Bioinsecticidas microbianos

El manejo integrado es un sistema de actividades que utiliza conocimientos,

monitoreo, criterios de accin y materiales y mtodos concertadamente con los
factores de mortalidad natural para el manejo de las poblaciones de las plagas y vectores
de enfermedades. Bajo el control integrado, los enemigos naturales, prcticas culturales,
variedades de plantas y animales resistentes, inclusive los pesticidas se hacen
mutuamente aumentativos en lugar de operar individualmente y an en forma
antagnica como ocurre a menudo bajo la prctica prevaleciente (ejemplo insecticidas
contra enemigos naturales).
A continuacin se describen algunos de los diferentes tipos de control utilizados en
un manejo integrado:
Control cultural: Consiste en la manipulacin directa del agroecosistema con el
objeto de obstaculizar el desarrollo de las plagas. Algunas de estas medidas son el
barbecho, aporque alto, asociacin y rotacin de cultivos, destruccin de hospederos
alternativos y residuos de la cosecha.
Control fsico y mecnico: Incluye mtodos orientados a la destruccin de las
plagas en forma directa causndoles algn trastorno fisiolgico o creando ambientes
desfavorables que impiden su desarrollo normal. Por ejemplo, coleccin y
destruccin mecnica, control de la temperatura, uso de arena, ceniza o aceites en
granos almacenados.
Control etolgico: Se realiza mediante el uso de atrayentes, repelentes y otras
formas de control que aprovechan el comportamiento de las plagas para repelerlas o
matarlas. Ejemplo trampas amarillas para mosca minadora y feromonas sexuales
para capturar machos de gusano rosado.
Control legal: Se basa en la aplicacin de normas dictadas por el Ministerio de
Agricultura en coordinacin con los agricultores y sus organismos representativos.
Evita el ingreso de una plaga a un sector libre de ella, regula la fecha de siembra, se
destruye algn cultivo sospechoso y otras operaciones culturales.
Control con extractos de plantas: Muchas plantas contienen compuestos qumicos
con efectos repelentes (cardo santo, ajo, mua) o insecticidas (barbasco,
piretro,tabaco)
Control Qumico : Son todas aquellas actividades en donde se aplica un producto de
tipo qumico que puede ser larvicida, adulticida, hormonas, inhibidores, etc.
 Control biolgico: Es el uso de enemigos naturales que se puede dar en forma
natural o por accin del hombre a travs de las crianzas y liberaciones. Los
enemigos naturales son los individuos que se alimentan de los insectos plaga
controlando su nmero y manteniendo el equilibrio. Pueden ser parasitoides,
depredadores y patgenos.
Parasitoides: Son organismos que atacan a una sola presa llamada hospedero.
Viven a expensas de su presa slo en su fase larval siendo el adulto de vida libre.
Ejemplo: Romanomvermis culicivorax cuyos adultos depositan huevos en el lodo o en
el detrito de los hbitats de mosquitos. Despus de salir del huevo, los nemtodos
preparasticos buscan e invaden larvas de mosquitos, donde crecen durante 7 das, luego
el nemtodo sale y mata a la larva al atravesar la cutcula. Cuando sale el nemtodo cae
al fondo del hbitat, muda, se aparea y las hembras comienzan a poner huevos.
Depredadores o predadores: Los depredadores difieren de los parasitoides en que
atacan varias especies durante su vida. Tanto las larvas de los depredadores como su
estado adulto buscan (son mviles) activamente presas de las que se alimentan.
Ejemplo: peces larvboros como Gambusca affinis y Poecilia reticulata.
Patgenos: Los patgenos de insectos o entomopatgenos son organismos que
producen enfermedades de insectos y generalmente no afectan a los organismos
superiores. Pueden ser bacterias, hongos, virus y otros.

