Resumen

Se realizaron 2 tipos de cromatografa, sobre papel y sobre capa fina (usando como
sustrato silica gel seco) para separar los constituyentes de diferentes mezclas de
sustancias incluyendo tinta de marcador, analgsicos, mezcla de aminocidos y
constituyentes vegetales. Se emplean diferentes solventes para observar sus efectos
sobre el proceso de separacin (el ascenso de componentes sobre el sustrato por
accin del arrastre del disolvente). Se calculo la razn de flujo RF entre la distancia
recorrida por el componente con respecto a la recorrida por el solvente, estos valores
se encuentran tabulados dentro del informe en detalle debido a la cantidad de datos.
Se pudo apreciar que la cromatografa es una tcnica en la separacin e identificacin
de sustancias con propiedades fisicoqumicas similares y que el efecto del solvente en
esta tcnica esta determinado en gran medida por qu tan polar es.

Palabras claves: cromatografa, papel, capa fina, marcador, analgsicos,

aminocidos, constituyentes vegetales, razn de flujo, polaridad y solvente.

Introduccin mantendr en el mismo lugar en el que

La cromatografa es un mtodo de
separacin fsico para la purificacin y
caracterizacin de una mezcla compleja,
es un conjunto de tcnicas basadas en el
mismo principio de retencin selectiva [1].
Las tcnicas cromatografcas son muy
variadas pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste de un flujo (gas o
liquido) que arrastra a la muestra a travs
de una fase estacionaria llamada tambin
adsorbente y es bsicamente un material
poroso sobre el cual los componentes de
la muestra pueden adherirse (como papel
y silica gel en el caso de esta prctica).
La forma en que se separan los
componentes de una mezcla viene dada
por la diferencia entre la interaccin del
componente con el disolvente y el
componente con el sustrato [2].
Bsicamente si la mezcla del componente
es mas polar que el disolvente, esta se
empez, con los componentes aun
mezclados. Por otro lado si el solvente es
mucho ms polar que la muestra, esta ser
desplazada totalmente por el solvente,
llegando a moverse pero a la misma
medida en que avanza el solvente
obtenindose as un solo punto de muestra
aun si separarse en sus componentes.
La idea es entonces usar un
solvente (o una mezcla de solventes) que
tenga una polaridad media y as desplace
a cada componente hasta un punto
determinado distinto. La eleccin del
solvente adecuado no es una ciencia
exacta, se hace por ensayo y error, por lo
que se han desarrollado listas (llamadas
series eluotrpicas) de compuestos
ordenados segn la polaridad (es decir,
segn su electricidad para eludir
componentes.
 El limitante ms comn en la
selectividad de la cromatografa como
tcnica de separacin (al menos como se
trata de cromatografa sobre papel o capa
fina) es que los componentes posean
polaridades muy similares ya que esto
hace que sea desplazados hasta el mismo
punto y por tanto no se separa. La
importancia de las tcnicas
cromatogrficas radica en su utilidad:
mediante ellas se pueden separar los
componentes de una mezcla obteniendo
sustancias ms puras que pueden ser
usadas posteriormente (paso final de
sntesis orgnica). En cromatografa ms
avanzada (analticas) se pueden
determinar la existencia de ciertos
compuestos en la mezcla incluso la
proporcin en que estn presentes.
En la cromatografa el analto son
las sustancias de inters a separar de la
mezcla; un cromatograma es el resultado
grafico de la cromatografa. Existen
diferentes tipos de cromatografa segn el
estado fsico de la fase mvil
(cromatografa de gases y liquido) segn
su mecanismo (cromatografa por
intercambio inico, por exclusin por
tamao, entre otras) y segn la forma de la
capa estacionaria (cromatografa en
columna y planar).
La cromatografa planar es aquella
donde la fase estacionaria se presenta
como un plano, dicho plano puede ser un
papel o una capa de partculas solidas
dispersas sobre un soporte. Diferentes
componentes de la mezcla viajan a
distancias diferentes dependiendo de qu
tan fuerte sea la interaccin con la fase
estacionaria en comparacin con la fase
mvil. Dado un solvente y un sustrato, la
razn entre la recorrida por un compuesto
y la recorrida por el solvente se conoce
como razn de flujo (o factor de retencin
Re) es constante y puede ser usada como
ayuda en la identificacin de sustancias
desconocidas.
La cromatografa de papel como su
nombre lo indica consiste en colocar un
pequeo punto o lnea de muestra en una
tira de papel, este es, luego puesto en un
recipiente con solventes en el fondo que es
sellado; el solvente asciende por el papel
por una accin capilar, se encuentra con la
muestra y esta comienza a moverse con el
solvente por arrastre. El papel esta hecho
en gran parte por celulosas que es una
sustancia solar, por lo que los
componentes ms polares tendrn a
recorrer una menor distancia ya que
cuesta mucho verse su interaccin con el
sustrato.
La cromatografa en capa fina son
similares a la cromatografa en papel solo
que en la fase estacionaria en vez de ser
papel es un capa fina de material
adsorbente como anilina (Al2O3 en polvo
fino), silica gel (SiO4 en forma granular,
vtrea y porosa), o algn otro sustrato
inerte. Comparado con el papel, esta
cromatografa tiene la ventaja de ser ms
rpida y de poder elegir los sustratos.
A menos que cada compuesto sea
coloreado, luego de realizar la
cromatografa no se vern los
componentes separados por lo que hay
que aplicar alguna tcnica de visualizacin.
Estas tcnicas se clasifican en destructiva,
semi-destructiva y no-destructiva. Ejemplo
de la destructiva es poner H2SO4 caliente
en el sustrato, los componentes se
destruyen y quedan como manchas;
ejemplo de la semi-destrutiva es colocar
cristales de Yodo en recipiente sellado con
el cromatograma , el yodo se sublima y
satura el aire dentro del recipiente, el vapor
entonces colorea como manchas los
lugares donde estn los compuestos, se
llama semi-destructiva por que el yodo
puede o no reaccionar con los compuestos
y cambiar sus composiciones; por ultimo
estn las no destructivas que se basa en
usar luz U.V de corta y larga longitud de
onda (normalmente se usan en algunos
adsorbentes especiales con polvos
fluorescentes). Con el yodo y con la luz
ultra violeta puede que algunos
compuestos no se visualicen.

