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Mecanismo FIJADORES

Caractersticas Datos Tcnicos Ventajas Desventajas


de Accin SIMPLES
Fija y deshidrata al mismo Fuerte reductor, incompatible
Preserva GLUCOGENO y la Lquido Inflamable, muy
tiempo. con fijadores oxidantes como el
actividad de ciertas enzimas voltil y olor agradable.
Gran velocidad de dicromato de K y tetrxido de
(fosfatasa, alcalina y acidas) Preparacin: tomar 70-
penetracin osmio.
Fija pigmentos 90 ml de OH y llevar
Precipita muy rpido las No fija adecuadamente la
Uso en extensiones hasta 100 ml de agua
protenas y el glucgeno cromatina. Disuelve ac. nucleico
citolgicas destilada.
Alcohol Etlico (fijacin rpida). y extrae parcialmente los
(PAP, lquidos como la Tamao corte : 5 mm
(CH3-CH2OH) Agente bactericida (buen lpidos.
sangre y secreciones)y en Tiempo fijacin : 2-4 hrs
conservante). Endurece y contrae
inmunohistoqumica. La fijacin ms potente
No Aditivo excesivamente los tejidos.
Buen fijador para IHQ (Altera Corresponde a la solu-
Coagulante Pierde su actividad al ir
escasamente las estructura cin ms concentra
interactuando con el agua.
antignica). Renovacin : 3 veces
Carece de efecto mordiente
(qumicamente es un reductor,
prepara mal la tincin).
Deshidratacin Origina fenmeno de
celular desplazamiento de sustancias.
Agente no aditivo y muy Lquido Inflamable, muy Conserva bien estructuras
oxidante (su tomo de voltil y olor dulzn. antignicas y la actividad Provocan una gran contraccin
oxgeno puede compartir un Preparacin: Se usa sin enzimtica. tisular y por tanto grandes
par de electrones). diluir a 4C. Rrecomendada para cidos artefactos.
Uso limitado: IQ y IHQ Tiempo fijacin: 2hrs. nucleicos y en IFD Fija muy rpido y endurece
Acetona Preserva muy exactamente Mximo. (deteccin de complejos demasiado a los tejidos.
(CH3-CO-CH3) la estructura antignica y la *Piezas delgadas se autoinmunes: biopsia La rpida extraccin del agua
actividad enzimtica de recomienda 20 min. renal, heptica, piel o desde el tejido provoca una
No Aditivo estos. mucosa). contraccin nuclear, que deja un
Coagulante Deshidrata violentamente. Uso en determinados halo perinuclear epitelios).
Miscible en agua e estudios con MET. Tiempo fijacin muy controlado.
incompatible con fijadores Disuelve los lpidos y los
metlicos bivalentes. carbohidratos se conservan
Generalmente se la emplea (correcta precipitacin de
sola. las protenas).
Mecanismo FIJADORES
Caractersticas Datos Tcnicos Ventajas Desventajas
de Accin SIMPLES
Fijador ideal de
Fijador ideal para NCLEO,
Liquido transparente, de nucleoprotenas y ac. Es mal fijador de citoplasma y
PROTENAS Y ACIDO
fuerte olor avinagrado. Nucleicos. membranas celular
NUCLEICOS.
Uso en concentraciones Penetra rpidamente y deja No fija carbohidratos ni lpidos
Acta rompiendo los
diluidas en 1-5%. el tejido muy blando Destruye mitocondrias.
puentes entre protenas,
Acido Actico En estado puro: Ac. Precipita protenas sin No se utilizan en frotis
exponiendo los grupos
(CH3-COOH) Actico glacial sustraer el agua de los tejidos sanguneos porque lisan los
hidroflicos, atrayendo el
Por debajo de los 10C (no es giroscpico) y produce eritrocitos.
agua, siendo absorbido y
No Aditivo tiende a solidificarse cierto edema intersticial, que
produciendo expansin.
Coagulante (agujas cristalizadas muy compensa la excesiva
Cambios Forma parte de mezclas
custicas). retraccin causado por otros
del fijadoras y descalcificante.
agentes fijadores.
estado coloidal Produce un aumento de
de las volumen mayor que el resto
protenas de los reactivos fijadores.

