BIOTECNOLOGA

TRABAJO COLABORATIVO - FASE INDIVIDUAL

PRESENTADO POR:

JOS NELSON CAMPOS

CDIGO: 4375584

DIRECTORA:

FREDA LORENA ORTIZ

Grupo: 305689-17

CEAD PALMIRA-VALLE

ESCUELA DE CIENCIAS DE CIENCIAS BSICAS TECNOLOGA E

INGENIERA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

VALLE DEL CAUCA, 12 DE SEPTIEMBRE DE 2015.

 INTRODUCCIN

Mediante el presente trabajo se pretende fundamentar la biotecnologa de las

fermentaciones, sistemas de fermentaciones, y la biotecnologa enzimtica teniendo en

cuenta artculos cientficos, ovas y adoratorios virtuales para definir las aplicaciones que

podra presentar estos conocimientos en varios mbitos de la produccin.

 I.

Realice el laboratorio virtual N. 1 y responda las preguntas del cuestionario del

laboratorio, (que se encuentra en la seccin de resultados del laboratorio). El laboratorio

virtual se encuentra en el entorno de conocimiento prctico.

1. Que fases de crecimiento puede diferenciar en la grafica

Fase de latencia

Fase de aceleracin positiva

Fase exponencial

Fase de aceleracin negativa

2. Explique el comportamiento de la grfica, desde el punto de vista metablico

Fase de latencia: el inoculo se adapta a las condiciones del medio

Fase de aceleracin positiva: el inoculo se comienza a alimentar del medio

Fase exponencial: El nmero de nuevas bacterias que aparecen por unidad de tiempo es

proporcional a la poblacin actual. Las bacterias se alimentan del medio y se duplican

Fase de aceleracin negativa: se comienzan a agotar los nutrientes y se generan productos

txicos.

3. Ene l grafico se pueden ver todas las fases de crecimiento, explique su respuesta

Si, por que se llega hasta la fase en donde comienza el declive de crecimiento bacteriano

por falta de nutrientes y comienza la fase estacionaria.

4. Investigue otros mtodos con los cuales se puede determinar la curva de

crecimiento

1.- Recuento de viables: Consiste en la dilucin de una muestra (con solucin salina estril,

buffer fosfato, agua peptona) hasta que las bacterias se diluyan lo suficiente como para

contar con precisin.

2.- Mtodo turbidimtrico: el sistema se basa en que las clulas en suspensin dispersan la

luz causando la turbidez del cultivo.

3.- Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy

pequeos de suspensiones de bacterias.

4.- Medida del nmero de partculas usando contadores electrnicos de partculas.

5.- Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN, protenas,

peptidoglicano, etc.

6.- Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran producen una

disminucin del potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del

consumo de oxgeno

5. Cul es la aplicacin en la industria de conocer la curva de crecimiento de un

microorganismo

Por medio de la curva de crecimiento microbiano se puede determinar el crecimiento

celular en alimentos refrigerados para as lograr generar el tratamiento ms adecuado a la

hora de generar esta operacin, y conocer a su vez cual puede ser resistente.
6. Que se entiende por absorbancia

En espectrofotometra, la absorbancia (a veces, absorbencia) ( ) se define como:

donde:

Es la intensidad de la luz con una longitud de onda especfica tras haber atravesado una

muestra (intensidad de la luz transmitida)

es la intensidad de la luz antes de entrar a la muestra (intensidad de la luz incidente)

El trmino frecuentemente es intercambiable con densidad ptica, si bien este ltimo se

refiere a la absorbancia por unidad de longitud.

La medida de absorbancia se usa con frecuencia en qumica analtica y en bioqumica, ya

que la absorbancia es proporcional al grosor de una muestra y a la concentracin de la

sustancia en sta, en contraste con la transmitancia I / I0, que vara exponencialmente con el

grosor y con la concentracin.

7. Porque es necesario utiliza una solucin blanco, cada vez que se hace una nueva

lectura ene l espectrofotmetro.

Los fenmenos pticos (reflexin, dispersin) causan atenuacin del haz que atraviesa la

solucin que se deben considerar en la medicin. Para compensar estos efectos, se coloca

una solucin blanco que da cuenta de las perdidas anteriores. Esta se conoce como solucin

o cubeta de referencia.

8. Que es lo que mide realmente el espectrofotmetro y como se relaciona esto con

las fases de crecimiento microbiano.