Objetivos

Objetivo General

Aplicar la cromatografa como

tcnica de separacin (tanto en papel
como en capa fina) presente en varias
mezclas de compuestos.

Objetivos Especficos

Identificar los componentes presentes

en pigmentos de marcadores utilizando
la tcnica de cromatografa ascendente
de papel y los patrones necesarios.

Determinar los posibles aminocidos

del jugo de limn, tomate y naranja
utilizando la tcnica de cromatografa
ascendente de papel y los patrones
necesarios.

Identificar los componentes presentes

en analgsicos (migran y rhinal),
utilizando la tcnica de cromatografa
de capa fina y los patrones necesarios.

Identificar los componentes presentes

en pigmentos vegetales (rosas y
siempre verde), utilizando la tcnica de
cromatografa de capa fina y los
patrones necesarios
Datos Experimentales

Tabla 1. RF Cromatografa ascendente de varias tintas de marcado

PIGMENTOS EN QUE SE RECORRIDO

# PUNTO SUSTANCIA RF
DESCOMPONE (CM)
- Solvente 4:1:5 - (9,60,1) -
Rojo (0,10,1) (0,010,01)
1 Marcador de color Azul medio (0,50,1) (0,050,01)
Fucsia (2,80,1) (0,290,01)
Rojo (0,10,1) (0,010,01)
2 Marcador de color
Azul claro (0,50,1) (0,050,01)
Amarillo (0,10,1) (0,010,01)
3 Marcador de color
Azul medio - -
Amarillo (0,30,1) (0,030,01)
4 Marcador de color
Azul medio - -
5 Marcador de color Rojo (0,60,1) (0,060,01)
Amarillo (0,40,1) (0,040,01)
6 Marcador de color
Naranja (0,70,1) (0,070,01)
7 Marcador de color - - -
8 Marcador de color - - -
9 Marcador de color Fucsia muy claro - -
10 Marcador de color Amarillo (0,20,1) (0,020,01)
Fucsia muy claro (0,10,1) (0,010,01)
11 Marcador de color Azul medio (0,60,1) (0,060,01)
Morado - -
Rojo claro - -
12 Marcador de color
Fucsia muy claro - -
Azul medio - -
13 Marcador de color
Amarillo muy claro - -

*En esta tabla se muestran los resultados de emplear el solvente 4:1:5 con los trece puntos
de marcadores, los pigmentos en los cuales se separ, cuanto recorri el solvente y cuanto
recorri cada pigmento medido desde el centro de la mancha como lo indica la bibliografa y
la razn entre ambas distancias. En anexo B1 muestra este cromatograma.
Tabla 2. RF Cromatografa ascendente de aminocidos

