Unidad de Competencia

HISTOLOGA ANIMAL

Subunidad de Competencia:
Ejecutar tcnicas microgrficas aplicadas
a una seleccin de tejidos animales.

Presenta:
Biol. Mar. Carlos Augusto Aguilar Cruz
 Unidad de Competencia
HISTOLOGA ANIMAL
AVISO DE RESPONSABILIDAD
Para comprender los temas tratados en esta presentacin se deber
contar con conocimientos previos, de lo contrario su comprensin
ser incompleta e inadecuada.
El contenido de las diapositivas debe considerarse como parcial y
slo ser utilizado con fines demostrativos del tema desarrollado.

La informacin de este archivo no es adecuada para la

presentacin de tareas o el estudio de exmenes, pues en
ellos se contemplarn aspectos que aqu no se presentan.

Siempre se debe tener en cuenta el presente aviso.

Conceptos bsicos de la histologa
La histologa es el estudio completo de los tejidos, su
organizacin, desarrollo, especializacin, forma y funcin
en el conjunto del cuerpo.

Los tejidos son agregados celulares cuyas clulas

mantienen funciones fisiolgicas uniformes y que en su
conjunto actan como una estructura funcional.

Las clulas de un tejido observan la misma tendencia en

su especializacin y generalmente sus componentes son
comunes entre ellas.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Conceptos bsicos de la histologa
Elementos que forman un tejido animal.

Los cuatro tejidos bsicos:

Epitelial
Reviste o recubre
Actividad glandular

Conectivo
Tejido de sostn
Asiste al soporte metablico del organismo

Muscular
Responsable del movimiento del organismo

Nervioso
Transmite el impulso nervioso
rganos de los sentidos
 Conceptos bsicos de la histologa
La histologa puede ser abordada tanto como una herramienta
como una disciplina cientfica en s dependiendo de cmo se
aborde un estudio y de los alcances que se le desee lograr.

Campos de estudio de la histologa.

Histomorfologa o histografa
Estructura, forma y descripcin de los tejidos y sus componentes.
Histofisiologa
Es la relacin entre la forma y el funcionamiento de los tejidos.
Histomeomerologa
Localizacin de cada tipo de tejido a lo largo del cuerpo.
Histoqumica
Histognesis o histogentica
Histopatologa
Neurohistologa
Conceptos bsicos de la histologa
Herramienta de trabajo indispensable

Microscopio estereoscpico o lupa

Microscopio fotnico o compuesto
Campo claro
Contraste de fases
Fluorescencia
Luz polarizada
Conceptos bsicos de la histologa

Microscopa fotnica
 Conceptos bsicos de la histologa
Microscopa electrnica
En lugar de reflejar la luz a travs de tejidos delgados con
diferente ndice de contraste, el microscopio electrnico
es capaz de formar imgenes a partir de la emisin y
deteccin de fotones

Microscopio Electrnico de Barrido

Microscopio Electrnico de Transmisin

Vista normal 100,000 nm

Microscopio ptico 400 nm
Microscopio Electrnico 0.08 nm
Conceptos bsicos de la histologa
Microscopio Electrnico de Barrido (SEM)

Se observan estructuras en tres dimensiones, y la forma de las

estructuras de inters.
Slo es til para evaluar la superficie de las clulas.
Conceptos bsicos de la histologa
Microscopio Electrnico de Transmisin (TEM)

Se observan estructuras dos dimensiones.

De mejor resolucin que el SEM, para piezas de tejido menores a
una micra de grosor.
til para evaluar la estructura interna de las clulas.
Equivalente de hasta 300,000x
Tipos de tcnicas microgrficas
Tcnicas de estudio de las clulas.
En fresco
Supravital
Material vital sin fijar.
Recin extrado del organismo.
Mantiene actividad metablica.

Postvital
El material vital no est fijado.
Sin actividad metablica.
Muerto.

Post mortem
Tcnicas microgrficas
Tipos de tcnicas microgrficas
Conjunto de procedimientos citolgicos e histolgicos
aplicados con el objeto de estudiar la clulas y tejidos a
partir de organismos frescos.

