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II Semestre
Docente:
GINA LEON
Universidad ECCI
Enfermera
Microbiologa
Bogot D.C.
2016
OBJETIVOS GENERAL
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Reconocer el rol que juegan las condiciones ambientales para el desarrollo de estos
microorganismos.
Conocer los estos tipos de bacterias que pueden ser tanto anaerobias, como aerobias
y facultativas.
Es un dispositivo simple que permite el cultivo de una gran diversidad de micro organismos y
que, como su nombre indica, fue un invento de Sergui Vinogradski.
El montaje consiste en una columna llena de agua y fango con una fuente de orgnico, se
llena con lodos ricos en materia orgnica hasta 1/3 de su volumen. Se aaden restos orgnicos
de diferente origen (tiras de papel de peridico, serrn, restos de races de plantas, carne
picada, etc.). Se aade a la mezcla un suplemento compuesto de CaSO4 y CaCO3 (que actan
como fuente de sulfato y tampn respectivamente). La mezcla, bien apretada para que no
queden burbujas de aire, se cubre con agua procedente de un lago, estanque, acequia (o alguna
fuente similar), se cubre con papel de aluminio y se deja en una ventana donde reciba la luz
del sol. A lo largo de la columna se desarrollan diversos organismos.
La formacin del tapete microbiolgico se puede observar en las zonas superiores formada
principalmente por cianobacterias dndole una coloracin verde y su principal caractersticas
es que realizan el proceso de la fotosntesis.
2. Zona microaerfilia:
Comprimir la
mezcla anterior Dejar absorber el
agua en la tierra
Aadir sulfato de
calcio+ carbonato Llenar la botella con
de calcio + agua de pecera
carbonato de hasta 1/3 del
acido de calcio volumen total
Tpica formacin bacteriana.
Las bacterias son organismos unicelulares microscpicos, sin ncleo ni clorofila, que pueden
presentarse desnudas o con una cpsula gelatinosa, aisladas o en grupos y que pueden tener
cilios o flagelos.
La bacteria es el ms simple y abundante de los organismos y puede vivir en tierra, agua,
materia orgnica o en plantas y animales.
Tienen una gran importancia en la naturaleza, pues estn presentes en los ciclos naturales del
nitrgeno, del carbono, del fsforo, etc. y pueden transformar sustancias orgnicas en
inorgnicas y viceversa.
CLASES DE BACTERIA
BACTERIA FACULTATIVA
Las bacterias facultativas son bacterias que pueden desarrollarse tanto en presencia como en
ausencia de oxgeno, por lo que tambin se las llama aerobias facultativas o anaerobias
facultativas. Pueden desarrollar un metabolismo respiratorio, usando el oxgeno presente o
fermentativo, en ausencia de oxgeno. Las bacterias anaerobias facultativas pueden obtener
energa en ausencia de oxgeno, pero el oxgeno no les es txico.
Las proteobacterias (Proteobacteria) son uno de los principales grupos de bacterias. Incluyen
una gran variedad de patgenos, las ms importantes son: Escherichia, Salmonella, Vibrio,
Helicobacter, Neisseria gonorrhoeae y muchos otros.
Todas las proteobacterias son gramnegativas, con una pared celular formada principalmente
de lipopolisacridos, y su morfologa es muy variable, desde bacilos, cocos simples hasta
gneros con prosteca, y ms e incluso cuerpos fructferos.
Muchas de estas bacterias se mueven utilizando flagelos, pero algunas lo pueden hacer por
deslizamiento bacterial, por contacto con una superficie. Entre estas se encuentran las
mixobacterias, un grupo nico de bacterias que pueden agruparse para formar cuerpos
fructferos.
BACTERIAS AEROBIAS
Se denominan aerobios o aerbicos a los organismos que pueden vivir o desarrollarse en
presencia de oxgeno diatmico,1 mientras que si lo necesitan se denominan aerobios
estrictos. El adjetivo "aerbico" se aplica no slo a organismos sino tambin a los procesos
implicados ("metabolismo aerobio") y a los ambientes donde se llevan a cabo. Un "ambiente
aerobio" es aquel rico en oxgeno, a diferencia del anaerobio, donde el oxgeno est ausente,
o uno microaeroflico, donde el oxgeno se encuentra en muy bajos niveles.
El metabolismo aerobio (respiracin) surgi en la evolucin despus de que la fotosntesis
oxignica, la forma ms comn de fotosntesis, liber a la atmsfera oxgeno, el cual haba
sido muy escaso hasta entonces. Inicialmente represent una forma de contrarrestar la
toxicidad del oxgeno, ms que una manera de aprovecharlo. Como la oxidacin de la glucosa
y otras sustancias libera mucha ms energa que su utilizacin anaerobia por ejemplo, la
fermentacin, los seres aerobios pronto se convirtieron en los organismos dominantes en la
Tierra.
