PRCTICA 5

HIDRLISIS ENZIMTICA DE LPIDOS

Aguilar Duque Anglica, Canul Cem Carina Ivonne, Delgado Reyes Janeth, Mrquez
Gaytn Coriolano, Mier Morales Susana Sarah.

5 semestre Grupo B.

I.Q. Rodrigo Cervando Villegas Martnez.

Docente del laboratorio de Laboratorio de Cintica Qumica.

Universidad Autnoma de Zacatecas, Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas, Programa

de Ingeniera Qumica. Nuevo campus UAZ Siglo XXI Edificio 6, km 6 s/n Carr.
Zacatecas-Guadalupe, Ejido La escondida, C.P. 98160, Zacatecas, Zac.

11 de octubre del 2017.

OBJETIVO GENERAL.

Observar el efecto de un catalizador enzimtico sobre la velocidad de la reaccin de

descomposicin de una grasa.

INTRODUCCIN

La oxidacin de los cidos grasos constituye la principal fuente de energa en el catabolismo

de lpidos. En los lpidos el grupo relevante son los cidos grasos.

Los triacilgliceroles, que constituyen la forma principal de almacenamiento de energa

qumica de los lpidos, y los fosfoacilgliceroles, que son componentes importantes de las
membranas biolgicas, tienen cidos grasos como parte de sus estructuras unidas por enlaces
covalentes. En ambos tipos de compuestos, el enlace entre el cido graso y el resto de la
molcula puede hidrolizarse y la reaccin es catalizada por grupos apropiados de enzimas,
las lipasas, en el caso de los triacilgliceroles, y las fosfolipasas, en el caso de
fosfoacilgliceroles.

La hidrlisis enzimtica se produce en presencia de catalizadores biolgicos (enzimas

lipasas). En los animales se produce en el estmago y en el intestino. En los vegetales y
plantas superiores lignificadas, las enzimas lipasas tienen su mxima actividad en el proceso
de germinacin de las semillas oleaginosas (vegetales que poseen aceites y grasas que pueden
ser extrados). En los humanos la lipasa es una enzima liberada por el pncreas dentro del
intestino delgado y que desencadena la descomposicin de las grasas en cidos grasos. Se
encuentra en la leche materna y, segn estudios bioqumicos, es idntica a la enzima
colesterol esterasa (o lipasa pancretica no especfica), por lo que se supone que el origen es
pancretico y llega a las glndulas mamarias a travs de la circulacin sangunea. La funcin
principal de esta lipasa gstrica es ayudar a la absorcin de grasas.

La hidrlisis de lpidos puede tener como objetivo la obtencin de cidos grasos o alcoholes,
productos de gran inters industrial, y tambin la descomposicin de la grasa.

La situacin en la que actan las lipasas en sistemas naturales (in vivo) fue el primer
sistema en que se estudi la cintica de la hidrlisis enzimtica de lpidos constituyendo un
ejemplo clsico de cintica enzimtica heterognea.
La cintica de la accin de las lipasas ha sido estudiada en diferentes dispositivos y para
distintas reacciones catalizadas por enzimas. En general se divide en 3 grandes grupos:

Sistemas micelares y emulsiones: Aquellos en los que el sustrato (puro o disuelto en

algn disolvente orgnico) se encuentra disperso (como micela o pequeas gotas) en
el seno de una fase acuosa continua, en la cual se encuentra la enzima, o bien la
solucin acuosa que contiene la enzima es dispersada en la fase oleosa donde se halla
el sustrato.
La reaccin catalizada en este caso es la hidrlisis, ya que el exceso de agua impedira
llevar a cabo la sntesis de forma favorable.
Sistemas micro acuosos: La mezcla reaccionante est formada por el /los sustratos,
que pueden estar o no disueltos en un disolvente orgnico, y la enzima, que es
empleada de forma directa (libre o inmovilizada) o bien encapsulada en micelas
inversas.
Son adecuados para la reaccin de sntesis, si bien son tambin son utilizados en
hidrlisis.
Sistemas no dispersos: En los que la fase acuosa y la orgnica (sustrato) no tienen
contacto directo entre s, al hallarse separados por membranas, en las que la enzima
se encuentra inmovilizada.

Independientemente del ambiente en que se encuentra la enzima, el mecanismo cataltico

actualmente aceptado para describir la accin de lipasas y esterasas se centra en el residuo
cataltico serina, situado en su centro activo.

CONTENIDO

En las clases de enzimas que catalizan la hidrlisis de diversos steres hay diferencia entre
las lipasas y las Esterasas. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial y grasas,
o sea triglicridos de cidos grasos, de cadena larga, mientras que los substratos naturales de
las esterasas, son los esteres sencillos de cidos de bajo peso molecular. Sin embargo, las dos
clases de enzimas son sumamente inespecficas en cuanto a su accin, y la naturaleza del
cido graso o del alcohol tiene efecto no en la especificidad sino en la velocidad de reaccin.
La hidrlisis de los triglicridos que consumen los animales superiores se lleva a cabo
principalmente en el intestino delgado, por medio de enzimas lipolticas elaboradas en el
pncreas. Las lipasas pancreticas existen en dos tipos: las especficas para romper la unin
ster en la posicin alfa o alfa prima de los triglicridos, y las especficas para las uniones
beta. La hidrlisis completa de los triglicridos procede entonces por pasos. Primero se
hidrolizan rpidamente las uniones alfa y alfa prima, luego lentamente se rompe las uniones
beta.