Tcnicas comunes en un laboratorio de histologa:

Montajes completos
Frotis sanguneos
Citologas exfoliativas
Macerados
Fraccionamiento Celular
Cortes Histolgicos
Tipos de tcnicas microgrficas
Montajes completos: (embriones, parsitos, insectos)

Organismo vivo
Narctico o relajante
Fijador
Lavado
Preservacin (alcohol 70%)
Tincin
Deshidratacin (alcohol)
Aclarar (aceites)
Montaje permanente en resina
Tipos de tcnicas microgrficas
Frotis: (Sangre, fluidos corporales, bacterias)
Citologas exfoliativas (Bucales, vaginales)

Fluido orgnico o tejido exfoliado

Frotis en laminilla
Fijacin (opcional)
Tincin
Secado (opcional)
Montaje (opcional)
Tipos de tcnicas microgrficas
Macerados: (Cromosomas)

Tejido fresco
Pieza o porcin de tejido
Tincin
Macerado en portaobjetos
Montaje (opcional)
Tipos de tcnicas microgrficas
Cortes en Cristato: (Cortes en congelacin)

Organismo vivo o piezas de tejido

Congelar
Cortes
Fijacin
Tincin
Montaje
Tipos de tcnicas microgrficas
Cortes en Resina: (Histologa de alta resolucin)

Organismo vivo o piezas de tejido

Fijacin
Lavado
Deshidratar (alcohol)
Montar en resina
Cortar
Teir
Montar
Tipos de tcnicas microgrficas
Cortes en Parafina: (Cortes histolgicos finos)

Organismo vivo o piezas de tejido

Fijacin
Lavado
Preservar (alcohol 70%)
Deshidratar (alcohol)
Aclarar
Infiltrar con parafina e incluir
Cortar
 Tipos de tcnicas microgrficas
Cortes en Parafina: (Cortes histolgicos finos)

Corte en Portaobjetos
Desparafinar
Hidratar
Teir
Deshidratar
Aclarar
Montar
 Teora de la fijacin
Finalidad de la fijacin
Fijar es inmovilizar las estructuras de un material
biolgico en un estado lo ms cercano al estado de los
procesos orgnicos actuales del tejido.

Detiene la necrosis tisular y descomposicin celular.

Evita la autolisis y las deformaciones durante las etapas

del proceso mismo de la fijacin.
 Teora de la fijacin
Caractersticas de un buen fijador
Insolubiliza los componentes inter e intracelulares.
Penetra rpidamente en el tejido.
Endurece el tejido sin alterarlo.
No interfiere osmticamente en la estructura celular.
No produce cambios en el pH.
Inhiben la liberacin de enzimas intracelulares.
 Teora de la fijacin
Caractersticas de un buen fijador
No produce precipitados indeseados.
Son antispticos.
Acta como mordente.
Aumenta la afinidad del tejido por los colorantes.
Incrementa los ndices de refraccin.
De fcil acceso y costo.
Fcil de manipular.
 Teora de la fijacin
Clasificacin de los fijadores por su estado natural
Slidos
cidos minerales
cido crmico, cido smico.
Sales metlicas
Bicloruro de mercurio, bicromato de potasio.
cidos orgnicos
cido pcrico.

Lquidos
cido actico, metanol, acetona, etanol (alcohol etlico)

Gaseosos
Formaldehdo
 Teora de la fijacin
Tipos de fijadores
Oxidantes
Commente forman precipitados de componentes celulares.
Tetraxido de osmio, cido crmico, bicloruro de mercurio.

Reductores orgnicos
Generalmente actan por coagulacin protica.
Formaldehdo, metanol, etanol, glutaraldehdo.
 Teora de la fijacin
Mecanismos de accin del fijador
Deshidratacin
Alcohol, acetona.

Formacin de sales
Dicloruro de mercurio, dicromato de potasio, cido pcrico.

Cambio en el estado coloidal

cido actico, cido crmico.

Reticulacin de protenas
Formaldehdo, glutaraldehdo, tetrxido de osmio.
 Teora de la fijacin
Clasificacin por su composicin
Simples
Alcohol etlico (80 % a absoluto o 99.5%)
Formaldehdo (Gas concentrado en solucin al 35-40 %)
Formalina o formol (Solucin saturada de formaldehdo al 10%)
cido pcrico.
Acetona (tiene muy baja accin antienzimtica)

Compuestos (mezclas)
Formol-Alcohol (FA)
Formol-Alcohol-cido actico (AFA, FAA)
Formol neutro; formol amortiguado con fosfatos (PBF)
Bouin (cido pcrico, formaldehdo, etanol)
Davidson (Formaldehdo, etanol, cido actico, glicerina)
 Teora de la fijacin
La fijacin con formaldehdo es una de las ms
tradicionales en histologa mdica.

