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Artculo especial Arch Argent Pediatr 2011;109(3):237-244 / 237

Terapia gnica: los cidos nucleicos como


frmacos. Mecanismos de accin y vas de
entrega a la clula
Gene therapy: nucleic acids as drugs. Action mechanisms
and delivery into the cell

Dr. Brian M. Cavagnaria

RESUMEN El propsito de este artculo es


La terapia gnica involucra la transferencia de
compartir algunos de los ambiciosos
material gentico a una clula para conseguir un
beneficio teraputico, por lo que ofrece una nue-va objetivos de la TG, as como comentar
opcin para el tratamiento de muchas pato-logas. cules son las molculas teraputicas que
En este artculo se presentan algunos de los nuevos se introducen en la clula y las distintas
frmacos a base de cidos nucleicos, como
plsmidos, aptmeros, oligonucletidos, ribozimas
formas de entrega del mate-rial gentico
y pequeos cidos ribonucleicos de interferencia. utilizadas para cumplir su objetivo.
Se comenta el mecanismo y nivel de accin de
estos agentes teraputicos y se dis-cuten sus varias
vas de administracin, como liposomas, polmeros
catinicos, transferencia directa de cidos
TERApIA GNICA
nucleicos y vectores virales. La TG se basa en la introduccin de
Palabras clave: terapia gnica, ribozimas, nuevo material gentico dentro de una
aptme-ros, oligonucletidos, vectores virales. clula para conseguir un beneficio
teraputico.2,3
SUMMARY
Gene therapy involves the transference of new
Cuando la base molecular de la en-
genetic material to the cell in order to obtain a fermedad a tratar consiste, por ejem-plo,
therapeutic benefit, offering a new option for the en la ausencia de un producto
treatment of various diseases. In this article, some determinado debido a un gen nativo
of these nucleic acid-based drugs, such as
plasmids, aptamers, oligonucleotides, ribozymes
defectuoso (Factor IX, en la hemofilia B;
and small interfering ribonucleic acid, are pre- distrofina, en la distrofia de Duch-enne,
sented. Their mechanism and level of action is etc.), se podra introducir di-rectamente
commented and several delivery systems, such as una copia adicional del gen normal para
liposomes, cationic polymers, direct nucleic acid
transfer and viral vectors, are also discussed. Key
restablecer la fun-cin. Esto se conoce
words: gene therapy, ribozymes, aptamers, oli- como suplemen-tacin gnica y es la
gonucleotides, viral vectors. estrategia que la mayora de los mdicos
generalistas considera como sinnimo de
TG. Pe-ro la TG involucra tambin otras
INTRODUCCIN es-trategias.
El impacto de la biologa molecu-lar
sobre la medicina modific ini-cialmente Ante una situacin opuesta a la del
la forma de comprender la enfermedad, ejemplo previo, cuando la expre-sin de
para luego involucrar-se en su un gen favorece el desarrollo de una
diagnstico. Al da de hoy, se posiciona enfermedad, sea ste un gen nativo
como una de las herra-mientas ms (oncogenes para el desarrollo de cncer)
importantes para el tra-tamiento de o material gentico viral (multiplicacin
distintas patologas y promete modificar y desarrollo de la in-feccin), se pueden
sustancialmente la prctica mdica introducir oligo-nucletidos antisentido o
durante el presen-te siglo,1 tanto por la ribozimas, para evitar la expresin del
disponibilidad de frmacos obtenidos gen en cuestin. Esto se conoce como
por biotecno-loga, como por el supre-sin gnica.
desarrollo de la te-rapia gnica (TG).
Por otra parte, muchas veces la pre-
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sencia de unas pocas protenas mutantes puede das por cido desoxirribonucleico (ADN) (como
interferir con la funcin de muchas protenas nor- plsmidos, aptmeros y oligonucletidos) o ci-do
males. Esto se denomina efecto negativo dominante. ribonucleico (ARN) (como ribozimas, ARN de
Basndose en este hecho, otra estrategia de TG interferencia, aptmeros y oligonucletidos, entre
consiste en introducir en la clula secuencias que otras).4-6
codifiquen protenas mutantes para que inter-fieran,
por ejemplo, con las protenas necesarias para el Plsmidos
correcto armado de un virus y as actuar frente a Los plsmidos son estructuras de ADN de ca-
infecciones. dena doble que existen en procariotas (bacterias) y en
Otro ejemplo de TG consiste en introducir un algunos eucariotas (levaduras). Naturalmen-te, los
gen suicida de manera especfica en clulas neo- genes presentes en el plsmido le confieren a las
plsicas o infectadas con un patgeno peligroso, pa- bacterias portadoras ciertas cualidades, como la
ra que slo estas clulas blanco sean destruidas, no resistencia antibitica.
vindose afectadas las clulas sanas circundantes. En el contexto de la TG, los plsmidos se pue-den
Vemos as, como la TG no consiste nica-mente utilizar como herramientas que lleven incor-porados
en la introduccin de una copia sana de un gen, sino un promotor y el gen productor de la protena
que existen muchas otras estrategias muy originales, deseada. Se los puede considerar como profrmacos,
algunas de las cuales iremos co-mentando a medida ya que, una vez internalizados en la clula del
que analicemos qu mate-rial gentico se introduce paciente, su secuencia se transcribe y luego traduce a
en la clula blanco y con qu propsito. la protena que cumple la fun-cin teraputica. 7

