ESTADO DEL ARTE EN LA APLICACIN DE TRATAMIENTOS BIOTECNOLGICOS

PARA LA DEGRADACIN DE RESIDUOS SLIDOS GRASOS PROCEDENTES DE

EFLUENTES METALMECNICOS

SUSAN NATALIA CATAO VALENCIA

UNIVERSIDAD CATLICA DE MANIZALES

INSTITUTO DE INVESTIGACIN EN MICROBIOLOGA Y BIOTECNOLOGA
AGROINDUSTRIAL
MAESTRA EN MICROBIOLOGA AGROINDUSTRIAL
MANIZALES
2016
ESTADO DEL ARTE EN LA APLICACIN DE TRATAMIENTOS BIOTECNOLGICOS
PARA LA DEGRADACIN DE RESIDUOS SLIDOS GRASOS PROCEDENTES DE
EFLUENTES METALMECNICOS

SUSAN NATALIA CATAO VALENCIA

Trabajo de grado presentado como requisito para optar al ttulo de:

Magster en Microbiologa Agroindustrial

Director:
PhD. Javier Mauricio Naranjo Vasco

Codirector:
PhD. Wilmar Osorio Viana

UNIVERSIDAD CATLICA DE MANIZALES

INSTITUTO DE INVESTIGACIN EN MICROBIOLOGA Y BIOTECNOLOGA
AGROINDUSTRIAL
MAESTRA EN MICROBIOLOGA AGROINDUSTRIAL
MANIZALES
2016
 Nota de aceptacin
_____________________________________
____________________________________________
____________________________________________
____________________________________________
______________________________

______________________________
Firma de Director del Trabajo de Grado

__________________________________
Firma del Presidente del Comit de Programa

Firma de Evaluador
 DEDICATORIA

La inteligencia consiste no solo en el conocimiento, sino tambin en la destreza de aplicar dichos

conocimientos en la prctica

Aristteles

Este trabajo se lo dedico a mis padres, tanto por haberme dado la inteligencia,
como por ensearme a utilizarla. Su constante apoyo y motivacin para hacer
crecer en m el amor por el estudio, sentaron las bases para alcanzar este logro.
Anglica y Daniel, mis queridos hermanitos, ustedes tambin han sido un gran
incentivo en mi vida.

A Dios, infinitas gracias por haberme regalado una familia tan especial.
 AGRADECIMIENTOS

Instituciones y oficinas

Universidad Catlica de Manizales

Rectora, Vicerrectora Acadmica y Vicerrectora Administrativa y Financiera.

Direccin de Investigaciones y Posgrados.
Instituto de Investigacin en Microbiologa y Biotecnologa Agroindustrial.

A las empresas INCOLMA INVERMEC y Soluciones Microbianas del Trpico por el

apoyo tcnico, asesoras y suministro de insumos, durante la parte experimental de
este trabajo.

Doctores e investigadores

Dr. Mauricio Naranjo Vasco y Dr. Wilmar Osorio Viana, Directores de la tesis.
Por la determinacin con que asumieron este compromiso, la confianza,
motivacin y apoyo constantes durante el rescate de este barco que
navegaba a la deriva.
M.Sc. Patricia Eugenia Vlez e Ing. Jos Fernando Restrepo, por su paciencia,
enseanzas y acompaamiento durante una gran parte de esta aventura.
M.Sc. Narmer Fernando Galeano, por su acompaamiento en la realizacin
de las pruebas de laboratorio.
M.Sc. Dora Janeth Garca Jaramillo, por siempre estar atenta y dispuesta a
brindarme sus valiosas recomendaciones.

Estudiantes de Postgrados y Compaeros

A Margarita Mara Uribe Lpez, Guido Ernesto Villota Calvachi y Nstor Fabio Holgun
Osorio, por todos los momentos compartidos y el apoyo constante en las duras
jornadas de trabajo.

Agradecimientos personales

A Santiago Herrera Castao por su paciencia y compaa, adems de tener las

palabras perfectas para sacarme una sonrisa hasta en los momentos ms difciles.

A la Rectora de la Institucin Educativa Hojas Anchas, Carmen Sofa Monroy Daz,

por la flexibilidad que me brind en el horario de trabajo, para hacer posible mi
crecimiento acadmico y profesional.
 CONTENIDO

1 ENFOQUE DE LA TESIS ..................................................................................................... 14

1.1 Contexto ................................................................................................................... 14
1.1.1 Normativa ambiental ...................................................................................... 14
1.2 Problema de investigacin .................................................................................... 15
1.3 Objetivos ................................................................................................................... 17
1.3.1 Objetivo general .............................................................................................. 17
1.3.2 Objetivos especficos....................................................................................... 17
1.4 Metodologa ............................................................................................................ 17
1.4.1 Metodologa de revisin ................................................................................. 17
1.4.2 Metodologa experimental............................................................................. 18
1.5 Antecedentes .......................................................................................................... 20
2 REFERENTE TERICO........................................................................................................ 24
2.1 Generalidades del sector metalmecnico......................................................... 24
2.1.1 Sector metalmecnico en Colombia ........................................................... 24
2.1.2 Sector metalmecnico en Manizales ........................................................... 26
2.1.3 Residuos generados en los procesos de la industria metalmecnica .... 28
2.1.4 Impacto ambiental de la industria metalmecnica ................................. 34
2.2 Tecnologas de tratamiento de residuos peligrosos........................................... 38
2.2.1 Tratamientos Fsico-Qumicos ......................................................................... 39
2.2.2 Tratamientos Trmicos ..................................................................................... 41
2.2.3 Tratamientos Biolgicos................................................................................... 41
2.3 Biorremediacin ...................................................................................................... 44
2.3.1 Reactores de Suelos Activados (RSA) ........................................................... 46
2.3.2 Compostaje ...................................................................................................... 46
2.3.2.1 Fases del compostaje aerobio ............................................................... 47
2.3.2.1 Ventajas y desventajas del compostaje ............................................... 49
2.3.3 Fitorremediacin asistida por microorganismos .......................................... 49
3 BIORREMEDIACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS CON GRASAS Y LUBRICANTES
51
 3.1 Estado del arte......................................................................................................... 51
3.2 Aspectos claves en la biorremediacin de residuos contaminados con
grasas y lubricantes............................................................................................................ 63
3.2.1 Caractersticas fisicoqumicas tenidas en cuenta a nivel experimental . 63
3.2.1.1 Aireacin.................................................................................................... 63
3.2.1.2 pH ................................................................................................................ 64
3.2.1.3 Temperatura .............................................................................................. 65
3.2.1.4 Relacin Carbono/Nitrgeno/Fsforo (C/N/P) .................................... 65
3.2.1.5 Humedad ................................................................................................... 65
3.2.2 Aislamiento de microorganismos................................................................... 66
3.2.3 Microorganismos relevantes........................................................................... 66
3.2.3.1 Pseudomonas sp. ...................................................................................... 68
3.2.4 Evaluacin de la degradacin microbiana ................................................ 76
3.2.4.1 Actividad deshidrogenasa ...................................................................... 76
3.2.4.2 Respirometra ............................................................................................. 77
3.2.4.3 Actividad lipoltica .................................................................................... 77
4 ASPECTOS TECNOLGICOS DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL PARA TRATAMIENTO
POR BIORREMEDIACIN DE RESIDUOS ORGNICOS CONTAMINADOS CON GRASAS Y
LUBRICANTES ........................................................................................................................... 78
4.1 Metodologa para la aplicacin a nivel industrial ............................................. 78
4.1.1 Sitio de muestreo y recoleccin de muestras.............................................. 78
4.1.2 Composicin de los residuos industriales...................................................... 79
4.1.3 Aislamiento y purificacin de bacterias degradadoras de hidrocarburos
79
4.1.4 Caracterizacin e identificacin microbiana ............................................. 80
4.1.4.1 Caracterizacin fenotpica ..................................................................... 80
4.1.4.2 Caracterizacin genotpica.................................................................... 80
4.1.5 Tolerancia y degradabilidad de grasas ....................................................... 81
4.1.6 Alternativas de aplicacin industrial ............................................................. 82
4.1.6.1 Compostaje ............................................................................................... 82
4.1.6.2 Fermentacin en estado slido (SSF)..................................................... 82
 4.1.6.3 Produccin, extraccin y purificacin de lipasas por FSS .................. 86
4.1.7 Seleccin del proceso e identificacin de las variables de diseo......... 87
4.1.8 Diseo, anlisis de sensibilidad y optimizacin de variables ..................... 88
4.1.9 Seguimiento del proceso en escala piloto .................................................. 89
4.1.10 Caracterizacin de productos y evaluacin econmica ........................ 89
4.2 Caso de estudio: biodegradacin por compostaje de un residuo slido
contaminado con grasas y aceites de una empresa metalmecnica de la ciudad
de Manizales ....................................................................................................................... 89
4.2.1 Sitio de muestreo y recoleccin de muestras.............................................. 90
4.2.2 Caracterizacin fisicoqumica de los residuos industriales ........................ 90
4.2.3 Aislamiento y purificacin de bacterias degradadoras de hidrocarburos
91
4.2.4 Caracterizacin fenotpica microbiana...................................................... 91
4.2.5 Alternativa de aplicacin industrial: Compostaje ...................................... 92
4.2.6 Discusin de resultados ................................................................................... 94
4.2.6.1 Caracterizacin fisicoqumica ................................................................ 94
4.2.6.2 Aislamiento y purificacin de bacterias................................................ 94
4.2.6.3 Caracterizacin fenotpica ..................................................................... 94
4.2.6.4 Compostaje ............................................................................................... 95
5 CONCLUSIONES............................................................................................................... 96
6 REFERENCIAS .................................................................................................................... 98
 SMBOLOS Y ABREVIATURAS

ANDI: Asociacin Nacional de Empresarios de Colombia

BID: Banco Internacional de Desarrollo

BHMS: Medio Selectivo de Sales Minerales Bushnell Hass

CBS: Caldo Bsico de Sales

CCMPC: Cmara de Comercio de Manizales por Caldas

C/N: Relacin carbono: nitrgeno

C/N/P: Relacin carbono: nitrgeno: fsforo

COT: Carbono Orgnico Total

DANE: Departamento Administrativo Nacional de Estadstica

DBO5: Demanda Biolgica de Oxgeno

DQO: Demanda Qumica de Oxgeno

HTP: Hidrocarburos Totales del Petrleo

ICER: Informe de Coyuntura Econmica Regional

IDEAM: Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales

ILAFA: Instituto Latinoamericano del Fierro y del Acero

PIB: Producto Interno Bruto

PHA: Hidrocarburos policclicos aromticos

RSA: Reactores de suelos activados

SSF: Fermentacin en estado slido

TIC: Tecnologas de la Informacin y la Comunicacin y Competitividad

 LISTA DE TABLAS

Tabla 2.1. Facturacin anual y generacin de empleos, por parte

de la industria metalmecnica. ..................................27

Tabla 2.2. Operaciones que pueden llevarse a cabo en cada

etapa del proceso de transformacin en una empresa
..................................30
metalmecnica.

Tabla 2.3. Principales impactos ambientales de las aguas residuales

del sector metalmecnico. ..................................35

Tabla 2.4. Principales impactos de los residuos peligrosos del sector

metalmecnico. ..................................36

Tabla 2.5. Tipificacin de residuos obtenidos de la industria

metalmecnica en el departamento de Caldas. ..................................37

Tabla 2.6. Tratamientos fsico-qumicos aplicados a residuos

peligrosos. ..................................39

Tabla 2.7. Tratamientos trmicos aplicados a residuos peligrosos.

..................................41

Tabla 2.8. Tratamientos biolgicos aplicados a residuos peligrosos.

..................................42

Tabla 2.9. Ventajas y desventajas de los tipos de tratamiento

aplicados sobre los residuos peligrosos. ..................................43

Tabla 2.10. Parmetros iniciales para el compostaje de la mezcla

de materiales contaminados por compuestos orgnicos. ..................................47

Tabla 2.11. Ventajas y desventajas del compostaje como tcnica

de biorremediacin. ..................................49

Tabla 2.12. Resumen de las tcnicas de fitorremediacin.