Coagulacin de protenas.
Penetracin rpida.
Velocidad de fijacin lenta.
Barato.
Fcil preparacin.
Txico, cancergeno y mutgeno.

Formol 10% amortiguado con fosfatos.

Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la fijacin
Factores que dificultan la fijacin
Propios del tejido
Autlisis
Descomposicin celular por sus propias enzimas.
Putrefaccin
Destruccin del tejido por accin bacteriana.
Desnaturalizacin protica
Pierden su estructura helicoidal y toman formas fibrilares
Prdida de substancias solubles
Desplazamiento de componentes celulares por
difusin
Destruccin enzimtica
 Teora de la fijacin
Factores que dificultan la fijacin
Por manipulacin de la muestra
Momento de la fijacin
Manipulacin de la muestra
Desecacin
Grosor excesivo
Exceso de sangre o mucosidad
Volumen del fijador
 Teora de la Coloracin
Coloracin
Es la propiedad que poseen ciertos cuerpos de ejercer sobre la luz una
absorcin selectiva.
Como consecuencia transmite las radiaciones complementarias a las que
absorbe.

Es muy comn que las tcnicas de coloracin o tcnicas de tincin se

hayan desarrollado en otros campos de actividad humana diferente al de
las ciencias biolgicas.
En particular muchos colorantes histolgicos tuvieron y tienen su origen en
la industria textil y de alimentos.
 Teora de la Coloracin
Teora Auxcromo-Cromgeno
Es una molcula que comunica o confiere su coloracin a otros cuerpos.

Cromforo
Es la parte de una molcula responsable de su color por absorcin de
ciertas longitudes de onda (otorga su color especfico).
Esta molcula por s sola es inestable y podra ser incolora.
Cromgeno
Es el conjunto de un cromforo y un anillo de benceno.
El cromgeno es una molcula coloreada.
No siempre es un colorante pues podra no tener afinidad a los tejidos.
Auxocromo
Es un grupo de radicales positivos que hacen que una intensifican la
molcula coloreada del cromgeno.
Enlaza el cromgeno al cuerpo a ser coloreado.

An as es importante recalcar que no existe una explicacin que

aplique a todos los casos en que los tejidos animales se colorean.
Imgenes tomadas de:
http://www.transtutors.com/chemistry-homework-help/chemistry-in-action/theory-of-dyes.aspx.
http://www.ecusd7.org/ehs/ehsstaff/gbannon/apchem/labs/thinlayer.htm
 Teora de la Coloracin
Aumentan el ndice de refraccin.
Dan contraste a componentes celulares.
Indican substancias especficas de los tejidos.
Permiten la identificacin de estructuras microscpicas.
Facilitan la estandarizacin.
 Teora de la Coloracin
Teoras propias de la coloracin
Cmo se fija el colorante a los tejidos?
Teora fsica
El tejido atrae a pequeas y minsculas partculas de colorante por
adsorcin por intercambio de electrones.
Sudn Negro IV.

Teora qumica
El tejido y el colorante reaccionan al contacto entre ellos formando una sal
insoluble (hasta cierto punto) por enlaces covalentes, inicos o de
hidrgeno.

Se ha observado en muchos colorantes que la accin de

coloracin es sinrgica.
 Teora de la Coloracin
Tipos de coloraciones
Coloraciones directas (Sustantivas)
Los colorantes se unen directamente al tejido.

Coloraciones indirectas (Adjetivas, por mordanza o mordentadas)

Es necesario que el tejido sea tratado previamente con otra substancia
intermedia que lo prepara para recibir al colorante.
Esas substancias son llamadas Mordentes.
La combinacin de mordente y colorante se denomina laca.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
Origen del colorante
Natural
Animal
Carmn (Cochinilla) (rojizo)
Vegetal
Hematoxilina (Palo de Campeche) (prpura)
Orcena (Liquen) (azuloso)
Tornasol (Liquen)
Mineral
xido de Hierro, azul ultramarino.