Conceptualmente, la TG puede realizarse en la Los plsmidos son relativamente fciles de pu-


lnea germinal o en clulas somticas. rificar y manipular. Los mayores inconvenientes se
relacionan con su rpida degradacin y su ex-presin
TG de lnea germinal temporaria.8
Si se alteran genticamente las clulas de la lnea Inicialmente se los utiliz solo para tratar en-
germinal, todas las clulas del organismo presentarn fermedades monognicas, como la inmunode-
la modificacin y todo cambio intro-ducido pasar a ficiencia combinada grave debida al dficit de
la descendencia,2 con lo que sur-giran evidentes adenosina deaminasa,9 pero actualmente su uso
planteos ticos sobre la alteracin de la herencia incluye patologas de etiologa ms compleja, como
humana. Parkinson,10 Alzheimer11 y cncer,12-14 en-tre otras.
En el presente artculo slo se discutir la TG de
clulas somticas. Los plsmidos tambin se emplean actualmen-te
como vacunas de ADN que confieren una in-
TG de clulas somticas munizacin gentica.15
En ella, se altera genticamente un solo rgano o
tejido del individuo, sin afectar sus clulas ger- Aptmeros
minales y, por lo tanto, no existen efectos sobre la Los aptmeros son cidos nucleicos que no
descendencia. existen naturalmente. Para su creacin, primero se
A su vez, se puede realizar ex-vivo (se obtienen sintetizan diferentes cadenas de oligonucle-tidos en
clulas del paciente, se transfiere el material gen- forma aleatoria, las cuales luego se in-cuban con las
tico deseado mediante un vector adecuado, se molculas blanco de inters, hasta encontrar las que
seleccionan y se reimplantan en el paciente) o in-vivo de acuerdo a su estructura tri-dimensional presentan
(se administra el material gentico terapu-tico mayor avidez de unin. Finalmente, se amplifican los
directamente al paciente).2 oligonucletidos que presentan la mayor afinidad.
Habiendo expuesto los objetivos y tipos de TG,
debemos enfocarnos en dos aspectos bsicos para As, los aptmeros pueden interactuar direc-tamente
entender su alcance: qu material teraputico se con las protenas involucradas en el de-sarrollo de
utiliza y cmo se lo introduce en la clula. una enfermedad o con sus factores de
transcripcin.16,17 Su comportamiento es similar al de
Qu material teraputico se introduce los anticuerpos, pero los aptmeros seran muy
en la clula? especficos y menos inmunognicos.18 Su ma-yor
Para realizar TG se pueden introducir en la clula limitacin estara dada por su corta semivida. A
blanco diferentes estructuras constitui- modo de ejemplo, se han ensayado aptme-
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ros contra priones19 y contra infecciones como he- Estas molculas han sido ensayadas en dife-rentes
patitis C,20 HIV,21 y hepatitis B,22 entre otras. rganos, como msculo y cerebro 34 y en el
El organismo estadounidense de control de tratamiento de diversas patologas, como hepati-tis
frmacos (United States Food and Drug Adminis- C20 y B,35 e infecciones por CMV.36
tration, FDA) aprob el primer aptmero de uso Normalmente, el transcripto primario (ARN con
teraputico. Se trata de un frmaco antiangiogni-co intrones y exones) sufre modificaciones pos-
para el tratamiento de la degeneracin macular transcripcionales para convertirse en un ARNm
neovascular asociada a la edad. Se llama Pegapta-nib maduro.37 La eliminacin de los intrones se pro-duce
y acta por unin al factor de crecimiento del durante el corte y empalme (splicing). Este proceso
endotelio vascular, cuya actividad inhibe.23 celular se lleva a cabo por estructuras de ARN
denominadas espliceosomas.
Oligonucletidos Teniendo esto en cuenta, las ribozimas no solo