Son cristales incoloros, Preparacin: Se usa Precipita macromolculas Produce edema y artefactos si se
custicos y solubles en agua. mezclado con otras (ADN,ARN y protenas) lava el tejido despus de usar este
Se emplea en bioqumica y sustancias al 2%. cido.
para destruir lesiones Tiempo de fijacin: En
preneoplsicas y displasias solucin al 5% fija los
cido cervicales nervios de 8-12 h
tricloroactico
(C2HCl3O2 )

Aditivo
Coagulante

Cambios
del
estado coloidal
de las Forma parte de mezclas
protenas fijadoras.
Se utiliza en microscopia
electrnica y para preservar
lpidos
Se usa tambin como post-
fijacin con glutaraldehdo.

Preparacin: Uso en
disolucin de cristales
Es incompatible con fijadores
de anhdrido crmico en
Excelente fijador reductores: formol y Alcoholes.
agua. Disoluciones al 2%
Acido Crmico estructural Escasa velocidad de penetracin
formando parte de
(H2CrO4) Por ser un fuerte oxidante en trozos pequeos.
mezclas fijadoras.
acta como un mordiente Impregna de coloracin verdosa
Es incompatible con
Aditivo en tinciones que emplean los tejidos por lo que hay que
fijadores habituales
Coagulante colorantes bsicos. lavarlos abundantemente agua
como el formol y alcohol
destilada
(Ac. Crmico es
Por el uso de ese acido, los
oxidante).
tejidos quedan excesivamente
blandos.
Mecanismo FIJADORES
Caractersticas Datos Tcnicos Ventajas Desventajas
de Accin SIMPLES

Reactivo muy corrosivo.