Artificial
Derivados de la anilina, de la hullla, carbn o sintticos.
Han sustituido a colorantes naturales.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
Por sus afinidades a componentes celulares
cidos
Cuando el colorante es un cido.
Tienen afinidad al citoplasma.
Eosina (cido eosnico).
Bsicos
Cuando el colorante es una base.
Tienen afinidad al ncleo.
Azul de metileno; Hematoxilina.
Neutros (Mixtos)
Son sales de componentes coloreados cidos y bsicos.
Giemsa.
Indiferentes
No son capaces de formar sales, ni son cidos o bsicos.
Presentan solubilidad selectiva.
Sudn III Insoluble en soluciones acuosas.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
Efecto de tincin de los colorantes
Monocromticos
El colorante slo produce un color intenso.
Rojo Oleoso O.
Ortocromticos
El colorante tie del mismo color la solucin colorante y el tejido.
Azul de anilina.
Metacromticos
El colorante tie tejidos de un color diferente al de la solucin colorante.
Azul de alcin, azul de toluidina.
Pancromticos o panpticos
Los tejidos reaccionan de mltiples maneras con una misma solucin
colorante.
May-Grnwald para teir sangre o mdula sea.
 Teora de la Coloracin
Accin de coloracin
Progresiva
El tejido adquiere el colorante mientras est inmerso en la solucin
colorante.
Comnmente el tejido se satura de colorante hasta el punto deseado y se
lava el exceso para evitar sobretincin.

Regresiva
El tejido debe ser sobreteido y posteriormente debe ser sumergido en una
solucin que diluya el colorante.
Es ms comn de componentes de tejido que precisan de un cierto grado
de contraste para distinguirlo claramente en el tejido.
A ese proceso se le llama diferenciacin.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
Momento de la coloracin
Simple
Cuando se aplica un solo colorante.
Azul de toluidina, rojo de alizarina.

Combinada
Son las ms comunes.
Favorecen el contraste entre diferentes elementos de un tejido.

Puede ser:
Simultnea
Cuando todos los colorantes se aplican al mismo tiempo.
Tricrmico de Gomori; Solucin de Van-Gieson.
Sucesiva
Cuando los colorantes se aplican en una serie sucesiva de pasos ordenados.
Tricrmica de Masson, tricrmica de Mallory.
Hematoxilina Eosina.
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 Teora de la Coloracin
Factores de los que depende la coloracin.
Naturaleza del tejido
Depende del tipo de tejido bsico y sus variaciones.
Grosor de los cortes
La fijacin
Cada coloracin tiene su fijador de eleccin.
Marca y lote del colorante
Aunque el Color Index (CI) es un intento de estandarizar la calidad
de colorantes de distintos fabricantes, la calidad puede variar.
Madurez de las soluciones
Es el tiempo que lleva preparada una solucin colorante.
Temperatura ambiente.
Exposicin a la luz solar
Fotosensibilidad de la reaccin y del colorante.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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 Teora de la Coloracin
La tcnica de tincin ms generalizada y
difundida a nivel mundial es la que se conoce
simplemente como: Hematoxilina Eosina

La familia de tcnicas H-E se define por sus

coloraciones.

La hematoxilina se comenz a utilizar desde

1865 como colorante biolgico.
 Teora de la Coloracin
El ncleo morado es un componente basfilo.
El citoplasma rosado es un componente
acidfilo.

Los componentes basfilos son aquellos que en los

tejidos tienen un pH cido, y con H-E toman colores
morados o azulados.

Los componentes acidfilos son aquellos que en los

tejidos tienen un pH bsico y con H-E toman colores
rosados o rojizos.
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
Existen ms de 60 frmulas de preparar hematoxilina.
Harris
Ehrlich
Mayer
Cole
Carazzi
Gill
Delafield
Groat
Frrica de Weigert
Frrica de Krustay
Frrica de Slidder
Frrica de Heidenhain
Hematoxilina fosfotngstica PTAH
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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 Teora de la Coloracin
Frmulas de preparar eosina.
Eosina Y acuosa
Eosina Y alcohlica
Eosina Naranja G
Eosina Y Floxina alcohlicas

Naranja G
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
 Teora de la Coloracin
En literatura especializada se hace referencia
simplemente a:
Hematoxilina Eosina; tcnica H-E.

Hematoxilina de Harris
Eosina Y alcohlica
Imagen tomada de:
Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
stains and H & E.
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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Kumar y Kiernan, 2010. Special
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Imagen tomada de:
Wulff, 2004. Guide to special
stains.
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Wulff, 2004. Guide to special
stains.
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Wulff, 2004. Guide to special
stains.
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Wulff, 2004. Guide to special
stains.