UNIVERSIDAD DE SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS FSICAS Y NATURALES

LABORATORIO DE BIOCIENCIAS SALUD
PRCTICA 7
MICROSCOPIA

1. INTRODUCCIN

El microscopio ptico es un instrumento que permite aumentar las imgenes de especmenes y

diferentes tipos de clulas tanto animales, vegetales como de microorganismos. En las ltimas
dcadas se ha incrementado la aplicacin de la microscopa ptica en los laboratorios de
investigacin de variadas disciplinas como la biologa celular y molecular, microbiologa,
inmunologa y virologa. El rpido desarrollo de diferentes mtodos como los de fluorescencia,
contraste de fases, confocal y de campo oscuro entre otros, que, sumados a los avances en la
digitalizacin y anlisis de imgenes, han permitido obtener resultados rpidos, cuantificables y
confiables de una gran variedad de especmenes biolgicos. Al margen de estos avances, las
bases del funcionamiento de los distintos tipos de microscopios pticos siguen siendo los
mismos que se presentan en esta prctica y con los cuales el estudiante deber familiarizarse.

1.1. Clases de microscopios.

Existen dos tipos de microscopios pticos

Microscopios simples: Constan de un solo sistema de lentes.
Microscopios compuestos: Constan de dos (2) sistemas de lentes: el objetivo y el ocular.

El microscopio compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagen de

los objetivos que en l se observan. Entre las variedades de ste microscopio encontramos el
electrnico y el fotnico u ptico; este ltimo, est formado por un sistema mecnico y un
sistema ptico.

1.2. Sistema mecnico.

Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo de las dems

piezas del microscopio. El pie debe ser slido y pesado para asegurar su estabilidad.

Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostiene la
platina y el condensador y de ella se agarrar el microscopio cuando se traslada durante los
trabajos. En algunos microscopios la columna es mvil

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 Tubo del Ocular: Est colocado en la parte superior del microscopio, donde estn
acoplados los oculares, que pueden tener movimiento vertical, con ayuda de una cremallera
sobre la columna. En algunos microscopios el tubo del ocular es inclinado y se mantiene fijo,
en este caso se mueve la platina.

Revlver o Disco Giratorio: Est debajo del tubo ocular donde estn acoplados los
objetivos, presenta movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.

Platina: Es una placa que puede ser cuadrada, circular o rectangular, con un orificio central
que permite el paso de la luz a travs de ella. Su funcin es sostener las placas con los
preparados biolgicos que se van observar.

Carro: es un dispositivo ubicado sobre la platina, cuya funcin es sujetar y mover la placa
que se va a estudiar. Posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales (hacia
adelante, hacia atrs, hacia la derecha y hacia la izquierda) del portaobjeto. Cuando la
platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar las placas llamadas
ganchos.

Tornillo Macromtrico: Acerca o aleja rpidamente el objetivo del preparado a observar;

su funcin es lograr un enfoque ms o menos claro o aproximado del objeto.

Tornillo Micromtrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente, casi
imperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del ocular.
Durante la observacin y enfoque este tornillo debe estarse moviendo permanentemente; su
funcin es darle nitidez al enfoque.

1.3. Sistema ptico.

Objetivos: Son las piezas ms importantes del microscopio. Ellos se acoplan mediante
roscas estndar al revlver y pueden ser cambiados de posicin con slo rotarlos. Reciben
el nombre de objetivos porque son los lentes que estn ms cerca del objeto. Las lentes de
los objetivos son de aumentos diversos, los ms usados son: Objetivos de pequeos
aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de grandes aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos
de inmersin 90x, 95x y 100x. Los objetivos de inmersin se emplean con aceite de
inmersin para conectar la lente frontal (lente inferior del objetivo) al porta-objeto. Entre el
objetivo y el objeto se produce una prdida de luz por reflexin que se corrige adicionando
al preparado unas gotas de aceite de cedro (aceite de inmersin) cuyo ndice de refraccin
1.515, es prximo al cristal. Este aceite tambin reduce o suprime por completo la refraccin
de los rayos de luz provenientes de la fuente luminosa.

Oculares: Estn colocados en la parte superior del tubo ocular. Estn formados por dos
sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Su finalidad es aumentar la imagen dada por
el objetivo y eventualmente corregir algunos defectos de la misma. Reciben dicho nombre
porque son las lentes que se encuentran ms cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x;
10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x.