Penetra poco (5mm espesor).
Si se prolonga el tiempo de
fijacin, el tejido se contrae y
Uso: patologas Polvo cristalino blanco y Excelente fijador
Formacin de hematopoyticas y renales muy toxico. Morfolgico celular
endurece (dificulta el corte).
sales Da origen a precipitados
(finos detalles nucleares y Uso bajo campana Excelente mordiente (ya que
con el tejido metlicos de color pardo.
citoplasmticos). (venenoso). los puentes de H+
Se eliminan (precipitados)
Cloruro de Efecto fijador se produce Preparacin: solucin intramoleculares de las
mediante un tratamiento previo
Mercurio por la combinacin de los acuosa saturada. protenas quedan
a la coloracin con soluciones
(HgCl2) iones de mercurio (Hg+++) preservados tras la fijacin y
alcohlicas yodadas semejantes
con grupos cidos de las Se usa en soluciones al pueden reaccionar con los
al lugol (deszenkerizacion).
protenas: 5-6%. colorantes).
Aditivo Por la intensa eosinofilia
- COOH carboxilo Corte: 5mm de Produce intensa y brillante
Coagulante citoplasmtica que provoca,
- OH hidroxilo espesor coloracin nuclear y citoplas
puede dificultar el
- *SH sulfhdrico mtica, permitiendo finos
reconocimiento de las zonas de
- Residuos fosfricos de las Tiempo fijacin: 4 hrs detalles.
necrosis tisular.
nucleoprotenas. max.
No es un buen bactericida( no es
El efecto fijador se produce
un lquido conservante)
por la combinacin de los
iones de Mercurio con grupos
cidos de las protenas.
Formacin de
sales
con el tejido
Dicromato de
Potasio
(K2Cr2O7)
Reacciona con las protenas
para formar cromatos. Por ser un fuerte oxidante es
Aditivo
Excelente fijador para
lpidos Polvo rojo amarillento. Incompatible con el alcoholes y
No Coagulante
complejos (mielina, golgi y Preparacin: Se utiliza en formaldehido.
mitocondrias). disolucin acuosa al 1-2%. Baja velocidad de penetracin.
Fuerte efecto mordiente al Endurece escasamente los
Forma parte de mezclas pH optimo: 4.4 oxidar los grupos alcohlicos tejidos.(dificultad de corte).
fijadoras, el ion cromo A un pH mayor estn de las grasas y polisacridos Provoca artefactos tisulares
tiende a formar complejos disociados la mayor parte a aldehdos y por (aparicin de vacuolas
con el agua. Estos grupos de los grupos carboxilos) incrementar la basofilia de citoplasmticas, retraccin y
constituyen quelatos con las las protenas cuando se cambios de morfologa nuclear).
protenas, al reaccionar con Despus de la fijacin el emplea a un pH En soluciones no acidificadas el
los grupos aminos y tejido se lava en una fuertemente acido. Dicromato disuelve la cromatina.
carboxilos de estas. solucin salina o Por ello es necesario asociarlo
tamponada para evitar el Su uso es indispensable para con el ac. Actico o
depsito de pigmentos demostrar la reaccin triclocloacetico dentro de
verdes. cromafin y realizar tcnicas mezclas fijadoras.
de golgi, para tcnicas de Despus de su fijacin, los tejidos
impregnacin argntica de han de ser lavados con
las clulas nerviosas. abundantemente en solucin
salina o tamponada para evitar
Las mitocondrias quedan depsitos de pigmentos verdes
perfectamente fijadas y da tras reducirse el trixido crmico
aspecto homogneo al (CrO3) a oxido crmico (Cr2O3) en
ncleo. el curso de la inclusin o
coloracin.
Muy toxico y explosivo si se
somete a la accin del calor
No dejar evaporar sus
Excelente fijador disoluciones par evitar la
estructural, conserva formacin de precipitados.
Forma de agujas
Acta coagulando adecuadamente la Si se prolonga el tiempo optimo,
cristalizadas de color
protenas a travs de la composicin proteica de los provoca excesiva retraccin
amarillo.
formacin de picratos que tejidos. tisular y de la disolucin que
confieren gran apetencia por Control adecuado del provoca sobre los precipitados
Uso: solucin saturada al
Acido Pcrico colorantes cidos. tiempo de fijacin, produce calccicos y hemosiderina.
2%.
(C6H3N3O7 ) Es un excelente fijador una ptima contraccin de No puede ser utilizado para
Tiempo Fijacin: 4-18
estructural, conserva la los tejidos. ciertos tejidos porque los hace
horas, dependiendo del
Aditivo composicin proteica de los Buena velocidad de fijacin frgiles o quebradizos
tamao de la pieza
Coagulante tejidos. aunque penetra lentamente. (dificultad en el corte).
aparecen inconvenientes
Fijador de glucgeno, No disuelve el glucgeno ni Tie los tejidos de color amarillo
por una excesiva
lpidos, medula sea, los lpidos. y si no se elimina antes de la
retraccin tisular
ac.nucleicos y tejido seo. Posee una leve accin inclusin en parafina provoca un
. decalcificante. continuo deterioro. Luego de la
Gran estabilidad en fijacin debe realizarse lavados
soluciones. sucesivos en OH de 70-80 o la
solucin saturada de carbonato
de litio en OH de 70 .
Incompatible con la celoidina.

