas clulas idnticas s
originais.

 Reproduo sexuada

Permite a troca de material gentico gerao de um
novo ser.

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Reproduo assexuada

No envolve unio de ncleos, clulas sexuais ou rgos

sexuais;

No implica em variao gentica;

Mais eficiente do que a reproduo sexuada na propagao

da espcie;

Novos indivduos so produzidos por:

 Um organismos parental;

 Uma clula (organismos unicelulares).

Fisso binria reproduo assexuada;

Nos eucariontes reproduo mais complexa Mitose.

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Reproduo assexuada

Mitose

uma forma de diviso nuclear;

Todos os cromossomos da clula so duplicados;

Os dois novos conjuntos se separam para formar os
ncleos-filhos idnticos;

A clula se divide em 2 clulas-filhas cada uma recebendo
um ncleo;

Cada clula-filha tem o mesmo nmero de cromossomos e
a mesma composio gentica que a clula-parental.

um processo contnuo.

45
Mitose

Entre as mitoses Intrfase fase de repouso;

 Cromossomos no so visveis nas clulas-filhas;
 Ocorre duplicao do DNA, formao de organelas e
acmulo de energia para mitose.

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Mitose

Fases da Mitose:

 Prfase

 Metfase

 Anfase

 Telfase

A mitose permite o crescimento do organismo, a

substituio de clulas que morrem e a regenerao de
partes lesadas do organismo.

47
Prfase

Os cromossomos condensam-se, tornando-se visveis;

A carioteca e os nuclolos desintegram-se;

Os centrolos dividem-se e dirigem-se para os plos da
clula;

formado o fuso de diviso (fibras proticas).

48
Metfase

Membrana nuclear desaparece;

Cromossomos esto completamente condensados e
alinhados na regio equatorial do fuso;

No final da metfase, os centrmeros se duplicam e se
dividem, de modo a deixar livres os cromossomos-filhos.

49
Anfase

Estgio mais curto da mitose;

O cromossomo-filho se move para um dos lados da clula,
utilizando as fibras do fuso como guia.

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Telfase

Os dois cromossomos chegam aos plos e se agregam;

Os cromossomos descondensam-se e alongam-se em fitas
de cromatina;

Membrana nuclear formada ao redor dos cromossomos;

Citoplasma da clula se divide Citocinese.

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52
Reproduo sexuada

Fuso de 2 clulas sexuais diferentes (gametas),

procedentes de dois pais de sexos diferentes ou tipo de
relao sexuada;

Fuso de gametas Fertilizao zigoto

Na reproduo sexual tem-se:

 Fuso de dois ncleos haplides;
 Formao de um zigoto (diplide);
 MEIOSE, resultando novamente em clulas haplides;
 Fuso das clulas haplides completando o ciclo;
 Ocorre nas clulas reprodutivas do organismos.

53
Etapas da meiose

54
Meiose

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Ciclo celular eucaritico

Todas as clulas eucariticas
perfazem um ciclo celular
semelhante, com exceo dos
gametas;

A durao do ciclo celular varia de
um tipo de clula para outra;

As fases do ciclo:
 G1 - fase de crescimento - a
clula cresce e sintetiza
protenas;
 S - fase de sntese de DNA - a
clula continua a crescer e a
sntese de DNA ocorre no ncleo
at que a quantidade de DNA
seja duplicada;
 G2 - fase de crescimento -
atinge o seu mximo;
 M - mitose - a sntese de
macromolculas quase cessa e o
ncleo sofre mitose.
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