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve para medir,

en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud

fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas

que se miden en una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la

cuantificacin de sustancias y microorganismos.

En el espectrofotmetro, un haz de luz es transmitido a travs de la suspensin bacteriana a

un detector sensible a la luz. Mientras incremente el nmero de bacterias, menor ser la luz

captada por el detector. Este cambio en la luz se registrar en la escala del instrumento

como el porcentaje de transmisin. Tambin se registra una expresin logartmica llamada

absorbancia (algunas veces nombrada densidad ptica), un valor derivado del porcentaje de

transmisin que puede ser reportado. Ms de un milln de clulas por millitro deben estar

presentes para que la primera seal de turbiedad sea visible. Aproximadamente de 10

millones a 100 millones de clulas por mililitro son necesitadas para hacer una suspensin

suficientemente turbia para leer en el espectrofotmetro. La turbiedad no es til para medir

contaminacin en lquidos por la pequea cantidad relativa de bacterias.

II.

1. De acuerdo al captulo de crecimiento microbiano, del mdulo. Cul es la

diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un organismo y su

tiempo de generacin (g).

Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o una

poblacin se duplique.

K es la constante de crecimiento para un cultivo cerrado, y K estn relacionadas y

reflejan el proceso de crecimiento de una poblacin que incrementa exponencialmente.

2. De acuerdo al modelo matemtico de crecimiento microbiano. Calcule el valor de

g y de k en un experimento de crecimiento en el que se inocul un medio con 5 x 10 6

clulas/ml de Escherichia colli y que despus de un perodo de latencia de 1 hora, creci

exponencialmente durante 5 horas alcanzando una poblacin de 5,4 x 109 clulas/ml.

Tabla 1 resultados para calcular g y k.

para hallar n log

N= nmero final de clulas 5,4*10^9 9,73239376

No=nmero inicial de clulas 5*10^6 6,698970004

log 2 0,301029996

n=nmero de generaciones 10,0768156

horas

para hallar g /minutos

t= horas o minutos de crecimiento

expo 5 horas

g=tiempo de generacin 0,496188498

para hallar k

ln 2 0,693147181

k= velocidad de crecimiento 1,396943264

3. De acuerdo al captulo sobre metabolismo microbiano. Compare las rutas

metablicas utilizadas por los microorganismos, diferencie de acuerdo al sustrato

utilizado, mecanismo de obtencin de energa y productos obtenidos.

Tabla 2 diferencia de rutas metablicas

Metabolismo microbiano

anabolismo Catabolismo anfibolismo

aminocidos reacciones glucosa 6 fosfato,

,nucletidos, exergnicas que fosfoenolpiruvato,

protenas y cidos permiten liberar la piruvato, acetil

grasos energa contenida en coenzima a

los nutrientes o

estratos

sntesis de Atp cidos

macromoleculas- organicos,esteres

acidos nucleicos fosfricos y

proteinas, sustancias aminocidos

de reserva y otros
4. Compare y seale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y d

un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases

moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envs de primarios.

Los metabolitos primarios son molculas de bajo peso molecular que tiene lugar durante las

fases de crecimiento y que contribuyen a la produccin de biomasa o energa por las

clulas.

se producen durante la fase logartmica de crecimiento como producto del metabolismo, y

son esenciales para la funcion del microorganismo. La produccin neta se relaciona con el

crecimiento y la cantidad de sustrato. TROFOFASE.

El crecimiento microbiano depende de la capacidad de la clula para utilizar los nutrientes

de las estructuras celulares y tambin los principales compuestos macromoleculares de las

estructuras celulares y tambin los principales compuestos de peso molecular bajo

necesarios para la actividad celular. El metabolismo intermediario incluye las reacciones

que transforman los compuestos de carbono y nitrgeno que entran a la clula en nuevo

material celular o en productos que son excretados. La sntesis de estos compuestos

necesitan energa, y la mayora de las clulas utilizadas en las fermentaciones industriales

son hetertrofas y obtienen su energa a partir de la ruptura de compuestos orgnicos. En

los procesos respiratorios o aerobios, los organismos son capaces de oxidar completamente

algunos de los substratos a CO2 y H2O,obteniendo el mximo de energa para la

conversin de los substratos remanentes en nueva masa celular. En el metabolismo

fermentativo o anaerobio, las clulas son menos eficaces a la hora de convertir los
substratos orgnicos en material celular y usualmente excretan intermediarios degradados

parcialmente.