a. Bacterias entomopatgenas
Se agrupan en dos categoras: esporulantes y no esporulantes. Estas ltimas
debido a que tienen la capacidad de ser persistentes, lo cual es un requisito para su
produccin en escala comercial son las ms ampliamente estudiadas. Bacillus popillae,
Bacillus thuringiensis y Bacillus sphaericus son las bacterias entomopatgenas ms
abundantes. De las tres, Bacillus thuringiensis es la que mayormente se produce a nivel
comercial bajo diferentes formulaciones.
a.1 Bacillus thuringiensis
Fue descrito por primera vez en 1904 en Japn como organismo
causante de una enfermedad a larvas de gusano de seda y fue denominado Bacillus
sotto. El descubrimiento real de Bacillus thuringiensis lo hizo Berliner en Alemania en
1910. Lo aisl a partir de Ephestia kiihniella que obtuvo en un molino de harina del
distrito de Thringen.
Morfologa
 Es un bacilo Gram positivo, aerobio, ciliado que forma una endospora
oval subterminal as como una inclusin parasporal proteica denominada comnmente
cristal, que contiene la delta- endotoxina responsable en parte de la patogenecidad.
Principales toxinas
B. thuringiensis produce hasta siete toxinas diferentes de las cuales la
delta- endotoxina es la de mayor importancia. Esta toxina se sintetiza en forma de
protoxina dentro de un cristal, inclusin proteica o cuerpo parasporal de forma
bipiramidal, el cual es termolbil y se forma durante el proceso de esporulacin.
Sntomas de infeccin
El primer sntoma de infeccin en las larvas es una actividad reducida
y prdida de apetito, seguida por la descarga de fluidos por la boca y el ano. Despus de
la muerte, el cuerpo se oscurece tomando una coloracin parda o negra con una
consistencia blanda. A continuacin, los tejidos internos pueden desintegrarse o tomar
una consistencia viscosa desprendiendo olor desagradable pero normalmente no se
lican como sucede con los insectos muertos por ciertas infecciones virosas. La larva
generalmente se seca y se encoge permaneciendo intacto el integumento.

Modo de accin de la delta- endotoxina

Los cristales del Bacillus thuringiensis tienen que ser ingeridos por los
insectos, para luego disolverse en las condiciones extremas del pH del intestino medio,
alcalino en el caso de los lepidpteros y cido en el caso de los colepteros liberando as
las protoxinas. Estas carecen de actividad biolgica y para su activacin necesitan ser
hidrolizadas por las proteasas del jugo intestinal. Los polipptidos resultantes se unen a
receptores especficos en las microvellosidades de las membranas de las clulas
epiteliales del intestino. La delta- endotoxina no pasa a travs de la membrana celular al
interior de las clulas blanco, sino que permanece en la membrana, formando poros que
alteran la regulacin de las propiedades de permeabilidad de la membrana celular.
La accin de la delta- endotoxina es rpida. El cese de la alimentacin
puede observarse a los pocos minutos de la ingestin de los cristales. Existe parlisis del
intestino y tracto alimenticio, vmito, diarrea, parlisis total y finalmente la muerte. Los
primeros cambios histopatolgicos se observan en las microvellosidades, los cuales se
incrementan en tamao, pierden su estructura interna y aparecen vacuolas dentro de las
clulas epiteliales del intestino. El tamao de las clulas se incrementa hasta reventar.
La falta de control en la permeabilidad lleva a un intercambio libre entre la hemolinfa y
el contenido del intestino, lo cual es letal para la larva. El modo de accin de las
diferentes delta- endotoxinas de B. thuringiensis pareciera que se basa en el mismo
principio. Los cristales deben solubilizarse en el jugo intestinal. Las proteasas del jugo
intestinal tienen que generar el polipptido activo correcto y finalmente, los receptores
apropiados tienen que estar presentes en las clulas de la membrana del intestino.
Espora de B. thuringiensis
En el proceso patolgico las esporas juegan un papel pasivo ya que slo
cuando el pH intestinal ha disminuido, producto de la destruccin del epitelio intestinal
por la delta- endotoxina, las clulas vegetativas son capaces de proliferar colonizando el
hemocele y causando una septicemia letal.
Serovariedades de B. thuringiensis
Se tienen registradas ms de 30 serovariedades de B. thuringiensis, de
las cuales algunas de ellas son usadas en control microbiano de insectos. Se conocen
actualmente ms de 200 especies de insectos que son controlados con productos a base
de Bacillus thuringiensis, la mayora son larvas de lepidpteros, otras variedades son
activas contra larvas de mosquitos culcidos y simlidos y ms recientemente
colepteros.
Algunas variedades de Bacillus thuringiensis que han sido probadas
como larvicidas para dpteros son: Bacillus thuringiensis variedades tolworthi,
kyushehuensis, kenyae, aizawai, fukutokaensi, morrisoni, thuringiensis, israelensis, de
las cuales slo algunas presentan actividad pero por ser tan pequea es despreciable y la
mayora son completamente inactivas.
Bacillus thuringiensis var. israelensis o serotipo H- 14 de Barjac
(1978); es altamente txica para larvas de culcidos y su efecto ha sido comprobado para
72 especies de mosquitos culcidos y 22 especies de simlidos. Hasta la fecha no ha
sido aislada otra variedad diferente de Bacillus thuringiensis israelensis y la encontrada
se comercializa en diferentes presentaciones. Bacillus thuringiensis var. israelensis
(cepa BTI H-14) ha conseguido controlar muy bien al Aedes aegypti y otras especies
aunque se tropieza con un efecto residual de muy corta duracin.

