Curva de calibracin para la determinacin cuantitativa de protenas

La curva de calibracin nos permite tener un patrn de forma numrica para obtener la
concentracin de la muestra de protena. De forma experimental se obtiene una relacin de
absorbancia por concentracin al analizar las muestras patrn en un espectrofotmetro que en
este caso es de UV-vis; de acuerdo a esto se espera obtener una relacin con tendencia lineal
como funcin, acorde a esto se obtendr una ecuacin por el mtodo de mnimos cuadrados para
obtener una ecuacin de la forma :

Y=mx + b

Donde y es la absorbancia, x la concentracin y b es le intercepto en y que se obtiene mediante

clculos estadstico acordes a la metodologa de mnimos cuadrados.

Se debe tener en cuenta tambin la fiabilidad de los parmetros de los mnimos cuadrados, para
ello se debe estimar las incertidumbres expresadas como deviaciones estndar de la pendiente y
de la ordenada en el origen ( todo se realiza mediante una hoja de clculo en Excel por facilidad).

De esta forma se obtiene una grfica como se muestra a continuacin como ejemplo

CURVA DE VALORACIN
250
y = 10,1277x + 1,866
200 R = 0,9948
absorvancia

150

100

50

0
0 5 10 15 20 25
CONCENTRACIN ESTANDAR

RESULTADOS DE ESTIMACION LINEAL

(MATRIZ)
PENDIENTE ORDENADA
10,1277582 1,86619939
Sm 0,32715606 3,50617809 Sb
R^2 0,99480969 5,56852177 Sy
CONCENTRACIONES
ESTNDARES (ppm) AREA UA
(X) (Y) X^2 MEDIA (Y)
1 9,98929 9,66878 10,18894 1 9,949003333
2 26,1658 26,4874 23,1853 4 25,2795
5 61,7659 50,3554 25 56,06065
7 74,5978 70,5518 72,3888 49 72,5128
10 93,7802 93,0873 100 93,43375
15 161,386 157,779 225 159,5825
20 206,7304 205,48727 199,5144 400 203,9106867
SUMA DE COLUMNAS
60 634,4154 694,41541 199,5144 804 620,72889

D=
D=
2028 2028 (Todo es calculado mediante las formulaciones estadsticas de Excel)

Asi con la formula

Y=101277x+1.866 de donde se despeja x que es la concentracin:

X=( y-1.866)/ 101277 nos proporciona la concentracin de la muestra de protena con respecto al
dato obtenido de la absorbancia de dicha muestra