Son cidos nucleicos pequeos de cadena sim-ple pueden eliminar los ARNm involucrados en una
que, tras su internalizacin, pueden impedir la patologa, sino que tambin pueden reparar el ARNm
expresin de una protena especfica involucrada en del gen mutado, a travs del trans-splicing del ARN
el desarrollo de una enfermedad.24,25 mediado por espliceosoma (SMaRT, por
Pueden actuar unindose directamente al gen, Spliceosome-Mediated RNA Trans-splicing).
formando una estructura de triplex con la doble Esta prometedora estrategia ha sido ensa-yada,
cadena de ADN e impidiendo su transcripcin. entre otras, en patologas como fibrosis qustica, 38,39
Tambin pueden usarse como oligonucletidos hemofilia A40 y enfermedades neuro-degenerativas.41
antisentido, en donde se unirn al ARN mensaje-ro
(ARNm), para formar un duplex e impedir su
traduccin. ARN de interferencia
Una limitacin importante para el uso clnico de La interferencia del ARN es un fenmeno natural
los oligonucletidos es su dificultad para llegar al que lleva a silenciar la expresin de un determinado
citoplasma o al ncleo de la clula blanco con su gen, por un mecanismo postrans-cripcional.
actividad funcional intacta. Actualmente, los
oligonucletidos de tercera generacin son ms En lneas generales, cuando una clula in-
resistentes a las nucleasas. corpora, por infeccin viral o por transferencia,
Los oligonucletidos se han ensayado para el molculas de ARN de cadena doble, stas son
tratamiento de patologas como el cncer, 26-28 la cortadas por una enzima en fragmentos ms
atrofia muscular espinal29 e infecciones por cito- pequeos (21-23 nucletidos) llamados ARN
megalovirus (CMV),30 hepatitis C20,31 y papiloma- pequeos de interferencia (siRNA, por small in-
virus,32 entre otras. terfering RNA). Estos se acoplan al complejo de
Un oligonucletido antisentido (Fomivirsen) fue silenciamiento inducido por ARN (RISC, por RNA-
aprobado por la FDA para tratar la retinitis causada induced silencing complex), donde una de las hebras
por CMV en pacientes inmunocompro-metidos con se degrada y la otra (hebra antisentido) identifica al
lo cual se ha convertido en el primer frmaco basado ARNm complementario que se de-sea anular.
en cidos nucleicos.33 Finalmente, se cortar el ARNm blan-co y se evitar
la expresin del gen involucrado en la patologa.42
Ribozimas
Son molculas de ARN que, gracias a su es- Las clulas de mamfero se pueden transfectar
tructura terciaria, presentan actividad enzimtica: con vectores que expresen siRNA o se pueden in-
cortan y pegan ARN en sitios especficos. Existen yectar con siRNA sintticos, obtenindose resul-
ribozimas naturales que han sido descriptas en virus, tados similares.43-45
procariotas y eucariotas. En el laboratorio, se pueden Cabe destacar que el efecto silenciador de
generar ribozimas sintticas, con la ca-pacidad de genes es temporalmente limitado y que los siARN
dirigir el corte hacia una secuencia es-pecfica de pueden ser degradados por ribonucleasas end-genas
blanco. en su camino a la clula. En el laboratorio, se pueden
Presentan la ventaja de ser especficas y poco modificar qumicamente para incre-mentar su
inmunognicas, pero las principales dificultades para estabilidad.
su uso teraputico son su baja estabilidad y lo Actualmente, se ensaya su uso teraputico contra
dificultoso de colocalizar la ribozima con la se- patologa oncolgica44 y contra infecciones como la
cuencia contra la cual est dirigida. del VIH.21
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Cmo se introduce el material gentico La gran desventaja es que no se los ha podido