El producto comercial est basado nicamente en la forma asporgena y

la endotoxina de la bacteria BTI- H14, para evitar el empleo de organismos vivos en el
aguas para consumo humano, resultando un producto bastante seguro que puede ser
colocado en el agua de bebida y que no causa dao a los predadores de los mosquitos y
en general ningn vertebrado. El BTI H- 14 se obtiene por fermentacin del Bacillus
thuringiensis var. israelensis y se emplea en forma de suspensiones acuosa, de color
marrn claro. El ingrediente activo est presente en forma de cristales proteicos, slidos
de fermentacin y por lo menos 10 millones de esporas viables por gramo presentando
una potencia nominal de 1200 Unidades Txicas Internaciones (UTI)/ miligramo =
1280 millones UTI por litro.

La muerte se produce 24 horas despus de la ingestin. El producto

muestra actividad muy rpida y buena toxicidad para las larvas entre el primer y tercer
estado y en el cuarto necesitan una mayor concentracin del ingrediente activo. No
tiene efecto sobre las larvas al final del cuarto estado, ni en pupas. El producto se
dispersa fcilmente en el agua, presentando excelente suspensibilidad. No presenta
toxicidad hacia las plantas y se conserva invariable cuando se le almacena a temperatura
ambiente hasta por 2 aos. No se ha registrado resistencia de las larvas al producto.
Cuando se aplica el BTI H- 14 en un medio acutico las endosporas y la endotoxina
quedan algunos das en suspensin en el agua, en los niveles cercanos a la superficie,
pero paulatinamente van asentndose al fondo de los recipientes dando como resultado
una disminucin de la actividad larvicida. Los fabricantes recomiendan que se repita la
aplicacin cada 7 das.
Forma de aplicacin de B. thuringiensis var. Israelensis cepa BTIH-
14
El uso de BIT H- 14 se basa en que la reduccin vectorial es ms
efectiva si se hace en su fase acutica, siendo su actividad especficamente larvicida.
Los sitios escogidos como criaderos de las larvas son cuerpos de agua con vegetacin
emergente (arrozales, riachuelos, drenes), para el caso de Anopheles y criaderos
artificiales tipo cilindros o tanques de agua de almacenamiento para el caso de Aedes.
La efectividad en el control de larvas se debe principalmente a las caractersticas
alimenticias en la superficie del agua donde ingieren las esporas de entomopatgenos
que debido a su baja densidad pueden flotar.

Aplicacin de B. thuringiensis var. Israelensis cepa BTIH-14

Durante aos la microbiloga peruana Palmira Ventosilla, se ha
esforzado por controlar la malaria, especficamente al vector Anopheles sp. En 1991, sus
trabajos adquirieron una urgencia mayor cuando se detect Plasmodium falciparum el
parsito causante de malaria ms mortfero que se conoce al Per. Ventosilla y sus
colegas en el Instituto de Medicina Tropical Alexander Von Humboldt en Lima han
creado una alternativa econmica e inocua para el ambiente que podr ser usada como
plaguicida contra mosquitos en la lucha contra la malaria. En Salitral, pueblo ubicado en
la costa hmeda y semitropical del Per, el equipo de Ventosilla ha enseado a la
poblacin como usar los cocos como incubadores naturales de Bacillus thuringiensis
var. israelensis (Bti), cepa H- 14, bacteria de generacin espontnea que es inofensiva
para humanos y animales, pero que aniquila el mosquito Anopheles en la etapa larval,
antes de que deje las charcas de agua y otros criaderos.

El proceso de incubacin consiste en insertar en el coco una torunda de

algodn empapada con las bacterias, despus de lo cual se sella con cera. Transcurridos
unos das de fermentacin, se abre el coco y se vierte el agua en las charcas donde los
mosquitos depositan los huevos. Este simple procedimiento requiere poco
adiestramiento. Excepto por las torundas de algodn, todo el equipo necesario- incluida
la cera de velas, el cuchillo filoso y los cocos se puede obtener localmente.

