FUNDAMENTO DEL METODO DE ANALISIS

NITRATOS EN AGUA

El contenido de nitratos es un indicador importante de la calidad del agua y ha demostrado tener un

alto peso estadstico a la hora de clasificarla. El ion nitrato tiene un origen natural pero por el uso de
fertilizantes inorgnicos, principalmente, o por residuos humanos o animales se puede introducir en
exceso, llegar por filtracin o escorrenta hasta las aguas superficiales y subterrneas y ser
acumulado en concentraciones muy altas para la salud humana. Ya sea por los procesos
agroindustriales, residuos domsticos o residuos industriales, los nitratos en altas concentraciones
multiplican el crecimiento de organismos vegetales, elevan el nivel de fotosntesis y agotan el
oxgeno de las aguas superficiales frescas, daando la vida y los ecosistemas.

La determinacin de los nitratos en el agua de consumo humano es importante ya que si estos se

encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm, como N, pueden causar una enfermedad
infantil conocida como metahemoglobinemia, que se caracteriza por la dificultad de la sangre
para absorber oxgeno.

Por otra parte, los nitratos, as como los fosfatos, constituyen parte de los nutrientes esenciales para
muchos organismos auttrofos o fotosintticos y en este sentido, su presencia en el agua, puede
ocasionar fenmenos de eutrificacion en ros y lagos.

Mtodo Espectrofotometrico UV Visible

Este mtodo es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgnica, tales como las
provenientes de plantas suministro y/o aguas subterrneas. Las mediciones se realizan utilizando un
fotmetro a 220 nm, para concentraciones inferiores a 10 mg/l, rango para el cual se cumple la Ley
de Beer.

Teniendo en cuenta que tanto la materia orgnica como el ion nitrato absorben energa radiante a
una longitud de onda de 220 nm yque la materia orgnica mas no el nitrato, absorbe tambin a 275
nm, el mtodo analtico realiza las mediciones a estas dos longitudes de onda, con el objeto de
corregir las primeras mediciones por la interferencia que halla podido ocasionar la materia orgnica
presente en la muestra. El grado de esta correccin emprica se reacciona con la naturaleza y
concentracin de la materia orgnica y puede variar a partir de un agua a otra.

El mtodo fotomtrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para muestras
con materia orgnica, siempre que esta permanezca estable y constante.
La filtracin de la muestra se piensa para quitar interferencia posible de partculas suspendidas.

Este mtodo es sensible a interferencias por cloruros y bromuros que se encuentran en altas
concentraciones en las aguas de estuarios y en materia orgnica disuelta en aguas dulces.
 DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA

La tcnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o despus de que ha reaccionado
con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la radiacin. La primera tcnica tiene
ms restricciones, en particular con muestras complejas porque pocas veces se puede encontrar una
longitud de onda en la que solo se absorba el analito. En ocasiones, las separaciones previas ayudan
a eliminar las especies que puedan absorber e interferir con la determinacin espectrofotometrica
del analito. En otros casos, las interferencias se pueden corregir con una segunda medicin de
absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la determinacin de nitrato en muestras de
aguas naturales (lo realizado). El ion nitrato absorbe a 220 nm, y la materia orgnica disuelta
tambin puede absorber a esta longitud de onda. Para corregir las interferencias debidas a la materia
orgnica, se toma una segunda lectura de absorbancia a 270 nm, donde no absorbe el nitrato.
Aunque tome ms tiempo a veces es preferible hacer una separacin previa para eliminar las
especies que interfieren.
Tambin es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la reaccin se
forme una especie que absorba una regin donde no haya interferencias.

En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:

Solucin stock de nitrato: se disolvi 0.3626g de KNO3, previamente secado a 105

C durante 24 horas, en 500 ml de agua y preservar por adicin de 2 ml de
cloroformo. Esta solucin contiene 100 ppm de nitrato como N. (es estable por 6
meses)

Preparacin de solucin patrn intermedia de nitrato de 100ppm a partir de la

solucin stock. El cual resulta de 10 ppm.

Soluciones de patrn de nitratos: se preparan por dilucin de la solucin intermedia.

De 0 a 5 ppm de NO3- N a 50ml.

El blanco: en una fiola de 50 ml colquese aproximadamente 45 ml de agua ultra

pura, adase 1 ml de solucin de HCl 1N y luego compltese el volumen hasta el
enrase.

Tratamiento de la muestra. sobre 5 y 25 ml de muestra transparente, filtrada si

fuera preciso, adase antes de enrazar 1 ml se solucin de HCl 1Ny mezcle
vigorosamente. El HCl tiene por objeto impedir interferencias por concentraciones
de hidrxido o carbonatos que pueden estar en las muestras.