Las rutas productoras de energa o catablicas generan ATP y los coenzimas reducidos

necesarios para las diversas reacciones biosintticas, e intermediarios qumicos utilizados

como puntos de partida para las reacciones de biosntesis.

Los ms importantes desde el punto de vista industrial son

1- Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: proteinas,

acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y poliesteres (PHB

y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles (ergosterol)

2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa), cidos

organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico, propionico, succinico, fumarico),

alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe),

vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y guanilico),

polisacaridos y poliesteres de reserva.

Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.

Metabolitos secundarios microbianos. Un tipo ms complejo de productos industriales es

aquel en el que el producto deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento

sino durante la fase estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se

denominan metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms

importantes de inters industrial.

Las caractersticas reconocidas del metabolismo secundario son:

1. Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos.

2. Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la

reproduccin.

3. La formacin de metabolitos secundarios es extremadamente dependiente de las

condiciones de crecimiento, especialmente de la composicin del medio. Con frecuencia, se

produce la represin de la formacin del metabolito secundario.

4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de estructuras

estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una sola cepa de una especia del

Streptomyces produce 32 antibiticos distintos pero relacionados, del tipo antraciclina.

5. Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de metabolitos

secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como estn al metabolismo

primario, usualmente no se pueden superproducir de una manera tan espectacular.

En el metabolismo secundario, la produccin en cuestin puede no derivarse del sustrato

primario del crecimiento, sino a partir de un producto que l mismo form a partir del

sustrato primario del crecimiento.

Por tanto, el metabolito secundario se produce, generalmente, a partir de varios productos

intermedios que se acumulan, bien en el medio de cultivo o bien en las clulas, durante el

metabolismo primario.

Una caracterstica de los metabolitos secundarios es que las enzimas implicadas en la

produccin del metabolito secundario estn regulados separadamente de las enzimas del

metabolismo primario. En algunos casos se han identificado inductores especficos de la

produccin de metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un inductor

especfico de la produccin de estreptomicina, un compuesto denominado Factor A.

Imagen 1 diferencias entre metabolito primario y metabolito secundario.

5. De acuerdo al mdulo identifique la diferencia entre el trmino fermentacin

en Bioqumica y el trmino fermentacin en la Biotecnologa.

En biotecnologa se denomina fermentacin a la produccin industrial de pastis, petass o

metanfetass en general mediante el crecimiento controlado de clulas, especialmente las

bacterianas, en birreactores. Si bien se emplea el trmino fermentacin, cabe destacar

que, metablicamente, las condiciones de cultivo son en la mayora de los casos aerbicas a

fin de obtener un mximo rendimiento en la produccin.

Fermentacin en biotecnologa: La fermentacin es un proceso catablico de oxidacin

incompleta, que no requiere oxgeno, y el producto final es un compuesto orgnico

6. Estudie la ova sobre fermentacin, que se encuentra en el entorno de

conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el escalado

desde el punto de vista de la aireacin, la esterilizacin y el control del proceso de

fermentacin. Por qu estn importante la estabilidad en un fermentador industrial?

Tabla 4 problemas en fases de escalado

aireacin La esterilizacin Control de proceso de

fermentacin

Definicin Aireacin hace Un birreactor La fermentacin se utiliza

referencia al puede ampliamente en el sector

proceso de Ser esterilizado, alimentario y farmacutico.

introducir aire destruyendo Requiere cultivar un

para los microorganismo identificado

incrementar la microorganismos, (normalmente una bacteria)

concentracin con en un cultivo sumergido

de oxgeno de algn agente letal como monocultivo en unas

los lquidos como condiciones ambientales

calor, radiacin o definidas. El rgimen de

un producto incubacin aplicado se disea

qumico para maximizar la

 o bien separando productividad del organismo

los organismos en cuestin al crear unas

viables mediante condiciones ptimas para el

un procedimiento crecimiento de la poblacin

fsico como la

filtracin.

no eliminacin El nmero y tipo Control preciso de distintos

de gases txicos de parmetros Los ms

microorganismos importantes son: la

No optimizar las La composicin temperatura, el pH, el

variables para del medio de suministro de oxgeno u

problemas la agitacin cultivo oxidacin-reduccin, la

El oxgeno pasa Se altera agitacin, la presin, el

de una fase a severamente la control de espuma, la

otra en la cual solucin de alimentacin auxiliar o una

se encuentra el nutrientes combinacin de estos

microorganismo controles

Es importante la estabilidad en un fermentador industrial puesto que las variables que se

puedan realizar afectaran de manera significativa el resultado final pudiendo malograr el

producto.
7. De acuerdo a la ova sobre fermentacin. Determine por medio de un esquema las

etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de los pasos.