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 Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es natural (solar) o procede de un foco
luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del medio y la refleja a travs
del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un bombillo
ubicado en el microscopio y conectado a un circuito elctrico de bajo voltaje.

Diafragma: Est ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamente debajo

de la platina, su funcin es regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. El diafragma
tiene una palanca que al moverla hacia delante o hacia atrs aumenta o disminuye el orificio
central, dejando pasar mayor o menor cantidad de luz respectivamente.

Condensador: Es un elemento cnico que posee un sistema de dos lentes convergentes

que condensa el haz de luz para enviarlos al objetivo por el agujero de la platina. Existe un
tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduacin es
importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), porque en la
medida que se trabaja con stos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrario sucede
cuando se trabaja con objetivos de menor aumento (4x, 10x).

Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos microscopios existe un portafiltros

en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros son elementos de
cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde.

1.4. Microscopio estereoscopio.

El microscopio estereoscpico (o estereoscopio) es un binocular con aumentos de 4 a 40 veces,

que permite observar muestras opacas y realizar disecciones de estructuras en organismos
pequeos, ya que en l puede manipularse la muestra mientras se observa. Consta de dos
tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para
observaciones que requieren pequeos aumentos. Se utiliza para ofrecer una imagen
estereoscpica (3D) de la muestra; para ello, y como ocurre en la visin binocular convencional,
es necesario que los dos ojos observen la imagen con ngulos ligeramente distintos.
Obviamente todos los microscopios estereoscpicos, por definicin, deben ser binoculares (con
un ocular para cada ojo), por lo que a veces se confunden ambos trminos.

El microscopio estereoscpico es apropiado para observar objetos de tamaos relativamente

grandes, por lo que no es necesario modificar los objetos a ver, (laminar) ni tampoco lo es que
la luz pase a travs de la muestra. Este tipo de microscopios permiten distancias que van desde
un par de centmetros a varios de ellos, desde la muestra al objetivo, lo que lo hace muy til en
botnica, mineraloga, industria, (microelectrnica), medicina (microscopios quirrgicos) e
investigacin, fundamentalmente en aplicaciones que requieren manipular el objeto visualizado
(donde la visin estereoscpica es esencial) como macroinvertebrados.

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 1.5. Para realizar observaciones en el microscopio tenga en cuenta:

Aleje el objetivo de la platina y coloque el lente de menor aumento (4x).

Abra las pinzas del carro que se encuentran sobre la platina y coloque la preparacin
con el cubreobjeto hacia arriba y ajstela.
Ubique el carro de modo que la regin a observar quede justo en el orificio de la platina.
Utilice el tornillo macromtrico para acercar el lente a la preparacin. Cuando logre un
enfoque aproximado utilice el tornillo micromtrico (girarlo lentamente hacia adelante)
para ajuste de precisin.
Para cambiar el aumento, gire el revlver y seleccione el nuevo objetivo a utilizar.

1.6. Disposicin del microscopio al terminar las observaciones:

Una vez finalice las observaciones debe tener en cuenta:

Apagar la lmpara del microscopio.

Verificar que los oculares y los objetivos estn limpios y secos.
Dejar el revolver en objetivo de menor aumento (4x o 5x).
Enrollar el cable del microscopio alrededor del brazo.

Tema de consulta: Defina los siguientes trminos: Resolucin, definicin, poder de

magnificacin, campo de visin

2. COMPETENCIAS

Adquirir conocimiento y destreza en el uso del microscopio como herramienta elemental

en investigacin
Preparar adecuadamente las muestras a observar en el microscopio ptico y
estereoscopio

3. LISTA DE MATERIALES

Materiales y equipos Reactivos Materiales que trae el estudiante

Microscopio ptico Lugol Implementos de seguridad

Estereoscopio Solucin limpiadora Laminas portaobjeto y cubreobjeto
Laminas de lentes (Xilol) 1 cebolla, preferiblemente roja (una para
portaobjeto todo el grupo)
Laminas Hilos de colores
cubreobjeto 1 Hoja de papel peridico y
Tijeras (DEBE SER Azcar (1 sobre)
TRAIDO POR CADA
GRUPO DE TRABAJO)
Papel de arroz

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4. PROCEDIMIENTO

4.1 Identificacin de las partes del microscopio:

Identifique las partes del microscopio compuesto.