BACTERIAS ANEROBIAS
Los organismos anaerobios o anaerbicos son los que no utilizan oxgeno (O2) en su
metabolismo, ms exactamente que el aceptor final de electrones es otra sustancia diferente
del oxgeno.1 Si el aceptor de electrones es una molcula orgnica (piruvato, acetaldehdo,
etc.) se trata de metabolismo fermentativo; si el aceptor final es una molcula inorgnica
distinta del oxgeno (sulfato, carbonato, etc.) se trata de respiracin anaerbica. El concepto
se opone al de organismo aerobio, en cuyo metabolismo se usa el oxgeno como aceptor final
de electrones.
Tipos de metabolismos anaerobios
En la prctica hay tres categoras de organismos a los que se puede llamar anaerobios:
Estrictos: no pueden vivir o desarrollarse con la presencia de oxgeno.
Aerotolerantes: no pueden usar oxgeno para crecer pero toleran su presencia.
Facultativos: microorganismos aerbicos que usan oxgeno si lo hallan, pero pueden
desarrollarse en su ausencia, por medio de procesos de fermentacin.
MATERIALES
1 Esptula
1 Cubetas para tincin
Papel vinipel
Bistur o tijeras
Toallas absorbentes
9 porta objetos
Cascara de huevo t
Toallas absorbentes
Alcohol antisptico
PREPARACIN COLUMNA DE WINOGRADSKY
A diferencia de los estudios realizados por Luis Pasteur y Roberto Koch sobre cultivos puros,
dos famosos microbilogos: Sergei N. Winogradsky (1856-1953) y Martinus Willem
Beijerinck (1851-1931), fueron los primeros en estudiar las relaciones entre diferentes tipos
de microorganismos en un mismo hbitat.
El estudio de las comunidades microbianas en condiciones de laboratorio puede realizarse
fcilmente en una columna de Winogradsky, la cual simula un microecosistema o
microambiente que ilustra cmo los microorganismos ocupan microespacios altamente
especficos de acuerdo con sus necesidades vitales, tales como: requerimientos de carbono,
energa y oxgeno, as como la interdependencia, de forma tal que la actividad metablica de
un microorganismo posibilita el crecimiento de otros y viceversa. Estas columnas, que llevan
el nombre del microbilogo ruso que las utiliz por primera vez, son sistemas completamente
autoreciclables.
PROCEDIMIENTO:
1. Colectar una cantidad de suelo, lodo o barro ricos en materia orgnica. Remover las
piedras, ramas o partculas grandes del material en estudio.
2. Adicionar al suelo 1 g de cada una de las sales, el papel finamente cortado y el huevo
desmenuzado. Mezclar hasta homogenizar completamente.
3. Colocar la mezcla en un recipiente adecuado hasta ocupar 1/3 del volumen total.
Compactar el suelo con la ayuda de una esptula a fin de eliminar las burbujas de aire.
6. Agitar la solucin con una varilla de vidrio para eliminar burbujas de aire (Fig 1).
8. Tomar 9 portaobjetos y hacerles unas muescas (Fig. 2A). Sobre ellas amarrar un extremo
del hilo camo de tal forma que se pueda jalar el portaobjetos con el otro extremo (figura
2B).
9. Colocar los 9 portaobjetos en una posicin vertical a diferentes niveles, cuatro sobre el
sustrato inclinados contra la pared del recipiente dejando que el extremo de hilo suelto quede
suspendido fuera de la botella y cuatro en los primeros 10 cm de la superficie. (Fig. 2C).
10. Marcar el nivel de agua y cubrir la boca de la botella con el plstico auto adherible. Hacer
algunas perforaciones para reducir la evaporacin. Puede ser necesario reponer agua para
mantener el nivel original.
11. Incubar a temperatura ambiente (25 a 30C) cerca de una ventana para que reciba
iluminacin.
PRIMERA SEMANA
SEGUIMIENTO Y CONTROL DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY
PROCEDIMIENTO:
1. Observar la columna y registrar, los cambios fsicos producidos con respecto al aspecto
inicial. Observaciones (sedimentacin, color uniforme o presencia de bandas, formacin de
burbujas, olor caracterstico*, etc.)
2. Remover tres portaobjetos (uno de la superficie, otro del medio y otro del fondo). Dado
que los microorganismos pueden colonizar ambos lados de los portaobjetos, es necesario
limpiar una de sus caras; observar los microorganismos sin teir con los objetivos de 10X y
40X. Posteriormente fijar con alcohol acetona durante 5 minutos a temperatura ambiente y
teir con azul de metileno o safranina. Observar con el objetivo de inmersin, esquematizar
o fotografiar los microorganismos observados y registrar en el cuadro 1. Recordar que las
bacterias son los primeros organismos en colonizar los portaobjetos, seguidos por las algas,
los protozoarios y algunos invertebrados.