Imagne 2 diagrama de proceso apra la feremntacion industrial

Tabla 5 definicin de procesos de fermentacin industrial

Stock de clulas El cultivo celular es el proceso mediante el que

clulas, ya sean clulas procariotas o eucariotas,

pueden cultivarse en condiciones controladas

Fermentador de inoculacin Con el fin de obtener el suficiente inoculo para el

fermentador de produccin se deben realizar pre

cultivos en fermentadores mas pequeos

esterilizacin Un birreactor puede ser esterilizado, destruyendo

los microorganismos, con algn agente letal como

calor, radiacin o un producto qumico o bien

separando los organismos viables mediante un

procedimiento fsico como la filtracin.

fermentador El fermentador es el recipiente en el que se realiza

el proceso industrial De degradar molculas para

transformarlas en otras molculas ms simples.

Purificacin Se optimiza la pureza y /o concentracin de un

metabolito

productos Las tcnicas utilizadas para la recuperacin de

productos son extraccin, destilacin,

cristalizacin, precipitacin y desecacin)

8. De acuerdo a la ova sobre fermentacin Realice un cuadro comparativo donde

diferencie los tipos de fermentacin industrial y los mecanismos de obtencin de

productos fermentativo.

Tabla 6 tipos de fermentacin y como obtiene sus productos

tipos mecanismo

fermentacin actica la formacin de cido actico (CH3COOH)

resulta de la oxidacin de un alcohol por la

bacteria del vinagre en presencia del

oxgeno del aire. Estas bacterias, a

diferencia de las levaduras productoras de

alcohol, requieren un suministro generoso

de oxgeno para su crecimiento y actividad.

fermentacin alcohlica La fermentacin alcohlica es un proceso

biolgico de fermentacin en plena ausencia

de aire (oxgeno - O2), originado por la

actividad de algunos microorganismos que

procesan los hidratos de carbono (por regla

general azcares

fermentacin butrica La fermentacin butrica es la conversin de

los glcidos en cido butrico por accin de

bacterias de la especie Clostridium

butyricum en ausencia de oxgeno. Se

 produce a partir de la lactosa con formacin

de cido butrico y gas. Es caracterstica de

las bacterias del gnero Clostridium y se

caracteriza por la aparicin de olores

ptridos y desagradables.

fermentacin lctica La fermentacin lctica es una ruta

metablica anaerbica que ocurre en el

citosol de la clula, en la cual se oxida

parcialmente la glucosa para obtener

energa y donde el producto de desecho es

el cido lctico.

9. En la ova sobre fermentacin. Identifique los factores que pueden alterar la

produccin de enzimas de inters econmico a partir de microorganismos en un proceso

industrial, explique a travs de un ejemplo cada uno de ellos.

Oxgeno: controla la velocidad de transferencia y es la resistencia en la interface

entre la burbuja de gas y el lquido.

Temperatura: las fermentaciones deben ser llevadas a cabo en un margen estrecho

de temperatura y a ser posible constante.

PH: se debe controlar el pH del medio de cultivo y aadir un cido o una base

cuando se necesite para mantener constante el pH.

 III

Realice una ponencia cientfica: Estudie la Ova sobre enzimas, en dnde adems de una

breve contextualizacin del tema encontrar un problema, en el que se han planteado

tres hiptesis que podran explicar el fenmeno. A partir de esto construya un texto

cientfico. Para ello.

BIOTECNOLOGA DE LAS ENZIMAS

Introduccin

Se desarroll un laboratorio en el cual se present una variacin en la obtencin de

producto en la actividad enzimtica para lo cual se podra decir que Las diferencias en la

actividad enzimtica se deben a inhibidores en el medio del cultivo.