..................................49

Tabla 3.1. Comparacin de los estudios experimentales realizados

sobre biorremediacin de suelos contaminados con grasas y
..................................55
aceites.

Tabla 3.2. Caractersticas generales del cromosoma de ..................................70

P.aeruginosa.

Tabla 3.3. Codificacin de las enzimas producidas por

Pseudomonas aeruginosa que participan en la - Oxidacin de los
..................................73
cidos grasos.

Tabla 4.1. Caracterizacin fenotpica de las colonias obtenidas del

residuo slido graso. ..................................92

Tabla 4.2. Registro de temperatura para las pilas de residuo graso.

..................................93
 LISTA DE FIGURAS

Figura 1.1 Metodologa de revisin. ..................................18

Figura 1.2 Diagrama de flujo para la implementacin de un

tratamiento de biorremediacin de residuos slidos contaminados
..................................19
con grasas y lubricantes.

Figura 1.3 Certificacin ambiental en la cadena metalmecnica.

..................................23

Figura 2.1 Descripcin del sector metalmecnico.

..................................25

Figura 2.2. Certificaciones con las que cuentan las empresas del
sector. ..................................28

Figura 2.3. Etapas bsicas de proceso en las empresas

metalmecnicas. ..................................29

Figura 2.4. Proceso de produccin de machetes y corrientes de

residuos peligrosos generados. ..................................33

Figura 2.5. Estrategias de biorremediacin.

..................................45

Figura 2.6. Etapas del proceso de compostaje en funcin de la

temperatura. ..................................48

Figura 3.1. Artculos publicados desde 1997 sobre

biorremediacin/biodegradacin en revistas de investigacin
cientfica internacionales referenciados en las bases de datos ..................................51
Science Direct, Springer y Web of Science.

Figura 3.2. Artculos sobre biorremediacin/biodegradacin de

suelos contaminados con aceites y lubricantes industriales
..................................52
referenciados en la base de datos Science Direct .

Figura 3.3. Ruta bsica de degradacin microbiana aerobia de los

hidrocarburos. ..................................64

Figura 3.4. Transferencia de masa de micelas a la clula

bacteriana. ..................................68
Figura 3.5. rbol filogentico de mxima similitud de gnero
Pseudomonas basado en la secuencia del gen 16S rRNA. ..................................69

Figura 3.6. Mapa del cromosoma circular de Pseudomonas

aeruginosa N002. ..................................71

Figura 3.7. Rutas de degradacin microbiana de n-alcanos.

..................................72

Figura 3.8. Oxidacin de n-alcanos por alcano hidroxilasas

pertenecientes a la familia AlkB. ..................................73

Figura 3.9. Enzimas producidas por Pseudomonas aeruginosa que

participan en la degradacin de los cidos grasos. ..................................74

Figura 3.10. Representacin esquemtica del reguln AlgR de P.

aeruginosa. ..................................75

Figura 4.1. Etapas de la identificacin genotpica.

..................................81

Figura 4.2. Reactor de bandejas.

..................................84

Figura 4.3. Biorreactor de lecho empacado.

..................................85

Figura 4.4. Tambor giratorio discontinuo.

..................................85

Figura 4.5. Esquema de un biorreactor de lecho empacado con

mezcla intermitente y aireacin forzada. ..................................86

Figura 4.6. Diagrama de flujo para el tratamiento por fermentacin

en estado slido. ..................................88

Figura 4.7. Residuo slido de pulido contaminado con grasa animal

y aceite lubricante mineral. ..................................90

Figura 4.8. Dilucin 1x10-6 en Agar Tributirina de la muestra de

residuo slido graso. ..................................91

Figura 4.9. Temperatura mostrada durante el compostaje para la

pila evaluada. ..................................93
 1 ENFOQUE DE LA TESIS

1.1 Contexto

Manizales, capital de Caldas, es una ciudad del centro occidente de Colombia,

ubicada en la Cordillera Central, con gran actividad econmica, industrial, cultural
y turstica. Segn los resultados y proyecciones (2005-2020) del censo realizado por el
Departamento Administrativo Nacional de Estadstica (DANE, 2005), tiene una
poblacin de 396.075 habitantes, y debido a la crisis del caf (su tradicional motor
econmico), a finales del siglo pasado inici una transformacin en su vocacin
productiva, enfocndose en el sector industrial como su posible fuente de mayor
desarrollo econmico y social (Plan de Desarrollo de Manizales 2012 2015
Gobierno en la calle, citado por BID & Findeter, 2015).

Por sus fortalezas en competitividad, innovacin, emprendimiento, sus recursos

naturales y la calidad y talento humano de su gente, Manizales tiene las condiciones
para ser una ciudad sostenible. De acuerdo al estudio de Ciudades Sostenibles
desarrollado por el Banco Internacional de Desarrollo (BID) & Findeter (2015), se
identificaron las reas prioritarias para permitirle a la ciudad de Manizales mejorar las
perspectivas de sostenibilidad y competitividad, entre las que se identific como
oportunidad de mejora la promocin del aprovechamiento integral de residuos1, ya
que en la actualidad presenta los niveles ms bajos en la separacin y clasificacin
de residuos como parte de procesos de reciclado, en comparacin con las otras
ciudades de Colombia donde se ha realizado el estudio de Ciudades Sostenibles
(Barranquilla, Bucaramanga y Pereira), as como la necesidad de implementar
tratamientos de residuos industriales ms amigables con el medio ambiente.

1.1.1 Normativa ambiental

El marco ambiental que avala la significancia de la presente revisin terica, est

fundamentada en el Decreto-Ley 2811 de 1974, en el cual se reglamenta el Cdigo
Nacional de Recursos Naturales Renovables y de Proteccin al Medio Ambiente
cuyo objeto es lograr la preservacin y restauracin del ambiente, prevenir y
controlar los efectos nocivos de la explotacin de los recursos naturales no
renovables sobre los dems recursos, y regular la conducta humana, individual o
colectiva, respecto de tales recursos y del ambiente.

1 Gestin, valorizacin, tratamiento y disposicin final de los residuos generados.

A partir de este Cdigo Nacional (artculos 34 al 38), la Ley 9 de 1979 o Cdigo
Sanitario Nacional, en cuyos artculos 22 a 35 se dictan disposiciones sobre los
residuos slidos, y teniendo en cuenta los compromisos adquiridos con la
aprobacin en 1989 y entrada en vigor el 5 de mayo de 1992, del Convenio de
Basilea, sobre el control de los movimientos transfronterizos de los desechos
peligrosos y su eliminacin; tomando consciencia de que es preciso desarrollar y
aplicar tecnologas ambientalmente racionales que generen pocos desechos, se
estableci el Decreto 4741 de 2005 por el cual se reglamenta la prevencin y el
manejo de los residuos o desechos peligrosos generados en el marco de la gestin
integral, con el fin de proteger la salud humana y el ambiente.

En la actualidad, este decreto conforma el Ttulo 6 del Decreto 1076 de 2015, el cual
es producto de la compilacin con otras normas reglamentarias preexistentes
respecto al manejo ambiental, ante la necesidad de racionalizar y simplificar el
ordenamiento jurdico sobre el tema, y cuya seccin 3 establece las obligaciones y
responsabilidades del generador de residuos peligrosos, a partir de la cual se
fundamenta el objetivo del presente trabajo.

1.2 Problema de investigacin

Manizales como ciudad en camino de fortalecer su industria debe aprovechar sus

fortalezas, para mejorar las condiciones de vida bajo una premisa de sostenibilidad
ambiental (BID & Findeter, 2015); es por esto que se hace necesario que desde la
academia se promuevan proyectos de investigacin donde se apliquen valores
tanto ticos y econmicos, como de sensibilizacin y responsabilidad hacia el
entorno (lvarez, 2013; ICFES, 1991; Novo, 2009). Dichos proyectos deben apuntar
especialmente a la optimizacin de los procesos de produccin industrial donde
continuamente se generan corrientes indeseadas (corrientes de desecho) y sobre
las cuales, por la legislacin vigente, las empresas tienen la responsabilidad y
obligacin de disminuir su volumen, so pena de recibir sanciones econmicas o
restricciones en su operacin (Decreto 1076 de 2015).

El sector metalmecnico es reconocido como uno de los ejes principales de

industrializacin de Manizales (Cmara de Comercio de Manizales por Caldas
(CCMPC) & Alcalda de Manizales, 2014) y es un punto neurlgico que debe ser
tenido en cuenta a nivel ambiental por la gran fuente de contaminacin que
representa, al generar residuos impregnados con aceites lubricantes y qumicos
industriales en las diferentes etapas de transformacin de las piezas metlicas.
Aunque dichos residuos, de acuerdo con el Ttulo 6 del Decreto 1076 de 2015 son
considerados peligrosos, muchas veces, son descargados directamente al suelo o
las fuentes hdricas, o son incinerados, generando emisiones gaseosas txicas; ya
que se muestran recalcitrantes frente a los tratamientos fisicoqumicos de
degradacin convencionales (IDEAM, 2011; IQA, 2014).

Ante este panorama de alto riesgo ambiental, se hace evidente la necesidad de

establecer sistemas de tipo biotecnolgico para la mitigacin y degradacin de
residuos, que permitan utilizar el potencial metablico de los microorganismos para
mineralizar los contaminantes (Snchez & Rodrguez, 2003). Estos sistemas presentan
ventajas econmicas y ambientales sobre los mtodos convencionales de
tratamiento, especialmente los trmicos, tanto por la disminucin en volumen y
gastos de disposicin de los residuos, como por la prevencin de sanciones debidas
al incumplimiento de la legislacin (Snchez & Rodrguez, 2003). En consecuencia,
se originan las siguientes preguntas de investigacin:

Cul es la importancia real de la industria metalmecnica en la ciudad de

Manizales, y cul es el impacto ambiental que sta genera?
Qu est haciendo la industria metalmecnica para mitigar el impacto
negativo de sus residuos sobre el ambiente?
Cules tratamientos de biorremediacin muestran potencialidad de uso
sobre los residuos recalcitrantes de la industria metalmecnica?
Qu condiciones y especificaciones deben tenerse en cuenta para aplicar
un tratamiento de biorremediacin a un residuo graso de la industria
metalmecnica?

Para dar respuesta a estas preguntas se plantea la necesidad de investigar el

estado del arte en el tema de biorremediacin sobre residuos grasos, realizando una
revisin integral de las caractersticas y particularidades que deben tenerse en
cuenta para establecer sistemas de biodegradacin que permitan utilizar el
potencial metablico de los microrganismos para transformar los contaminantes
provenientes de la industria metalmecnica en compuestos ms simples, poco o
nada contaminantes (Gonzlez, 2011; Snchez & Rodrguez, 2003). Adicionalmente,
se plantea la ejecucin de algunas pruebas experimentales que permiten
enriquecer el presente trabajo y adquirir mayor conocimiento de los procesos
referenciados.
1.3 Objetivos

1.3.1 Objetivo general

Evaluar a travs de un estudio del estado del arte, las potencialidades de aplicacin
de tratamientos biotecnolgicos en la degradacin de residuos grasos procedentes
de efluentes industriales metalmecnicos en la ciudad de Manizales.

1.3.2 Objetivos especficos

1. Establecer la importancia del sector industrial metalmecnico y su impacto

ambiental en la ciudad de Manizales.
2. Analizar el estado del arte sobre el uso de la biorremediacin como
tratamiento de efluentes metalmecnicos contaminados con grasas y
lubricantes.
3. Proponer, basado en el estado del arte, un protocolo para la implementacin
a nivel industrial de un tratamiento de biorremediacin en efluentes
metalmecnicos contaminados con grasas y lubricantes.

1.4 Metodologa

1.4.1 Metodologa de revisin

La presente revisin de tema consta de un captulo introductorio y de

contextualizacin del problema de investigacin, tres captulos correspondientes al
cuerpo del trabajo, los cuales dan cumplimiento a los objetivos especficos
planteados, y uno de conclusiones. En la Figura 1.1, se describe el esquema general
de la informacin clave para construir el documento.

