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Recientes ensayos clnicos de terapia gnica han demostrado beneficios

teraputicos notables y un excelente historial de seguridad. Ellos proveen
evidencia de la promesa largamente buscada de la terapia gnica para
entregar 'curas' por alguna otra manera terminal o gravemente
incapacitante
condiciones. Detrs de estos avances se encuentran diseos mejorados de
vectores que permiten la entrega segura de genes teraputicos a especfica
las clulas. Tecnologas para la edicin de los genes y la correccin de
mutaciones hereditarias, la participacin de las clulas madre para
regenerar tejidos
y la explotacin efectiva de potentes respuestas inmunes para combatir el
cncer tambin estn contribuyendo a la revitalizacin de
terapia de genes.
1
Instituto San Raffaele Teletn para la Terapia Gnica (TIGET), Instituto
Cientfico San Raffaele, 20132 Miln, Italia.
2
Vita Salute Universidad San Raffaele, 20132 Miln, Italia.
GRAMO
terapia eno tiene cientficos siempre fascinado, los mdicos y la
pblico en general debido a su potencial para el tratamiento de una enfermedad
en su
races genticas. Esto se consigue contrarrestar o reempla-
ing un gen mal funcionamiento dentro de las clulas afectadas negativamente
por la
condicin. Tan simple como suena el concepto, los obstculos que ponen en
la prctica son de enormes proporciones. La transferencia de genes debe superar
complejo celular
y las barreras de tejido para ofrecer nueva informacin gentica en el blanco
celular para dirigir la expresin dominio de una molcula teraputica sin
interrumpir los mecanismos reguladores esenciales. Las clulas corregidas
genticamente
deben estar presentes en cantidades suficientes para revertir la condicin,
escapar reconocimiento inmunolgico y sobrevivir a largo plazo, o
ser capaz de transmitir la modificacin a su progenie para sostener el
beneficio. Varios ensayos de terapia gnica se han realizado en el pasado
dos dcadas de enfermedades hereditarias, el cncer y las infecciones crnicas,
pero
slo unos pocos inform beneficios clnicos claros y en algunos individuos,
eventos adversos graves experimentados relacionados con los vectores. En
general, con-
preocupacin y escepticismo se levantaron sobre la extensin del uso de estos
estrate-
gas. Pero estas actitudes estn cambiando radicalmente. Un nmero de fase I /
Los ensayos clnicos de terapia gnica II han reportado notables evidencias de
eficacia y seguridad para el tratamiento de diversas dis- heredado severa
alivia de la sangre, los sistemas inmunitario y nervioso, incluyendo primaria
inmunodeficiencias, leucodistrofias, talasemia, hemofilia y
distrofia de la retina, as como cnceres tales como neoplasias malignas de
clulas B (Tabla
1). Todos estos ensayos exploit tecnologas mejoradas de vectores para entregar
genes teraputicos. En algunos ensayos, el material gentico se transfiere a
Las clulas madre hematopoyticas (HSC) o linfocitos T (clulas T) ex vivo,
y en otros hepatocitos en el hgado o los fotorreceptores en la retina
estn dirigidos directamente in vivo. Aqu se revisan los ms relevantes clnica
resultados, destacan los avances en las tecnologas de transferencia de genes y
en nuestra
comprensin de los procesos biolgicos que sustentan estos avances
y discutir los desafos y las perspectivas para la terapia gnica.
Hematopoyticas-madre-cellgenetherapy
HSC han sido durante mucho tiempo un objetivo preferido para terapia gnica
ex vivo
1
. Gentico
modificacin de las CMH multipotentes auto-mantenimiento asegurara un
suministro constante de su progenie gen corregido en el cuerpo. Estas clulas
tienen el potencial para tratar afecciones que se manifiestan hae- cuando madura
linajes matopoietic no logran desarrollar o funcione correctamente. Dado que
naturaleza de las CMH y la necesidad de garantizar que modi- gentica auto-
renovacin
caciones se transmiten a su descendencia, la correccin de genes debe ser
estable
introducido en la cromatina celular, ya sea por transgen mediada por vectores
insercin o por en la edicin gen situ.
Ensayos anteriores de HSC informe terapia gnica beneficios claros para las
personas con
enfermedades especficas, que demostraron el potencial teraputico de la gia
egy
2.10
. Sin embargo, tambin destacan las limitaciones y riesgos del uso
vectores de primera generacin que se basan en gammaretroviruses (gamma-
RVs)
11-15
.
Por ejemplo, estas tcnicas ofrecen slo una capacidad limitada para transferir
genes en las clulas progenitoras ms primitivos, que dan lugar a la baja de
nivel
y la apariencia transitoria de clulas hematopoyticas in vivo de genes
corregida.
Leucemia relacionada con la insercin del vector cerca de oncogenes tambin
ocurri en un
fraccin de los pacientes durante su largo plazo de seguimiento. El desarrollo
de los vectores con mejor eficacia y seguridad en modelos preclnicos, tales
como vectores lentiviral, se ha renovado el inters en el enfoque
1
.
HSC terapias gnicas que incorporan estos nuevos vectores se han probado
en enfermedades hereditarias graves del sistema inmune (Wiskott
-
Aldrich
sndrome (FUE) y X-ligado inmunodeficiencia combinada severa
(SCID-X1))
16-18
y la sangre (-talasemia)
19
Y, en neurodegenerativa
enfermedades de almacenamiento (adrenoleucodistrofia y leukodys-
metacromtica
trofeo)
20-22
(vase la Tabla 1). En los nios con SCID-X1, el desarrollo
y la funcin del sistema inmunolgico se deteriora debido a las deficiencias
en los receptores para ciertas citoquinas que son esenciales para las clulas
inmunes
el desarrollo, mientras que aquellos con WAS tienen deficiencias en un
cytoskel-
et al adaptador que se requiere para el montaje de la sinapsis inmunolgica
23
.
En consecuencia, estos nios sucumben a la infeccin o, en el caso de WAS,
hemorragia debido a una deficiencia de plaquetas acompaa. Gente con
-talasemia mayor - la forma ms grave de la -talasemia - dejar de
expresar la cadena de hemoglobina-, que conduce a erythropoie- ineficaces
sis y anemia severa que requiere transfusiones de sangre frecuentes y una
rgimen de quelacin de hierro. Los nios con principios adrenoleucodistrofia
inicio
o leucodistrofia metacromtica se ven afectados por la mielinizacin defectuosa
y, en consecuencia experimentar degeneracin glial- y de clulas neuronales en
el
sistemas nerviosos central y perifrico. Son incapaces de romper
algunos de los metabolitos de la mielina debido a una deficiencia en la per-
oxisomal ATP vinculante cassette de transportador en la adrenoleucodistrofia
24
,
o en la enzima lisosomal arilsulfatasa A en leukodys- metacromtica
trofeo
25
. Estos pacientes sufren deterioro rpido e irreversible de
su motor, el rendimiento sensorial y cognitiva, que conduce a la muerte
dentro de unos pocos aos. Trasplante de HSC, en la que las HSC son
transferidos
de un donante sano a un destinatario con una condicin especfica, puede
virtualmente
curar SCID-X1, WAS y -talasemia
26
. HSC trasplante tambin puede
Genetherapyreturns
al centro de la escena
Luigi Naldini
1,2
1 05 de octubre 2 0 1 5 | VOL 5 2 6 | NATURALEZA | 3 5 1
RESEA
doi: 10.1038 / nature15818
2015 Macmillan Publishers Limited. Reservados todos los derechos
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Tabla 1 | Los ensayos clnicos de terapia gnica se destacan en este
Comentario
Enfermedad
Estrategia de vector y
Nmero de
pacientes *
Seguir
(meses)
El estado del paciente y los resultados biolgicos y clnicos *
Ensayo clnico
identificador
Referencias
La terapia gnica basada en HSC
Wiskott-Aldrich
sndrome
Vector lentiviral;
transferencia gnica ex vivo
en CD34
+
las clulas.
7
10 a 60 Todos los pacientes AAW; injerto estable con transducidas
las clulas; beneficio clnico persistente y seguridad.
NCT01515462
16 y LN
Wiskott-Aldrich
sndrome
Vector lentiviral;
en CD34
+
las clulas.
7
9 a 42
6 pacientes AAW, 1 paciente falleci de una infeccin preexistente;
injerto estable con clulas transducidas; persistente
beneficio y la seguridad clnica.
NCT01347242
NCT01347346
NCT02333760
17
Ligada al cromosoma X severa
conjunto
inmunodeficiencia
Auto-inactivacin de -RV;
en CD34
+
las clulas.
9
12-39 8 pacientes AAW, 1 paciente falleci de una infeccin; estable
el injerto con clulas transducidas; persistente clnica
beneficio y la seguridad en 7 pacientes; 1 paciente no injertar
y se someti a trasplante de HSC.
NCT01410019
NCT01175239
NCT01129544
18
-talasemia
mayor
Vector lentiviral;
en CD34
+
las clulas.
3
24 a 72 2 pacientes de forma estable injertados con clulas transducidas,
1 paciente se convirti en la transfusin independiente; 1 paciente
logrado injertar y recibi clulas de rescate.
N/A
19,
M. Cavazzana
y BlueBird
Bio
-talasemia
mayor
Vector lentiviral;
en CD34
+
las clulas.
2
15
Injerto estable con clulas transducidas; transfusin
la independencia y la seguridad en ambos pacientes.
NCT02151526
M. Cavazzana
y BlueBird
Bio
-talasemia
mayor
Vector lentiviral;
en CD34
+
las clulas.
5
1a6
Injerto estable con clulas transducidas; seguridad y
independencia de transfusin en el primero 2 evaluables
pacientes.
NCT01745120
BlueBird Bio
Vector Lentiviral Adrenoleucodistrofia;
en CD34
+
las clulas.
4
54 to101 injerto estable con clulas transducidas y la seguridad en todo
los pacientes; beneficio clnico persistente en 3 pacientes.
N/A
20, 21 y
P. Aubourg
Metacromtica
leucodistrofia
Vector lentiviral;
en CD34
+
las clulas.
20
3 a 60
Injerto estable con clulas transducidas y seguridad en
todos los pacientes; beneficio clnico persistente en todos los late-infantil
los pacientes que fueron tratados cuando presintomtico.
NCT01560182
22 y LN
La terapia gnica del hgado dirigida
Hemofilia B
Vector AAV8;
intravenoso
administracin.
10
De 16 a 48 No hay inhibidores; expresin FIX persistente; en altas dosis
grupo, los niveles de FIX promedio de 5,1 1,7% observados en los 6 tratados
pacientes.
NCT00979238
40
Hemofilia B
Vector AAV8;
intravenoso
administracin.
7
Hasta 12 No hay inhibidores; REVISIN expresin persistente en 1 paciente.
NCT01687608
110
La inmunoterapia de clulas T para el cncer
Linfoma de clulas B
o CLL
gamma-RV; ex vivo
transferencia de genes en
Clulas T; Modificado CAR-
clulas anti-CD19.
15
1 a 23 de
8 CR, 4 RP; La ORR 80%.
NCT00924326
51
De clulas B
gamma-RV; ex vivo
clulas anti-CD19.
5
1a4
5 CR; TRG 100%; 4 pacientes fueron sometidos posteriormente
alo-trasplante de HSC segn diseo clnico-estudio,
1 paciente era inelegible para HSC trasplante y
reincidido.
NCT01044069
52
De clulas B
Vector lentiviral, ex
la transferencia de genes in vivo en
clulas anti-CD19.
30
1 a 24 27 CR; TRG 90%; 19 pacientes permanecieron en remisin,
3 de estos pacientes fueron sometidos a trasplante de HSC;
7 pacientes recayeron, 3 de estas recadas ocurrieron despus
prdida de clulas T transducidas.
NCT01626495
NCT01029366
53
De clulas B o
linfoma
gamma-RV; ex vivo
clulas anti-CD19.
21
Mediana
= 10 #
14 CR (en el da 28); TRG 67%; 10 pacientes posteriormente
se someti a un trasplante de HSC.
NCT01593696
54
La terapia gnica de la retina
Tipo 2 Leber
amaurosis congnita
Vector AAV2;
subretiniano unilateral
administracin.
5
36
En los 5 pacientes, la mejora estable en sensibilidad visual
visto.
NCT00516477
94, 97
Tipo 2 Leber
amaurosis congnita
Vector AAV2;
administracin.
3
54 a 72 en los 3 pacientes, mejora en la sensibilidad visual visto
a los 6 meses, lo que aument de 1 a 3 aos y despus
disminuido.
NCT00481546
95
Tipo 2 Leber
amaurosis congnita
Vector AAV2;
administracin.
12
36
En 6 pacientes, mejora en la sensibilidad visual visto,
que alcanz su punto mximo a las 6 a 12 meses y luego disminuy.