PIGMENTOS EN QUE RECORRIDO

# PUNTO SUSTANCIA RF
SE DESCOMPONE (CM)
- Solvente 4:1:5 - (8,40,1) -

1 Lisina (2gts) Fucsia (1,20,1) (0,140,01)

Morado Oscuro (1,40,1) (0,170,01)

2 Ac. Aspartico (2gts) Morado Claro (1,40,1) (0,170,01)
Morado Claro (1,70,1) (0,200,01)
3 Metionona (2gts) Morado Oscuro (3,80,1) (0,450,01)
Morado Muy Claro (5,00,1) (0,600,01)
4 Leucina (2gts) Morado Oscuro (4,50,1) (0,540,01)
Fucsia (1,30,1) (0,150,01)
5 1,2,3,4 (2gts) Morado Claro (1,60,1) (0,190,01)
Morado Oscuro (4,50,1) (0,540,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
6 Extracto De Limn (2gts)
Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
7 Extracto De Naranja (2gts)
Morado Claro (1,50,1) (0,180,01)
Fucsia (1,20,1) (0,140,01)
8 Extracto De Tomate (2gts) Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Morado Muy Claro (4,70,1) (0,560,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
9 6,7,8 (3gts) Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Morado Muy Claro (4,00,1) (0,480,01)
Fucsia (1,00,1) (0,120,01)
10 Ac. Aspartico (3gts)
Morado Claro (1,50,1) (0,180,01)

*En esta tabla 2 se muestran los resultados de emplear el solvente 4:1:5 con en la
cromatografa sobre papel de los aminocidos, el formato e informacin presentada es
similar a la tabla 1. En anexo B2 muestra este cromatograma.
Tabla 3. RF Cromatografa en capa fina de analgsicos y pigmentos vegetales

# RECORRIDO
SUSTANCIA RF
PLACA (CM)
Acetato de Etilo
(4,20,1) -
(Solvente)
1
Migran (3,40,1) (0,690,02)
Rhinal (3,00,1) (0,610,02)
Cloroformo (Solvente) (4,20,1) -
2 Migran (0,80,1) (0,190,02)
Rhinal (0,70,1) (0,170,02)
Butanona (Solvente) (4,90,1) -
3 Migran (4,70,1) (0,960,02)
Rhinal (4,30,1) (0,880,02)
2:9:9 (N-Butanol,
Butanona y Acetato de (4,40,1) -
4 Etilo)
Migran (4,40,1) (1,000,03)
Rhinal (4,30,1) (0,980,03)
Mejor Solvente
(4,40,1) -
(Butanona)
5 Cafena (1,20,1) (0,270,02)
Fenacctina (3,40,1) (0,770,03)
Acido Aspartico (1,30,1) (0,300,03)
Mejor Solvente
(Butanona) Placa sin (4,40,1) -
6 Activar
Migran (4,30,1) (0,980,03)
Rhinal (4,40,1) (1,000,03)
Mejor Solvente
(3,40,1) -
(Butanona)
7
Rosas (1,20,1) (0,350,03)
Siempre Verde (1,10,1) (0,320,03)