La fuente central de informacin fueron los artculos publicados en revistas de la

base de datos Science Direct, complementada con artculos publicados en
Redalyc, Springer y Scielo. Esta bsqueda se limit a artculos del ao 2000 en
adelante, con preferencia por las publicaciones de la ltima dcada, relacionados
principalmente con las palabras clave Biorremediacin y/o Biodegradacin de
Hidrocarburos.
Figura 1.1. Esquema general de la informacin clave para desarrollar la monografa.

1.4.2 Metodologa experimental

Aunque el presente trabajo corresponde a una revisin de tema, en el captulo 4 se

integran los aspectos tericos y tecnolgicos analizados y se propone la metodologa
que se resume en la Figura 1.2 para implementar un tratamiento de biorremediacin a
nivel industrial. Esta metodologa se describe con detalle en la seccin 4.1 y respalda
algunas pruebas experimentales que se realizaron durante un ejercicio de
investigacin complementario cuyos resultados se presentan en la seccin 4.2.
 Fuente: elaboracin propia.

Sitio de muestreo y recoleccin de muestras

Caracterizacin fisicoqumica de los residuos industriales

Aislamiento y purificacin de bacterias degradadoras de hidrocarburos

Caracterizacin e identificacin microbiana

(Fenotpica y genotpica)

Pruebas de tolerancia y degradabilidad de grasas a nivel laboratorio

Evaluacin de alternativas de aplicacin industrial.Caracterizacin de

productos.

Seleccin del proceso e identificacin de las variables de diseo

Diseo, anlisis de sensibilidad y optimizacin de variables

Seguimiento del proceso en escala piloto

Figura 1.2. Diagrama de flujo para la implementacin de un tratamiento de biorremediacin de

residuos slidos contaminados con grasas y lubricantes.
1.5 Antecedentes

Aunque se conocen diversos tratamientos fisicoqumicos y biolgicos para reducir el

volumen y la toxicidad de los residuos peligrosos, son pocas las propuestas que se
encuentran en la bibliografa sobre el manejo integrado y tratamiento de estos
materiales en la industria metalmecnica. A continuacin se citan algunos de los
trabajos que se han desarrollado sobre el tema a nivel internacional:

Flores et al., (2006), destacaron la importancia de la industria metalmecnica en

Mxico, as como la necesidad de encontrar alternativas de uso a las toneladas de
residuos peligrosos y no peligrosos generados en dicha actividad. Este trabajo se
centr en la evaluacin de la factibilidad de utilizar las virutas de hierro provenientes
de las operaciones de esmerilado y barrenado, que generalmente quedan
impregnadas con aceite, como medio reactivo para transformar Cr (VI) en efluentes
contaminados, que adems pueden contener carbonatos, sulfuros, cloruros y
compuestos orgnicos.

Ferrer & Martnez (2007), realizaron un sondeo sobre el compromiso frente a la

sostenibilidad ambiental de las diecisiete empresas metalmecnicas oferentes de
servicios petroleros, ubicadas en la costa oriental del Lago de la Regin Zuliana
(Venezuela), aplicando un instrumento evaluativo, en el cual indagaron si la misin,
objetivos y la poltica empresarial contemplaban aspectos medioambientales,
encontrando una tendencia hacia un posicionamiento ecolgicamente responsable.
Pero, aunque existe un nivel de conciencia y aceptacin de algunos indicadores,
realmente no se evidenciaron acciones claras que permitan avanzar en el
cumplimiento de las metas.

Candian et al., (2015), presentaron una revisin actualizada de las rutas de

recuperacin de materias primas presentes en la gran variedad y volumen de residuos
slidos generados en la industria del acero (escorias, lodos, cascarillas de laminacin,
polvos y lodos de precipitacin), que se caracterizan, en general, por la gran cantidad
de metal presente en su composicin; enfatizando en la importancia del desarrollo
sostenible y la responsabilidad en el consumo de los recursos naturales.

Severo et al., (2015), realizaron un estudio por medio de encuestas para analizar la
relacin entre los conceptos de produccin ms limpia, sostenibilidad ambiental y el
desempeo organizacional en 298 empresas del Cluster Automotriz metalmecnico de
la Serra Gacha, el cual es actualmente el segundo ms grande de su tipo en Brasil.
Los resultados mostraron que las empresas de Serra Gaucha tienden a buscar procesos
alternativos para reducir los costos y que las prcticas de produccin limpia
contribuyen a aumentar la capacidad de produccin y a mejorar aspectos de salud y
seguridad.

Otros autores han realizado estudios sobre biorremediacin de suelos contaminados

con grasas y aceites, tales como Menndez-Vega et al., (2007) que analizaron los
efectos de la bioestimulacin in situ sobre un subsuelo contaminado con
hidrocarburos, proveniente de una antigua planta metalmecnica del Norte de
Espaa. Y Llad et al., (2012) que compararon la atenuacin natural, la
bioestimulacin y la bioaumentacin en un suelo contaminado con aceite de corte,
tomados de una ex fbrica de tornillos en la ciudad de Barcelona (Espaa), que fue
abandonada en 1990. Estos y otros estudios experimentales de biorremediacin
realizados sobre residuos de composicin similar a los de la industria metalmecnica,
aunque no necesariamente de este sector, se analizarn con ms profundidad en el
captulo 3.

A nivel nacional, son mucho ms escasos los estudios especficos para la industria
metalmecnica. Entre estos se encuentran:

Acero (2008) en su trabajo de grado para optar al ttulo de Ingeniero Ambiental y

Sanitario, elabor el plan de gestin integral de residuos peligrosos de la fbrica Santa
Brbara de la Industria Militar Indumil, ubicada en la ciudad de Sogamoso (Boyac),
el cual incluy la capacitacin a los trabajadores sobre la manipulacin de los
residuos, el diseo de un centro de acopio bajo las especificaciones tcnicas
requeridas, un plan de contingencia para atender accidentes, y el seguimiento
continuo. Los residuos all generados, son producto de procesos metalmecnicos tanto
en fundicin convencional como en microfundicin para la produccin de granadas
de mano y de morteros, adems de piezas metlicas para armamento, que segn su
caracterizacin, el 46 % son txicos, el 23% son altamente explosivos e inflamables y el
8% son corrosivos. Con la implementacin de este plan, se mejor su manejo en las
diferentes etapas de la gestin, tales como: la recoleccin, transporte, embalaje,
etiquetado, almacenamiento, tratamiento o disposicin final, reduciendo en gran
parte los riesgos ambientales y de salud ocupacional generados por stos.

Cano & Cano (2008), presentaron el informe sobre el mejoramiento en el manejo de

los residuos slidos de la empresa Metlicas Caldas Ltda., luego de la implementacin
del plan de gestin integral de residuos slidos, el cual consiste en separacin en la
fuente, recoleccin, almacenamiento, tratamiento y disposicin final. En dicho
informe, no se especifica la informacin sobre los tratamientos realizados y se da a
entender, que lo nico que se est haciendo es recuperar excedentes de materias
primas, con lo que se disminuyen costos de disposicin final y compra de materia
prima.
Rodrguez (2011), se enfoc en proponer una estrategia para el aprovechamiento de
la viruta de aluminio y acero, generada en el taller de diseo mecnico de la
Universidad Militar Nueva Granada que generalmente se contamina con sustancias
refrigerantes, con el fin de obtener beneficios econmicos y ambientales, haciendo
una adecuada separacin en la fuente, la posterior descontaminacin de fluidos y por
ltimo la refundicin para utilizarla nuevamente en los procesos de mecanizado.

El crecimiento demogrfico y la industrializacin generan una gran cantidad de

residuos que con frecuencia ocasionan importantes problemas ambientales y de
salubridad por su tratamiento inadecuado (Lpez, 2010) o por su disposicin de forma
directa a los cuerpos de agua, causando conflictos entre el sector industrial y la
comunidad, lo que ha llevado a las empresas a buscar un mejoramiento continuo de
sus procesos y actividades industriales, mediante la implementacin de sistemas, no
solo de eliminacin sino tambin de minimizacin, aprovechamiento y reutilizacin de
los recursos presentes en los desechos y subproductos generados diariamente
(Rodrguez & Daz, 2011; Secretara de ambiente, 2010; Severo et al., 2015;
Thangarajan, 2011).

Colombia es un pas que tradicionalmente ha sido agrcola, pero, segn la Asociacin

Nacional de Empresarios de Colombia y el Instituto Latinoamericano del Fierro y del
Acero (ANDI & ILAFA, 2011) durante la dcada 2001-2011 tuvo un crecimiento en el
sector industrial. En efecto, la industria siderrgica y metalmecnica representan el
14%, del total del Producto Interno Bruto (PIB) manufacturero y el 12,12% de la
generacin de empleo a nivel nacional. Por este motivo, se convirti en una
necesidad imperante, clasificar y manejar adecuadamente los diversos residuos que
surgen de la transformacin del metal y que son considerados altamente peligrosos
para la sostenibilidad de los ecosistemas (Marn, 2009). De ah que entre los aos 2010
y 2013, las compaas invirtieron 366 millones de dlares y se espera que entre el 2014 y
2017 sean 373 millones de dlares para aumentar capacidad, reducir costos y hacer
gestin en medio ambiente (Ana Mara Fergusson, directora del Comit Colombiano
de Productores de Acero, citada por Portafolio.co., 2014).

Aunque se han evaluado algunas aplicaciones de estos residuos en el sector de la

construccin, las industrias cementeras, mezclas asflticas y la adecuacin de suelos
(Borsi org, 2015; INCOLMA, 2014), an se presentan grandes limitaciones en su
aprovechamiento, tanto por la humedad con que se generan los residuos slidos,
como por las caractersticas recalcitrantes frente a tratamientos fisicoqumicos
convencionales de los vertimientos (IQA, 2014), lo que dificulta el cumplimiento de la
normatividad ambiental vigente. El acatamiento del Decreto 1076 de 2015 y la
participacin en procesos de certificacin en calidad ambiental se hace
indispensable si se quiere evitar sanciones operacionales o econmicas, y asegurar la
competitividad frente a los nuevos mercados que se abren por los tratados de libre
comercio y poder llegar con confianza a los pases desarrollados, como Canad y los
de la Unin Europea (SENA, 2014), ya que como se puede observar en la Figura 1.2, en
la actualidad solo el 18% de las empresas del pas cuentan con certificaciones
ambientales.

Fuente: periodico.sena.edu.co, 2014.

90
80
% Empresas certificadas

70
60
Comercializacin
50
40 Producto
terminado
30 Manufactura

20
10
0
SI NO

Figura 1.3. Certificacin ambiental en la cadena metalmecnica.

En consecuencia, la realizacin de esta revisin de tema, es de gran importancia para

actualizar y guiar a los centros de investigacin de la regin que estn interesados en
desarrollar estudios para minimizar el impacto ambiental de la actividad industrial
metalmecnica en la ciudad de Manizales, mediante la implementacin adecuada
de tecnologas de biorremediacin sobre los residuos generados, aprovechando la
reconocida capacidad de algunos grupos microbianos (Mantilla & Ruz, 2008), para
remediar los problemas causados por vertimientos de petrleo y la efectividad en la
degradacin de compuestos txicos y recalcitrantes, como los organoclorados, los
lodos cargados de metales pesados y los plsticos (Watanabe, 2001). Adems de
brindarle a las empresas la posibilidad de generar beneficios econmicos inherentes a
la reduccin de gastos en disposicin de residuos peligrosos o el pago de sanciones
ambientales, as como, agregar valor a sus residuos industriales y hacer que el proceso
de produccin sea ms rentable y competitivo (Candian et al., 2015).
 2 REFERENTE TERICO

2.1 Generalidades del sector metalmecnico

El sector metalmecnico se dedica al aprovechamiento de los insumos obtenidos de

la siderurgia, aceros, aluminios, cobres, bronces y derivados para su transformacin,
ensamble o reparacin en bienes intermedios como partes, piezas, maquinarias,
equipos y herramientas (PNUD & DPS, 2014; PROPAIS, 2013). De acuerdo a Velosa
(2011), La cadena productiva de la metalmecnica se integra con otras por medio
de artculos para oficina, herramientas y artculos para hogar y ferretera, artculos
agropecuarios, artculos de aluminio, envases metlicos, muebles metlicos,
maquinaria para otras industrias, mquinas primarias, maquinaria para el sector
alimentos, para la minera, agropecuaria, para petroqumica, para metalurgia y
madera-textil-imprenta, para oficina, para el comercio, y maquinaria para la
construccin. En la Figura 2.1 se muestran los principales productos del sector
metalmecnico (PROPAIS, 2013).