Es una sal cristalizada de


color amarillo soluble en
Se usa para tinciones
agua.
negativas en microscopa
Acetato de Preparacin: Suele usarse
electrnica y para cuantificar
uranilo en soluciones al 2-3% por No endurece los tejidos Se descompone con la luz
sodio en suero.
UO2(NO3)2 100 ml de agua.
Actualmente se usa junto
Tiempo de fijacin: 10 min
con el teraxido de osmio
Despus se lava
abundantemente con agu
Es gaseoso en estado Es txico.
Excelente fijador para puro, se vuelve liquido a Es el fijador mas barato, de
21C eleccin para los trabajos de Produce vapores de carcter
todo.
Se disuelve fcilmente en rutina. irritante sobre la conjuntiva y
agua. mucosa nasal.
En soluciones acuosas a Buen fijador, nico que
MECANISMO DE ACCION:
concentraciones y determina una moderada Por accin de la luz y del oxgeno
Formaldehdo o - Reacciona con las protenas. estabilizado con metanol conservacin de la atmosfrico se transforma
Formol se denomina formalina o estructura tisular. progresivamente en cido
- Rompe enlaces covalentes
(CHOH) formol. frmico y sta sustancia
entre polipptidos. Por accin del fro la Alta capacidad de disuelve rpidamente la
formalina pura tiende a penetracin. cromatina nuclear, con el paso
Aditivo - Ataca grupos que tienen un
precipitar al polimerizarse del tiempo los ncleos adoptan
No Coagulante H activo (grupo hidroximetil). hacia paraformaldehido Fcil de preparar y estable. un aspecto de fantasma (por eso
(es reversible al aadir el formol debe guardarse en
- Poder coagulante y alta
gotas de hidrxido sdico Por ser buen desinfectante y frascos opacos o emplear la
capacidad de penetracin. y calentar la mezcla). no endurece excesivamente solucin neutra o tamponado).
Preparacin: Solucin los tejidos.
- La produccin de acido
Reticulacin diluida 1:10 con agua o Debido a que su incorporacin es
frmico daa los tejidos. buffer.(formol al 10%)- 1 Medio ptimo para progresiva en el tejido en forma
de
parte de formalina y 9 conversar y almacenar de puentes metlicos, el
Protenas - Produce hinchamiento del
partes de agua, solucin biopsias. formaldehdo se consume
tejido y vacualiza las clulas. salina o tampn durante la fijacin, por lo cual
debe encontrarse siempre en
- Disminuye el contraste entre
Provoca escasa retraccin exceso.
el ncleo y el citoplasma. tisular.
Su uso no amortiguado
Posee una velocidad de disminuye la basofilia.
penetracin intermedia
(1mm/hora) Por su accin polimerizarte
disminuye la reaccin de PAS.
Es excelente fijador para el Por la baja presin osmtica que
tejido adiposo y para lpidos posee la disolucin de trabajo
en general y se emplea (180 mOs), provoca la
como agente de eleccin incorporacin de agua a los
para fijar el tejido nervioso, espacios intratisulares por lo
clulas enterocromafines y que el peso y el volumen del
en general antes de tejido unja vez fijado aumenta
cualquier impregnacin de manera notable. (este efecto
argntica. se puede prevenir utilizando
formol salino o tamponado).
Formaldehdo o El proceso de fijacin puede
Reticulacin Formol ser acelerado o retrasado Relativa capacidad de fijacin
de (CHOH) sin graves inconvenientes sobre las protenas, pigmentos
Protenas modificando la temperatura. que contienen hierro y los
- 36 hrs a 35C derivados de la bilirrubina, a
Aditivo
- 12 -24 hrs. a 55C stos ltimos les da una
No Coagulante coloracin verdosa.
Fijador de eleccin cuando
de usa microondas. Tras su uso prolongado y
conversin a ac. frmico. Puede
Es compatible con la mayor reducir masivamente la
parte de las tinciones. hemoglobina y los pigmentos
derivado de ella, hasta originar
un precipitado cristalino
Penetra bien, no endurece birrefringente y de color pardo
ni hace quebradizo los negruzco que dificulta su
tejidos. observacin y recibe el nombre
de pigmento formlico
(hemateina acida de
formaldehdo).
El pigmento se puede eliminar
sumergiendo los cortes en OH
absoluto saturado con acido
pcrico (10, 12 gr de c. pcrico
en OH etlico al 95-100)