Se prepara la curva de calibracin y se lee la absorbancia de las muestras y

patrones.

Interferencias

Interfieren la materia orgnica disuelta, los surfactantes, NO2- y Cr6+. Pueden interferir varios iones
inorgnicos, que no se encuentran normalmente en el agua natural, como clorito y clorato. Las
sustancias inorgnicas se pueden compensar con un anlisis independiente de concentraciones y la
preparacin de curvas de correccin individuales.

DESCRIPCION DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS

USADOS
Espectrofotmetro de doble haz

En un espectrofotmetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de la muestra y de

la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta manera entra y sale del paso de
la luz. Cuando el cortador no desva el haz, la luz pasa a travs de la muestra, y el detector mide la
potencia radiante que llamamos P. Cuando el cortador desva el haz a travs de la cubeta de
referencia, el detector mide P0. El haz se corta varias veces por segundo, y el circuito compara
automticamente P y P0, dando as la transmitancia y la absorbancia. Este procedimiento permite
hacer una correccin automtica de las variaciones de intensidad de la fuente, y de la respuesta del
detector con el tiempo y la longitud de onda, porque se comparan con mucha frecuencia la potencia
que sale de las dos muestras. Los espectrofotmetros de mayor calidad destinados a investigacin
tambin permiten un barrido automtico de longitudes de onda y un registro continuo de
absorbancia. Cuando se registra un espectro de absorbancia, es de rutina registrar primero el espec-
tro de la lnea base con las disoluciones de referencia (disolvente puro o blanco) en las dos cubetas.
Despus se resta el espectro base de la absorbancia medida de la muestra, para obtener as la
verdadera absorbancia de la muestra a las distintas longitudes de onda. En la figura 1 se muestra un
espectrofotmetro visible de doble haz. La luz blanca procede de una lmpara de halgeno de
cuarzo (como la de luz larga de un automvil), y la fuente ultravioleta es una lmpara de arco de
deuterio, que emite en el intervalo de 200-400 nm. En un momento dado slo se utiliza una de ellas.
La red de difraccin 1 selecciona una banda estrecha de longitudes de onda, que entra en el mono-
cromador, y ste selecciona una banda an ms estrecha, que es la que pasa a travs de la muestra.
Despus de cortado el haz, y una vez que pasa por las cubetas de la muestra y referencia, la seal es
detectada por un tubo fotomultiplicador, que produce una corriente elctrica proporcional a la
potencia radiante que llega al detector.

Fig. 1 Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de doble haz

 Espectrofotmetro de ultravioleta visible

El instrumento con el que se trabaj en la experiencia fue un espectrofotmetro SHIMADZU que es

un espectrofotmetro de doble haz que nos evita estar en cada medida de absorbancia poner el
blanco de referencia porque tiene un comportamiento para este, las celdas paraleleppedos con las
que trabajamos fueron de cuarzo con un lado transparente a la radiacin y el otro difuso por el no
pasa la radiacin y por donde se puede manipular, se pude trabajar con el espectrofotmetro usando
la pantalla liquida que tiene o desde una computadora usando el software UV PROVE.

El UV-1700 de Shimatzu puede operar como instrumento independi-

ente o controlado por una PC con el software UV Prob, cumple con todas las
especificaciones principales internacionales de la farmacopea. El UV-1700 diseado para
facilitar el cumplimiento con los requisitos mundiales, incluye una resolucin de 1 nm
funciones de validacin integrales. Una amplia gama de funciones analticas ofrecen la
experimentacin rpida y fcil.
 CALCULOS

1.-Preparacin del patrn primario: Partiendo de la solucin madre de KNO 3

=0.1820 g/250 ml, se calcula el nmero de mg NO-3 - N / 1L solucin:

Entonces:

0.1820g X 14 g/mol NO-3 - N = 0.0252g NO-3 - N

250 ml 101.11g/mol KNO3 250ml

0.0252 3 103 103 3

= 100.8 100
250 1 1

2.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 5ppm a partir de la

solucin patrn intermedia de 100 ppm.

(100 ppm x V2) patrn primario = (100ml x 5ppm)

V2 = 5 ml (tomar 5 ml de solucin 100ppm y llevarlo a 100 ml para obtener la

solucin intermedia a 5ppm)

3.- Preparacin de patrones a partir de la solucin 5ppm.