NCT00643747
96
AAW, vivo y bien; ALL, leucemia linfoctica aguda; CLL, la leucemia
linfoctica crnica; CR, respuesta completa; N / D, no aplicable; TRG, tasa de
respuesta global; PR, respuesta parcial.
* Como se indica en las publicaciones referenciadas o actualizados por la
comunicacin personal. Comunicacin personal.
0
/
mi
genotipo. 2
0
/
mi
, 2
0
/
0
, 1
0
/
+
genotipos. Median = 7. # 51 das para HSC
la mediana del trasplante.
3 5 2 | NATURALEZA | VOL 5 2 6 | 1 05 de octubre 2 0 1 5
RESEA
VISIN
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detener la progresin de leucodistrofias si se realiza antes o cerca de la
momento de aparicin, aunque el resultado del procedimiento es ms
satisfactoria
toria en adrenoleucodistrofia
24
que en leucodistrofia metacromtica
27
.
Alognico HSC trasplante confiere un riesgo considerable de morbilidad
y la muerte, sobre todo cuando se realiza entre leucocitario humano anti-
gen (HLA) -mismatched individuos. Incluso en los pocos casos en los que un
HLA compatible donante familiar, se encuentra, el riesgo de los restos de
morbilidad
sustancial
28
. Terapia gnica HSC puede satisfacer esta necesidad mdica no cubierta,
especialmente cuando ningn donante HSC emparejado est disponible.
Terapia gnica HSC es administrado por transferencia gnica ex vivo en
haema-
progenitores topoietic. En primer lugar, las clulas se purificaron utilizando la
superficie CD34
marcador de otros leucocitos cosechadas a partir de la mdula sea o
movilizacin
lized sangre perifrica del receptor. A continuacin, se cultivan durante 2-4 das
en presencia de citoquinas que estimulan el crecimiento, mientras que la
exposicin a
vectores que llevan un casete de expresin para el transgn correctiva. antes de
las clulas modificadas pueden administrarse, el destinatario se trata con un pre-
acondicionado rgimen de quimioterapia. Esto agota progenitoras endgena
res y clulas diferenciadas en la mdula sea - as como la linfoide
rganos, en algunos casos - y favorece el injerto de la ex vivo gene-
clulas corregidas. Preacondicionamiento resulta en una considerable
morbilidad temprana
el agotamiento de las clulas de la sangre owingtotransitory,
immunodeficiencyandmucosal
daos, que coloque el receptor en riesgo de infeccin severa. Tambin causa
retardada morbilidad debido al riesgo de desarrollar inducida por
quimioterapia-
tumores secundarios y la infertilidad
28
. Varios ensayos de terapia gnica HSC tienen
intentado aliviar la morbilidad asociada con preacondicionamiento por
la reduccin de la dosis y la combinacin de los frmacos quimioteraputicos
que
se administran en comparacin con los regmenes convencionales utilizados en
Trasplante de HSC. Sin embargo, el impacto del cambio de estos frmacos
regimiento
hombre sobre los riesgos y beneficios de la terapia es an por determinar
en los estudios comparativos ms amplios y por medio de seguimiento del
paciente a largo plazo
arriba. Algunos regmenes de preacondicionamiento tambin agotan microglia
endgena
progenitores, que viven en el sistema nervioso central (SNC). En los pacientes
con leucodistrofias que han sido tratados con la terapia gnica HSC,
estas clulas son reemplazadas con sus homlogos del gen corregido, que
migrar a los tejidos del sistema nervioso central y producir descendencia
funcional que puede borrar
metabolitos de mielina almacenados. En el caso de leukodystro- metacromtica
phy, estas clulas modificadas tambin la liberacin de enzimas lisosomales
funcional para
la cruz de correccin de otras clulas residentes del tejido
29 a 31
.
Todos los ensayos de HSC de terapia gnica realizados con lentiviral informe
vectores
reconstitucin estable y de alto nivel de la hematopoyesis con gen
correspondiente
clulas rected en la mayora de los beneficiarios, con los ensayos ms recientes
observacin
hasta el 90% de la reconstitucin en algunos pacientes
16,17,19-22
. Debido a que todos los
linajes hematopoyticos ensayadas (mielo-monoctica, megacarioctica,
eritroide, natural killer (NK) y linfoide B y T linfoide) contienen
gen corregido clulas y parecen recibir una entrada constante de recin formado
clulas modificadas - ms evidentes en los de corta vida linajes mieloides - gen
transferencia debe haber ocurrido en, progenitores multipotentes auto-
renovacin
que efectivamente implantada a los destinatarios. La extensin de la
hematopoytica
reconstitucin con clulas corregidas genticamente vara entre los pacientes y
ensayos. Esto refleja el impacto de la enfermedad y su correccin en el
diferentes linajes hematopoyticos, as como la potencia de cada vector
lote y el tipo de rgimen de preacondicionamiento administrada. Observacin-
blemente, la mayora de los pacientes obtienen beneficios sustanciales de la
terapia gnica que pueden
observado evenexceedthose despus exitosa transplantationfrom un HSC
donante alognico. Esto es especialmente cierto para un leukodys-
metacromtica
trophytrial
22
basado en el argumento de que la transferencia de genes podra conducir ms
alta
expresin de la enzima lisosomal en las clulas hematopoyticas que en las
clulas normales,
lo que permitira a estas clulas para proporcionar un aumento de la oferta de la
enzima
mientras homing en los tejidos afectados. La estrategia permiti la
insatisfactorio
resultado toria de HSC trasplante que hay que superar en metacromtica
leucodistrofia. A pesar de un nmero creciente de pacientes tratados
en estos ensayos de terapia gnica HSC (ver Tabla 1), no ha habido ningn
informe de
eventos adversos relacionados con lentiviral vectores. En la ltima de
seguimiento
de los pacientes incluidos en estos ensayos, el primero de los cuales fue tratado
casi
hace siete aos en el juicio adrenoleucodistrofia
20
, Los que tuvieron xito
cessfully injertados con clulas modificadas fueron reportados a estar en una
buena
estado - que es, o bien son libres de la enfermedad o su enfermedad ha sido
corto y se conduce - estables o en remisin desde el momento del tratamiento
una vida normal. Estos individuos probablemente ya han sucumbido
a su enfermedad si no se trata con terapia gnica
24,25
.
La terapia gnica del hgado dirigida
El hgado ha sido durante mucho tiempo un objetivo preferente para la terapia
gnica in vivo
32
. Esta
principal rgano interno y centro metablica central recibe una abundante
suministro de sangre a travs de una amplia cama de sinusoides con alta
permeabilidad
paredes capaces - una estructura que facilite el acceso de las partculas
transmitidas por la sangre,
tales como virus, a los hepatocitos. Los hepatocitos son de larga vida y robusto
fbricas de protenas que pueden liberar de manera eficiente sus productos en
la sangre
circulacin. Entrega transgn estable en el hgado, por tanto, podra
proporcionar
una estrategia para el tratamiento de varias enfermedades metablicas
hereditarias y plasma
deficiencias de protenas, especialmente las de los factores de coagulacin. Los
principales obstculos
a la terapia gnica dirigida al hgado incluyen la toxicidad potencial de una
aguda
respuesta inflamatoria a la administracin en bolo de partculas virales en
el torrente sanguneo, y la inactivacin de estas partculas por pre-existente
anticuerpos especficos del virus y el despacho de los fagocitos que bordean la
sinu-
soidal paredes del hgado y el bazo. Si la inmunidad humoral o celular es
desencadenada contra el producto del transgn, la actividad teraputica del gen
terapia podra ser inhibido en la circulacin o las clulas modificadas podran
ser eliminado por las clulas T citotxicas, respectivamente
33,34
.
La terapia gnica del hgado dirigida ha sido probado principalmente en el
tratamiento de la
severehaemophiliaBusingvectors derivedfromthehuman parvovirus,
virus adeno-asociado (AAV)
35
. En la inyeccin intravascular, algunos AAV-
serotipos del vector en cuenta efectivamente los hepatocitos y se mantienen de
forma estable asociaciones
ado con las clulas modificadas, en su mayora como episomas no integrados
dentro de
el nucleo. En modelos animales, esta estrategia de entrega no induce una
respuesta inmune contra el producto transgnico y en su lugar favorece la
desarrollo de tolerancia-transgn especfica
32
. La persistencia de AAV-
genomas de vectores que contienen un casete de expresin para el factor de
coagulacin
IX (FIX) - una protena que est ausente o es defectuosa en la hemofilia B -
dentro de
hepatocitos nonproliferating pueden dar lugar a un suministro estable de
funcionamiento
FIX en el torrente sanguneo
36
. Expresin FIX precio tan bajo como 1% de lo normal
nivel puede convertir hemofilia B grave en una forma ms leve de la
enfermedad. Esta
reconstitucin parcial alivia el riesgo de hemorragias espontneas,
que son perjudiciales para las articulaciones y potencialmente letal si se
producen en
el cerebro. Tambin puede reducir la necesidad de factor profilctico
intravenosa
terapia tor-reemplazo, un tratamiento que impone una carga sustancial
de los pacientes y slo est disponible a un costo elevado y en pases con
bienestar
los sistemas de salud desarrollados
37
. Aunque los ensayos anteriores demostraron
la seguridad de la entrega de vectores AAV en el torrente sanguneo humano,
se
reportado solamente limitada y transitoria expresin FIX. Esto es
probablemente
debido a los bajos niveles de la transduccin de genes en el hgado y un bracin
retardada
respuesta inmune lular que apuntado componentes AAV que persisten dentro
de
hepatocitos modificado y provoc su eliminacin
38,39
. Ms recientemente,
un ensayo que utiliz un serotipo nuevo AAV (AAV8) y un cassette mejorada
diseo fue capaz de superar estas limitaciones para demostrar por vectores
dosis-dependentFIXexpressionofupto6% ofthenormallevelafterasin-
infusin vector gle, bien tolerado en una vena perifrica
40
. Tres aos despues,
Expresin FIX mantenido estable en la mayora de los pacientes, aunque
algunos tuvieron que ser
dado un tratamiento con corticosteroides inmunosupresor transitoria en la
primera
signo de lesin hepatocelular en las 4-8 semanas despus del tratamiento. La
mayora
los pacientes tratados fueron capaces de reducir o anular la necesidad de
profilctica
reemplazo de factor, que mejor sustancialmente su calidad de vida.
La inmunoterapia de clulas T para el cncer
Las clulas T son tambin objetivos populares para la terapia gnica ex
vivo. Tales terapias
apuntar principalmente a impulsar la respuesta inmunitaria adaptativa contra el
cncer y
infecciones crnicas tales como VIH
41,42
. Clulas autlogas T pueden ser cosechadas
fcilmente a partir de la sangre perifrica y ampliado ex vivo. Las clulas son
luego
transducidas con un -RV o lentiviral vector que expresa una clula T exgeno
receptor de antgeno (TCR) que es especfico para un antgeno asociado al
cncer o
una molcula antiviral, y se infunde de nuevo al paciente. El uso de clulas T
inmunoterapia para el cncer surgi a partir de observaciones seminales de
objetivo
INSIGHT COMENTARIO
Pgina 4
respuestas tumorales, que a veces llevaron a completar la regresin del tumor,
despus de la infusin de ex vivo -EXPANDED autlogo tumor infiltrante
linfocitos en pacientes con melanoma avanzado
41
. El subyacente
mecanismos de estas respuestas han sido relacionados con la activacin ex vivo
y la amplificacin - y posterior en la persistencia vivo - de tumour-
clulas T citotxicas especficas que ya existen en pequeas cantidades dentro
de algn
tumores, pero se suprimen por el microambiente local. Estos datos
apoyar el potencial teraputico de una respuesta inmunitaria adaptativa contra
algunos tumores cuando se libera de las seales supresoras endgenos
y las clulas T reactivas se infunden en un nmero elevado, lo que conduce a
una
relacin efector-diana favorable. Preacondicionamiento pacientes con lin-
tifoidea ozono rgimen antes de la infusin de la ex vivo -EXPANDED clulas
T
mejora su prendimiento y la actividad in vivo
43
.
La transferencia gentica de un TCR exgeno a una clula T puede pasar por
alto la
la necesidad de encontrar especificidades cancerosas preexistentes dentro de las
clulas T del paciente
poblacin. Tambin permite la explotacin de alta afinidad sinttica
TCR, que de otro modo podran ser purgado in vivo mediante la seleccin
tmica, a
redirigir la especificidad de clulas autlogas. Idealmente, tales TCR seran
Aduaneros
obtener antgenos asociados a tumores de protenas endgenas que no son
siendo expresado - al mismo tiempo o en niveles detectables - por normales
tejidos, comola carcinoembryonicorcancertestis antigens.Alternatively,
que podran apuntar a mutaciones tumor de controladores que se encuentran
comnmente
dentro de un determinado tipo de tumor y que no puede ser perdido, incluso
para evadir
aclaramiento inmunitario. Estudios recientes, sin embargo, indican que la
mayor parte espon-
reactividad inmune especfica de tumor nea o provocada en su lugar se dirige
contra neoantgenos 'pasajeros', que se originan nicamente de azar
mutaciones que se acumulan dentro de los tumores individuales
44-47
. Este tipo de
inmunoterapia debe por lo tanto ser altamente personalizado y requerir
tanto la identificacin de neoantgenos candidato de la exoma tumor
o proteoma y la recuperacin o generacin del reconocimiento TCR afines
secuencias cin para la ingeniera gentica adhoc de clulas T.