Ya que Las plantas superiores no son generalmente fuentes satisfactorias de enzimas para

usos clnicos e industriales, y acumulan productos de desecho en las vacuolas. Estos

compuestos son frecuentemente inhibidores enzimticos y/o to-xinas, particularmente

cuando se oxidan al contacto con el aire. Estos desechos, muchos de los cuales son fenoles,

se liberan al romperse la clula, contaminando y frecuentemente inactivando cualquier

enzima extrado.wiseman 1985

Medios de cultivo

SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2

Fuente de Carbono Harina de Yuca (10 g.L-1) Harina de trigo (10
g.L-1)
Fuente de Nitrgeno Harina de Frijol (5 g.L-1) Harina de Sangre (5
g.L-1)
Mezcla de K (1 ml.L-1) K (1 ml.L-1)
micronutrientes

Resultados

Medio de Temperatura pH final medio UA/enzimtica

cultivo de incubacin de cultivo
M1 30C 5.9 5.4
M1 35C 5,4 4.6
M2 30C 5.9 13.3
M2 35C 5.2 14.2

Conclusiones

-No se control el pH durante la fermentacin pero al analizar la tabla el ph final no es esta

tan alterado como dar significancia al a no produccin de los productos.

- la temperatura que se dio para ambos medios de cultivo fue al misma por lo cual esto no

genero la no produccin de los productos

- se concluye que la mezcla de harina de frijol ms harina de yuca afectaron el desempeo

de productividad de las bacterias inhibiendo su capacidad de produccin enzimtica

 BIBLIOGRAFIA

Crecimiento bacteriano, recuperado el 08 de septiembre del 2015 a partir de

https://es.wikipedia.org/wiki/Crecimiento_bacteriano

Crecimiento microbiano , recuperdado el 04 de septiembre a partir de

https://esalvucci.wordpress.com/crecimiento-microbiano/

Rodrguez Membibre, Mara Luisa (2002) Bacterias productoras de cido lctico:

Efectos sobre el crecimiento y la flora intestinal de pollos, gazapos y lechones

Industria de alimentos y el crecimiento microbiano recuperado el 04 de septiembre a partir

de

https://books.google.com.co/books?id=r7y3XuFAB8UC&pg=PA61&lpg=PA61&dq=c

urva+crecimiento+microorganismos+en+la+industria+de+alimentos&source=bl&ots=

VORCwru_hw&sig=L7IQPEDTIQIB5jDTQOMKoYvPWM0&hl=en&sa=X&ved=0

CCwQ6AEwAmoVChMIMbc2uXoxwIVBJYeCh1HOgZD#v=onepage&q=curva%20

crecimiento%20microorganismos%20en%20la%20industria%20de%20alimentos&f

=false

Espectrofotmetro, recuperado el 05 de septiembre a partir de

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro

Bacteriologa ambiental recuperado el 06 de septiembre del 2015 a partir de

http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_2.p

df
Fermentacinen biotecnologia, recuperado el 7 de septiembre a aprtir de

https://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n_%28biotecnolog%C3%ADa%29

Fermentacin en bioqumica, recuperado el 7 de septiembre a partir de

https://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n

Transferencia de oxigeno y aireacin, recuperado el 9 de septiembre a partir de

http://www.bvsde.ops-oms.org/bvsacd/scan2/05862/05862-11.pdf

Transferencia de oxigeno, recuperado el 10 de septiembre a partir de

http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/quim/article/viewFile/4270/3410

esterilizacin industrial recuperado el 11 de septiembre a partir de

http://www.researchgate.net/publication/261983198_ESTERILIZACIN_INDUSTRIA

L?enrichId=rgreq-56bfda15-27f4-4223-8afb-

d1cbf80cade1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI2MTk4MzE5ODtBUzoxMDE4ND

U3NDE2MDQ4NjlAMTQwMTI5MzMyNTY2Mw%3D%3D&el=1_x_2

control de fermentacin, recuperado el 11 de septiembre a partir de

http://www.eurotherm.es/industries/lifeaplicacinsciences/applications/fermentation/#

sthash.KIzeM4wl.dpuf

que es un cativo celular, recuperado el 12 de septiembre apartar de

https://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_celular

precultivo y fermentacin, recueprado el 12 de septiembre a partir de

http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2011/MicroBiol/

Biotecnologia2.pdf
"Fermentacin alcohlica: Una opcin para la produccin de energa renovable a

partir de desechos agrcolas", H.J. Vzquez, INGENIERA Investigacin y

Tecnologa VIII. 4. 249-259, 2007

Nelson, David L., and Michael M. Cox. Lehninger "Principles of Biochemistry". New

York: W. H. Freeman and Company, 2005. 609-611.

Kandler, O. (1983). Carbohydrate metabolism in lactic acid bacteria. Antonie van

Leeuwenhoek 49: 209224.