PATRON 1: Obtener 0.1ppm a partir de 5ppm en 50 ml

C1 x V1 = C2 x V2
5ppm x V1 = 0.1ppm x 50ml
V1=1ml.

Tomar 1ml de la solucin intermedia, agregar 1mL de HCl (0.1N) y enrasarlo a

50ml con agua destilada para obtener as la solucin patrn intermedia.

De la misma manera se realiza los clculos para los patrones restantes.

4.-Hallamos la ecuacin de la curva de calibrado

Con los datos de concentracin y absorbancia se grafica la curva de calibracin y

aplicamos el ajuste por mnimos cuadrados.

= . + = +

p xi yi xi y x y x x
2
yi
m i
b i i i i

p xi2 x i
2
; p x x
2
i i
2
 Solucin Concentracin Absorbancia XY X2 Y2
Muestras de A=y
agua ppm = X
Blanco (BK) 0 0 0 0 0.000
CP1 0.1 0.067 0.0067 0.01 0.0045
CP2 0.2 0.129 0.0258 0.04 0.0166
CP3 0.3 0.170 0.051 0.09 0.0289
CP4 0.4 0.244 0.0976 0.16 0.0595
CP5 0.5 0.313 0.1565 0.25 0.0980

Suma total 1.5 0.923 0.3376 0.55 0.2075

50.3376 1.50.923
= = 0.607 1
50.55 (1.5)2

0.550.923 1.50.3376
= = 0.0025
50.55 (1.5)2

= 0.607 + 0.0025

Igualando: = 0.607 + 0.0025

A=(ab).c +0.0025

= (0.6071 ). + 0.0025

5.-Calculo de la concentracin de Nitratos en la muestra 1

La muestra 1 se prepar con 1mL de agua Vida llevados a un volumen de

solucin final de 50mL teniendo como absorbancia valor igual a 0.162,
reemplazando este valor en la ecuacin de la curva de calibracin:
= (0.6071 ). 3 + 0.0025

0.162 = (0.6071 ). 3 + 0.0025

3 = 0.2628
Usamos el factor gravimtrico:

62
3

3 = 3 = 3 14

62
3 = 0.2628 ( ) = 1.1638
14

Hallamos la concentracin de la muestra usando el factor de dilucin:

50
3 = 3 = (1.1638) ( ) = 58.19
1

Concentracion de la Muestra 1 (Agua Vida) mediante el instrumento:

62 50
3 = 3 ()() = (0.2 63) ( ) ( ) = 58.2357
14 1

De la misma manera se realiza los calculos para la muestra 2 y 3

 TABLA DE RESULTADOS

TABLA N 1
SOLUCIN ESTNDAR MADRE (100 ppm)

Solucin de KNO3 0.1820 g /250ml

TABLA N 2
Preparacin de patrones a partir de la solucin intermedia (5ppm).

Patrn V(ml)
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5

TABLA N 3
Muestra de agua mineral sin gas: Vida y Cielo (botella de 625 ml)

Muestra Volumen (ml)

M1 1 ml
M2 2 ml
M3 10 ml

TABLA N 4

CURVA DE PATRONES

Patrones V de la solucin estndar Ppm NO-3 N

(ml)
P1 1 0.1
P2 2 0.2
P3 3 0.3
P4 4 0.4
P5 5 0.5
TABLA N 5

ABSORBANCIA Vs. CONCENTRACION

Lectura de la absorbancia de los estndares preparados = .

Absorbancia Concentracin ()
Blanco (BK) 0.000 0.000
P1 0.067 0.100
P2 0.129 0.200
P3 0.170 0.300
P4 0.244 0.400
P5 0.313 0.500

TABLA N 6

Anlisis de las muestras con el espectrofotmetro

Muestra Absorbancia Concentracin (ppm NO-3)
M1 0.162 0.263
M2 0.224 0.365
M3 0.141 0.229

TABLA N 7

Calculo de la concentracin de la muestra

Muestra Por la curva de Segn espectrofotmetro

calibracin (ppm NO-3) (ppm NO-3)
M1 58.19 58.2357
M2 40.4007 40.4107
M3 5.0524 5.0707
 BIBLIOGRAFIA
Skoog D. West D. Analisis Instrumental Edit. Mc. Graw HillMexico 1992

http://www.sma.df.gob.mx/sma/download/archivos/secofi_nmx_aa_079_scfi_2001.
pdf

http://www.advmex.com/espectrofotometro_uv.htm

http://www.scielo.br

http://www.agua-mineral.net/592/manantial-de-agua-sin-nitratos/

https://www.labinstcol.com/pdtos_espctro_uvisible.htm