Los primeros ensayos clnicos de la transferencia de genes de clulas T con
TCR dirigidos contra
antgenos asociados a tumores informaron respuestas tumorales parcial y,
en algunos casos, fuera de tumor reactividad que llevaron a dao tisular
y los eventos adversos graves
48-50
. Ms recientemente, se us la transferencia de genes
introducir receptores de antgenos quimricos sintticos (CAR) a las clulas T.
CARs combinan la especificidad de unin de un anticuerpo contra un cncer-
marcador de superficie asociada con uno o ms de sealizacin intracelular
dominios de la TCR y complejos receptores estimuladoras
42
. los
estrategia tiene una serie de ventajas sobre el uso de convencional
TCR. Por ejemplo, el reconocimiento de antgenos no est restringido por HLA,
y
especificidades de anticuerpos previamente validados para el cncer segura y
especfica
el reconocimiento in vivo puede ser explotado por la incorporacin de un solo
derivados de anticuerpos de cadena en los coches. Adems, estos niera
clulas neered T pueden ser totalmente activan cuando el cumplimiento de su
objetivo. Ensayos
que los coches desplegados dirigidos contra la superficie de clulas B CD19
molcula
beneficios dramticos reportados en pacientes con neoplasias de clulas B, que
respuestas clnicas duraderas con experiencia, incluyendo la remisin completa,
con una toxicidad manejable en su mayora
51-54
. Estos resultados han estimulado enor-
mous inters en seguir desarrollando este enfoque
55
.
Razones para el xito en los ensayos clnicos recientes
Los resultados clnicos positivos analizados en este Examen proporcionan larga
buscado pruebas de la elusiva promesa de la terapia gnica para entregar
duradera
beneficio teraputico, o incluso una "cura", de lo contrario un terminal o grave
incapacitante condicin despus de un solo tratamiento. Estos resultados
podran representar
el resultado gratificante del esfuerzo por mejorar racionalmente vectores en el
laboratorio, como se explica en el Cuadro 1 y Cuadro 2. Los avances en vector
cante
fabrica- y caracterizacin, lo que lleva a los lotes con mayor potencia
y una mayor pureza, tambin se podra facilitar el aumento de la transduccin
de las clulas diana con efectos adversos ms bajas, incluso cuando se utiliza la
samevec-
diseo tor como en los ensayos anteriores. Una mejor comprensin de lo
biolgico
procesos y tipos de clulas especficas que estn implicadas en el xito o Fail-
ure de cada terapia gnica tambin ha contribuido a mejorar los mtodos de ex
vivo
la manipulacin de clulas y condujo a la vigilancia y una gestin ms eficaz
de
pacientes. De hecho, el aumento de la confianza en el resultado positivo de la
reciente
ensayos ahora se construye tanto en la observacin clnica y molecular
avanzada
lecturas que proporcionan evidencia de la eficacia y seguridad de la terapia
gnica.
En los ensayos de HSC de terapia gnica recientes basados lentiviral-vector-,
vector insercin
Se utiliz el anlisis cional para rastrear clones individuales en el reconstituida
la hematopoyesis y la reconstitucin mostr que policlonal por transducidas
clulas madre haban tenido lugar sin la aparicin de clones dominantes
cuyo comportamiento podra atribuirse a la ganancia de funcin vectorial
insercin
mutagnesis cional. Un anlisis molecular en profundidad de la reconstituida
hematopoyesis que ahora se lleva a cabo en diferentes enfermedades,
incluyendo
varios que fueron tratados con diferentes tipos de vector, est facilitando
la primera evaluacin comparativa fiable de eventos inducidos por vectores en
pacientes
16,17,20-22,56
. El cuadro que surge de manifiesto que la ausencia de
eventos clnicos adversos en los ensayos recientes se acompaa de un notable
diferente del paisaje de la distribucin del vector-insercin en los pacientes. en
el
ensayos anteriores, que se realizaron con la repeticin terminal larga (LTR) -
vectores -RV competentes, hubo frecuentes y generacin temprana de
clones dominantes, cuyos appearedtobe expansin impulsado por thealtered
expresin de los genes del cncer que fueron el blanco de vector de insercin
11-13,14,57
.
Sin embargo, este hallazgo se observa raramente vectores cuando ms recientes,
como
lentiviral vectores, LTR con auto-inactivacin y diferente de insercin del sitio
se utilizan preferencias
16,17,19-22
. En la reconstruccin paralelo, retrospectiva de
leucemognesis mltiples etapas de los ensayos anteriores apoya la opinin de
que
Los principales obstculos para el de clulas madre hematopoyticas (HSC)
terapia gnica
incluir el logro eficiente transferencia gnica ex vivo en largo plazo
repoblar las CMH, evitando la activacin de oncogenes por la cercana
la integracin de un vector y el control de la expresin del transgen para evitar
la expresin ectpica o constitutiva que conduce a la toxicidad
1
. Comparado
a vectores gammaretroviral generacin temprana (gamma-RVs), derivado del
VIH
vectores lentivirales resultan en la transferencia gnica ms eficiente y estable,
robusta expresin del transgen en las HSC y su progenie multilinaje.
Trabajo preclnico Amplia indica caractersticas importantes en el vector
biologa y diseo que afectan genotoxicidad y destac las estrategias
para aliviarlo
111-117
. Las repeticiones terminales largas de auto-inactivacin (LTRs)
y las preferencias de integracin de sitio de los vectores lentivirales, se mostr
a
aliviar sustancialmente genotoxicidad insercin. Cuando se prob en gamma-
RVs,
el diseo de auto-inactivacin LTR ha demostrado mejorar la seguridad de
esta plataforma, as
18
. Anlisis retrospectivo de varios ensayos anteriores
sugiere que la enfermedad de fondo, la funcin transgn, cultivo ex vivo
y la eficiencia de la repoblacin de todo anfitrin puede influir en la
probabilidad
que genotoxicidad insercin se manifestar en un ensayo
13,14
. Estos datos
ayudado a dar forma a las ideas que no todos los vectores de integracin tienen
la
mismos efectos y que la integracin de todo el genoma de una mejor vectorial
diseos, aunque sigue siendo un evento mutagnico, se pueden tolerar en el
ausencia de circunstancias agravantes
118
.
Libre inactivar lentiviral vectores tambin se estn utilizando para disear
Clulas T con receptores quimricos de antgeno (CAR) o antgeno de clulas
T
receptores para uso en inmunoterapia adoptiva para el tratamiento
de cncer. Las ventajas de esta nueva plataforma en comparacin con
-RVs de generaciones anteriores, que realizan satisfactoriamente en esta celda
objetivo, an para ser plenamente establecida. Los vectores lentivirales se cree
para dar lugar a ms robusto y estable en la expresin del transgen
Clulas T in vivo y ex podra facilitar ms eficiente y verstil
Vivo la transferencia de genes, mientras que el apoyo a la expresin coordinada
de
mltiples transgenes
41,42,55,119
. Estas ventajas se harn ms
relevante como el campo de la terapia gentica implementa estrategias
refinadas,
como la mejora de la manipulacin de clulas T para preservar T de memoria
clulas madre
59-61
, Las tareas de clulas de ingeniera o ms exigentes, tales
como el co-expresin de varios vehculos (para mejorar la especificidad) o un
interruptor de seguridad condicional / gen suicida (para mejorar la seguridad)
120
.
CAJA 1
Lentiviral vectores
RESEA
VISIN
Pgina 5
vector de insercin previsto un primer xito mutagnico que potencialmente
llev a la
desarrollo de la leucemia. La progresin de la enfermedad fue facilitado por
acumulacin de mutaciones adicionales en vectores independiente en el
expandible
clon ing, que se ve favorecida por factores precipitantes concurrentes tales
como la reconstitucin oligoclonales, la presin selectiva para una
supervivencia o el crecimiento
ventaja, la toxicidad del transgn o subrayado resultante de la hematopoyesis
la enfermedad subyacente
12,13,14
. En general, estos resultados apoyan la idea de
que la mejora de la eficiencia de transduccin y el trasplante de HSC,
junto con la mejora del diseo del vector, puede aliviar sustancialmente, pero
no eliminar, las preocupaciones sobre la genotoxicidad. Una vez que se ha
establecido
que el vector de insercin es en su mayora neutral para el comportamiento
celular, el seguimiento clonal
actividad en la hematopoyesis reconstituido puede resaltar importante
caractersticas biolgicas de la regeneracin hematopoytica. Estos incluyen el
patrn de actividad y estabilidad de las HSCs transducidas, que proporciona
el foundationfor la prediccin a largo termmaintenanceofthetherapeutic
beneficio
16,22
. Clones de seguimiento tambin pueden ayudar a establecer la fiabilidad de
los modelos actuales de relacin de linaje y jerarqua hematopoytica
con base en estudios de xenotrasplantes
58
.
En la terapia adoptiva de clulas T, una subpoblacin de clulas madre T de
memoria
juega un papel importante en el apoyo a la eficacia a largo plazo. Este
conocimiento
surgi a partir de un mejor conocimiento y caracterizacin fenotpica
de las vas de diferenciacin de clulas T, y la identificacin de las clulas que
son responsables de la generacin sostenida de la actividad efectora in vivo
59
.
Optimizacin del cultivo celular ex vivo
60
y el seguimiento in vivo del gen marcado
Clulas T
61
tambin contribuy a este descubrimiento, lo que debera facilitar la
diseo de los ensayos ms eficaces. Mapeo de eptopos y el seguimiento de
cncer-
atacar a las clulas T en los pacientes que se someten a terapias de clulas T
adoptivos
y el tratamiento de drogas bloqueo puesto de control proporcionan evidencia
directa de la
potencial para evocar las clulas T efectoras especficas de cncer en algunos
tipos de cncer,
que podra ser explotada para despejar la enfermedad metastsica avanzada
despus
ex vivo oa formulaciones gentica
44-47
.
En la terapia gnica dirigida al hgado, detallado monitor inmune eptopo
especfico
segui- de respuestas de clulas T antivirales en el suministro de genes in
vivo AAV es capaz
para explicar en parte los fracasos anteriores para observar FIX estable a largo
plazo
expresin
34,39
. Esto tambin ayud a descubrir las estrategias para controlar una
retardada respuesta adaptativa citotxico para componentes virales que
persisten
dentro de las clulas transducidas, que incluyen inmunodeficiencia transitoria
administracin
frmacos supresores de la primera aparicin de una respuesta tal
40
y niera
cpsides virales inge- eludir respuestas dominantes
62-64
.
La eficacia mejorada observada en los ltimos ensayos de terapia gnica podra
tambin reflejan la mejora de diseos de estudio. Estos han sido posibles
gracias
una comprensin ms profunda de las interacciones husped-vector y por la
aplicacin
cin de criterios de seleccin de pacientes ms racionales, que son ms
fcilmente
adoptada despus de la 'prueba de la seguridad' inicial de la administracin por
el vector en
los seres humanos se ha obtenido. La mejora de los diseos del ensayo pueden
mejorar eficiencia
cacia de varias maneras. Por ejemplo, el tratamiento de sintomtica temprana
(o incluso
presintomticos) individuos en lugar de las personas con un estado avanzado de
una enfermedad ofrece mayores posibilidades para la terapia de trabajar antes
de los tejidos
el dao se ha vuelto irreversible. Dosis del vector se pueden establecer en
niveles que
acercarse a la eficacia teraputica en lugar de la actividad biolgica mnima, tal
como se
generalmente se hace para aliviar los riesgos al establecer la seguridad de un
tratamiento
en fase I / II de ensayos. Sin embargo, este enfoque de precaucin a menudo
niega juicio
a los participantes la oportunidad de obtener un beneficio inmediato de la
terapia, como
as como cualquier beneficio futuro (porque se vuelven inmunes al vector).
Byadministeringmoreaggressivepreconditioningregimens, spacecan
disponer que las clulas genticamente corregido. Eventos adversos inducidos
por vector puede
alsobeneutralizedbypreemptiveorpromptpharmacologicaltreatment,
tales como la administracin de frmacos anti-inflamatorios o esteroides para
suprimir
la respuesta inmune innata y adaptativa, respectivamente.