*En esta tabla 3 se muestran los resultados de la cromatografa sobre capa fina usando silica
gel para los analgsicos, se especifica que solvente se uso, que analgsicos, el recorrido
total del solvente, el recorrido de cada muestra y el RF.
Discusin de resultados.
El primer ensayo realizado fue la
cromatografa sobre papel, para separar
los compuestos de tinta de marcador
negro; dos disolventes fueron empleados,
el 4:1:5 de n-butanol, acido actico y agua
destilada y el 2:1:1 de 1-butanol, etanol y
amoniaco 2N; se escogera cul de ellos
sera el ms adecuado para el sistema de
separacin, pero en ambos casos se dio
un arrastre continuo de la tinta,
depositndose de manera lineal, muy
parecida a la forma en que se hizo la lnea
inicial en el papel; de ello se puedo decir
que ninguno de los dos solventes se
cataloga como una buena fase mvil, ya
que el objetivo no es arrastrar toda la tinta,
sino fraccionar los compuestos. La mejor
explicacin a lo ocurrido es que la tinta del
marcador no era la ms apta para la
prctica, se puede tratar de una marca
comercial que emplea tintas orgnicas.
Siguiendo con este tipo de
cromatografa, se emplearon aminocidos,
y como solvente el 4:1:5 de n-butanol,
acido actico y agua destilada, adems
una solucin de ninhidrina al 0,5% , sta
es el agente revelador, ya que los
aminocidos son incoloros, la ninhidrina
reacciona con ellos y muestra su color
caracterstico que va desde tonos fucsias y
morados dependiendo del pH del
aminocido. Por tratarse de cromatografa
sobre papel se puede afirmar que los
compuestos con mayor razn de flujo son
polares, por ejemplo los tonos morados de
los puntos 4,5 y 8; de lo contrarios, los que
se desplazaron menos, sern poco
polares, como los puntos 5,6 y 9 donde el
color es fucsia ver tabla 2 y anexo B1.
En este caso, tambin se puede
hacer referencia, a la influencia de la
concentracin para identificar
cualitativamente componentes en
cromatografa. El punto 2 contiene 2 gotas
de acido aspartico, mientras que el punto 9
contiene 3, en este ltimo, se ve un tono
fucsia y otro morado, lo que conlleva a
decir que est constituido por dos
compuestos, mientras que en el primer
punto, slo se evidencia un compuesto
morado claro; por ende, aqu la
concentracin es importante para estudiar
la muestra.
Algunos puntos tengan razones de
flujo similares, es indicio de que poseen el
mismo compuesto, esto tambin se ve si
presentan la misma coloracin, por
ejemplo, los morados oscuros de los
puntos 3,4 y 5; el morado claro del 5,6,7,y
8 y el fucsia de los puntos 1,5,8,9 y en
mnima proporcin el 10 (tabla 2 y anexo
B1).
Para la cromatografa ascendente
de varias tintas de marcador, se formaron
muchas colas, debido a la presencia de
agua; y algunas ramificaciones, como
causa de la caracterstica lavable que
presenta el tipo de marcador empleado.
Visualizando, se puede acotar que el
marcador numero 13 contiene al
compuesto mas polar, mientras que el 1, 2,
3, 4, 10, 11 y 12 los menos polares, podra
decirse apolares, pues se mantuvieron en
la lnea de referencia y algunos que no se
permitieron que se calculara el RF debido
a que se mezclaron y se moviendo durante
su ascenso capilar esto de pueda deber al
error humano o al mal manejo de la
cmara de revelado.

Por otra parte, los puntos 1, 3, 7, 8 y
11 poseen el mismo compuesto, que se
caracteriza por su coloracin azul, el 3, 4 y
10 uno con tomo amarillo y por ltimo, los
fucsias del 9, 11 y 8.
Luego, se empleo la tcnica de
cromatografa en capa fina, para estudiar
analgsico con placas de gel slice
activadas, es decir sin contenido de agua,
se dio la eleccin del solvente, haciendo
varias pruebas para descartar y se deja activar y se visualiza la
seleccionar el ms adecuado entre el
acetato de etilo, cloroformo, butanona,
2:9:9 de 1-butano. Usando migran y rhinal,
se comparan los resultados una vez
revelados, el mejor es la butanona, pues
adems de desplazar los compuesto por la
placa se nota su separacin a lo largo de
la fase estacionaria, caso contrario en los
otros solventes.
Ya seleccionada la butanona como
fase mvil, se colocan en placas
desactivadas cafena, fenacctina, acido
aspartico, migran y rhinal, por tratarse de
una capa fina de gel slice muy polar,
retendr en la parte inferior a las
compuestos afines, es decir con el menor
Rf calculado, como la cafena con
(0,270,02) y el menos apolar con
(1,000,03) de Rf perteneciente al rhinal.
En la separacin de pigmentos
vegetales, la fase estacionaria es seca, sin
presencia de agua, por tratarse de
compuestos poco polares, para una mejor
retencin en la capa fina; las soluciones de
rosa y siempre verde, en el mejor eluyente,
es decir butanona, dieron un Rf con
valores cercanos, es decir se pueden
poseer compuestos similares.
Conclusin.
En la cromatografa de papel, se
emplean compuestos polares, para
arrastrar los compuestos afines a l hacia
partes superiores del papel, ste por ser
tericamente neutro albergar los
componentes apolares en la parte inferior.
Los aminocidos no poseen un color
caracterstico, para revelar su
desplazamiento en la cromatografa se le
aade anhidrina, que cubre a los
compuestos de aminocidos con tonos
violetas, dependiendo del pH.
El iodo tambin es un agente
revelador, usado en pigmentos vegetales,
cromatografa en una cmara UV.
La cromatografa de capa fina, usa
como fase estacionaria gel silica, muy
polar, por ende, los compuestos se
separaran de manera que los apolares se
muevan a una mayor distancia, mientras
que los polares se retendrn en la parte
inferior.
Muestras den una razn de flujo
similar o muy cercana, poseern el mismo
compuesto.
La cromatografa es un mtodo que sirve
para separar e identificar cuantos
compuestos posee una mezcla, se ve
afectada por el tipo de fase mvil y
estacionaria empleada, as como de la
concentracin de la muestra.
Referencias.
[1] Chromatography (n.d) Wikipedia, The
Free Encyclopedia. Extrado el 6 de
Abril 2015 desde:
en.wikipedia.org/wiki/Chromatograp
hy
[2] Zubrick, J. (1988). The Organic Chem
Lab Survival Manual. A Students
Guide to Techiniques John Wiley &
Jons Inc.
ANEXOS
Muestra de clculo:
Para calcular el RF de cualquier
componente se divide lo que recorri ese
componente entre lo que recorri el
solvente en que se encuentra. El error de
clculo viene dado por las frmulas de
propagacin de errores. Por ejemplo con el
RF de marcador de color # 4 en solvente
4:1:5
RF= (0,040,01)
Vale acotar que segn bibliografa
consultada la medicin de lo recorrido por
el compuesto se hace desde la lnea del
inicio hasta el centro de la mancha del
compuesto.