Estas reacciones se aceleran con las sales biliares como taurocolato o glicocolato de sodio,
que emulsifican y solubilizan a los lpidos. Las sales biliares vienen en la bilis, secrecin del
hgado que pasa al intestino se provoca por la hormona colecistocinina, que se sintetiza en el
intestino delgado y se libera a la circulacin en respuesta en presencia de lpidos en el
duodeno.

La lipasa triacil glicerol acil hidrogenasa. Tambin llamada antiguamente esteapsina,

extrada de diferentes fuentes biolgicas, contiene siempre diversas fracciones proteicas de
muy diversos pesos moleculares, que van desde 39,000 hasta 200,000, todas ellas con
actividad lipolca. Estas esterasas hidrlisis substratos emulsificado, y no ataca a substratos
en verdadera solucin. Se cree que esto se debe a que la enzima se absorbe a su substrato
emulsificado, y a la velocidad inicial de reaccin est en funcin del nmero de molculas
de enzima adsorbidas en la interfase. Se le llama Pancreatina a un extracto de pncreas con
fuerte actividad lipolitica. El mtodo titrimtrico para determinar la accin de la lipasa,
consiste en estimar por titulacin la cantidad de cidos grasos liberados de los steres.

MATERIALES Y REACTIVOS

Material y equipo Reactivos

6 matraces Erlenmeyer de 125ml Leche homogeneizada (60ml)
1 bureta de 25ml Pancreatina 1%
1 probeta de 50ml Etanol 95%
1 pinza de tres dedos Hidrxido de potasio 0.05N
1 soporte universal Fenolftalena (indicador)
1bao mara a 37C
 1 pipeta graduada de 1ml
1 pipeta graduada de 5ml
1 termmetro

DESARROLLO EXPERIMENTAL

a) Colocar en cada matraz 1ml

de leche homogeneizada.

b) Adicionar a cada matraz

0.4ml de extracto neutro de
pancreatina de 1% y colocarlos
en un bao de agua a 37C

c) Esperar15min y retirar el primer

matraz del bao. Adicionar con una
probeta y titular con KOH usando 1
gota del indicador alcohol

d) Titular todos los matraces

como el anterior, (titularlos
cada 15min).

Para preparar el testigo

1) Aadir a un matraz 1ml de leche 2) agregar 2.5ml de alcohol y 2 gotas de

homogeneizada y 0.3 de pancreatina fenolftalena y titular con KOH 0.0.5N,
hervida previamente durante 3min. para luego restar el valor gastado de
titulante en la muestra problema.
DATOS, CLCULOS Y RESULTADOS.

1.- Graficar el volumen gastado de titulante (corregido con el volumen gastado de la muestra
blanco) vs tiempo de hidrlisis.

Muestra t/min V.KOH/ml V. corregido/ml

blanco 0 0.7 0
1 15 1.3 0.6
2 30 1.4 0.7
3 45 1.5 0.8
4 60 1.6 0.9
5 75 1.7 1

Tabla 1. Datos obtenidos en la prctica.

V.corregido vs tiempo
1.2

1
V.corregido/ml

0.8
y = 0.0067x + 0.5
0.6
R = 1
0.4

0.2

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min

Grafico 1. V. corregido vs tiempo.

2.- Escriba una reaccin qumica para la reaccin de una lipasa.

3.- Suponiendo que la grasa es triesterina, calcule el nmero de miligramos de triesterina
hidrolizada por su lipasa en una hora, basndose en la cantidad de cido liberado durante el
intervalo.

C1V1 C2V2
CKOH VKOH CLECHEVLECHE
CKOH VKOH
CLECHE
VLECHE

gr
0.05
gr 1.6 103 L
L
CLECHE mol
1.0 103 L
CLECHE 0.08M

mol
M
L
mol g / PM
g PM * L * M

891.48 mol
g

1.6 103 L 0.08 molL
m 0.1141g
m 114.1mg
CONCLUSIN

La pancreatina es una enzima que se obtiene del pncreas de bovinos, esta enzima funciono
como catalizador de la reaccin de los cidos grasos de la leche y el alcohol.

El volumen de titulante (KOH) fue aumentando conforme aumentaba el tiempo de reaccin.

La teora nos menciona que el cambio de color durante la titulacin es consecuencia de la
liberacin de cidos grasos, esto se debe a que la lipasa son triglicridos de cadena larga
siendo estos triglicridos los que se hidrolizan provocando el rompimiento del ster que
forma parte de la estructura, dicho rompimiento provoca que se necesite ms volumen de
titulante para que los cidos reaccionen con el alcohol.

BIBLIOGRAFA

Daz Lara, L.A, Gaytn Rivas, D, Lara Garca, C. T, Mendoza Hernndez, C, Ramrez
Rocha, M. & Rodrguez Gutirrez, J. (s.f.). Hidrlisis enzimtica de lpidos. Recuperado de
https://es.scribd.com/doc/309146915/Practica-7-Hidrolisis-Enzimatica-de-Lipidos (Fecha
de Consulta: 10/10/2017)

Guerrero, S. (2012). Lpidos. Recuperado de

https://es.slideshare.net/staceyguerrero/lipidos-13431423 (Fecha de Consulta: 10/10/2017)

Garca M. (2005). Recuperado de https://hera.ugr.es/tesisugr/15750796.pdf (Fecha de

Consulta: 11/10/2017)

ANEXO
Imagen 1. Muestras tituladas.