Ensayos de terapia gnica a menudo abordan las enfermedades raras para las
que es poco
conocido sobre la historia y el genotipo-fenotipo relacin naturales
buques. Enriquecimiento de tal conocimiento ayuda en el diseo de ms eficaz
ensayos, ya que hace posible reclutar a los pacientes que corren ms
probabilidades de beneficiarse del tratamiento. La eficacia tambin se puede
establecer
de acuerdo a los puntos finales validados dentro de un plazo que sea compatible
con un mayor desarrollo de la terapia.
Desafos futuros y desarrollos futuros
En la terapia gnica HSC, a pesar de los avances en el diseo de vectores, la
determinacin de la
riesgo real de mutagnesis de insercin en los ensayos clnicos - y cmo se
puede
ser gestionados en el nivel del paciente individual o superar por ms
mejoras en el diseo del vector - siguen siendo los principales objetivos para el
futuro pro-
Congreso. Se han desarrollado varios modelos experimentales para evaluar y
rango tipos genotoxicityofdifferentvector therelative anddesigns. A pesar de
proporcionar el fundamento para avanzar en nuevos vectores para ensayos
clnicos, no logran
para proporcionar una prediccin cuantitativa de riesgo oncognico real en la
clnica
ajuste de cal. Todava es difcil establecer el riesgo real de genotoxicidad para
un vector dado en un ensayo dado, especialmente teniendo en cuenta el bajo
nmero de
pacientes que han sido tratados con vectores hasta la fecha, el tiempo de
seguimiento
perodos que se requieren, y la posibilidad de que el fondo de la enfermedad
podra concurrir a aumentar el riesgo. Adems, no queda claro si
molecularmonitoringcanpredicttheprogression a malignancyofaber-
clones diatriba en pacientes individuales. Mientras los vectores elegidos son
capaces
para integrar en todo el genoma, con sujecin a las preferencias dictadas por
el virus parental y la composicin de las partculas, el riesgo de activacin de
genes
y la inactivacin en los sitios de insercin puede ser mitigado, pero no derog.
Aunque los tipos de vectores mejorados y los diseos que estn siendo
actualmente
probado podra aliviar algunas de las preocupaciones que rodean activacin de
oncogenes
vacin, lo que representa un evento mutagnico dominante de alto riesgo, la
dis-
ruption de genes supresores de tumores sigue siendo posible. Estos menos
frecuente
y los eventos recesivos pueden revelar sus consecuencias slo despus de un
largo
perodo de latencia o por medio de la prueba en los ensayos a gran escala.
Si eficacia y seguridad se pueden establecer en un mayor nmero de pacientes
y durante perodos de seguimiento ms largos, la terapia gnica HSC podra
finalmente
desafiar el dominio del trasplante alognico HSC como una primera lnea
therapeuticoptioninmonogenicdiseasesforwhichHSCtransplantation
es beneficioso
5,65
. De hecho, el uso de autlogo HSCs hace que el tratamiento
Los principales obstculos para la transferencia gnica dirigida al hgado
incluyen alivia
la respuesta inflamatoria a la administracin intravenosa de alto
dosis de partculas virales y sin pasar por la inmunidad preexistente al virus
componentes. Hepatocitos objetivo tambin debe ser mejorado y largo
la expresin del transgen plazo debe ser establecido
33,34
. En una reciente
ensayo clnico de terapia gnica de la hemofilia B dirigida al hgado, un
adenovirus
virus (AAV) vectores asociados que haban mostrado una mejora tropismo
heptico
(proporcionado por el serotipo AAV8) y la transduccin mejorada
eficiencia (obtenida por el envasado de un genoma auto-complementaria)
en modelos animales, como resultado la expresin a largo plazo del factor IX
(FIX) en la mayora de los pacientes
40
tan largo como un inmunosupresor transitoria
tratamiento con corticosteroides se administr con prontitud a las
que se desarrolla signos de lesin hepatocelular. Si el
resultado exitoso se puede atribuir a la utilizacin del nuevo vector
diseo queda por establecer porque la dosis-respuesta
relacin y el tropismo de los diferentes serotipos de vectores podra
diferir entre los seres humanos y modelos animales
64
. Otro ensayo en curso
de la terapia gnica de la hemofilia B es utilizar el mismo serotipo AAV8 a
expresar una hiperactivo FIX transgn. Los informes preliminares indican
que la expresin de FIX sostenida slo se produce en algunos pacientes, a pesar
de
la administracin de corticosteroides orales en los signos de hepatocelular
lesin
110
. Es posible que el tratamiento inmunosupresor era
administrado demasiado tarde para ser eficaz en la prevencin de la liquidacin
modificado de hepatocitos. Alternativamente, ciertos aspectos de vector
diseo y fabricacin pueden ser detectados por los mtodos actuales
de la caracterizacin, lo que podra influir en la robustez de
la terapia.
BOX 2
Nueva adeno-asociado
serotipos vector de virus
REVISIN INSIGHT
Pgina 6
potencialmente disponibles para todos los pacientes. HSC trasplante, por su
parte, es
disponible slo para los pacientes para los que un donante HLA emparejados o
compatible
puede ser encontrado. Terapia gnica HSC puede tambin sustancialmente
menor morbilidad
porque abroga el riesgo de enfermedad de injerto contra husped y suprime
la necesidad forimmune supresin despus del tratamiento. Por otra parte,
podra per-
mit el uso de tratamientos de preacondicionamiento ms leves, como
quimerismo parcial
a travs de la presencia de clulas corregidas genticamente podra ser
suficiente para corregir
la enfermedad y salvar a los pacientes el riesgo de mielo- y lymphoablative
preacondicionamiento tratamientos. Adems, la ingeniera gentica de las
CMH
podra facilitar nuevos modos de tratamiento si el actual resultado de HSC
El trasplante no es satisfactoria. Esto podra implicar el aumento de la tera-
putico dosis de genes a un nivel que es ms alto que el nivel que se proporciona
por las clulas de donantes normales (como se describe previamente para leu-
metacromtica
kodystrophy) o entregar la actividad del transgn en los tejidos o en los sitios
seleccionados de
enfermedades (tales como el CNS en leucodistrofia metacromtica). HSC y
su progenie tambin podra estar equipado con informacin gentica exgena
cin a una mejor lucha del cncer o infeccin crnica. Como opciones
teraputicas
estn disponibles para las enfermedades incurables de lo contrario, los genomas
de los recin
babiescould nacido bescreenedtoallow condiciones earlytreatmentofthese.
Para el cumplimiento de estas predicciones, ex vivo modificacin gentica y
cultivo de
HSCs y sus progenitores deben ser ms robusto y fiable. Esta
debe ser, junto con la mejora de mantenimiento y expansin de la
clulas tratadas, que apoyaran una recuperacin ms rpida hematopoytica en
pre-
acondicionado pacientes y aumentar la composicin clonal, resistencia y
la estabilidad del injerto ingeniera - mejorando as el corto plazo y
seguridad a largo plazo del procedimiento. Cuando se alcanza un beneficio
teraputico en
el establecimiento de un quimerismo parcial, basado regmenes de
acondicionamiento menos txicos
en podran aplicarse tambin agentes biolgicos, lo que sobra pacientes
tanto la toxicidad aguda ya largo plazo de la actual quimioterapia basada en
regmenes
66
.
En la inmunoterapia de clulas T para el cncer, el nmero de coches en la
clnica
prueba est creciendo rpidamente, aunque la mayora de los ensayos se centran
en el tratamiento de
MalignanciesusingCARsthattarget de clulas B B
cellsurfaceantigens. Notacin
blemente, este enfoque reduce no slo los clones malignos que causan
enfermedades
sino tambin casi todas las clulas B en el paciente. Aunque la falta de clulas
B puede
remediarse por la infusin de inmunoglobulinas, el agotamiento de otra clula
linajes podran no ser tan manejable. Este problema podra limitar el uso de
otherlineage-specificantigensas objetivos CAR. Inaddition, theclearance
de grandes masas tumorales observados en estos ensayos fue acompaado por
un
syndrome- aguda ya menudo graves, incluso requiriendo cuidadosamente
intensivo que
seguido de la liberacin masiva de citoquinas de las clulas T activadas en la
diana.
Dados los beneficios extraordinarios que se han observado en algunos
pacientes, ms las CAR son susceptibles de ser diseados y probados
42,55
.Sin embargo,
preguntas importantes todava deben ser abordados. Por ejemplo, qu CAR
diseo ser lograr la mayor eficacia con la mnima toxicidad? Cmo se puede
las toxicidades derivadas del reconocimiento mediado de CAR-sana
tejidos que expresan antgenos diana a niveles bajos pueden controlar de una
manera oportuna
y eficaz? Puede adoptivos terapias de clulas T sean lo ms eficaces en la slida
cnceres, ya que parecen ser en algunas neoplasias linfoides, o pueda
featuresofthetumourstromainhibittheiractivity? Althoughmorechal-
lenging que la transferencia de genes CAR, la transferencia de genes TCR
podran ser
ms eficaz a largo plazo. La transferencia de genes TCR tambin podra ser un
mejor
aptos para cnceres que no tienden a acumular mutaciones de pasajeros y poder
ser menos sensible a punto de verificacin drogas bloqueo. Por cncer-
destinada a una audiencia
mutaciones del conductor, la transferencia de genes TCR podran ser menos
propensos a la induccin
de la resistencia de transferencia de CAR-gen, que tiene una gama ms limitada
de
objetivos que deben estar antgenos de superficie y no siempre son los
conductores de la
enfermedad. Edicin gen TCR
67,68
puede redirigir la especificidad de una clula T hacia una
nuevo antgeno mediante la interrupcin de genes TCR endgenas a
continuacin, la introduccin de una
TCR o CAR exgeno. Por lo tanto, podra convertirse en una poderosa
estrategia
para evitar mispairing TCR, que ocurre cuando la misma clula expresa dos
diferentes TCR. Por otra parte, en la conduccin de las respuestas biolgicas de
la genet-
camente modificado las clulas T, que suprime confusin seal TCR endgena
transduccin nal. Cuando se combina con la creciente evidencia para apoyar la
una eficacia sustancial de la terapia de bloqueo immunecheckpoint, el resultado
de los ltimos ensayos de transferencia CAR T-celular-genes sugiere que la
inmunoterapia
podra convertirse en un nuevo pilar de la terapia del cncer que tiene el
potencial de
erradicar la enfermedad
69
.
En algunos de los ensayos, de terapia gnica basada en AAV dirigida al hgado
discutidos
En esta revisin, las consecuencias de un retraso mediada por clulas inmunes
respuesta que se dirige transducidas hepatocitos podran ser
controlados. Cmo-
nunca, esto sigue siendo un rea de estrecha vigilancia debido a que los factores
que podran
concurrir a desencadenar la respuesta y regular su tiempo no son totalmente
comprensin
destacado
34
. Por ejemplo, cmo la aparicin de este retraso hepatocelular
Toxicidad lular se relacionan con la dosis administrada de vectores, la potencia
y el tipo?
Y se relaciona con posibles desencadenantes concomitantes como sub
transitoria
lesin heptica clnica, o inflamacin que recluta clulas T de memoria a una
momento en el que el antgeno viral sigue siendo presentado por el hepato
transducidas
citos? Otro aspecto sin resolver se refiere a la durabilidad del transgn
expresin durante un perodo prolongado de tiempo. Aunque mediada por AAV
Expresin FIX se mantiene estable durante la vida de los perros tratados, es
difcil
predecir si esto tambin se aplica a los seres humanos, que tienen vidas ms
largas. LA
comprensin clara de las formas moleculares que subyacen en el largo plazo
asociacin de ADN de AAV con el ncleo del hepatocito - y su relacin
contribucin tiva a la expresin del transgen - seguramente proporcionar
informacin. En
los estudios preclnicos, una fraccin del genoma AAV se inform de que inte-
gratedintothechromatinofhepatocytes, althoughitisunclearhowmuch
podra contribuir a la expresin gnica a largo plazo
35
. Aunque la integracin
asegura la expresin a largo plazo de los genes, incluso en la cara de la
replicacin celular,
existen preocupaciones sobre su seguridad
70,71,72
. Los enfoques deben ser desarrollados que
permitir a los pacientes con altas concentraciones de anticuerpos neutralizantes
del AAV
acceder a la terapia gnica mediada por AAV y para permitir la re-
administracin de
genetherapy, possiblybyexploitingalternativecapsidcomposition
34,63,73,74
.
Como la confianza crece en la eleccin del tipo de vectores y la dosificacin,
paciente
criterios de seleccin se pueden utilizar para apuntar a terapias para individuos
que son menos
probable para montar respuestas inmunes de AAV-dirigida. Nuevos serotipos
de vectores
se asegurar de que la terapia gnica basada en AAV se vuelve ms
ampliamente aplicable.