Segn Trade Map (2014), China es el principal productor mundial de acero crudo y en
el ao 2010 representaba el 45,85% de la produccin mundial, seguido por Japn
(7,22%), Norte Amrica (5,79%), Rusia (4,61%) y Alemania con el 2,97% (ANDI & ILAFA,
2011). La produccin y exportacin de manufacturas de fundicin del hierro y acero
en el 2014 fueron lideradas por China (19,3%), seguida por Alemania (10,3%) y Estados
Unidos (7,2%).

La participacin de pases latinoamericanos en la industria siderrgica y

metalmecnica es poco representativa y ha perdido competitividad frente a la
estrategia de flujo comercial unidireccional de China (Mendes de Paula, 2012), a pesar
de que en estos pases la cadena metalmecnica ocupa un lugar central en su
economa, ya que representa cerca del 16% del PIB industrial, tiene una alta incidencia
en las exportaciones y aporta una alta tasa de empleos directos e indirectos en el
sector. Los pases con mayor participacin en las exportaciones mundiales de
manufacturas de fundicin del hierro y acero son Mxico (1,9%), Brasil (0,7%), Argentina
(0,3%), Chile y Colombia (0,1%), (Trade Map, 2014).

2.1.1 Sector metalmecnico en Colombia

Como se explic anteriormente, para los pases latinoamericanos, la industria

metalmecnica tiene una gran importancia interna, y Colombia no es ajena a este
comportamiento, ya que el sector se ubica como la tercera industria con mayor
importancia en la provisin de insumos para la operacin de las dems industrias del
pas, luego de los productos de la industria extractiva y los combustibles (DANE, 2015).
 Fuente: PROPAIS, 2013.

Tubera metlica Tubera metlica con y sin costura

Estructuras metlicas y cables

estructurales.
Estructura y galvanizado Productos trefilados.
Productos galvanizados.

Tableros, portacables, cables y

conductores elctricos.
Materiales elctricos Transformadores y motores elctricos.
Sector metalmecnico

Aparatos de corte, seccionamiento y

proteccin.

Alambres y barras.
Materiales para la construccin Elementos de soldadura.
Tornillera, grifera.

Calderas, tanques de
almacenamiento.
Bienes de capital Recipientes, tubos, bombas de presin.
Ascensores y elevadores.

De desbaste: tornos, taladros,

Mquina- Herramientas
fresadoras, pulidoras...
Unidades y centros de mecanizado.
Prensas: mecnicas, hidrulicas,
oleoneumticas.
Mquinas de electroerosin, lser,
ultrasonido...

Figura 2.1 Descripcin del sector metalmecnico.

A pesar de la cada de las exportaciones industriales durante el 2014 influenciadas

sobre todo por el dficit comercial con China, el sector mostr un crecimiento de 3,5%
debido al comportamiento econmico interno del pas y a la actualizacin de equipos
y maquinaria para la produccin (Industrias Metlicas Miller, 2014). Adems desde su
inclusin en el 2011 en el Programa de Transformacin Productiva (PTP), la industria
metalmecnica colombiana es una de las ms importantes y prometedoras del pas,
ya que exporta ms de 363.000 toneladas al ao, representa cerca del 14% de la
produccin industrial nacional y el 15% del empleo dentro del PIB industrial, con un
promedio de 90 mil empleos directos y aproximadamente el triple de indirectos (Marca
Colombia, 2014).

2.1.2 Sector metalmecnico en Manizales

La ciudad de Manizales, capital de Caldas, departamento declarado patrimonio

inmaterial de la humanidad por la UNESCO por su paisaje cultural cafetero, ha visto
ligado su desarrollo industrial a la historia del caf como motor econmico del pas.
Desde la segunda dcada del siglo XX cuando el grano cobr importancia en la
economa del departamento, motiv el surgimiento y progreso de otros sectores como
el comercial, financiero e industrial, as como el mejoramiento de carreteras y la
llegada de medios de transporte a la floreciente ciudad (Lpez, 2004; UNESCO, 2009).
La bonanza econmica de la poca, permiti el desarrollo del sector industrial de la
capital caldense que estaba basado, adems de las trilladoras, en fbricas para la
produccin de chocolate, herramientas agrcolas y metalmecnicas, textiles, fsforos,
alimentos y bebidas (DANE, 2015). Debido a las ventajas competitivas que ofrece la
regin y al liderazgo de los empresarios, la industria metalmecnica se consolid y
constituye, al da de hoy, uno de los sectores pilares de la economa de Manizales
(Alcalda de Manizales & CCMPC, 2014), al mismo tiempo que el departamento le
apuesta al fortalecimiento de la produccin agroindustrial, minero-energtica y
metalmecnica (PROEXPORT, 2015).

Segn el Informe de Coyuntura Econmica Regional (ICER) del DANE (2015) el PIB de
Caldas, durante el perodo 2012-2013 creci 6,5% y particip con 1,5 % del PIB nacional
(US$5.018 millones), siendo la industria metalmecnica de produccin de herramientas
agrcolas el tercer rengln de las exportaciones no mineras del departamento. Los
principales productos de exportacin de Caldas para el 2014 fueron el caf (68,1%),
refrigeradores (5,8%), desperdicios de cobre (4,4%), layas, palas y hachas (3,5%) y
productos de confitera (3,1%) a destinos como Estados Unidos (19,7%), Japn (10,8%),
Blgica (10,7%), Ecuador (7,8%) y Alemania (6,8%)(CCMPC., 2015).

En Manizales, el sector metalmecnico est compuesto por un diverso conjunto de

actividades industriales y su desarrollo est influenciado por la dinmica de otros
sectores, como el sector de la construccin, automotriz, minero, infraestructura,
petrolero, manufactura y agroindustrial; convirtindose as, en un sector clave para
otras actividades econmicas (Lpez, 2004). De acuerdo a la CCMPC (2013),
Manizales es la ciudad del Eje Cafetero que presenta mayor potencial metalmecnico
ya que, sumando maquinaria, equipos y otros productos de metal, sta industria
participa con el 33% de las exportaciones no tradicionales y contribuye con el 36% del
empleo industrial (2.460 empleos directos y ms de 2000 indirectos) y con el 20% del
empleo total de la ciudad.

En un estudio realizado en 2014 por la Alcalda de Manizales - Secretara de

Tecnologas de la Informacin y la Comunicacin (TIC) y Competitividad y la CCMPC,
se focalizaron 473 empresas ubicadas en las diferentes comunas de la ciudad, con
actividades econmicas incluidas dentro del sector metalmecnico. De sta
poblacin se tom una muestra de 160 empresas a las cuales se les aplic un
instrumento de caracterizacin, con el que se pudo determinar que las microempresas
son las de mayor representacin en la ciudad con un 75% de las empresas
caracterizadas, luego se encuentra a la pequea empresa que representa el 19% del
sector, el 4%, las medianas y el restante 2% son de categora grande, de las cuales
apenas el 6% de las empresas superan los $5.000 millones de pesos de facturacin
anual y el 8% emplean ms de 51 trabajadores (Alcalda de Manizales & CCMPC,
2014), como se puede observar en la Tabla 2.1.

Tabla 2.1. Facturacin anual y generacin de empleos, por parte de la industria

metalmecnica.

Empleos generados
Valor de 1-10 11-50 51-200 MS DE 200 TOTAL
Facturacin anual
$0-$30.000.000 46 1 2 49
$30.000.001-$50.000.000 23 23
$50.000.001-$100.000.000 13 3 16
$100.000.001-$300.000.000 23 7 30
$300.000.001-$600.000.000 4 9 1 14
$600.000.001-$1.000.000.000 1 7 8
$1.000.000.001-$5.000.000.000 1 7 2 1 11
$5.000.000.001-$10.000.000.000 2 2
Ms de $10.000.000.000 1 1 1 4 7
TOTAL EMPRESAS 112 35 8 5 160

Fuente: Alcalda de Manizales & CCMPC, 2014

En cualquier tipo de industria, el contar con certificaciones de calidad es un indicador

de competitividad que permite ganar confianza en el mercado, asegurar la eficiencia
de los procesos, encontrar nuevas oportunidades de negocio y en general mejorar la
imagen de la empresa (Equipo editorial buenos negocios, 2013). Sin embargo, el sector
metalmecnico manizaleo an es muy informal frente a este aspecto, tal como lo
revel la caracterizacin, ya que slo el 9% de las empresas caracterizadas cuentan
con alguna certificacin y se encuentran distribuidas como se ve en la Figura 2.2, de
las cuales 4 empresas cuentan con ms de una certificacin, siendo la ms
representativa la ISO9000. Dentro de la categora otros aparecen certificaciones
referentes al sector autopartes y de laboratorios.

Fuente: Alcalda de Manizales & CCMPC, 2014.

Ninguna (88%)
ISO 9000 (7%)
Otra (3%)
ISO 14000 (1%)
NTC 6001 (1%)

Figura 2.2. Certificaciones con las que cuentan las empresas del sector.

Entre las empresas que se destacan por su tradicin en el sector, capacidad de

produccin, volumen de ventas y actividades de internacionalizacin, en la
fabricacin de artculos metlicos como ngulos y perfiles de hierro o acero laminados
en caliente, herramientas manuales agrcolas, clavos y puntillas, piezas fundidas, entre
otras, se encuentran Bellota, Herragro, Iderna, Invermec, Madeal, Sicolsa, Ternium y
Proalco. Tambin se reconoce a Mabe, Iderna Bsculas y Prometlicos, como
empresas lderes en la produccin de maquinaria de uso general (Alcalda de
Manizales & CCMPC, 2014; Lpez, 2004).

2.1.3 Residuos generados en los procesos de la industria metalmecnica

Aunque el sector metalmecnico cuenta con diversas actividades industriales, el

proceso de manufactura dentro de una empresa metalmecnica se puede dividir en
las etapas bsicas que se describen en la Figura 2.3.
 Fuente: Sitjes, 2003.

Recepcin Preparacin Mecanizado

de materias mecnica Limpieza y Empaque y
Acabado
primas y de las piezas previa Tratamientos distribucin
almacenaje y materiales trmicos

Figura 2.3. Etapas bsicas de proceso en las empresas metalmecnicas.

Estas etapas de transformacin de las piezas metlicas incluyen operaciones fsicas,

adicin de sustancias qumicas y/o el suministro de energa trmica. Algunos de estos
procesos pueden ser: corte, torneado, lijado, cepillado, pulido, y desengrasado, los
cuales generan diversos residuos entre los que se encuentran: virutas, polvo, grasas y
aceites lubricantes usados, refrigerantes, resinas, aserrn, estopas y guantes de lona o
carnaza impregnados con aceites o qumicos industriales (La Opinin, 2014; Lehnert,
1979; Marn, 2015) que son considerados altamente peligrosos para la salud humana y
la sostenibilidad de los ecosistemas por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, txicas, inflamables, infecciosas o radioactivas(Decreto 1076 de 2015), por
lo cual se consideran como un aspecto ambiental de alta significancia que debe ser
minimizado, atendiendo principios de responsabilidad ambiental, produccin limpia y
sostenibilidad para dar cumplimiento a la normativa ambiental (INCOLMA INVERMEC
S.A., 2014). La clasificacin de los residuos generados en cada etapa del proceso y el
tratamiento tradicional que se les da, se resumen en la Tabla 2.2.