3
Aspecto de la columna oscuro color negro, sin
burbujas con una capa de nata, olor ms pestilente
Zona
anaerobia
es una bacteria de color Es una bacteria
prpura sin azufre, en forma gram negativa
de barra.
RHODOPSEUDO- Se encuentra extensamente
MONAS en la naturaleza y ha sido
aislado de las lagunas de los
desperdicios del cerdo, de
los excrementos de la
lombriz, de los sedimentos
costeros marinos y del agua
del estanque
La mayora de las especies Es una bacteria
son auttrofos, utilizando gram negativa.
como fuente de energa el
azufre elemental, tiosulfato
TIUBACILLUS o poliotionatos, pero
Thiobacillus aquaesulis
puede crecer dbilmente en
medios complejos como
hetertrofos.
Se encuentran en agua. Bacterias gran
Metablicamente se negativas
clasifican dentro de las
CHROMATIUM bacterias purpuras o (rojas)
del azufre con capacidad
fotosinttica.
PRIMERA SEMANA
Observacin sin teir con los objetivo 10x y 40x
OBJETIVO OBSERVACION
SUPERFICIE
En este objetivo podemos observar
bacterias, cianobacterias y diatomeas
unidas de color caf claro, no se mueven
10x
40x
MEDIO
En este objetivo se observan bacterias
protozoos, en movimiento.
10X
40x
FONDO
Se observan bacterias pequeas
10x
40x
SUPERFICIE
En este objetivo con aceite de
inmersin podemos observar
bacterias, cianobacterias y gran
positivas.
100X
MEDIO
Se observan bacterias ms diminutas
y agrupadas , protozoos teidos de
color azul.
100X
FONDO
Se observan bacteria ms diminutas
y agrupadas de color azul.
100X
SEGUNDA SEMANA
ANAEROBIAS
En el primer montaje se pueden
observar un tipo de bacteria
conocida como chlorobium, se
encuentran pequeas cantidades de
estas. No se logra identificar otros
10X tipos de bacterias
10X
100X
TERCERA SEMANA
SUPERFICIE
En este objetivo encontramos una
bacteria conocida como chlorobium,
encontramos algunos, aunque muy
pocos clostridium, no observamos
ningun otro organismo.
10X
10X
Primera semana
Los microorganismos presentes en la superficie son bacterias aerobias como diatomeas,
cianobacterias (organismos auto-fottrofos y quimio-hetertrofos -Invertebrados, Protistas, Algas,)
se observaron inmviles, al parecer encontrndose en fase de latencia a nivel de crecimiento
de cultivo, mientras que en la parte media, se encuentran protozoos en movimiento, pero lo
contrario pasa en el fondo, donde aparecen bacterias y hongos anaerobios, los cuales
producen energa a partir de nutrientes que carecen de oxgeno, habitualmente a travs de
procesos de fermentacin.
Segunda semana
Fue ms evidente el tipo de microrganismo presentes y su clasificacin anaerobia, aerobia y
facultativa.
Las anaerobias tales como chlorobium, choromatium y prosthecochloris aeustarii (Bacterias
foto-auttrofas dependientes del azufre). Por lo general se encuentran en la zona media baja
del recipiente de cultivo.
Aerobias como chroococcus, crecen en un amplio margen de aguas dulces y saladas,
incluyendo lagos y charcas entre rocas o en plantas hmedas, por lo general son incapaces
de figar nitrgeno.
Por ultimo contamos con las facultativas como thiobacillus, beggiatoa (bacterias oxidantes
del azufre) y chloromatium, las cuales tienen una fase de crecimiento exponencial y
estacionaria en la parte superior del recipiente.
Tercera semana
En este tiempo observamos los mismos microorganismos anteriores pero ms escasos
dndonos una visin de mortandad, con lo cual podemos deducir que la falta de nutrientes ya
que haban sido absorbidos en las semanas anteriores hace que no tengan la energa suficiente
para subsistir, reflejando el final de una fase estacionaria e iniciando la de muerte.
CONCLUSIONES
https://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/seminariobiodiversidad.htp
https://www.calameo.com
https://es.wikipedia.org/wiki/Organismo_aerobio
https://es.wikipedia.org/wiki/Organismo_anaerobio
https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_facultativa
https://es.wikipedia.org/wiki/Mastigophora
https://es.wikipedia.org/wiki/Paramecium