Por ejemplo, debera ser posible para hacer frente a la hemofilia A - el ms
forma comn y desafiante de la hemofilia -, as como varios otros
enfermedades metablicas y almacenamiento que afectan el hgado y otros
perifricos
rganos, incluyendo los msculos y el corazn. La notable capacidad de AAV
la terapia gnica para establecer un beneficio clnico a largo plazo a travs de
un simple,
bien tolerado infusin intravenosa, combinado con la facilidad de fabri-
facturing un medicamento basado en vectores (en lugar de un trato
personalizado
producto de clulas que es necesario que vivo ex terapia gnica), podra
establecer el escenario
por su rpido desarrollo comercial y distribucin amplia del mercado.
Terapia gnica AAV tambin puede ser adecuado para abordar mdica
insatisfecha
las necesidades de los pases con sistemas de salud menos desarrollados, porque
una
intervencin sola podra aliviar la carga de la prestacin y el acceso a
La terapia de reemplazo de toda la vida y atencin mdica. Otras plataformas
vector,
incluidos los vectores lentiviral, tambin se estn desarrollando para la dirigida
al hgado
terapia de genes
75
y podra finalmente entrega complementAAV basada a
ampliar el acceso de los pacientes a - y las enfermedades objeto de - esto
prometedor tipo de terapia gnica.
Edicin de genes dirigidos
Otra importante impulso al renacimiento terapia gnica ha emergido
de los avances en las tecnologas de genes de metas
76
. La capacidad de generar
endonucleasas de ADN artificiales que se unen especficamente a una secuencia
de DNA
de eleccin e inducir una rotura de doble cadena (DSB) est haciendo apuntado
edicin de genoma ms eficiente y mucho ms fcil para llevar a cabo, lo que
trae los objetivos largamente buscados de somtica interrupcin de genes,
especfica
y la integracin del transgn in situ correccin de genes dentro del alcance de
terapia de genes. Todas estas estrategias implican un mecanismo de 'hit-and-
run' que
requiere slo la expresin transitoria del complejo de nucleasa y, en algunos
de los casos, una plantilla de reparacin para modificar el genoma de forma
permanente. Porque ellos
dirigirse a una regin seleccionada del genoma, estas estrategias abrogar el
riesgo de
mutagnesis de insercin y la expresin del transgen que mal controlada
se asocia con las estrategias de gen de reemplazo convencionales.
Focalizacin de Gene ha entrado recientemente en ensayos clnicos a travs de
la adoptiva
La terapia de clulas T de los pacientes infectados con el VIH
77
. Artificial nucleacin zinc-finger
ASES (ZFNs) se utilizaron para interrumpir el gen que codifica CCR5, un
celular
RESEA
VISIN
Pgina 7
co-receptor para el VIH, en las clulas T crecido ex vivo de cada paciente - con
el
objetivo de dar a estas clulas resistentes a la infeccin con el virus antes de su
reinfusin. Interrupcin de genes se logr mediante la creacin de un DSB de
ADN en una
exn del CCR5 gen porque reparacin de DSBs por la no homloga
(NHEJ) pathwayleads finales a participar tothelossorinsertionofbasesduring
reincorporacin final, que inactiva la secuencia de codificacin. El ensayo
informado
tanto la prueba de seguridad y largo plazo la persistencia de las clulas
modificadas en
vivo. Tambin proporciona una indicacin de la eficacia a travs de una
tendencia para la posicin
tiva seleccin de clulas con interrumpidos CCR5 alelos, as como una
observacin
en algunos pacientes de un mejor control de la replicacin viral en la
programada
interrupcin de la terapia antiviral
77
. Para lograr la eliminacin del virus definitiva,
sin embargo, la fraccin y el mantenimiento a largo plazo de clulas infundidas
rodamiento
ing biallica CCR5 interrupcin podra ser necesario aumentar. Esto podra ser
logrado mediante la realizacin de la edicin de genes en clulas progenitoras
de auto-renovacin,
tales como HSCs
78
o clulas madre T de memoria, ya que estas clulas ofrecen una mejor
potencial para lograr este nivel de mejora y de largo plazo reconstitucin
tionoftheT-cellcompartment, especiallyifcombinedwithprecondition-
ing para agotar las clulas endgenas no modificados. Dirigida interrupcin
gnica
tambin se puede utilizar para aliviar la represin de un gen endgeno cuya
expresin podra compensar la disfuncin de otro gen. por
ejemplo, la inactivacin del represor transcripcional en BCL11A eryth-
clulas progenitoras roid podan reactivar fetal expresin -globina a compen-
sate a favor o contrarrestar una cadena -globina disfuncional en -talasemia o
la enfermedad de clulas falciformes, respectivamente
79
. Sin embargo, una mayor eficiencia de biallico
Se requiere nocaut para cumplir con estos objetivos, cuando no existe un
mecanismo por
que para amplificar selectivamente las clulas modificadas genticamente.
Edicin gen se vuelve an ms ambicioso cuando se pretende sustituir
una secuencia diana con una versin exgena de eleccin mediante la
explotacin de la
reparacin de homologa dirigida (IDH) y la va de ADN DSBs. Conseguir
esto, nucleasas artificiales y un ADN exgeno homol- cojinete plantilla
OGY al sitio de destino y que comprende la nueva secuencia
76
debe ser deliv-
Ered a la clula. El enfoque tiene un gran potencial para su uso en ex vivo de
genes
la terapia debido a que la integracin dirigida de un casete de expresin en una
preseleccionado genmico 'puerto seguro'
80,81
o la in situ reconstitucin de una
gen mutante sera asegurar la expresin robusta y predecible - estrechamente
recapitulando el control de la expresin endgena en este ltimo - sin
el riesgo de mutagnesis insercional
82-84
. Varios obstculos se deben superar
antes de que estas estrategias pueden ser aprovechadas plenamente. Esto se
debe a la eficiencia
de la edicin genoma HDR-mediada sigue siendo baja en la mayora de tipos
de clulas primarias
de relevancia para la terapia gnica, tales como HSCs
82
. Adems, es un reto
para lograr la traduccin clnica segura y factible de productos de terapia celular
cuando tener que depender de la seleccin extensa y ex vivo amplificacin de
una
feweditedcellclones.ThecellularresponsetoDNADSBsvariesaccord-
ingtocelltypeandcellcycleandgrowthstatuses, andrangesfromrepair
por los diferentes caminos hacia la diferenciacin o apoptosis
85
. En general, cmo
las clulas elige entre NHEJ y HDR es poco conocido. Alternativo
mecanismos tivos para HDR que podran funcionar fuera de los S / G2-fases
del ciclo celular tambin estn surgiendo.
Multiplexado, edicin genoma objetivo ahora es fcilmente alcanzable a travs
la aplicacin de clster repita palindrmica corta interspaced regularidad
(CRISPR) /Cas9RNA-basednucleases.Thesenucleasescanberapidlyand
fcilmente adaptable toseekoutany TargetSite ADN bydesigningan RNAguide
en lugar de generar un motivo de reconocimiento de secuencia a base de
protenas para cada
objetivo
86
. En consecuencia, varias aplicaciones se han encontrado para apuntado
edicin genoma en modelos experimentales y preclnicos. Traduciendo estos
aplicaciones a la clnica sern, sin embargo, requieren evaluacin exhaustiva de
la actividad fuera del objetivo de la nucleasa seleccionado
87,88
y la optimizacin de la
terapia. Adems Gene de HDR o vectores convencionales tambin se puede
com-
combinado con la alteracin dirigida de otro gen celular para aumentar
effectorfunction, tales relievinginhibitorycheckpoints Asby al editar
Especificidad de las clulas T
89
.
Estrategias de Gene-edicin tambin se estn desarrollando para su uso en
directo en
Vivo aplicaciones, incluyendo la terapia gnica dirigida al hgado. Los estudios
en ratones
han informado de la reconstitucin de la expresin de FIX en ratones con
hemofilia B
mediante la entrega de AAV-mediada de ZFNs y una plantilla de reparacin
90
, El objetivo
interrupcin del colesterol reguladora del gen PCSK9 por mediada por AAV
entrega de CRISPR / Cas9 (Ref. 91), y la reparacin de la Fah mutacin
en tirosinemia (incapacidad para descomponer el aminocido tirosina) por
entrega plsmido hidrodinmico de CRISPR / Cas9 y una plantilla
92
.Mayor
hurdlestothefurtherdevelopmentof in vivo geneeditingincludethesafe
y la entrega clnicamente adecuada de theeditingmachinery, que debe actuar
transitoriamente sin inducir toxicidad celular y la inmunogenicidad. Todas
nucleasas artificiales actualmente en uso emplean uno o ms dominios
derivados
a partir de procariotas - en algunos casos, los patgenos bacterianos comunes o
saprfitos. Por lo tanto, cuando se entrega in vivo, hay un riesgo de que tales
nucleasas generarn o encontrarse con una inmunidad mediada por clulas
preexistentes
nidad, especialmente si se expresan en el largo plazo. Ms recientemente, una
estrategia de metas de gen-endonucleasa independiente se demostr
inmice.Atransgenewastargetedtothealbuminlocusofhepatocytesby
la administracin de un vector AAV sin promotor con homologa a la altamente
gen de la albmina transcrito
93
. Una pequea proporcin del vector integrado en
el locus albmina y lleg a ser expresada a partir de su promotor endgeno,
que elimin el requisito de los dos endonucleasas y la transferencia
de un promotor dentro del vector. La eficiencia y nismo subyacente
nismo de este y los otros tipos de vivo en la edicin de genes analizados en este
Revisin todava no se ha determinado completamente.
La terapia gnica de la retina
Los beneficios notables que la sustitucin de genes puede proporcionar a los
pacientes
con enfermedades degenerativas graves se destacaron por primera vez por el
gen de la retina
terapia. Administracin subretiniano del serotipo AAV 2 (AAV2) mediada
La primera terapia gnica para ser aprobado comercialmente en el occidental
mundo era tiparvovec alipogene (tambin conocido como Glybera). Esta
la terapia gnica del msculo dirigida virus adeno-asociado-1 basado era
autorizacin de comercializacin concedida en la Unin Europea en 2012
para el tratamiento de una forma rara de la dislipidemia familiar
121
. los
el precio de mercado se estableci recientemente en 1.000.000 (US $ 1,1
millones) por
tratamiento
122
. Si prximas terapias gnicas tambin se venden en tal
alto precio, que pondr a prueba las polticas de reembolso estndar
de los gobiernos y las compaas de seguros. Este alto precio refleja
el costo de desarrollo preclnico, fabricacin y distribucin
de la nueva medicina, en especial para ex vivo terapias gnicas, que
son altamente personalizado y requieren de fabricacin individualizada.
Sin embargo, las terapias gnicas tienen el potencial de ofrecer un sustancial,
beneficio duradero para el paciente en una sola administracin, que
puede compensar el costo del tratamiento estndar de la condicin
y sus complicaciones. Sin embargo, un solo pago por adelantado
modelo para la terapia gnica puede no ser sostenible. Los enfoques que
dividir el pago en varios aos se deben considerar,
lo cual podra estar relacionado con el xito de la terapia.
Por ejemplo, una estrategia de pago por desempeo se ha propuesto
123
que hace que el pago de las cuotas depende de la mejora
salud del paciente, segn lo determinado por los biomarcadores objetivos. Los
riesgos
luego se comparten entre el profesional de la salud y la aseguradora y
el costo del tratamiento es ms estrechamente acorde a la actual
beneficios entregados al paciente. Adems, la sostenibilidad de
terapias gnicas podran mejorarse mediante la adaptacin normativa y
requisitos de fabricacin para dar cabida a las caractersticas nicas
de estos medicamentos y facilitando su accesibilidad y
distribucin sin detrimento de su seguridad. Un plataforma- flexibles
la aprobacin y la estrategia basada en la inscripcin deben ser considerados,
especialmente en el desarrollo de terapia gnica y celular que debe
que adaptarse a cada individuo, como es el caso para la transferencia de
Los genes del receptor de antgeno de clulas T que se dirigen a neoantgenos
tumorales en
clulas T autlogas de las personas con cncer
44-47
.
CAJA 3
Pricinggenetherapy
REVISIN INSIGHT
Pgina 8
la terapia gnica en pacientes con diabetes tipo 2 amaurosis congnita de Leber
(LCA),
una distrofia retiniana hereditaria que causa la prdida de la visin a una edad
temprana, dirigido
a la mejora de la agudeza visual en varios pacientes jvenes en tres
independientes
ensayos
94-96
. Intwo de estos ensayos, los pacientes perdieron el beneficio despus de un
seguimiento
por perodo de 2-3 aos. Sin embargo, el beneficio sostenido se inform
despus de un
perodo de seguimiento similar en el tercer ensayo
97
, Que ahora ha progresado hasta
fase de pruebas III. Las razones de los diferentes resultados de estos ensayos,
todos
de los cuales se utiliza una cpside derivada de AAV2, siguen sin estar claros
98
. La progresin
naturaleza degenerativa sive de tipo 2 LCA plantea un reto para la entrega
extendido los beneficios teraputicos debido a que el pequeo nmero de
fotorreceptores
res que son rescatados por la terapia, finalmente, pueden ser superados por no
cambios clulas autnomas en el tejido. Como se ha discutido para el hgado
dirigida
terapia, tambin puede haber diferencias sutiles en el diseo vectorial y cante
fabri- que afectan el grado de in vivo la transferencia de genes, el inflamatoria
responseatthesiteofdeliveryandtheleveloftransgenereconstitutionin
clulas transducidas. La disponibilidad de AAV vectores con potencias ms
altas,
lo que permitira ms seguro aumento de la dosis y el aumento de la
transduccin, y
tropismo ms estrictas para los objetivos pertinentes, debera ayudar a superar
estas limitaciones.