Como ejemplo especfico se puede analizar el proceso de produccin de machetes

(Figura 2.4.), ya que Colombia, es reconocido como el mayor exportador de esta
tradicional herramienta en el mundo (Portafolio.co, 2014) y cuya base de produccin
est en Manizales, donde la Comercializadora Invermec fabrica al mes hasta un milln
de machetes de 850 tipos que exporta a 45 pases (Vanguardia.com, 2014).
Tabla 2.2. Operaciones que pueden llevarse a cabo en cada etapa del proceso de transformacin en una empresa
metalmecnica.

ETAPA OPERACIN ACTIVIDAD
Recepcin de
En esta fase se producen
materias
bsicamente residuos de
primas y
embalajes.
almacenaje
Segmentacin de la lmina
Preparacin Corte metlica de acuerdo a la
plantilla base.
mecnica de
Eliminacin de exceso de
las piezas y Lijado y material de las piezas
materiales
desbaste mediante la exposicin a
discos abrasivos.
Se utilizan xidos o carburos
Limpieza metlicos por va hmeda
abrasiva para eliminar incrustaciones
de los materiales.
Limpieza previa Acuosa cida, acuosa
alcalina, con disolventes
Limpieza
orgnicos clorados o no, y
qumica
los correspondientes
enjuagues.
Operacin para dar
Esmerilado acabado y reducir las
proyecciones.
En el torno se maquinan
piezas de revolucin, donde
Torneado se efectan el torneado,
cilindrado, roscado y
Mecanizado mandrilado.
Corte del material que se
mecaniza con una
herramienta rotativa de
Fresado
varios filos, que se llaman
dientes.
TRATAMIENTO Y
RESIDUOS GENERADOS CLASIFICACIN
DISPOSICIN
Papel, cartn, plsticos, madera, Residuos Separacin y
flejes, etc ordinarios reciclaje
Polvos metlicos secos y virutas Residuos Recuperacin de
secas procedentes de desbastes. metlicos metales
El proceso se realiza en hmedo
por lo que se generan lodos
Secado,
Lodos residuales almacenamiento y
residuales con una humedad
disposicin final
aproximada de 40%.
Polvos metlicos y virutas Residuos Decantado y secado
hmedas de agua o disolventes metlicos - Recuperacin de
procedentes de desbastes. hmedos metales
Disoluciones acuosas (cidas,
alcalinas, con sales o aditivos)
Almacenamiento en
agotadas. Residuos
depsitos Empresa
Disolventes orgnicos sucios o peligrosos
gestora autorizada
agotados (clorados o no).
Aguas de lavado o aclarado.
Polvos metlicos secos y virutas Residuos Recuperacin de
secas procedentes de desbastes. metlicos metales
Decantado,
Virutas metlicas y polvos
centrifugacin y
impregnados de aceites o Posibles residuos
filtrado -
taladrinas procedentes de metlicos
Recuperacin de
mecanizados lubricados.
metales
Polvos metlicos secos y virutas Residuos Recuperacin de
secas procedentes de desbastes. metlicos metales
 Proceso trmico en el que la
pieza se somete a calor
Forja (rojo vivo) y luego a una
presin mediante golpe en
un martillo.
Proceso trmico que
consiste en someter el metal
Temple y a altas temperaturas y
revenido luego a refrigeracin en un
fluido para aumentar la
resistencia del acero.
Su finalidad es el
ablandamiento, la
recuperacin de la
Recocido
Tratamientos estructura o la eliminacin
trmicos de tensiones internas
generalmente en metales.
Consiste en calentar la
pieza entre 30C y 50Cpor
Normalizado
encima de la temperatura
crtica superior
Adems de cambios en la
Termoqumicos estructura, producen
superficiales cambios en la composicin
de la superficie.
Tratamientos fsicos de
Pulido y
limpieza de las
biselado
herramientas.
Acabado
Para dar acabado a
Cepillado superficies planas y cortar
ranuras y surcos.
2 Fluido de corte que se utiliza como lubricante y refrigerante.
En esta etapa se genera una
Residuos Recuperacin de
cascarilla totalmente seca y libre
metlicos metales
de grasas y aceites.
En esta etapa se genera un
sedimento (Calamina)
Decantado,
conformado por una cascarilla
centrifugacin y
metlica (xido de hierro) en el Posibles residuos
filtrado -
aceite de temple por lo tanto metlicos
Recuperacin de
viene impregnada de este
metales
(contiene un 11% aproximado de
grasas y aceites).
Decantado,
Virutas metlicas y polvos
centrifugacin y
impregnados de aceites o Posibles residuos
filtrado -
taladrinas2 procedentes de metlicos
Recuperacin de
mecanizados lubricados.
metales
Residuos lquidos de aceites,
taladrinas, disolventes agotados
Almacenamiento en
o sucios. Residuos
depsitos Empresa
Trapos y papeles sucios, peligrosos
gestora autorizada
absorbentes impregnados de
aceites, grasas, disolventes.
Disoluciones acuosas (cidas, Almacenamiento en
Residuos
alcalinas, con sales o aditivos) depsitos Empresa
peligrosos
agotadas. gestora autorizada
Se producen limaduras finas y
pesadas, de apariencia similar al
cemento gris. Se componen
Residuos Recuperacin de
esencialmente de xidos de
metlicos metales
hierro. Se compactan
fuertemente cuando entran en
contacto con el agua.
Polvos metlicos y virutas Residuos Decantado y secado
hmedas de agua o disolventes metlicos - Recuperacin de
procedentes de desbastes. hmedos metales
 Disoluciones acuosas (cidas,
Utilizacin de bases cidas
alcalinas, con sales o aditivos)
o alcalinas para preparar Almacenamiento en
agotadas. Residuos
Desengrasado las piezas metlicas para la depsitos Empresa
Disolventes orgnicos sucios o peligrosos
aplicacin de pintura gestora autorizada
agotados (clorados o no).
lquida o en polvo.
Aguas de lavado o aclarado.
Con aire comprimido, Sistemas de
procedimientos Partculas slidas, pintura en Partculas en depuracin y
Pintura
electrostticos y mtodos polvo. suspensin chimeneas de
de recubrimiento de polvo. evacuacin
Residuos del desengrasado de Almacenamiento en
Limpieza del producto Residuos
Lavado metales y mantenimiento de depsitos Empresa
terminado. peligrosos
maquinaria. gestora autorizada
Empaque y
En esta fase se producen bsicamente los mismos residuos de embalajes que en la etapa de recepcin de materias primas.
distribucin
Fuente: Bronzini et al, 2011; INCOLMA INVERMEC S.A., 2014; Lehnert, 1979; Sitjes, 2003
 Fuente: Elaboracin propia

Figura 2.4. Proceso de produccin de machetes y corrientes de residuos peligrosos generados.

Imgenes tomadas de:

http://www.lapatria.com/galerias/conozca-el-proceso-de-produccion-de-machetes-en-la-fabrica-bellota#13
 2.1.4 Impacto ambiental de la industria metalmecnica

Como se ha podido observar, el sector metalmecnico, incluye diversas

operaciones y actividades, a partir de las cuales se genera una gran cantidad y
variedad de sustancias contaminantes para el medio ambiente y la salud
humana que se centran en las emisiones atmosfricas, el vertido de aguas
residuales y en la generacin de residuos slidos o semislidos, tal como se
describen a continuacin, de acuerdo al informe medioambiental del sector
metalmecnico, de la Fundacin Entorno de Espaa (1998) y a datos
proporcionados por el Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios
Ambientales (IDEAM, 2011).

Aunque las emisiones atmosfricas, ocupan slo el 0,1% de residuos peligrosos

emitidos (IDEAM, 2011), su principal potencial contaminador radica en el fcil
transporte de las partculas emitidas a grandes distancias y los trastornos de tipo
respiratorio o irritante que pueden ocasionar en la salud. Las dos principales
emisiones que se pueden considerar de este tipo son: la emisin generalizada de
partculas slidas en suspensin (de carcter metlico en la mayor parte de los
casos) y los gases de combustin correspondientes a los subsectores que implican
fundicin de metales.

En relacin con la generacin de aguas residuales, una caracterstica comn al

sector es su contaminacin con metales, adems del posible contenido de
aceites, disolventes, restos de pinturas y esmaltes, desengrasantes y una alta
carga orgnica que causa importantes demandas de oxgeno, lo que puede
generar efectos txicos para la vida acutica. Las consecuencias
medioambientales de estos vertidos se agravan ante el hecho de que
representan el 29,9% de los residuos peligrosos (IDEAM, 2011) y que, generalmente,
no sufren un tratamiento de acondicionamiento y se disponen directamente en la
fuente de agua sin cumplir con la normatividad vigente sobre los vertimientos
(Captulo 3, Decreto 1076 de 2.015). Los principales efectos de las aguas residuales
se resumen en la Tabla 2.3.
Tabla 2.3. Principales impactos ambientales de las aguas residuales del sector
metalmecnico.

CONTAMINANTES IMPACTO
3 , 43 , + , 2+ , 2+ Eutrofizacin3

Aniones y cationes.
Salinizacin del medio receptor
cidos y bases.

DQO4, DBO5 5, COT6. Consumo del oxgeno disuelto

Aceites y grasas. en el medio receptor

Slidos en suspensin, turbidez.

DQO, DBO5 , COT. Salud y ecosistemas
Metales pesados, aceite y grasas

Fuente: Fundacin entorno, 1998.

Por ltimo, la generacin de residuos slidos y semislidos puede considerarse

como el efecto medioambiental ms importante del sector, ya que para el ao
2011 representaron el 69,9% de los residuos peligrosos, y donde la mayora, como
se puede observar en la Tabla 2.4., estn contaminados con aceites, grasas,
disolventes orgnicos y otras sustancias qumicas altamente txicas.

Marn (2015) afirma que, actualmente, Colombia se encuentra en una etapa de

transicin, concientizacin y mejoramiento de la gestin de residuos peligrosos,
donde su adecuado manejo es un tema de conciencia ambiental y
responsabilidad social, y la industria metalmecnica moderna debe propender
por una fabricacin limpia, para contribuir a que la produccin sea un actor
fundamental del cambio y transformacin tanto de la empresa como de la
sociedad, evidenciando resultados ms all del ahorro de dinero y recursos, en la
responsabilidad de la empresa con el medio ambiente y la poblacin.

3 Acumulacin de nutrientes inorgnicos en ecosistemas acuticos, que causa la

proliferacin de algas.
4 Demanda Qumica de Oxgeno: parmetro que mide la cantidad de sustancias

susceptibles de ser oxidadas por medios qumicos que hay disueltas o en suspensin en
una muestra lquida.
5 Demanda Biolgica de Oxgeno: cantidad de oxgeno que los microorganismos,

consumen durante la degradacin de las sustancias orgnicas contenidas en la muestra,

durante 5 das a 20C.
6 Carbono Orgnico Total: cantidad de carbono unido a un compuesto orgnico.
Tabla 2.4. Principales impactos de los residuos peligrosos del sector metalmecnico.

CONTAMINANTES IMPACTO
Aceites hidrulicos.
Absorbentes, trapos sucios, papeles sucios, absorbentes Irritantes
impregnados, etc., de aceites, grasas, disolventes, etc.
Residuos de la formulacin, fabricacin, distribucin y utilizacin de
grasas, detergentes, pintura y barniz.
Nocivos, txicos y/o
Residuos de moldeado.
cancergenos
Residuos de los procesos de tratamiento mecnico de superficie.
Aceites hidrulicos y lquidos de freno utilizados.
Residuos de soluciones cidas.
Residuos lquidos y lodos del tratamiento y revestimiento de
metales. Corrosivos
Residuos lquidos de aceites y disolventes, agotados o sucios.

Fuente: Fundacin entorno, 1998.

