COLORACIN DE GRAM

MARIA PAULA MENDOZA FRANCO

LAURA TATIANA OTLORA GUTIERREZ

UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TUNJA-BOYACA

2017
RESULTADOS

Fig. 1 Cocos Gram + (100x) Fig.2 Bacilos y Cocos Gram + (100x)

Fig.3 Cocos Gram - (100x) Fig.4 Bacilos Gram - (100x)

DISCUCIN DE RESULTADOS

En 1884 un mdico Dans, Christian Gram, desarroll un mtodo de tincin de gran utilidad en el

laboratorio de bacteriologa, denominado tincin de Gram, esta revela el conocimiento de la

estructura de las membranas bacterianas desde el aspecto fsico como su composicin molecular,

y demostraron que distingue dos bacterias de grupos diferentes; una de ellas son las Gram positivas

que presentan una capa gruesa de peptidoglicano como estructura fundamental sobre la membrana

citoplasmtica y las Gram negativas, las cuales presenta una delgada capa de peptidoglicano a la

que se superpone una capa de lipopolisacaridos-proteina, llamada membrana externa; la presencia

de esta membrana diferencia actualmente dos tipo de bacterias, las que no lo poseen las Gram

positivas y las que s, denominadas Gram negativas.

El comportamiento patgeno y en la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente, por ello

la importancia de la tincin de Gram en bacteriologa clnica, ya que permite realizar el examen

directo de muestras clnicas, logrando determinar la calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la

naturaleza, la cantidad de microrganismos presentes y el germen predominante en una infeccin

mixta o con muestras contaminadas.1

Permite correlacionar su resultado con el del cultivo y de esta manera disponer un control de

calidad. Adicionalmente, tiene valor diagnostico en muestras de lquido cefalorraqudeo y lquidos

corporales, esputo, sangre, orina, absecos y secreciones. No tiene valor diagnostico en muestras

farngeas y nasofarngeas y es de uso limitado en muestras de materia fecal, sin embargo,

desafortunadamente existen algunos grupos bacterianos en los cuales la tincin de Gram no es de

1
Espinal,G.(2005), MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA I, INTEC, Santo Domingo.
utilidad taxonmica; como son: espiroquetas, micoplasmas, micobacterias, clamidias y

rickettsias.2

En el laboratorio de microbiologa veterinaria la coloracin de gram, empez por la toma de una

colonia bacteriana, perteneciente a una muestra de leche con el asa de platino ya previamente

esterilizado y se extendi la muestra en una lmina porta objetos. Luego se lo agrego una gota de

agua destilada para fijar la muestra con calor. Ya fija la muestra se aplic cristal violeta de 2 a 3

gotas, se dej por tres minutos y se procedi a lavar con agua en un recipiente, este colorante

catinico penetra en todas las clulas bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a

travs de la pared bacteriana. Posteriormente se aplic un fijador o tambin llamada solucin

mordiente, como lo es el colorante lugol, se esper que actuara por un minuto aproximadamente

y se lav de nuevo con agua; el lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI

(yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de

mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula

bacteriana. En seguida se coloc una solucin decolorante conocida como alcohol-cetona de dos

a tres gotas y se dej por 1 minuto para que nuevamente se lavara con agua. La mezcla de alcohol-

acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, los organismos gram positivos no se

decoloran, mientras que los gram negativos s lo hacen. Por ltimo se aplic el colorante de

contraste Fucsina, que sirve de manifiesto para las bacterias gram negativas, se dej otro minuto y

se lav como en las anteriores soluciones aplicadas.

Se dej secar al aire libre y se procedi a ver la muestra en un microscopio de campo luminoso, a

un aumento de 100x con aceite de inmersin, en donde se demostr que las bacterias que fijan el

2
Manual de prcticas de laboratorio de Microbiologa y Micologa, pg. 44
violeta o color azul, se calificaron como gram positivas, y las que pierden la primera coloracin y

retienen la segunda, se les denominaron gram negativas, es decir, presentan una coloracin roja

tirando a fucsia. Adems permiti identificar varios morfotipos distintos como los cocos que son

de forma esfrica y que estos pueden aparecer aislados despus de la divisin celular (micrococos),

aparecer por pares (diplococos), formar cadenas (estreptococos), o agruparse de manera irregular

(estafilococos) y los bacilos que poseen una forma alargada.

Esta tcnica de laboratorio permiti identificar distintos tipos de bacterias, basndose en las

diferencias de las paredes celulares de las gram positivas y gram negativas, en donde cada una de

las superficies tomo un color correspondiente. Como conclusin, demostr que puede aportar

informacin muy til y rpida, para orientar el tratamiento, con el uso de antibiticos, tal como lo

afirma Espinal G.
Referencias