Otherrelevantdevelopments
Hay varios otros avances en el campo de terapia gnica que podran
no se discutir en detalle en esta revisin. Estos incluyen aplicaciones en
enfermedades neurodegenerativas que han alcanzado la etapa clnica de
pruebas.
Por ejemplo, buena seguridad, pero limitada eficacia ha sido demostrada
durante
la entrega de transgenes al cerebro por vectores AAV o lentiviral
99-101
.
El aumento de la administeredvectordose y optimizingthevehicle, carga
y el diseo del estudio es probable que conduzca a nuevos avances.
Virus oncolticos, que infectan y matan las clulas cancerosas, han estado en la
clnica
cal uso durante algn tiempo. Aunque pueden ofrecer robusto y clnicamente
actividad anticancergena relevante, estos virus siguen siendo utilizados como
parte de
terapias de combinacin
102
. Terapias oncolticos explotan la replicacin viral y
theinduction ofan respuesta inmune contra infectedcells - condiciones
que normalmente estn desplazados en las estrategias de terapia
gnica. Curiosamente, su eficiencia
cacia es probable que sea aumentada por la adicin de una carga transgn que
mejora
la induccin de inmunidad contra el cncer
103
.
Los vectores adenovirales de origen simio tambin estn siendo evaluados por
su
capacidad para inducir la humoral y la inmunidad celular a travs de la
vacunacin:
resultados alentadores ya se han visto en las economas emergentes o
generalizada
enfermedades infecciosas que se han resistido a largo intentos convencionales
104105
.
En modelos preclnicos, la entrega basada en los genes de la terapia de
anticuerpo o
La profilaxis se est estudiando establecer un in vivo estable y robusto
fuente de gran cantidad de anticuerpos con especificidad ptima para tratar o
prevenir la infeccin
106
.
Perspectiva del futuro
La terapia gnica podra ser punto de convertirse en un importante nuevo
enfoque
para el tercer milenio, ya que su alcance se extiende mucho ms all de la de
frmacos convencionales. La terapia gnica permite la entrega selectiva de
informacin
casetes basadas en genes infor- ricos que facilitan la estable, sostenido y
la expresin regulada de agentes biolgicos. Adems, cuando se combina
con la terapia celular, resulta clulas en vehculos inteligentes para gnica
dirigida deliv-
ery. Como se ejemplifica en los estudios analizados en esta revisin, la terapia
gnica
dirige poderosos procesos biolgicos hacia los objetivos de la enfermedad de
correccin
cin, reparacin y regeneracin de tejidos. Por ejemplo, la estabilidad, la
fidelidad y
amplificacin de la teraputica entregado puede ser garantizada por
transferibles
informacin de anillo por mecanismos genticos. El homing y trfico
basan gen de mecanismos de las clulas en el cuerpo humano se pueden utilizar
para apuntar
la teraputica a los tejidos especficos y sitios de la enfermedad. La terapia
gnica tambin hace
utilizar el potencial regenerativo de las clulas madre y trasplante, as
como el arma biolgica de la inmunidad, que se explota para la especfica
eliminacin de clulas transformadas o infectadas. Al tomar ventaja de estos
capacidades incorporadas biolgicos, la terapia gnica tiene el potencial para
hacer frente
las necesidades mdicas no cubiertas sustanciales tanto rara y severa comn
enfermedades, lo que beneficiar tanto a los pacientes y - ms ampliamente - la
sociedad.
Los principales retos que an deben ser abordados antes de que esta promesa
puede ser
dio cuenta. Por ejemplo, la eficacia y seguridad de los vectores de transferencia
de genes
debe beimproved byfurtherengineering theirdesignandcomposition,
que podra incluir la combinacin de las caractersticas biolgicas de diferentes
virus
con molculas sintticas. Estos avances permitirn vectores para apuntar TIS
Sues y tipos de clulas, precisamente,
64,73,107
Y superar las restricciones de celulares en
la transduccin de genes y los sensores de derivacin de cidos nucleicos
exgenos. Ellos
tambin ayudar a vectores para evitar la activacin de la inmunidad innata y
adaptativa
sistema. En general, los cambios tambin se asegurar de que la expresin del
transgen es
reproducible y robusto, se produce durante un perodo prolongado y se asemeja
mucho
el patrn de expresin endgena (cuando la sustitucin de genes es per-
formado). Las mejoras en la fabricacin de vector y caracterizacin
permitir a la normalizacin y la evaluacin comparativa de vectores persona
rendimiento entre los ensayos. La tasa y la especificidad de in situ gen
correccin
cin y la edicin, la integracin de los vectores en los puertos genmicas
seguros, y
especfica de alelo silenciamiento por nucleasas artificiales y modificadores
epigenticos
representan nuevas oportunidades para mejorar las estrategias de terapia gnica.
Conocimiento ms profundo de la patognesis de la enfermedad en heredada,
multignica
o condiciones adquiridas permitirn el desarrollo de nuevos genes basados-
estrategias de tratamiento. Debido a que las transferencias de genes emplean
"en vivo" medicamentos biolgicos
de complejidad sin precedentes que tienen el potencial para inducir extendida
efectos sobre los pacientes y sus lneas germinales, la vigilancia a largo plazo y
pre-
se deben tomar mientras se promovi el uso de medidas cautelares.
Por otra parte, la corriente - Limited - comprensin de la regulacin de la madre
clulas, regeneracin de tejidos y la respuesta inmune puestos de control de
restricciones
la capacidad de intervencin y plantea inquietudes sobre la desfavorable
efectos de la manipulacin.
Desde un punto de vista clnico, la entrega de noche de genes y clulas tera-
llamadas empanadas de conocimientos multidisciplinarios y, en algunos casos,
celular avanzada
procesamiento en el sitio de tratamiento clnico. Lecturas biolgicos tambin
deben estar
desarrollado para controlar la seguridad y eficacia de las terapias. A medida que
el primer gen
terapias progresan desde el registro hasta la comercializacin, tanto de la
farmacutica
organismos del sector y regulatorios estn siendo contratados para ayudar a
definir apropiado
comi estndares de calidad formanufacturing y descarga, y para construir
adecuada
tuberas para el suministro de este tipo de terapias altamente
personalizados. Desde un social
punto de vista, la complejidad y el coste de fabricacin y suministro de "en
vivo"
medicamentos biolgicos en los sistemas de atencin de salud convencionales
desafiarn el
sostenibilidad de estas terapias y requiere creativa de reembolso de costes
polticas que permitan a todos los pacientes se beneficien de ellas (Cuadro 3).
Por ltimo, desde un punto de vista tico, es importante considerar si
medicina debe rendirse a la regla de la tecnologa o de comprometerse a una
mayor
directivo responsable del curso del progreso. Por ejemplo, las avenidas
que se estn abriendo a la intervencin de technologiescould emergente
socavar nuestra auto-percepcin y la autodeterminacin como terminamos
vista-
ing nosotros mismos como el producto evolutivo de ADN que se ha convertido
auto
consciente y puede editar en s para dar forma a su progenie como y cuando
desea.
La peticin de una moratoria en la aplicacin de edicin de genoma de la lnea
germinal humana
clulas destacados prximos dilemas ticos
108109
. Ciencia pudo dar vuelta
de nuevo a las antiguas races de la cultura occidental para aprender de su
sabidura,
tales como el "Concete a ti mismo" inscripcin en el Templo de Apolo en Del-
phi en la antigua Grecia - una advertencia para reconocer nuestros
lmites. Losofa moderna
filo- nos ha capacitado para ejercer la crtica al evaluar la verdad y
certeza del conocimiento, que se limita a priori y permite el aprendizaje
relaciones y hacer predicciones, pero no el descubrimiento de la naturaleza de
cosas. Esas predicciones nos permiten desarrollar estrategias que pueden aliviar
el sufrimiento humano de la enfermedad, proporcionando de esta manera
nuestros esfuerzos con un
translationalframeworkthatcanguideourchoicesandjustifythemfrom
un punto de vista tico.

Recibido el 15 de abril; aceptado 24 de agosto 2015.
1.
Naldini, L. Ex vivo transferencia de genes y la correccin en terapias basadas
en clulas. Naturaleza
. Rev. Genet 12, 301 hasta 315 (2011).
2.
Hacein-Bey-Abina, S. et al. Eficacia de la terapia gnica para ligada al
cromosoma X severa
de inmunodeficiencia combinada. N. Engl. J. Med. 363, 355-364 (2010).
3.
Aiuti, A. et al. La terapia gnica para la inmunodeficiencia debido a la
adenosina desaminasa
deficiencia. N. Engl. J. Med. 360, 447-458 (2009).
4.
Ferrua, F., Brigida, I. & Aiuti, A. Actualizacin sobre la terapia gnica para la
adenosina
de inmunodeficiencia combinada severa-desaminasa
deficiente. Curr. Opin. Alergia
Clin. Immunol. 10, 551-556 (2010).
RESEA
VISIN
Pgina 9
5.
Fischer, A., hacein-Bey-Abina, S. & Cavazzana-Calvo, M. 20 aos de gen
terapia para la SCID. Naturaleza Immunol. 11, 457-460 (2010).
Una revisin exhaustiva de los potenciales teraputicos, riesgos y
limitaciones de
Terapia gnica SCID utilizando -RV por algunos de sus pioneros HSC-
basada; ver tambin
rbitros 3 y 7.
6.
Gaspar, HB et al. Terapia gnica de clulas madre hematopoyticas de
adenosina
de inmunodeficiencia combinada severa-deaminasa deficiente conduce a largo
plazo
recuperacin inmunolgica y la correccin
metablica. Sci. Transl. Med. 3, 97ra80
(2011); errata 5, 168er1 (2013).
7.
Gaspar, HB et al. Persistencia a largo plazo de un repertorio de clulas T
policlonal despus
la terapia gnica para la inmunodeficiencia combinada grave ligada al
cromosoma X. Sci. Transl. Medicina.
3, 97ra79 (2011).
8.
Boztug, K. et al. Terapia gnica de clulas madre para el sndrome de Wiskott-
Aldrich.
N. Engl. J. Med. 363, desde 1918 hasta 1927 (2010).
9.
Candotti, F. et al. La terapia gnica para la adenosina desaminasa-deficiente
severa
de inmunodeficiencia combinada: comparacin clnica de vectores retrovirales
y
tratamiento planes. Sangre 120, desde 3635 hasta 3.646 (2.012).
10. Kang, EM et al. Terapia gnica Retrovirus para granulomatosa crnica
ligada al cromosoma X
enfermedad puede lograr la correccin estable a largo plazo de la actividad
oxidasa en perifrico
sangre neutrfilos. Blood 115, setecientos ochenta y tres-setecientos noventa y
un (2.010).
11. hacein-Bey-Abina, S. et al. Insercional oncognesis en 4 pacientes despus
retrovirus-
la terapia gnica mediada de SCID-X1. J. Clin. . Invertir 118, 3.132-3.142
(2008).
12. Howe, SJ et al. Mutagnesis insercional combinado con somtica adquirida
mutaciones provoca la leucemia despus de la terapia gnica de los pacientes
SCID-X1.
J. Clin. . Invertir 118, 3143 a 3150 (2.008).
13. Stein, S. et al. La inestabilidad genmica y mielodisplasia con monosoma
7
como consecuencia de la activacin EVI1 despus de la terapia gnica para
granulomatosa crnica
enfermedad. Naturaleza. Med 16, 198-204 (2010).
14. Braun, CJ et al. La terapia gnica para el sndrome de Wiskott-Aldrich
sndrome largo plazo
eficacia y genotoxicidad. Sci. Transl. Med. 6, 227ra233 (2014).
15. Kang, HJ et al. Terapia gnica retroviral para granulomatosa crnica ligada
al cromosoma X
enfermedad: los resultados de la fase I / II de prueba. Mol. Ther. 19, 2092-2101
(2011).
16. Aiuti, A. et al. Lentiviral la terapia gnica de clulas madre
hematopoyticas en pacientes con
Wiskott-Aldrich sndrome. Ciencia 341, 1.233.151 (2013).