En Caldas, se desconoce el estado total de generacin, tipo y gestin que se

realiza con los residuos de la industria metalmecnica, ya que, como se
mencion anteriormente, la mayora de las empresas son tipo micropyme que
cuentan con poco control por parte de las autoridades medioambientales. La
Bolsa de Residuos y Subproductos Industriales BORSI (2015), reporta que las
industrias metalmecnicas ms grandes y representativas de la regin generan
ms de 2200 Ton/mes de diferentes tipos de residuos, principalmente escorias y
calaminas, los cuales en su mayora son llevados para disposicin final en el
relleno o escombreras, ya que el aprovechamiento en el sector de la
construccin est limitado a la disponibilidad de obras civiles.

En la Tabla 2.5, se resume la informacin disponible sobre estos residuos, donde se

observan grandes cantidades de los residuos generados; considrese que estos
datos no comprenden la totalidad del sector, revelando un gran riesgo ambiental
y haciendo evidente la necesidad de desarrollar proyectos de investigacin que
permitan manejarlos adecuadamente y aprovechar todo el potencial que
poseen para su posible valorizacin en nuevos productos de valor agregado.
Tabla 2.5. Tipificacin de residuos obtenidos de la industria metalmecnica en el departamento de Caldas.

TIPO DE RESIDUO
Discos Polvos de
Polvo de
Lodos de abrasivos limadura
Laminilla/ Laminilla/ granalla
Nata de lijado Polvos de (xidos de de broca Arena Viruta de
Calamina Calamina (Mezcla de
fundicin/ Escoria (Hmedos pulido seco aluminio y (Hmedos residual machete
seca hmeda arena y
(Ton/mes) con agua) (Ton/mes) cascarilla con (Ton/mes) (Ton/mes)
(Ton/mes) (Ton/mes) hierro)
(Ton/mes) de caf) aceite)
(Ton/mes)
(Ton/mes) (Ton/mes)
TOTAL MES 1218 432,5 22 101 9,7 3 7 20 20 1

Separacin de
Horneada
ferrosos y no
para Agregado
DISPOSICIN ferrosos. Disposicin Disposicin Disposicin Disposicin Disposicin Disposicin Disposicin
posterior para abono
ACTUAL Aprovechamiento final final final final final final final
disposicin orgnico
de ambos.
final
Disposicin final.

Adoquines, Adoquines,
Adoquines,
Adoquines, Adoquines, Adoquines, adobes. adobes.
Cementeras adobes.
Mezclas adobes. adobes. adobes. Mezclas Mezclas
Cementeras. Cermica Mezclas
asflticas. Mezclas Mezclas Industria Mezclas asflticas. asflticas.
USO Cermica. Pinturas y asflticas.
Afirmado. asflticas. asflticas. del asflticas. Pigmentos y Pigmentos y
PROBABLE Pinturas y pigmentos. Industrias
Mezcla con Industrias Industrias caucho Industrias pinturas. pinturas.
pigmentos. Industria de cermicas
cemento. cermicas y cermicas y cermicas y Industrias Industrias
Cauchos. y
cementeras. cementeras. cementeras. cermicas y cermicas y
cementeras
cementeras. cementeras.

Fuente: BORSI, 2015

2.2 Tecnologas de tratamiento de residuos peligrosos

Un residuo es cualquier objeto, material o sustancia que es descartado por el

generador y no tiene valor de uso directo, pero que es susceptible de
aprovechamiento o transformacin en un nuevo bien, con valor econmico o de
disposicin final (Decreto 1076 de 2015). Segn la Norma Tcnica Colombiana
GTC 24 de 2009, los residuos se clasifican en Residuos No Peligrosos (que incluyen
los residuos aprovechables, no aprovechables y biodegradables), Residuos
Peligrosos y Residuos Especiales. Los residuos no peligrosos, pueden ser reutilizados,
reciclados o llevados a procesos de compostaje y lombricultivo tradicionales. En
cambio, los residuos peligrosos, por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, txicas, inflamables, infecciosas o radiactivas deben ser tratados de
manera que se incrementen sus posibilidades de aprovechamiento y/o
valorizacin o se minimicen los riesgos para la salud humana y el ambiente
(Decreto 1076 de 2015).

Segn el Informe Nacional de Generacin de Residuos Peligrosos del IDEAM

(2011), Colombia genera, 174.418,7 Toneladas de desperdicios al ao, que
provienen de hospitales, las industrias qumica, farmacutica, energtica, textil,
petrolera y minera, entre otras. Se estima que la cadena siderrgica, metalrgica
y metalmecnica produce el 19% de dichos desperdicios (33.139,553 Ton), los
cuales, en su mayora son incinerados (La Opinin, 2014).

Dada la importancia de minimizar estas cantidades de residuos peligrosos y poder

disminuir la contaminacin ambiental, es necesario que los generadores
incorporen tecnologas de tratamiento, las cuales, implican cualquier operacin o
proceso unitario que altera las caractersticas fsicas, qumicas o biolgicas de un
residuo, de modo tal que se eliminen sus propiedades nocivas, se reduzca su
volumen o simplemente, se haga ms fcil su recuperacin (Volke & Velasco,
2002; Decreto 1076 de 2015; IDEAM, 2011). Segn Benito (2015), algunos residuos
tienen la capacidad de ser tratados, pero hay otros cuyo tratamiento es
tcnicamente y ambientalmente inviable para lo cual se opta por la disposicin
final o por el envo al exterior. En la actualidad, existen diversas tecnologas
disponibles para el tratamiento de residuos y su seleccin se realiza dependiendo
de factores como son: naturaleza del residuo, accesibilidad, objetivos, estndares
de seguridad y costos (DESCONT, 2015).

En el pas, de acuerdo al informe del IDEAM (2011), el 38,6% de los residuos son
procesados mediante tratamientos trmicos, el 20,4% con tratamientos biolgicos,
11,8% con tratamientos fsico-qumicos y el 0,8% con tecnologas avanzadas. Entre
estas se encuentran, la electrobiorremediacin, que es una tecnologa hbrida de
biorremediacin y electrocintica para el tratamiento de compuestos hidrfobos
orgnicos, en la cual se hace pasar una corriente continua a travs del material
slido contaminado y utiliza los fenmenos microbiolgicos para la degradacin
de contaminantes y los fenmenos electrocinticos para la aceleracin y la
orientacin del transporte de los contaminantes (Megharaj et al., 2011). As como
los procesos avanzados de oxidacin (PAO) que hacen uso de diferentes sistemas
reactivos, como la catlisis y la fotoqumica, basados en el diseo y construccin
de sistemas para el aprovechamiento de la radiacin UV o luz visible, de
reactores fotoqumicos y mtodos de preparacin de nuevos fotocatalizadores,
que operan usualmente a presin y temperatura ambiente (GilPavas et al., 2011).

Las tecnologas de tratamiento o remediacin pueden clasificarse de diferentes

maneras (Volke & Velasco, 2002), con base en los siguientes principios:

Estrategia de remediacin; que clasifica las tecnologas entre las de

modificacin de la estructura qumica, las de destruccin y las de
extraccin, separacin y recuperacin de los contaminantes.
Lugar en que se realiza el proceso de remediacin; in situ, si el tratamiento
se realiza en el mismo sito en donde se encuentra la contaminacin, o ex
situ, si se requiere de excavacin, dragado o cualquier otro proceso para
remover el residuo.
Tipo de tratamiento; que se basa en el principio de la tecnologa de
remediacin y se divide en tres tipos:

2.2.1 Tratamientos Fsico-Qumicos

Comprenden un conjunto de operaciones de separacin y reduccin de

volumen, as como procesos de transformacin del residuo mediante reacciones
qumicas, que pueden aplicarse individualmente o en serie (Martnez, 2005; Benito,
2015). En la Tabla 2.6., pueden apreciarse los principales tratamientos fsico-
qumicos.

Tabla 2.6. Tratamientos fsico-qumicos aplicados a residuos peligrosos.

TIPO DE
DESCRIPCIN
TRATAMIENTO
Sedimentacin Separa slidos en suspensin de lquidos generalmente acuosos.
Concentra partculas suspendidas en un lquido sometido a una
Centrifugacin
fuerza centrfuga.
Autoclave Esteriliza los residuos mediante calor y presin.
 Adsorcin Adhiere contaminantes sobre superficies controladas.
Evaporacin-secado Elimina lquidos retenidos en los lodos
Reduce o elimina la toxicidad de los residuos cambiando su
estado de oxidacin. Es un mtodo muy comn para tratar
Reduccin y oxidacin residuos de la industria metalmecnica. Los reactivos de
qumica oxidacin ms fciles de usar y econmicos son el hipoclorito de
sodio o calcio. Entre los reactivos reductores, el sulfato ferroso es
el ms barato y el ms fcil de usar.
La neutralizacin se usa generalmente para tratar residuos
lquidos, pero los lodos y gases tambin son tratados, cuando
Neutralizacin
exceden el lmite de pH que va desde 4.3 a 8.3. El lquido
neutralizado es enviado por lo general para sedimentacin.
El residuo acuoso que contiene el material disuelto o el material
Extraccin con orgnico en suspensin se mezcla con un solvente inmiscible
solventes que disuelve el material orgnico. A continuacin, se realiza un
proceso de separacin.
Hace que sustancias solubles se hagan menos solubles o
insolubles. El tratamiento es eficaz para aguas residuales de la
industria metalmecnica que contienen metales txicos como el
Precipitacin arsnico, el bario, el cadmio, el cromo, el cobre, el plomo, el
mercurio, el nquel y el zinc. La precipitacin puede ser seguida
de sedimentacin o solidificacin y puede estar precedida de
oxidaciones y/o reducciones.
El cloro es qumicamente extrado de los compuestos orgnicos
Decloracin
clorados, utilizando reactivos reductores fuertes.
La hidrlisis causa la descomposicin de las sustancias en el
Hidrlisis agua y puede ser realizada en cidos, o en condiciones
alcalinas.
En la electrlisis, se pasa una corriente elctrica a travs de un
electrolito (una solucin que contiene iones y conduce
Electrlisis
electricidad).Este es el mtodo utilizado para recuperar la plata
de las aguas residuales fotogrficas.
Es un mtodo comn para tratar las emulsiones de aceite/agua
como los lubricantes y otros aceites solubles en agua. Esto
Coagulacin- implica la agregacin de partculas finas de una solucin,
Floculacin aadiendo coagulantes a la mezcla. El siguiente paso es la
floculacin, donde la agregacin de las partculas causa la
formacin de cogulos que sedimentan fcilmente.
Separa los componentes voltiles del lquido, sometindolos a
Stripping/Desorcin
una corriente de gas
Lixiviacin Elimina los componentes solubles del material slido
Irradiacin de
Separa los componentes peligrosos mediante ozono/energa
UV/Ozonlisis
Intercambio con especies inicas disueltas mediante el contacto
Intercambio de iones
con resinas.
Fuente: Benito, 2015; Colombia, Ministerio de ambiente/OCAD, 2007.
 2.2.2 Tratamientos Trmicos

Son los mtodos que utilizan calor para volatilizar (separar), quemar,
descomponer (destruir) o fundir (inmovilizar) los contaminantes en un suelo o
material slido (Volke & Velasco, 2002; Martnez, 2005); stos se encuentran
relacionados en la Tabla 2.7.

Tabla 2.7. Tratamientos trmicos aplicados a residuos peligrosos.

TIPO DE
DESCRIPCIN
TRATAMIENTO
Incineracin Combustin completa utilizando el oxgeno en exceso.
Utilizacin de la misma unidad de produccin de clinker7 para la
Coprocesamiento
combustin de residuos.
Pirlisis Descomposicin trmica en ausencia total de oxgeno.
Gasificacin Combustin incompleta en ausencia parcial de oxgeno.
Volatilizacin y posterior combustin del residuo por contacto con
un gas energizado. La tecnologa es aplicable a residuos orgnicos
Arco de plasma
lquidos finamente divididos y puede ser utilizada para residuos con
alto contenido de cloro, pesticidas, PCB, dioxinas y furanos.
Oxidacin sin llama, desarrollada a temperaturas entre 1500C y
Oxidacin en sal 2000C, donde las sustancias orgnicas son oxidadas por el oxgeno
fundida en una cmara de reaccin donde se encuentra una sal alcalina
fundida.
Fuente: Benito, 2015; Colombia, Ministerio de ambiente/OCAD, 2007.

