UniversidadNacionaldeLaPlata

LicenciaturaenQumica
QumicaAnalticaIII PROBLEMAS10

Cromatografa de Lquidos

1.- En una columna de slice para HPLC se encuentra que un soluto eluye prcticamente con el frente
de solvente cuando la composicin de la fase mvil es hexano cloroformo 50 %v/v.
a) Con qu modo de cromatografa lquida est trabajando?
b) Cmo modificara la composicin de la fase mvil para obtener una retencin aceptable?

2.- En una columna de trimetilsilano (TMS) para HPLC un soluto eluye a los 30 minutos si la fase
mvil es metanol-agua 10%v/v.
a) Con qu modo de cromatografa lquida est trabajando?
b) Cmo modificara la composicin de la fase mvil para disminuir el tiempo de retencin?

3.- La fuerza del solvente,, indica la capacidad fase mvil para eluir solutos de una columna.
Diferentes mezclas de solventes orgnicos con agua pueden tener la misma fuerza para eluir un dado
soluto. La fuerza de un solvente-mezcla puede estimarse como suma de contribuciones lineales de las
fuerzas de los solventes puros (o sea donde A y B indica el solvente al que se hace
referencia y indica la fraccin en volumen). La polaridad de una fase mvil tambin puede
describirse con el ndice de polaridad de Snyder (P'). En la siguiente tabla de solventes miscibles en
agua, se muestran valores de y P' para cromatografa lquida en fase inversa (RPLC o RP-HPLC) y
sus respectivas de corte. El agua tiene un P' de 10.2.

Solvente P' cut-off

(nm)
H2O (W) 10,2 190
Metanol (MetOH) 5.1 3.0 205
Acetonitrilo (ACN) 5.8 3.1 190
Tetrahidrofurano (THF) 4.0 4.4 212
2-propanol (iPrOH) 4.2 205
Acetona 3.4 330
Etanol (EtOH) 4.3 3.6 210
Dioxano 4.8 3.5 215

a) Qu mezcla producir valores de k' menores en HPLC-RP: una de tetrahidrofurano-agua 40%v/v

o una de metanol-agua 40%v/v?
b) Si una separacin se realiz con acetonitrilo-agua 20 %v/v pero de un total de 5 componentes dos
quedaron sin separar, qu cambios en la fase mvil podra hacer para aumentar la resolucin, sin
cambiar la fuerza del eluyente?
c) Por qu la fuerza del eluyente (fase mvil) incrementa a medida que la polaridad disminuye en
cromatografa lquida de fase inversa (RP-HPLC), mientras que en el modo normal (NP-HPLC) la
fuerza incrementa con el aumento de la polaridad del solvente?
d) Cules son las ventajas de realizar una elusin en gradiente en HPLC?
e) Porqu realiza siempre un gradiente de menor a mayor fuerza de eluyente y no al revs?
f) Qu inconveniente tiene el empleo de acetona en la fase mvil si se desea efectuar el anlisis de
surfactantes no inicos (steres no aromticos) empleando un detector UV-vis?

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4.- En una columna de fase inversa la dopamina tiene un tR = 31.3 min. para una fase mvil compuesta
de 30 % (v/v) de metanol y agua, mientras que el tiempo muerto determinado con NaNO 2 a 254 nm es
0.48 min.
a) Calcular el factor de capacidad, k', y decidir si este valor es apropiado para una determinacin
cromatogrfica de rutina.
b) Qu composicin de metanol se necesita en la fase mvil, si se desea hacer el anlisis en menos
de 8 min.?

5.- La queratina (quercetine) es una sustancia natural que tiene propiedades antihistamnicas y
antiinflamatorias. Se desea determinar queratina en un extracto vegetal. Se conoce que este soluto es
insoluble en hexano y prcticamente insoluble en agua, pero soluble en acetonitrilo y en isopropanol.
Se sabe tambin que pKa (1) = 7.03 y pKa (2) = 9.15.
a) Sugiera si el modo normal o inverso sera el ms apropiado para su determinacin mediante
HPLC.
b) Se inyect este soluto en una columna ODS de 150x4,60x5 empleando 20 % de acetonitrilo, 70 %
de agua y se observ que el soluto no eluye. Que pudo haber ocurrido?.
c) A qu valor de pH debera trabajar en la fase mvil para producir una retencin aceptable del
soluto?

OH O
OH

HO O
OH
OH
quercetina
6.- Indique qu modo de cromatografa usara para separar los componentes de una mezcla en los
siguientes casos:
a) molculas neutras de bajo peso molecular (<2000) solubles en hexano
b) molculas neutras de bajo peso molecular (< 2000) solubles en acetonitrilo
c) molculas inicas de bajo peso molecular (< 2000).
d) es posible emplear RP o NP-HPLC para separar molculas inicas? Justifique.