Que son los mtodos espectromtricos? Los mtodos espectromtricos son mtodos instrumentales empleados en qumica analtica. Basados en la interaccin de la radiacin electromagntica, u otras partculas, con un analito Para identificarlo o determinar su concentracin. Las leyes de Lambert- Bouguer- Bunsen- Roscoe- Beer, son esenciales para entender y para el empleo inteligente de la metodologa de la absorcin espectrofotomtrica y en conjunto forman la LEY DE BEER, donde menciona que La intensidad de un haz de luz monocromtica, que incide perpendicular sobre una muestra, decrece exponencialmente con la concentracin de la muestra 1. Ley de Beer
Cuando un haz de radiacin monocromtica de potencia P0 incide y
atraviesa una disolucin de espesor b cm y una concentracin c de la especie absorbente, la potencia de la radiacin disminuye de P0 a P debido a la interaccin de los fotones y las partculas absorbentes. T es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la disolucin.
La transmitancia T de la solucin es entonces la fraccin de la radiacin
incidente transmitida por la solucin:
Segn la Ley de Beer, entonces, la absorcin A estar determinada por:
La absorbancia aumenta a medida que disminuye la transmitancia.
Cuando se mide la absorbancia o la transmitancia,
la muestra est colocada en una cubeta en la cual pueden darse fenmenos de dispersin por parte de las partculas de la disolucin y de reflexin en las interfases aire/pared y pared /disolucin.
Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por la
disolucin del analito se compara con la potencia del haz transmitido a travs de una cubeta idntica que contiene slo disolvente midindose la absorbancia experimental.
4.- Aplicaciones de espectrometra de absorcin molecular IR.
La absorcin de radiacin IR implica transiciones entre distintos niveles de
energa vibracin al y rotacional asociados con el nivel electrnico ms bajo de las molculas.
La molcula debe sufrir un cambio neto en su momento dipolar debido a
diferentes movimientos de vibracin o rotacin.
Se define momento dipolar qumico , como la medida de la intensidad de
la fuerza de atraccin entre dos tomos. Es la expresin de la asimetra de la carga elctrica. Est definido como el producto entre la distancia d que separa a las cargas (longitud del enlace) y el valor de las cargas iguales y opuestas en un enlace qumico: = q d
El campo elctrico alterno de radiacin puede interaccionar con la
molcula y provocar cambios en la amplitud de sus movimientos.
Si la v de la radiacin IR coincide con la de vibracin/rotacin natural
de la molcula se produce una transferencia de energa que produce un cambio en la amplitud de vibracin molecular. Esto se traduce como absorcin de radiacin IR. Las especies mononucleares (sin momento dipolar) no absorben (O2, Cl2, N2).
La identificacin de analitos orgnicos se lleva a cabo siguiendo las siguientes
pautas:
1. Examinar frecuencias de grupo, pero hacer hincapi en la regin de huella
digital donde se observan cambios en el aspecto, distribucin de picos debido a pequeas diferencias de estructura. 2. Comparacin directa del espectro desconocido con espectros conocidos (de referencia). 3. Seguir un esquema sistemtico de la presencia/ausencia de bandas.
La identificacin de analitos orgnicos se lleva a cabo siguiendo las siguientes
pautas:
1. Examinar frecuencias de grupo, pero hacer hincapi en la regin de huella
digital donde se observan cambios en el aspecto, distribucin de picos debido a pequeas diferencias de estructura.
2. Comparacin directa del espectro desconocido con espectros conocidos (de
referencia).
3. Seguir un esquema sistemtico de la presencia/ausencia de bandas.
5.- Aplicaciones de espectrometra de fluorescencia molecular.
Los espectros de luminiscencia se obtienen cuando la muestra, tras absorber radiacin adecuada, la reemite en todos los sentidos y a una longitud de onda mayor.
Factores influyentes:
Distinto pH puede dar lugar o no a fluorescencia.
Valores de viscosidad alta y temperatura baja favorecen la disminucin de las colisiones entre partculas de soluto y disolvente, reducen la amortiguacin coloidal o conversin interna y favorece un incremento de la fluorescencia. La influencia del tipo de estructura es importante. As, la falta de rigidez de la molcula provoca un aumento de velocidad de conversin interna (desactivacin no radiante) provocando una disminucin de la fluorescencia. La presencia de grupos aromticos, confiriendo una mayor rigidez a la molcula produce un incremento de la fluorescencia. La presencia de un disolvente con tomos pesados reduce los valores de fluorescencia.
Se muestra la instrumentacin utilizada para las medidas de fluorescencia
molecular, ya sea un fluormetro (utilizando filtros como selectores de longitud de onda) o un espectrofluormetro (utilizando monocromadores). Ntese que la configuracin forma un ngulo de 90 entre el haz de excitacin (procedente de la fuente) y el haz de emisin de fluorescencia (procedente de la muestra). De esta forma se evita que la radiacin de la lmpara llegue al detector, junto con la radiacin fluorescente emitida por la muestra, produciendo interacciones en la medida. La emisin fluorescente de la muestra en todas direcciones hace posible este diseo instrumental. Biosensor de glucosa. Sin deteccin de fluorescencia.