0,3
= 0,04
8,3

0,3 0,1 2 0,1 2

= ( ) + ( ) 0,01
8,3 8,3 0,3
Tabla 4. Reactivos a emplear en la prctica

Compuesto Estructura Importancia Industrial

NH2

Es un aminocido componente de
H las protenas sintetizadas por los
OH seres vivos. Se ha sugerido que la
Lisina
NH2 lisina puede ser benfica para
aquellas personas que presentan
O infecciones con herpes simple,
tambin prometedor para el
tratamiento de cncer.
O

Acido O Es uno de los aminocidos que

asprtico OH actan como neurotransmisores.

OH NH2

S
H
Es un intermediario en la
Metionina OH biosntesis de la cistena, la
H2N carnitina, la taurina, la lecitina, la
fosfatidilcolina y otros fosfolpidos.
O
 Es uno de los veinte aminocidos
H
Leucina que utilizan las clulas para
OH sintetizar protenas reduciendo la
H2N degradacin del tejido muscular.

O
Produccin de tintas de impresin
para la industria grfica.
Produccin de tiner y solventes de
pinturas en industria de pinturas.
En la industria de adhesivos y
colas derivados de la celulosa. En
la industria alimenticia, en
productos de confitera, bebidas,
O dulces. En esencias artificiales de
Acetato de frutas.
Etilo Remocin de sustancias resinosas
O en la industria del caucho. En la
elaboracin de cueros artificiales y
para revestir y decorar artculos de
cuero.
Disolvente de compuestos
utilizados para revestir y decorar
objetos de cermica. Solvente
para la elaboracin de varios
compuestos explosivos.
Usado como reactivo relajante por
los lpidos orgnicos, el
Cl triclorometano es usado para
dormir. Adems, debido a que es
Cloroformo Cl usualmente estable y miscible con
C
la mayora de los compuestos
H Cl
orgnicos lipdicos y
saponificables, es comnmente
utilizado como solvente.

Utilizado como base disolvente en

O diversas aplicaciones y como
intermediario de sntesis del
Butanona
perxido de metil etil cetona,
usado en la catlisis de algunas
reacciones de polimerizacin.
 HO O

Es un frmaco de la familia de los

salicilatos, usado frecuentemente
cido O
como antiinflamatorio, analgsico
Acetilsaliclico
(para el alivio del dolor leve y
moderado), antipirtico (para
O reducir la fiebre) y antiagregante
plaquetario.

O
Usada tanto recreacionalmente
como mdicamente para reducir la
N fatiga fsica y restaurar el estado
N
de alerta mental en los casos que
Cafena
exista una inusual debilidad o
N
aletargamiento. El consumo global
O N de cafena fue estimado en
120.000 toneladas por ao
convirtindola as en la sustancia
psicoactiva ms popular.
H
N

Fenacetina Es una medicina utilizada para

combatir el dolor muscular
O
O