En este estudio, el vector de insercin analiza en pacientes muestran datos
que necesite
mejora de la seguridad de los vectores lentivirales en comparacin con
gamma-RVs mientras que el logro de manera similar
correccin eficaz de la enfermedad; vase tambin ref. 17.
17. hacein-Bey Abina, S. et al. Resultados despus de la terapia gnica en
pacientes con
sndrome de Wiskott-Aldrich severa. J. A.m. Medicina. . Assoc 313, 1550-63
(2015).
18. hacein-Bey-Abina, S. et al. Un vector -retrovirus modificado para ligada
al cromosoma X severa
de inmunodeficiencia combinada. N. Engl. J. Med. 371, 1407 a 1417 (2014).
19. Cavazzana-Calvo, M. et al. La independencia de Transfusin
y HMGA2 activacin
despus de la terapia de genes de -talasemia humana. Naturaleza 467, 318-
322 (2010).
20. Cartier, N. et al. Madre hematopoyticas terapia gnica de clulas con un
vector lentiviral en
Ligada al cromosoma X adrenoleucodistrofia. Ciencia 326, desde 818 hasta
823 (2009).
El primer ensayo de terapia gnica HSC realizado con vectores lentivirales
espectculos
datos que necesite estable transduccin de HSC, con la seguridad a largo
plazo y
eficacia revela en el documento de seguimiento (ver ref. 21).
21. Cartier, N. et al. Lentiviral terapia gnica de clulas hematopoyticas para
ligada al cromosoma X
adrenoleucodistrofia. Methods Enzymol. 507, 187-198 (2012).
22. Biffi, A. et al. Lentivirales de genes de clulas madre hematopoyticas
beneficios de la terapia
leucodistrofia metacromtica. Ciencia 341, 1.233.158 (2013).
Este estudio pone de relieve el potencial de la ingeniera gentica mediante
la consecucin de la
la reconstitucin de la hematopoyesis estable en el que hasta 90% de las
clulas son gen
corregida y sobreexpresan el transgn, que proporciona un beneficio
teraputico
cuando el trasplante de HSC convencional es menos satisfactoria.
23. Notarangelo, LD et al. Inmunodeficiencias primarias:. 2009
actualizacin J. Alergia
Clin. Immunol. 124, 1161-1178 (2009).
24. Kemp, S., Berger, J. & Aubourg, P. adrenoleucodistrofia X-ligados: clnico,
metablicos, genticos y aspectos fisiopatolgicos. Biochim. Biophys. Acta
1822, 1465 hasta 1474 (2012).
25. Gieselmann, V. & Krageloh-Mann, I. leucodistrofia metacromtica-an
actualizacin. Neuropediatra 41, 1-6 (2010).
26. Gennery, AR et al. El trasplante de clulas madre hematopoyticas y largo
plazo
la supervivencia de las inmunodeficiencias primarias en Europa: entrar en un
nuevo siglo, hacer
hacemos mejor? J. Allergy Clin. Immunol. 126, 602-610 (2010).
27. Krgeloh-Mann, I. et al. Menores leucodistrofia metacromtica 10 aos
despus
trasplante en comparacin con una cohorte no trasplantado. Trasplante de
Mdula sea.
48, 369-375 (2013).
28. Copelan, EA hematopoyticas trasplante de clulas madre. N. Engl. J.
Med. 354,
1813-1826 (2006).
29. Biffi, A. et al. Correccin de leucodistrofia metacromtica en el modelo de
ratn
por el trasplante de clulas madre hematopoyticas genticamente
modificadas. J. Clin.
Invest., 113, 1118-1129 (2004).
30. Biffi, A. et al. La terapia gnica de reveses leucodistrofia metacromtica
daos y dficits neurolgicos en ratones. J. Clin. . Invertir 116, 3070 a 3082
(2.006).
31. Capotondo, A. et al. Cerebral acondicionado es instrumental para microglia
xito
reconstitucin tras trasplante de progenitores hematopoyticos. Proc. Natl
Acad. Sci. EE.UU. 109, desde 15.018 hasta 15.023 (2012).
32. Mingozzi, F. & High, KA teraputica in vivo la transferencia de genes de
enfermedades genticas
usando AAV:. avances y desafos. Rev. Nature Genet 12, 341-355 (2011).
33. Nayak, S. y Herzog, RW Avances y perspectivas: la respuesta inmune a
virus
vectores. Ther gnica. 17, 295 hasta 304 (2010).
34. Mingozzi, F. y alta, las respuestas inmunitarias a KA vectores AAV:
superacin
barreras para la terapia gnica exitosa. Sangre 122, 23-36 (2013).
35. Grieger, JC & Samulski, vectorologa virus asociado a adeno RJ,
fabricacin,
y aplicaciones clnicas. Mtodos. Enzymol 507, 229-254 (2012).
36. Alta, KH, Nathwani, A., Spencer, T. & Lillicrap, D. Situacin actual de la
hemofilia
terapia gnica. Hemofilia 20 (supl. 4), 43-49 (2014).
37. Berntorp, E. & Shapiro, AD cuidado de la hemofilia
Moderno. Lancet 379, 1447-
1456 (2012).
38. Manno, CS et al. Transduccin exitosa de hgado en la hemofilia por AAV-
Factor
IX y las limitaciones impuestas por la respuesta inmune. Anfitrin Nature
Med. 12,
342 a 347 (2006); errata 12, 592 (2006).
Los primeros datos clnicos que demuestran la seguridad y la eficacia
potencial de Livermore
dirigida la transferencia de genes de AAV, que fue derogada por una
inesperada inmunolgico
respuesta contra cpsides virales (como se detalla en la ref. 39).
39. Mingozzi, F. et al. CD8
+
Respuestas de clulas T a la cpside del virus adeno-asociado en
los seres humanos. Naturaleza Med. 13, 419-422 (2007).
40. Nathwani, AC et al. Seguridad y la eficacia de la terapia de gen del factor
IX en a largo plazo
hemofilia B. N. Engl. J. Med. 371, 1994 hasta 2004 (2014).
Este ensayo basado en AAV8 fue el primero en reportar la expresin FIX
estable en teraputica
los niveles y tambin primero para superar el efecto perjudicial de la
inmunolgico
respuesta a cpsides virales por la administracin de corticosteroides.
41. Rosenberg, SA y Restifo, transferencia celular adoptiva NP como
personalizada
La inmunoterapia para el cncer humano. Ciencia 348, 62-68 (2015).
Un examen exhaustivo de la evolucin clnica y, potencialmente,
impacto transformador de la terapia de clulas T adoptiva sobre el cncer
por uno de sus
pioneros; vase tambin ref. 42.
42. Maus, MV et al. Inmunoterapia adoptiva para el cncer o
virus. Annu. Acelerar.
Immunol. 32, 189-225 (2014).
43. Dudley, ME et al. Regresin del cncer y la autoinmunidad en pacientes
despus
repoblacin clonal con linfocitos antitumorales. Ciencia 298, 850 a 854
(2.002).
44. Gubin, MM et al. Bloqueo Checkpoint objetivos de inmunoterapia del
cncer
antgenos mutantes especficos de tumores. Naturaleza 515, 577 hasta 581
(2014).
45. Yadav, M. et al. Prediccin de mutaciones tumorales inmunognicos
mediante la combinacin de masa
espectrometra y la secuenciacin del exoma. Naturaleza 515, 572 a 576
(2014).
46. Schumacher, TN y Schreiber, RD neoantgenos en la inmunoterapia del
cncer.
Ciencia 348, 69-74 (2015).
Una revisin oportuna sobre el origen y la naturaleza de neoantgenos
tumorales y cmo
pueden ser identificados y potencialmente explotados para la terapia
gnica de clulas T especfica en
el entorno clnico.
47. Rizvi, NA et al. Inmunologa del cncer. Paisaje mutacional determina
sensibilidad a PD-1 bloqueo en el cncer de pulmn de clulas no
pequeas. Ciencia 348,
124-128 (2015).
48. Hunder, NN al. Et tratamiento del melanoma metastsico con CD4 autlogo
+
T
las clulas contra NY-ESO-1. N. Engl. J. Med. 358, 2698 a 2703 (2.008).
49. Johnson, LA et al. La terapia gnica con los receptores de clulas T
humanas y de ratn
media la regresin del cncer y se dirige a los tejidos normales que expresan
cognado
antgeno. Sangre 114, 535-546 (2009).
50. Robbins, PF et al. Una prueba piloto utilizando linfocitos genticamente
modificados con
un NY-ESO-1-reactiva receptor de clulas T: a largo plazo de seguimiento y se
correlaciona con
respuesta. Clin. Cancer Res. 21, 1.019-1.027 (2015).
51. Kochenderfer, JN et al. Difuso de clulas B grandes-quimioterapia
refractarios
linfoma de clulas B y indolente tumores malignos pueden ser tratados
eficazmente con
clulas T autlogas que expresan un receptor de antgeno quimrico anti-
CD19. J. Clin.
Oncol. 33, desde 540 hasta 549 (2015).
52. Brentjens, RJ et al. Las clulas T CD19 orientada inducen rpidamente
remisiones moleculares
en adultos con leucemia linfoblstica aguda por la quimioterapia
refractario. Sci.
Transl. Med. 5, 177ra38 (2013).
53. Maude, SL et al. Las clulas T del receptor de antgeno quimrico para
remisiones sostenidas en
leucemia. N. Engl. J. Med. 371, 1507/17 (2014).
54. Lee, DW et al. Clulas T que expresan receptores de antgeno quimrico
CD19 para aguda
leucemia linfoblstica en nios y adultos jvenes: una fase 1 de la dosis
escalada juicio. Lancet 385, 517-528 (2015).
55. junio, CH, Riddell, SR & Schumacher, TN terapia celular adoptiva: una
carrera
a la lnea de meta. Sci. Transl. Med. 7, 280ps7 (2015).
56. Biffi, A. et al. Vector lentiviral sitios de integracin comunes en modelos
preclnicos
y un ensayo clnico refleja un sesgo benigna integracin y no la seleccin
oncognico.
Blood 117, 5.332 hasta 5339 (2011).
57. Deichmann, A. et al. Sitios de insercin en clulas injertadas agrupar dentro
de un limitado
repertorio de reas genmicas despus de la terapia gnica vector
gammaretroviral. Mol.
Ther. 19, 2031 a 2.039 (2.011).
58. Doulatov, S., Notta, F., Laurenti, E. & Dick, JE Hematopoyesis: un ser
humano
perspectiva. Cell Stem Cell 10, 120-136 (2012).
59. Gattinoni, las clulas de memoria L. T unirse oficialmente el club de clulas
madre. Inmunidad 41, 09/07
(2014).
60. Cieri, N. et al. IL-7 e IL-15 instruir la generacin de madre memoria
humana T
las clulas de los precursores ingenuos. Sangre 121, 573 hasta 584 (2013).
61. Biasco, L. et al. En vivo seguimiento de las clulas T en los seres humanos
revela la supervivencia de una dcada
y la actividad de las clulas madre T de memoria modificados
genticamente. Sci. Transl. Med. 7,
273ra13 (2015).
62. Asokan, A., Schaffer, DV y Samulski, RJ El vector AAV kit de
herramientas: a punto en el
encrucijada clnicos. Mol. Ther. 20, 699 a 708 (2012).
63. Mingozzi, F. et al. La superacin de la inmunidad humoral preexistente para
el uso de AAV
seuelos de la cpside. Sci. Transl. Med. 5, 194ra92 (2013).
64. Lisowski, L. et al. Seleccin y evaluacin de AAV clnicamente relevante
variantes en una
modelo de hgado de xenoinjertos. Naturaleza 506, 382-386 (2014).
65. La terapia Kohn, DB Gen supera haplo para SCID-X1. Sangre 125, 3,521
mil a 3.522 mil
(2015).
66. Logan, AC, Weissman, IL y Shizuru, JA El camino hacia hematopoyticas
purificadas
trasplantes de clulas madre est pavimentado con anticuerpos. Curr. Opin. .
Immunol 24,
640-648 (2012).
REVISIN INSIGHT
Pgina 10
67. Provasi, E. et al. Edicin de especificidad de las clulas T hacia la leucemia
por el dedo de zinc
nucleasas y la transferencia de genes lentiviral. Nature Med. 18, 807-815
(2012).
68. Torikai, H. et al. Una base para universal de la inmunoterapia basada en
clulas T:
Las clulas T diseadas para expresar un antgeno-receptor quimrico-CD19
especfica
y eliminar la expresin de TCR endgeno. Blood 119, 5.697 hasta 5.705
(2012).
69. Sharma, P. & Allison, JP El futuro de la terapia puesto de control
inmunolgico. Ciencia
348, 56-61 (2015).
70. Li, H. et al. Evaluar el potencial de AAV vector genotoxicidad en una
murino
modelo. Sangre 117, desde 3.311 hasta 3.319 mil (2011).
71. Chandler, RJ et al. Influencias de diseo vectorial genotoxicidad heptica
despus de adenovirus
terapia gnica virus asociado. J. Clin. . Invertir 125, 870-880 (2015).