en la clula? atenuar, por lo que suelen ser lticos para las c-lulas
Para introducir cidos nucleicos en la clula se que los reciben.
pueden utilizar vectores virales y no virales.
Adenovirus
Vectores virales Los adenovirus tienen ADN de cadena doble, el
Los virus introducen su material gnico en las cual ingresa a la clula infectada sin integrarse en su
clulas de manera eficiente, por lo que suena lgico genoma.
su uso como vectores del material gnico a Resultan interesantes para dirigir el material
introducir, sustituyendo el genoma propio del virus gnico a clulas del epitelio respiratorio y gas-
por un cido nucleico teraputico. 46-49 En la prctica, trointestinal, aprovechando su va de infeccin
la mayora de los protocolos de TG utili-za virus normal. Infectan tanto clulas en divisin como las
como vectores, habindose ensayado en patologas que no lo estn.
como la distrofia muscular,50 el cn-cer51 y el sida.52 Como el genoma viral no se replica durante la
divisin celular, la informacin no se transmi-te a la
Si bien los virus son muy eficientes para intro- descendencia, por lo que su uso en TG es transciente.
ducir el material gnico en la clula, todava resta Adems, podran desencadenar una marcada
mejorar aspectos relacionados a la seguridad de su respuesta inmunitaria sobre la clula husped.2
empleo y a su inmunogenicidad.8
Los Adenovirus han sido empleados en proto-
Retrovirus colos para el tratamiento de pacientes con cncer de
En el laboratorio se generan retrovirus con to-da mama, ovario y melanoma metastsicos, 63,64 y
la maquinaria necesaria para su incorporacin en la ensayados contra entidades tan diversas como la
clula blanco, pero cuyo material a transfe-rir sea el isquemia65,66 y el glioblastoma.67
cido nucleico teraputico en lugar del genoma
viral.53 Virus adenoasociados
Estos pueden transportar hasta 8 kb (sufi-ciente Los virus adenoasociados tienen ADN de ca-dena
para prcticamente todos los cidos nu-cleicos simple, el cual ingresa a la clula infectada y pasa al
teraputicos) pero, salvo los Lentivirus, slo pueden ADN de cadena doble. Luego se integra en el
integrar su genoma en clulas en divisin activa.53-55 genoma del husped, generalmente en el cromosoma
19, reduciendo las chances de muta-gnesis
Otra complicacin importante es que la inte- insercional.
gracin en el genoma celular ocurre de manera Infectan eficientemente tanto clulas en divi-sin
azarosa, pudiendo ocasionar la disrupcin de un gen como clulas que no se dividen. Para repli-carse
funcional (mutagnesis insercional). dentro de la clula necesitan la coinfeccin de otro
Los Retrovirus han sido empleados en pro-tocolos virus. Su capacidad es limitada (menos de 4 kb) y no
para el tratamiento de la inmunodefi-ciencia se asocian a ninguna enfermedad humana, por lo que
combinada grave debida a dficit de adenosina se ven reducidas eventuales reacciones adversas. 68,69
deaminasa,56,57 cncer de ovario,58 melanoma59 y
enfermedad de Gaucher,60 entre otras patologas. Estos virus han sido ensayados en protocolos de
TG contra enfermedades como fibrosis qusti-ca, 70
artritis y hemofilia.71
Herpesvirus
Poseen dos caractersticas muy interesantes para Vectores no virales
su uso: 1) al ser neuropticos, resultan muy tiles Los vectores no virales generalmente no pre-
para introducir genes en clulas del siste-ma sentan inmunogenicidad (como los vectores vi-rales),
nervioso; 2) al mantenerse en estado latente, pueden pero son menos eficientes a la hora del ingreso del
persistir por mucho tiempo en el tejido nervioso. material gnico a la clula.8