La incineracin es el mtodo ms empleado por las industrias para destruir sus

contaminantes, por la facilidad de aplicacin y la reduccin del volumen de los
residuos, a pesar de las emisiones de gases txicos que genera (IDEAM, 2011).

2.2.3 Tratamientos Biolgicos

Los tratamientos biolgicos o biorremediacin utilizan las actividades metablicas

de ciertos organismos (plantas, hongos, bacterias) para degradar (destruir),
transformar o remover los contaminantes a productos metablicos inocuos (Volke
& Velasco, 2002).

En el caso de los residuos txicos, estos tratamientos tienen una aplicacin

limitada, ya que los microorganismos suelen ser muy sensibles a las
concentraciones de los contaminantes, as como a la temperatura y el pH
(Martnez, 2005). Sin embargo, existen microorganismos extremfilos con
caractersticas adaptativas que les confieren tolerancia a factores fsicos y/o

7 Mezcla fundida de arcilla y caliza para la produccin de cemento.

qumicos extremos, como alta o baja temperatura, acidez, salinidad, alta
concentracin de metales y sustancias txicas, entre otros (Capdevielle et al.,
2010). Igualmente, tienen la capacidad de utilizar los contaminantes como fuente
de carbono y/o energa (Astashkina et al., 2015; Llad et al., 2012; Rodrgues et al.,
2015).

Adems, mediante la ingeniera gentica se ha logrado mejorar la resistencia de

los microorganismos a condiciones adversas y/o acelerar los procesos
metablicos para lograr la degradacin de ciertas sustancias (Megharaj et al.,
2011). Las tcnicas ms comunes de biorremediacin se resumen en la Tabla 2.8.

Tabla 2.8. Tratamientos biolgicos aplicados a residuos peligrosos.

TIPO DE TRATAMIENTO DESCRIPCIN

El tratamiento de los materiales contaminados se realiza en fase
Biorreactores de suelos
acuosa y es mantenido en suspensin mediante agitacin, lo
activados (RSA, o
cual permite mayor transferencia de masa, y tiempos de
Slurry Bioreactors)
tratamiento relativamente menores.
Sistema de tratamiento biolgico secundario, para aguas
Reactor Biolgico residuales domsticas e industriales biodegradables. Los
rotativo de contacto microorganismos responsables del tratamiento se adhieren a los
(RBC) o Biodiscos discos, los cuales giran poniendo en contacto a la biomasa con
el sustrato y el oxgeno.
Proceso mediante el cual diversos sustratos orgnicos se
descomponen de manera aerbica o anaerbica y se
Compostaje
estabilizan debido a la accin de una poblacin mixta de
microrganismos.
Digestin anaerobia Degrada los residuos orgnicos en ausencia de oxgeno.
Los materiales contaminados son esparcidos en una superficie
impermeable con un sistema incorporado para recoger
cualquier lixiviado. Se aran para oxigenar, se riegan y se
Landfarming8
aaden nutrientes, para generar materiales inocuos para el
ambiente, o subproductos estabilizados que no representan
peligro.
Aprovechamiento de la capacidad de ciertas especies
vegetales para extraer del suelo a travs de sus races,
Fitorremediacin
contaminantes inorgnicos tales como metales pesados y
acumularlos en su tejido vegetal.
Utilizacin de Proceso enfocado principalmente a la remocin de nutrientes y
microalgas de metales pesados presentes en las aguas residuales.
Fuente: Behling et al., 2003; Benito, 2015; Colombia, Ministerio de ambiente/OCAD, 2007.

Como se mencion anteriormente la seleccin del tipo de tratamiento depende

de factores como la naturaleza del residuo, potencialidad de recuperacin de
materiales, aprovechamiento energtico, requerimientos de instalaciones y/o

8 Anglicanismo para describir un tratamiento aerobio de suelos contaminados.

transporte, o la disposicin final de los residuos producidos durante el tratamiento.
Por esto, en la Tabla 2.9., se hace una comparacin bsica de las ventajas y
desventajas de cada uno. En general, la biorremediacin presenta como
principales ventajas sobre los mtodos de tratamiento convencionales, los bajos
costos, alta eficiencia, la minimizacin de lodos, y la posibilidad de recuperacin
de metales (Abdul Jaffar ali et al., 2015).

De esta comparacin, y de acuerdo al objetivo de este trabajo, el cual est

orientado a brindar una opcin de tratamiento para los residuos de la industria
metalmecnica que se muestran recalcitrantes a los mtodos fisicoqumicos
convencionales, en la siguiente seccin se profundizar en el anlisis de los
tratamientos biolgicos o de biorremediacin.

Tabla 2.9. Ventajas y desventajas de los tipos de tratamiento aplicados sobre los residuos
peligrosos.

TRATAMIENTOS VENTAJAS DESVENTAJAS

Los residuos generados por
Presentan una buena relacin tcnicas de separacin, deben
costo/beneficio. ser tratados o dispuestos
posteriormente.
Los fluidos de extraccin pueden
Fisicoqumicos Necesitan periodos cortos de
aumentar la movilidad de los
accin.
contaminantes.
Necesitan varias etapas de
El equipo es accesible y requieren
recuperacin y purificacin de
bajos gastos energticos.
sustancias.
Son aplicables a una gran variedad Generan emisiones de gases
de residuos. txicos.
Trmicos
Permiten una gran reduccin de Requieren un gran gasto
volumen. energtico y son ms costosos.
Presentan una buena relacin Requieren mayores tiempos de
costo/beneficio. tratamiento.
Son tecnologas amigables con el Es necesario verificar la toxicidad
ambiente. de los intermediarios y productos.
Aunque algunas veces se puede
Biolgicos requerir operaciones de
Los organismos son muy sensibles
acondicionamiento o de
a las condiciones ambientales y
separacin, los costos y el impacto
concentracin de sustancias
ambiental son menores frente a los
txicas.
tratamientos trmicos y fsico-
qumicos.
Fuente: Volke & Velasco, 2002.
2.3 Biorremediacin

La biodegradacin o biorremediacin, como se conoce desde los aos 70, es

una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los organismos (Megharaj et
al., 2011) para remover, degradar o transformar contaminantes orgnicos de
suelos, aguas y emisiones gaseosas, en compuestos ms simples como dixido de
carbono, sales inorgnicas, agua y biomasa (Ferrera et al., 2006; Llad, 2012;
Vsquez et al., 2010). El uso de la biodegradacin se generaliz para remediar los
problemas causados por vertimientos de petrleo al mar, y poco a poco ha
encontrado otras aplicaciones en la degradacin de compuestos txicos y
recalcitrantes como los organoclorados, los lodos cargados de metales pesados y
los plsticos (Megharaj et al., 2011; Watanabe, 2001).

El xito cualitativo y cuantitativo de la biorremediacin depende de las

condiciones ambientales de la zona donde se realiza el proceso. Realp et al.,
(2008) y Thangarajan et al., (2011) citan entre ellas: la disponibilidad de oxgeno,
por la mayor eficiencia de los procesos aerbicos sobre los anaerbicos; la
humedad, ya que los microorganismos requieren un contenido de agua
disponible entre el 30% y el 80% para sobrevivir; la presencia de nutrientes como
nitrgeno y fsforo que son necesarios para el metabolismo; un rango de
temperatura mesoflico entre 20C y 40 C, y un pH entre 7,4 y 7,8 para la
degradacin de hidrocarburos, ya que ste afecta tanto a la actividad
microbiana como a la solubilidad y adsorcin de contaminantes.

Las tcnicas de biorremediacin pueden aplicarse in situ o ex situ. En los

tratamientos in situ, los residuos son tratados en su emplazamiento natural,
mientras que en los ex situ el material contaminado es transportado hasta la
localizacin donde se implementar la tecnologa (Llad, 2012; Megharaj et al.,
2011), considerndose los tratamientos In situ ms amigables con el medio
ambiente y particularmente atractivos debido a su bajo costo y mantenimiento
sencillo (Agnello et al., 2015; Menendez-Vega et al., 2007). La biorremediacin,
como se observa en la Figura 2.5., puede darse de forma natural (bioatenuacin)
(Gonzlez, 2011; Megharaj et al., 2011); por bioestimulacin, que consiste en la
adicin y suplementacin de nutrientes, agua o electrones donantes o aceptores,
y el acondicionamiento fisicoqumico del medio para estimular la eliminacin de
los contaminantes; o por bioaumentacin, que corresponde al aumento de la
cantidad de organismos con catabolismo9 apropiado para acelerar la
degradacin, ya sean organismos autctonos, exgenos, modificados

9Fase exergnica del metabolismo en la que las biomolculas complejas se transforman

en molculas sencillas.
genticamente (GEM), en consorcios o formando biopelculas (Agnello et al.,
2015; Sprocati et al., 2012; Thangarajan, 2011).

Las tecnologas de biorremediacin basadas en los principios de bioestimulacin

y bioaumentacin incluyen bioventing10, landfarming, biorreactores de suelos
activados (slurry bioreactors), compostaje, fitorremediacin, utilizacin de
microalgas y fitorremediacin asistida por microorganismos, entre otros (Agnello et
al., 2015; Ferrera-Cerrato et al., 2006; Gonzlez, 2011; Khan et al., 2004; Megharaj
et al., 2011).

Fuente: elaboracin propia.

Bioatenuacin

Adicin y suplementacin
de nutrientes, agua y
Bioestimulacin
electrones donantes o
aceptores
Biorremediacin

Organismos nativos

Formacin de biopelculas

Bioaumentacin Quimiotaxis bacteriana

Inoculacin de GEM

Bioaumentacin en la
rizosfera

Figura 2.5. Estrategias de biorremediacin.

10 Anglicanismo para describir la tecnologa que estimula la biodegradacin de residuos in

situ mediante la circulacin de aire.
 2.3.1 Reactores de Suelos Activados (RSA)

Los reactores de suelos activados o Bioslurry systems son una tcnica de

restauracin ex situ que se lleva a cabo en sistemas de biorreactores bajo
condiciones ambientales controladas, para tratar zonas contaminadas con alto
contenido de materia orgnica y/o compuestos txicos recalcitrantes presentes
en altas concentraciones. (Cronje et al., 2002; Ferrera-Cerrato et al., 2006). Este
sistema, consiste en un tanque con control de nutrientes, oxgeno y pH, y
agitacin mecnica que permite la mezcla de la suspensin de biomasa
conocida como floc biolgico y el efluente contaminante, para favorecer la
biodegradacin (Maunga et al., 2012). Segn Khan et al., (2004) y Gonzlez
(2011), sta tcnica de biorremediacin provee un aumento en la transferencia
de masa y contacto de los microorganismos con los contaminantes/nutrientes; lo
que lleva a mayores tasas de biodegradacin de los contaminantes en tiempos
ms cortos de tratamiento y, una vez finalizado el proceso, el lodo resultante es
desecado y puede ser devuelto a su lugar de origen. Segn Ferrera-Cerrato et al.,
(2000) los grupos microbianos importantes identificados en tratamientos con RSA
incluyen bacterias pseudomonadales, actinomicetos, bacterias metantrofas y
deshalorrespiradoras, algunas arqueas como las metanognicas, y ms
recientemente, aunque no en escala comercial, hongos ligninolticos.

Por ltimo, de acuerdo a Ferrera-Cerrato et al., (2000) y Khan et al., (2004) aunque
el tratamiento mediante RSA, es relativamente simple, verstil y controlado, su
mayor desventaja corresponde al aumento en los costos, por el transporte del
material, construccin y operacin de los biorreactores y el manejo posterior de
los lodos y las aguas residuales.