Es un dialdehido, 2
molculas de formol unida
por una cadena recta con 3 Liquido oleoso. Excepcional capacidad para Capacidad de penetracin
carbonos. preservar la morfologa excepcionalmente baja. Los
Presenta impurezas que celular es el primer fijador tejidos no pueden tener un
Va actuando polimerizando. se eliminan con carbn de eleccin para ME. volumen superior a unos pocos
Glutaraldehido activado. milmetros cbicos.
Fija tejido para estudios de Conserva mejor las
ME, mas fino detalle para Se usa a una protenas celulares que el Gran capacidad de retraccin y
las muestras. concentracin 2.5-4% con formol. endurecimiento tisular. Impide
Usa acortes muy delgados un amortiguador pH 7.4 prolongar el tiempo de fijacin.
Reticulacin
(ultramicrotoma) (tampn fosfato como El tejido se encoge menos.
de amortiguador) Menos irritante. Su osmoralidad en disolucin es
Aditivo
Protenas No Coagulante No produce dermatitis. muy baja, lo obliga a usarlo
Conservar a 0-4C Permite realizar tinciones disuelto en soluciones
ordinarias o histolgicas. amortiguadoras (tampn
Solucin comercial 25% Fijacin rpida. cacodilato)

Estable en solucin acida Ms caro, menos estable y tarda


(pH 3-5) y a bajo TC (0- ms en penetrar en los tejidos.
4C) Tiende a disminuir
cuantitativamente enzimas
tisulares.
Produce reaccin de fondo con
el PAS.
Dialdehido, mejor
alternativa a la formalina.
Tiempo de fijacin: 45 min No emite vapores, es Es caro
Mecanismo Fijacin similar piezas pequeas. biodegradable.
al del formaldehdo. Fija por No genera
Glioxal reticulacin de las protenas *Fija en 2-6 hrs. tumores enmascaramiento de Ag
y forma puentes cruzados como el formaldehdo.
despus de un largo tiempo Tinciones especiales no se
Aditivo de fijacin. registran cambios, excepto
No Coagulante en tincin de Helicobacter
Fija muy bien (Ej; Hgado, Pylori.
rin, corazn y estomago) No genera artefactos de
formaldehdo.
Reticulacin No genera artefactos. - pigmentos de formalina
de Se usa para tinciones - ncleos espumosos
especiales. (ncleos con muchas
Protenas vacuolas prouce muy
poco)
- cambios del volumen
celular (previene el
choque osmotico).
MEZCLAS
PREPARACION USO ACCION
FIJADORAS

Es uno de los mejores fijadores para el estudio del


glucgeno; penetra rpidamente a los tejidos.
Piel
Es un buen fijador general, salvo para el rin(provoca
rganos endocrinos
distorsin).
Testculo La expansin de volumen provocada por el cido actico es
contrastado por la retraccin del cido pcrico.
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO Tejido embrionario
(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA) 750.0
Hgado La tincin amarilla producida por el cido pcrico se retira
ml
Bouin FORMALINA CONCENTRADA 250.0 ml. ganglio
con la aplicacin de Alcohol 70%, sino causa deterioro en la
coloracin.
C. ACTICO GLACIAL......50.0 ml.
*Sin embargo no es
PH. FINAL... 2.2
recomendado para la Es muy adecuado para las coloraciones de Masson y
TIEMPO DE FIJACIN.. 2 a 24 horas
fijacin de biopsias Mallory.
renales sobre los cuales
provoca una severa
distorsin Produce poco encogimiento.
El lquido completo es una solucin estable.

Este fijador produce lisis de los glbulos rojos y disminuye


la cantidad de hierro frrico demostrable. - Los tejidos no
deben permanecer por ms de 12 a 24 h. pues sino se
vuelven duros y quebradizos.
Una vez terminada la fijacin se debe pasar directamente a
la deshidratacin con alcohol 80.

ACETATO NEUTRO DE COBRE..2.5 gr. Es una variante del liquido de Bouin, indicado para la
C. PCRICO.....4.0 gr. fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando
FORMALINA CONCENTRADA......10.0 ml. no es posible controlar el tiempo de fijacin de la muestra
C. ACTICO GLACIAL.....1.5 ml. en ste lquido, la conservacin, puede incluso conservar
AGUA DESTILADA..100.0 ml. las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.

Para preparar la solucin se disuelve primero la sal Medula sea


Bouin de cobre en el agua destilada luego se aade el
Hollander cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido
actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a
temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila
entre 48-72 horas.