A H
B I
C J
D K
E L
F M
G N

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4.2: Montaje o preparado de letras (poder de magnificacin)

1. Seleccione una letra (d, b, p o g) de peridico que tenga un tamao mediano, sobre una lmina
portaobjetos deje caer una gota de agua en el centro de la placa, ubique la letra sobre la gota
de agua, cubra la letra con una lmina cubreobjetos formando un ngulo de 45 grados entre
el portaobjetos y el cubreobjetos. Djelo caer lentamente para evitar la formacin de burbujas
en la placa.
2. Coloque la placa ya preparada sobre la platina de tal manera que quede bien ajustada.
Enfoque con el objetivo de 4X utilizando el tornillo macromtrico. Abra el diafragma hasta que
obtenga una buena iluminacin de la muestra. Utilice el tornillo micromtrico para obtener
mayor nitidez, dibuje lo que observa en el espacio asignado para esto en los resultados.
Luego gire lentamente el revlver para colocar el objetivo 10X. Utilice el tornillo micromtrico
para obtener una imagen ntida. No utilice el tornillo macromtrico; ste no es necesario si
usted enfoc correctamente con el objetivo de 4X. Si se requiere abra un poco el diafragma
para aumentar la entrada de luz.
3. Dibuje lo que observa en el objetivo de 10X. Repita la operacin con el lente de 40X. Al
terminar su observacin gire lentamente el revlver y coloque el objetivo de 4X, ahora realice
desplazamientos del microscopio de izquierda a derecha y luego de arriba abajo.

Observe con atencin que pasa con los movimientos que realiza y que sucede con la
imagen Como aparece la imagen? Escribir los resultados.
Realice esquemas secuenciales en 4X, 10X y 40 X. (Utilice un circulo para simular el
campo visual)

4.3 Montaje con hilos de colores (profundidad de enfoque y poder de resolucin)

Al examinar un espcimen en el microscopio no siempre se puede enfocar todo al mismo tiempo

debido a su espesor y profundidad. Por tanto, se hace necesario enfocar ciertas secciones en
muestras que estn superpuestas.

1. Prepare una lmina fija con hilos de tres colores donde se superpongan en un punto. Use el
objetivo de baja potencia (10X) y localice el punto donde los tres hilos se cruzan.

2. Segn vaya enfocando, usted ver que los hilos se observan a diferente nivel. Un hilo o parte
de un hilo est enfocado mientras que los otros se vern opacos. Al girar el micromtrico,
usted puede percibir la profundidad de enfoque que no es evidente cuando el micrometrico
se deja en un mismo punto.

Preguntas para el informe

Cul es el orden de los hilos en su laminilla de arriba hacia abajo enfocando con el
tornillo macromtrico?
Qu importancia tiene la profundidad de enfoque en la observacin de estructuras
celulares? Relacinelo con el poder de resolucin del microscopio.
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4.4. Observacin de epidermis de cebolla

1. En un montaje hmedo de la epidermis de la cebolla se observa la pared celular, la cual

aparece como lneas que forman redes entre las clulas. La pared celular rodea la
membrana celular y sta ltima encierra el citoplasma; en la parte central de una clula
vegetal se observa la vacuola y el ncleo los cuales tiene forma redondeada.

2. Realice un montaje con la epidermis de la cebolla, agregue una gota de lugol, cubra con la
lmina cubreobjetos y realice los dibujos de sus observaciones indicando el objetivo utilizado
(4X, 10X, o 40X).

Preguntas para el informe

Qu estructuras celulares observ?

4.5. Uso del microscopio estereoscpico

1. Escoja un espcimen. Puede ser una hoja, una flor o un insecto, o unos cristales de azcar.
Ponga el espcimen o muestra sobre una caja Petri. Prenda y ajuste la fuente de luz.
Algunos estereoscopios tienen la fuente de luz integrada, mientras que otros no. Asegrese
de que la fuente de luz est iluminando su espcimen.

2. Enfoque el objeto que desea ver y muvalo hacia arriba, hacia abajo y hacia los lados.

5. BIBLIOGRAFA
Becker Wayne; Kleismith Lewis; Hardin Jeff. El mundo de la clula. sexta edicin 2007.
Audesirk, T., Audesirk, G. y Byers, B.E. (2008). Biologa. La vida en la tierra. 8a Edicin.
Editorial PrenticeHall. [LIBRO TEXTO]
Curtis, H., N. S. Barnes., A. Schnek y G. Flores. (2008). Biologa. . 7a edicin, Editorial
Mdica Panamericana, S. A. Argentina.
Cooper Geoffrey y Hausman Robert. La clula. Marban libros. 2008