72. Nault, J.-C. et al. Mutagnesis de insercin relacionadas con el AAV2
recurrente en humanos
carcinomas hepatocelulares. Nature Genet. http://dx.doi.org/10.1038/ng.3389
(2015).
73. Martino, AT et al. Engineered vector AAV minimiza in vivo focalizacin
de
hepatocitos transducidos por CD8-cpside especfica
+
Clulas T. De sangre 121, 2224-
2233 (2013).
Virus adeno-asociado 74. Kotterman, MA y Schaffer, DV Ingeniera para
terapia gentica clnica. Naturaleza Rev. Genet. 15, 445-451 (2014).
75. Cantore, A. et al. Terapia gnica lentiviral hgado dirigida en un modelo de
perro de
hemofilia B. Sci. Transl. Med. 7, 277ra28 (2015).
76. Cox, DB, Platt, RJ y Zhang, edicin genoma Teraputico F.: perspectivas y
desafos. Naturaleza Med. 21, 121-131 (2015).
77. Tebas, P. et al. Edicin gnica de CCR5 en clulas T CD4 autlogas de
personas
infectadas con el VIH. N. Engl. J. Med. 370, desde 901 hasta 910 (2014).
La primera prueba clnica de la interrupcin dirigida de genes que mostr
la seguridad,
persistencia y la supervivencia ventaja de las clulas T que han sido
genticamente
editado para la resistencia al VIH-1.
78. Li, L. et al. Edicin genmico del VIH-1 correceptor CCR5 en adultos
madre hematopoyticas y clulas progenitoras mediante nucleasas de dedos de
zinc. Mol. El R.
21, 1.259-1269 (2013).
79. Bauer, DE et al. Un potenciador eritroide de BCL11A sujetas a la variacin
gentica
determina el nivel de hemoglobina fetal. Ciencia 342, 253 a 257 (2013).
80. Lombardo, A. et al. Integracin y adaptacin del diseo de cassette para
site-specific
la transferencia de genes sostenible. Nature Methods 8, 861 a 869 (2011).
81. Rio, P. et al. Terapia gnica dirigida y la reprogramacin celular en la
anemia de Fanconi.
EMBO Mol. Med. 6, 835 hasta 848 (2014).
82. Genovese, P. et al. Edicin genoma apuntado en repoblacin humana
Las clulas madre hematopoyticas. Naturaleza 510, 235-240 (2014).
En este trabajo se demuestra la permisividad diferencial genoma dirigida
edicin en clulas madre y progenitoras hematopoyticas y proporciona
una prueba de
concepto para el in situ correccin de mutaciones SCID-X1 en HSCs.
83. Hoban, MD et al. Correccin de la mutacin en la enfermedad de clulas
falciformes humana
hematopoytica tallo / clulas progenitoras. Sangre 125, 2.597-2604 (2015).
84. Osborn, MJ et al. Fanconi edicin gen anemia por el sistema CRISPR /
Cas9.
Tararear. Gene Ther. 26, 114-126 (2015).
85. Jasin, M. & Rothstein, R. reparacin de roturas de cadena por
recombinacin homloga.
Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 5, a012740 (2013).
86. Doudna, JA y Charpentier, edicin E. Genoma. La nueva frontera del
genoma
ingeniera con CRISPR-Cas9. Ciencia 346, 1.258.096 (2014).
En esta revisin, los investigadores que fueron pioneros en la aplicacin de
ARN guiados-
nucleasas del genoma de ingeniera muestran cmo esta tcnica
transformadora
puede hacer que la edicin del genoma especfico fcil.
87. Gabriel, R. et al. Un anlisis de todo el genoma imparcial de nucleasa dedo
de zinc
especificidad. Naturaleza. Biotechnol 29, desde 816 hasta 823 (2011).
88. Tsai, SQ et al. GUA-ss permite perfiles de todo el genoma de la escisin
fuera del objetivo
por nucleasas CRISPR-Cas. Nature Biotechnol. 33, 187-197 (2015).
89. Beane, JD et al. Dedo de zinc de edicin gen de la nucleasa mediada escala
clnica
de PD-1 en linfocitos infiltrantes de tumor para el tratamiento de metstasis
melanoma. Mol. Ther. 23, 1380 hasta 1390 (2015).
90. Li, H. et al. In vivo edicin genoma restaura la hemostasia en un modelo de
ratn de
hemofilia. Naturaleza 475, 217 a 221 (2011).
El primer estudio para demostrar la viabilidad de la edicin genoma
dirigida in vivo por
la entrega mediada por AAV de nucleasas artificiales y plantilla.
91. Ran, FA et al. In vivo edicin genoma utilizando Staphylococcus
aureus Cas9. Naturaleza
520, 186-191 (2015).
92. Yin, H. et al. Edicin genoma con Cas9 en ratones adultos corrige una
enfermedad
mutacin y el fenotipo. Nature Biotechnol. 32, 551-553 (2014).
93. Barzel, A. et al. Gen sin promotor focalizacin sin nucleasas un ali-
hemofilia B en ratones. Naturaleza 517, 360-364 (2015).
94. Simonelli, F. et al. La terapia gnica para la amaurosis congnita de Leber
es seguro y
efectiva a travs de 1,5 aos despus de la administracin del
vector. Mol. Ther. 18, 643-650
(2010).
95. Jacobson, SG et al. Mejora y disminucin de la visin con la terapia gnica
en
infancia ceguera. N. Engl. J. Med. 372, desde 1920 hasta 1,926 mil (2015).
96. Bainbridge, JW et al. Efecto a largo plazo de la terapia gnica en congnita
de Leber
amaurosis. N. Engl. J. Med. 372, 1887 hasta 1897 (2015).
97. Testa, F. et al. Tres aos de seguimiento despus de la entrega unilateral de
subretiniana
virus adeno-asociado en pacientes con Amaurosis Congnita de Leber tipo 2.
Oftalmologa 120, 1283/91 (2013).
98. Wright, AF Los efectos a largo plazo de la terapia gnica de la retina en la
ceguera infantil.
N. Engl. J. Med. 372, 1954-55 (2015).
99. Leona, P. et al. A largo plazo de seguimiento despus de la terapia gnica
para la enfermedad de Canavan. Sci.
Transl. Med. 4, 165ra163 (2012).
100.Tardieu, M. et al. La administracin intracerebral de vector viral adeno-
asociado
rh.10 serotipo que llevan SGSH humana y SUMF1 ADNc en nios con
mucopolisacaridosis tipo IIIA de la enfermedad: resultados de una fase I / II de
prueba. Hum. Gene
Ther. 25, 506-516 (2014).
101.Palfi, S. et al. La seguridad a largo plazo y la tolerabilidad de ProSavin,
una por vectores lentiviral
terapia basada en genes para la enfermedad de Parkinson: un aumento de la
dosis, de etiqueta abierta,
fase media juicio. Lancet 383, desde 1138 hasta 1146 (2014).
102.Miest, TS y Cattaneo, R. nuevos virus para la terapia del cncer: Reunin
clnica
necesidades. Naturaleza Rev. Microbiol. 12, 23-34 (2014).
103.Lichty, BD, Breitbach, CJ, Stojdl, DF & Bell, JC El ir viral con cncer
inmunoterapia. Naturaleza Rev. cncer 14, 559 hasta 567 (2014).
104.Ogwang, C. et al. Vacunacin induccin-refuerzo con adenovirus de
chimpanc y
vaccinia modificado Ankara codificacin TRAP proporciona una proteccin
parcial contra
Plasmodium falciparum infeccin en adultos de
Kenia. Sci. Transl. Med. 7, 286re5
(2015).
105.Rampling, T. et al. Una vacuna monovalente bola adenovirus de
chimpanc
-. Informe preliminar N. Engl. J. Med. http://dx.doi.org/10.1056/
NEJMoa1411627 (2015).
106.Balazs, AB et al. Inmunoprofilaxis Vectored protege a los ratones
humanizados de
mucosa transmisin del VIH. Naturaleza Med. 20, 296-300 (2014).
107.Girard-Gagnepain, A. et al. Babuino envolver pseudotyped superan LV
VSV-
G-LV para la transferencia de genes en las primeras citoquinas estimulada y
descansando. HSC Sangre
124, 1221-31 (2014).
108.Baltimore, D. et al., Biotecnologa. Un camino prudente seguir para
genmica
la ingeniera y la modificacin gentica de la lnea germinal. Ciencia 348, 36-
38 (2015).
109.Bosley, KS et al. Ingeniera de la lnea germinal CRISPR comunidad
habla.
. Nature Biotechnol 33, 478-486 (2015).
110.Baxter. Baxalta informa el progreso continuo en fase de ensayo clnico de
un medio
BAX335, investigacin tratamiento de terapia gnica para la hemofilia
B. Baxter http: //
www.baxter.com/news-media/newsroom/press-releases/2015/06_24_15_
bax335.page (2015).
111.Montini, E. et al. Madre hematopoyticas transferencia de genes de clulas
en un tumor propenso
modelo de ratn revela baja genotoxicidad de la integracin del vector
lentiviral. Naturaleza
Biotechnol. 24, 687-696 (2006).
112.Modlich, U. et al. Los ensayos de cultivo celular revelan la importancia del
vector retroviral
diseo para genotoxicidad insercin. Sangre 108, 2.545-2.553 (2006).
113.Zychlinski, D. et al. Promotores fisiolgicos reducen el riesgo genotxico
de
la integracin de vectores de genes. Mol. Ther. 16, 718 a 725 (2008).
114.Montini, E. et al. El potencial genotxico de los vectores retrovirales es
fuertemente
modulada por diseo vectorial y la seleccin del sitio de integracin en un
modelo de ratn de
Terapia gnica HSC. J. Clin. . Invertir 119, 964-975 (2009).
Este estudio preclnico destaca caractersticas importantes de diseo
vectorial que
afectar genotoxicidad y revela estrategias para aliviarla; el estudio fue
un papel decisivo en la promocin de la prueba clnica de la mejora de los
vectores (ver refs
112-113 para una in vitro de ensayo que proporciona informacin
complementaria).
115.Modlich, U. et al. Transformacin de insercin de clulas hematopoyticas
por auto-
la inactivacin de los vectores lentivirales y
gammaretroviral. Mol. Ther. 17, 1919-1928
(2009).
116.Zhou, S. et al. Un vector lentiviral de auto-inactivacin para la terapia
gnica SCID-X1 que
no activa la expresin LMO2 en las clulas T humanas. Sangre 116, 900-908
(2010).
117.Zhou, S. et al. Modelos de trasplante mouse para evaluar el riesgo
oncognico de un
XSCID vector libre inactivar lentiviral. PLoS ONE 8, e62333 (2013).
118.Baum, C., Modlich, U., Gohring, G. & Schlegelberger, B. opinin Conciso:
la gestin de genotoxicidad en la modificacin teraputica de clulas
madre. Stem Cells
29, 1479 a 1484 (2.011).
119.Amendola, M., Venneri, MA, Biffi, A., Vigna, E. & Naldini, L. Coordinar
de doble gen transgnesis lentiviral que llevan por vectores bidireccional
sinttica
promotores. Naturaleza. Biotechnol 23, 108-116 (2005).
120.Greco, R. et al. Mejora de la seguridad de la terapia celular con el gen TK-
suicidio.
Frente. Pharmacol. 6, 95 (2015).
121.Melchiorri, D. et al. Evaluacin de Regulacin de Glybera en Europa - de
dos
comits, una misin. Naturaleza Rev. Drogas Discov. 12, 719 (2013).
122.Morrison, C $ 1 milln de precio establecido para la terapia gnica
Glybera. Naturaleza
Biotechnol. 33, 217-218 (2015).
123.Brennan, TA & Wilson, JM El caso especial de los precios de la terapia
gnica. Naturaleza
. Biotechnol 32, 874 a 876 (2014).
Agradecimientos LN pide disculpas a los muchos cientficos cuyas
contribuciones
al campo no pudo ser reconocido debido a limitaciones de espacio. Agradece
pasado
y miembros actuales de su laboratorio y colegas del San Raffaele Teletn
Instituto de Terapia Gnica (TIGET) y el Instituto Cientfico San Raffaele. LN
es
Tambin agradecemos a la Fundacin Teletn, la Unin Europea (7PM y ERC),
el
Asociacin Italiana para la Investigacin del Cncer, y los ministerios italianos
de la salud y de
la investigacin cientfica para apoyar su investigacin.
Autor Informacin reimpresiones y permisos informacin est disponible en
www.nature.com/reprints. El autor declara que compiten los intereses
financieros:
ver go.nature / pnd2xw. Los lectores estn invitados a comentar sobre la versin
en lnea
de este trabajo en go.nature / pnd2xw. La correspondencia debe ser dirigida a
LN
(naldini.luigi@hsr.it).
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