Es una alternativa de lquido de Bouin, se usa para


Bouin ALCOHOL ETILICO 80%........................75.0 ml. Glucogeno fijaciones relativamente voluminosa porque posee una
alcohlico C. PCRICO..0.5 gr. Hgado velocidad de penetracin mucho mas elevada.
FORMALINA CONCENTRADA....30.0 ml. Ganglios
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml. Piel
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin
para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.

Solucin stock de Zenker: Bazo


CLORURO MERCRICO5gr. Medula sea Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y
DICROMATO POTSICO...2.5 gr. del dicromato potsico. En la prctica habitual ha sido
SULFATO SDICO 1 gr. sustituido por B5.
AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.
Su empleo ha quedado prcticamente restringido al
proceso de refinacin-descalcificacin a que son sometidas
El cido actico reacciona con el dicromato y hace las biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin
que la solucin se oscurezca progresivamente, por inicial con B5.
lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser mas prolongada que con la
ZENKER solucin de b5 porque el cido actico que contiene,
produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben
sobreasar las 48 horas.

Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato


sdico al 5% durante 1-2 horas.

El bicloruro de mercurio es una sustancia que corroe el


instrumental metlico.
Es un fijador adecuado para las muestras a las que se les
aplique IHQ.
Antes de emplear las tinciones es necesario eliminar de
los tejidos, los pigmentos precipitados del bicloruro de
mercurio

CLORURO MERCRICO 12.0 gr. Espesor mximo de las muestras no mas 4 mm (escaso
ACETATO SDICO.....2.5 gr. poder de penetracin de la mezcla).
AGUA DESTILADA.....200 ml.
El tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas.
Solucin es inestable ya que formaldehdo reduce el
sublimado. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar
Aparicin de precipitados mercricos sobre los indefinidamente en alcohol etlico al 70-80.
tejidos antes de ser coloreados. Se someten a un
tratamiento especfico mediante soluciones que
eliminan estos depsitos. La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran
Rin
considerablemente la tincin nuclear, de hecho la fijacin en
B5 una mezcla que contenga sublimado es hoy da
prcticamente imprescindible para el diagnstico
morfolgico en las patologas del sistema linfoide y
hematopoytico. Es debido a la gran importancia que se da a
la observacin de finos detalles nucleares como es la
presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del
nucleolo para catalogar un tumor maligno de ganglios
linfticos, o de mdula sea (leucemias) como de alto o bajo
grado de malignidad y por tanto recomendar la teraputica
ms oportuna.

Adems estas soluciones B5, zenker formol son los


fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido
conectivo y para fibrina. Se prefiere la solucin de B5 porque
al no contener dicromato, esto permite una mejor
conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura
antignica tisular

ETANOL ABOSLUTO....60.0 ml. Glucogeno Este fijador es muy adecuado para pequeos fragmentos
CLOROFORMO.30.0 ml. Hidratos de carbono tisulares, por Ej. obtenidos por raspado, que se fijan bien en
C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml. Protenas fibrilares 30 min. a 2 h.
Miofibrillas
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 Hgado Tambin inicia la deshidratacin, es un buen fijador para
horas. el glucgeno, los ncleos se tien bien.
Las muestras deben cambiarse directamente a Su accin fijadora es
alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se extremadamente rpida
produce al prolongar demasiado la deshidratacin deshidratando el tejido al Como inconvenientes podemos citar que produce lisis y
en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el mismo tiempo, sin encogimiento importante.
etanol por metanol en la composicin de lquido embargo produce una
CARNOY fijador y para conservar la pieza se deposita en excesiva retraccin mstica Disuelve los lpidos y la mielina.
alcohol etlico absoluto. y una hemlisis masiva de
eritrocitos as como una
pobre conservacin Es un fijador que posee un excelente poder de
estructural del ADN. penetracin y de difusin.

Las muestras delgadas de tejidos y rganos se fijan en dos


o tres horas.

Produce lisis de los eritrocitos. Es el fijador adecuado


cuando se desea demostrar glucgeno y la tincin de
ncleos y especialmente cromosomas.

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