Su ADN no se integra al del husped, pero se Liposomas


mantiene establemente de manera epismica y se Los liposomas no presentan especificidad para
divide junto al ADN cromosmico. Por lo tanto, ningn tipo celular y su entrega de material g-nico
tampoco se ve interrumpido ningn gen es mucho menos eficaz que la mediada por virus. No
endgeno.61,62 obstante, algunos liposomas se pueden
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dirigir mediante la modificacin de sus lpidos de enfermedades y es muy usada para el desarrollo de
pared72-78 o por su acople a sustancias, como la vi- vacunas genticas.103,104
tamina A, o a fragmentos de anticuerpos (inmu-
noliposomas).79 CONCLUSIN
Se ha logrado as, entregar material gnico te- El campo de la salud es definitivamente uno de
raputico para patologas como fibrosis qustica, 73 los ms beneficiados con el desarrollo de la bio-loga
carcinoma hepatocelular,74 melanoma75 y psoria-sis,77 molecular. En particular, la TG se muestra como una
entre muchas otras. de las opciones teraputicas que puede revolucionar
la forma tradicional de tratar muchas enfermedades
Complejo asialoglicoprotena-polilisina en el presente siglo.
y otros polmeros catinicos La actividad clnica cotidiana hace que el m-dico
La polilisina (carga positiva) se une al ADN generalista deba actualizar permanentemen-te sus
(carga negativa), mientras que la asialoglicopro-tena conocimientos sobre los frmacos clsicos y sus vas
permite su ingreso a los hepatocitos (poseen un convencionales de administracin, pero este nuevo
receptor para molculas que perdieron su ci-do panorama obligar tambin a familia-rizarse con los
silico).80-83 nuevos frmacos de cidos nu-cleicos, como
Otros polmeros catinicos utilizados son la plsmidos, aptmeros, ribozimas y ARN de
polietilenimina84-87 y el quitosano.88-91 interferencia, as como con las novedo-sas vas de
Los polmeros catinicos han sido emplea-dos administracin de estos frmacos, que ofrecen nuevas
para dirigir la entrega de material gnico a clulas opciones teraputicas para el tra-tamiento de muchas
hepticas,81 respiratorias,86 y corneales,89 entre otras. patologas.

Agradecimientos
Cromosomas artificiales Al Dr. Diego J. Rodrguez Gil, Facultad de Me-
Pueden transferir grandes segmentos de ADN. Al dicina de la Universidad Yale, New Haven, CT,
mantenerse como episoma (material gentico que EE.UU.) por la lectura crtica del manuscrito y por
puede existir de manera independiente al ge-noma sus oportunas sugerencias.
del husped) de forma estable, no se corre el riesgo
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Todas las ciencias exactas estn regidas


por el principio de la aproximacin.

Bertrand Russel

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