Adicionalmente a la generacin de tecnologa, un programa de control

debe impartir a la poblacin suficiente conocimientos y recursos para que pueda
controlar por s misma los brotes de enfermedad. En el caso de la malaria los residentes
deben conocer el ciclo de vida de Anopheles y las condiciones ambientales que
favorecen la difusin de la enfermedad. Con tal informacin la poblacin controlar los
mosquitos aplicando B. thuringiensis a los criaderos, pavimentando los
canales de irrigacin y eliminando las aguas albaales. Adems se protegern de las
picaduras del mosquito mediante el uso de mosquiteros de cama y ventana, sembrando
limoneros y eucaliptos (que actan como barreras naturales contra el mosquito) y
fumigando sus hogares con la quema de ramas y hojas de eucalipto.

a.2 Bacillus sphaericus

Bacillus sphaericus cepa 2362 se comercializa como Griselesf,
biolarvicida que tiene como ingredientes activos esporas, cristales txicos y otros
elementos esenciales, siendo efectivo para el control de larvas de mosquitos de los
gneros Culex y Anopheles, y menos activo contra Aedes, Mansonia y Psorophora.
Adems, tiene ventajas sobre Bacillus thuringiensis debido a que se mantiene
viable en medios acuticos poludos y tiene alta capacidad de reciclaje en cadveres de
larvas mosquistos.

Bacillus sphaericus produce al menos dos toxinas durante la

esporulacin, y las evidencias demuestran que ambas protenas actan juntas como una
toxina binaria, siendo la presencia de ambas requeridas para desarrollar la actividad
insecticida de larvas de mosquitos susceptibles. La toxina binaria est conformada por
protenas de 51,4 a 41,9 kDa, ambas expresadas como protena nica, 3,5- kb Hind III
que, al ser ingeridas en forma de cristales, se solubilizan en el intestino medio, debido al
pH alcalino del intestino de la larva. Luego ocurre un procesamiento proteoltico de la
protoxina 51 y 42 kDa a protenas de 49 kDa, que se ligan a las clulas epiteliales del
ciego gstrico y parte posterior del intestino medio, internalizndose ambas toxinas por
un mecanismo mediado por proteasas, involucrando la aparicin de reas de baja
densidad electrnica, vacuolizacin e hinchamiento de las mitocondrias y, finalmente,
lisis de las clulas intestinales, provocando se desencadene la muerte de larvas.

Aplicaciones
Se evalu la efectividad de B. sphaericus cepa 2362 en larvas de
Anopheles en localidades de la ciudad de Iquitos, Loreto. Se seleccionaron seis
criaderos, de los cuales tres eran lagunas permanentes, un pozo y dos charcos
temporales y previa determinacin de la densidad poblacional de larvas (# de larvas de
mosquitos de los estados I al IV) se aplic el biolarvicida Bacillus sphaericus cepa
2362 de formulacin lquida con ttulos de 8-9 x 109 esporas/ ml conocido
comercialmente como Griselesf 2362 (LABIOFAM de la Habana. Cuba).La dosis de
aplicacin empleada fue de 10 mL de la solucin diluida en 90 mL de agua
previamente filtrada, por cada m2. La aplicacin se llev a cabo con expansores
manuales de 10 L de capacidad con 55 libras de presin, aplicndose en forma
horizontal sobre la superficie acutica con la finalidad de obtener una cobertura total,
determinndose el porcentaje de reduccin larvaria y la permanencia de B. sphaericus
a los 7 y 30 das despus de la aplicacin.

El efecto larvicida se inici 48 horas despus de la aplicacin del

producto mantenindose la efectividad hasta las 72 horas con un porcentaje de
mortalidad de 100% para larvas del I al IV estado. Se verific el incremento de
densidad larval a las 96 horas de la aplicacin obtenindose un 90% de reduccin larval
debido al efecto residual de B. sphaericus. Las aplicaciones demostraron
alta efectividad de la formulacin aplicada en la dosis recomendada de 10 ml/m2 entre
las 48 horas y 96 horas de aplicacin. La permanencia de Bacillus sphaericus se
comprob a los 30 das despus de la aplicacin en muestras de barro obtenidas del
fondo del criadero, lo que sugiere que la bacteria posee capacidad de reciclamiento y
persistencia en el ambiente por largos perodos.