2.3.2 Compostaje

El compostaje es un proceso biolgico de estabilizacin de residuos mediante la

oxidacin controlada de materia orgnica biodegradable, para generar dixido
de carbono, agua, energa calrica y compost, gracias a la accin de diversos
microrganismos (APROLAB, 2007), por lo que se constituye en una forma de
fermentacin en estado slido para el control ambiental (Santis, 2013). Las
aplicaciones ms comunes del compostaje incluyen el tratamiento de residuos
agroindustriales, desechos de jardinera y cocina, desechos de la madera como
el aserrn y las virutas, residuos slidos municipales y de lodos (Velasco & Volke,
2003). Sin embargo, tambin ha demostrado ser un proceso efectivo para
remediar suelos contaminados con hidrocarburos policclicos aromticos (HPA),
compuestos monoaromticos, explosivos, clorofenoles, diversos pesticidas e
hidrocarburos del petrleo como el diesel (Ferrera-Cerrato et al., 2006; Semple et
al., 2001). Otro tipo de contaminantes recalcitrantes, son los metlicos que
pueden encontrarse en diversos residuos y, a diferencia de los contaminantes
orgnicos, no son retirados significativamente durante el compostaje. Las
transformaciones microbianas de los metales durante este proceso corresponden
bsicamente a reacciones de oxidacin y reduccin, que influyen en la
solubilidad y biodisponibilidad para la adsorcin a molculas orgnicas, lo que
reduce su toxicidad (Moreno & Moral, 2007).

Al igual que para el compostaje de desechos no peligrosos, en el compostaje de

residuos recalcitrantes, es necesario controlar la aireacin, la temperatura, el
contenido de humedad, la relacin carbono/nitrgeno (C/N) y el pH
(Abarrataldea, 2005). Debido a que los contaminantes orgnicos generalmente
estn compuestos solo por carbono e hidrgeno (Realp et al., 2008), deben
mezclarse con sustancias orgnicas slidas biodegradables (agentes de volumen)
que aseguren el balance y la disponibilidad de nutrientes para los
microrganismos, adems de aumentar la porosidad, y, con esto la aireacin y
capacidad de retencin de agua de las pilas (Ferrera et al., 2006; Jorgensen et
al., 2000). En la Tabla 2.10 se muestran las caractersticas deseables de la mezcla
de materiales de partida para llevar a cabo el compostaje:

Tabla 2.10. Parmetros iniciales para el compostaje de la mezcla de materiales

contaminados por compuestos orgnicos.

CARACTERSTICA RANGO RAZONABLE RANGO PREFERIDO

Relacin C/N 20-40 25-30
Contenido de humedad 40-65% 50-60%
pH 6-8 6,5-7,5
Relacin material
1,5:1 3:1 2:1
contaminado/aditivos
Contaminantes <50000 mg/kg
Metales txicos <2500 mg/kg
Conteo bacteriano >1000 UFC/g mezcla
Fuente: Negro, 2000; Velasco & Volke, 2003.

2.3.2.1 Fases del compostaje aerobio

Segn Mantilla & Ruz (2008), y tal como se muestra en la Figura 2.6. , el proceso
de compostaje puede dividirse en cuatro perodos, de acuerdo con la evolucin
de la temperatura.

Fase Mesfila: el proceso inicia a temperatura ambiente permitiendo la

multiplicacin rpida de microorganismos mesfilos, que producen cidos
orgnicos que disminuyen el pH y, se incrementa la temperatura, como
consecuencia de la actividad metablica.
 Fase Termfila: se da a temperaturas entre 40C y 70 C. Los
microorganismos termfilos transforman el nitrgeno en amonaco,
causando una alcalinizacin del medio.
Fase de enfriamiento: luego de alcanzar el punto de estabilidad, empieza
a disminuir la temperatura, reapareciendo los hongos termfilos celulolticos
y los microorganismos mesfilos causando una ligera disminucin del pH.
Fase de maduracin: es la ltima fase; en sta, la temperatura disminuye
hasta temperatura ambiente, actuando mohos y actinomicetos que
contribuyen a la estabilidad del compost mediante reacciones secundarias
de condensacin y polimerizacin.

Fuente: www.agroterra.com.

Figura 2.6. Etapas del proceso de compostaje en funcin de la temperatura.

La adicin de inculos (bacterias, hongos y levaduras) a la mezcla inicial, induce

y acelera la descomposicin de la materia orgnica reduciendo el tiempo de
biodegradacin (APROLAB, 2007).
2.3.2.1 Ventajas y desventajas del compostaje

En la Tabla 2.11., se resumen las consideraciones que hace Khan et al., (2004)
sobre la tecnologa de compostaje.

Tabla 2.11. Ventajas y desventajas del compostaje como tcnica de biorremediacin.

VENTAJAS
Tecnologa fcil de disear y poner
en prctica.
Tiempos de tratamiento cortos (6
meses-2 aos).
Un sistema cerrado puede controlar
las emisiones de vapor.
Adaptable a diferentes condiciones
ambientales.
Reduccin de contaminantes hasta
de 95%.
Se requiere poco personal para
operacin y mantenimiento.
DESVENTAJAS
Concentraciones muy altas de contaminantes
pueden inhibir la biodegradacin.
Poco efectivo a concentracin > 50.000 ppm de
hidrocarburos del petrleo.
Concentraciones de metales pesados > 2.500 ppm
pueden inhibir el crecimiento microbiano.
En sistemas abiertos, puede darse evaporacin de
contaminantes.
Es necesario contar con un espacio adecuado
para montar los sistemas.
Requieren mayor tiempo de tratamiento que los
fsicos y qumicos.
Fuente: Khan et al., 2004

2.3.3 Fitorremediacin asistida por microorganismos

La fitorremediacin es el proceso de enmienda de suelos y aguas subterrneas

contaminadas utilizando la capacidad de las plantas para asimilar, acumular y/o
degradar sustancias, especialmente metales (Khan et al., 2004). Megharaj et al.,
(2011) y Ullah et al., (2015) describen las principales tcnicas de fitorremediacin,
las cuales se resumen en la Tabla 2.12.

Tabla 2.12. Resumen de las tcnicas de fitorremediacin.

TCNICA DESCRIPCIN
Los microorganismos de la rizsfera ayudan en la degradacin de
Rizodegradacin
xenobiticos orgnicos.
Fitovolatilizacin Los contaminantes se volatilizan y se liberan a la atmsfera.
Fitoextraccin Los contaminantes se acumulan en la biomasa.
Transformacin de compuestos altamente txicos en formas menos
Fitotransformacin
txicas.
Degradacin de xenobiticos orgnicos mediante las enzimas de la
Fitodegradacin
planta dentro de los tejidos vegetales.
Se limita la movilidad de los contaminantes por las races de las
Fitoestabilizacin
plantas en la rizosfera.
Secuestro por medio de plantas, de contaminantes de aguas
Fitofiltracin
contaminadas.
Fuente: Ullah et al., 2015.
La rizodegradacin o biorremediacin asistida por microorganismos, es una
tecnologa reciente y muy efectiva en la recuperacin de suelos contaminados
con metales pesados (Juwarkar, 2012), que est basada en el potencial
metablico de los microorganismos asociados a las races, aprovechando las
interacciones planta-suelo-microorganismos. Estos microorganismos transforman
los metales pesados en formas solubles y biodisponibles, que en consecuencia,
facilitan la fitorremediacin, adems, de que producen agentes promotores del
crecimiento de plantas, apoyando indirectamente la tecnologa de
fitorremediacin (Ullah et al., 2015). Algunos de los mecanismos propios de los
microorganismos que permiten una mayor absorcin de metales por las plantas
son: produccin de siderforos, cidos orgnicos, biosurfactantes, procesos de
biometilacin y redox (Juwarkar, 2012; Ullah et al., 2015).

Como se puede observar, existen muchas tcnicas de biorremediacin las cuales

dependen de factores biolgicos, qumicos y fsicos que deben ser tenidos en
cuenta para escoger la que presente mayor potencialidad de xito de acuerdo
al tipo de residuo a tratar (Realp et al., 2008; Thangarajan et al., 2011). Por esto, a
continuacin, se analizar el estado del arte en procesos de biorremediacin
aplicados a los residuos contaminados con aceites y grasas de la industria
metalmecnica, recopilando las investigaciones ms relevantes que se han
realizado sobre el tema y haciendo un anlisis de los aspectos significativos que
permitan cimentar una propuesta de aplicacin a nivel industrial.
 3 BIORREMEDIACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS CON GRASAS Y
LUBRICANTES

3.1 Estado del arte

El uso de la biotecnologa para la degradacin de contaminantes orgnicos e

inorgnicos se ha generalizado a nivel mundial. Prueba de ello, son los casi
150.000 artculos publicados en los ltimos 20 aos referidos a las palabras clave
de biorremediacin y biodegradacin que aparecen referenciados en algunas
de las bases de datos ms importantes de la comunidad cientfica, como se
muestra en la Figura 3.1.

Fuente: Elaboracin propia

12000
Cantidad de publicaciones

10000

8000

6000 Science Direct

Springer

4000 Web of Science

2000

Ao

Figura 3.1. Artculos publicados desde 1997 sobre biorremediacin/biodegradacin en

revistas de investigacin cientfica internacionales referenciados en las bases de datos
Science Direct, Springer y Web of Science.

Cuando se especifica la bsqueda a biorremediacin/biodegradacin de

residuos industriales contaminados con grasas y lubricantes, se observa que los
resultados se reducen notablemente, como se indica en la Figura 3.2. En estos
artculos se evalan residuos de diferente origen, siendo en su mayora
hidrocarburos derivados del petrleo, pero siendo muy limitada la informacin
especfica sobre residuos procedentes de la industria metalmecnica.

Fuente: Elaboracin propia

 100

Cantidad de publicaciones
90
80
70
60
50
Science Direct
40
Springer
30
Web of Science
20
10
0

Ao

Figura 3.2. Artculos publicados desde 1997 sobre biorremediacin/biodegradacin de

suelos contaminados con aceites y lubricantes industriales referenciados en las bases de
datos Science Direct, Springer y Web of Science.

Ante este panorama, en la presente monografa, se han elegido los reportes de

estudios experimentales y revisiones previas sobre biorremediacin de suelos y
materiales slidos contaminados con grasas y/o aceites minerales que permitan
dilucidar los aspectos claves necesarios para la aplicacin de un tratamiento de
biodegradacin a los residuos metalmecnicos.

Como revisin de tema se destacan las consideraciones de Singer et al., (2005)

sobre los aspectos a tener en cuenta para identificar y seleccionar cepas ms
promisorias para los tratamientos de bioaumentacin, ya que la supervivencia de
los microorganismos inoculados durante el tratamiento, es uno de los factores ms
limitantes en esta tcnica de biorremediacin (Sprocati et al., 2012). Los autores
sealan el enfoque tradicional que comprende la transmisin hereditaria y mejora
de las habilidades catablicas excepcionales de algunos microorganismos para
desempearse eficientemente en ciertas tareas y entornos, y la seleccin de
cepas rizo-dirigidas aprovechando las relaciones simbiticas que se generan entre
la planta y los microorganismos capaces de crecer en los exudados de la raz,
adems de degradar el contaminante correspondiente. Tambin hacen nfasis
en el potencial que ofrece la tcnica de "cebado", la cual consiste en preparar a
los microorganismos para las condiciones futuras en las que debern llevar a
cabo una funcin.

Tambin es de gran relevancia, el trabajo de Chen et al., (2015) sobre el uso del
compostaje en la biorremediacin de suelos cargados con contaminantes
orgnicos y metales pesados, en el cual describen aspectos microbiolgicos y
discuten algunos problemas que necesitan mayor investigacin tales como la
biodisponibilidad del contaminante, la mineralizacin11 de la materia orgnica y
la calidad del compost utilizado en dichos procesos.

A nivel experimental, en Colombia, son pocas las investigaciones realizadas sobre

biorremediacin, las cuales han sido enfocadas principalmente al tratamiento de
hidrocarburos aromticos y metales pesados en suelos (Narvez-Flrez, 2008). El
Centro de Investigaciones Microbiolgicas de la Universidad de los Andes ha
desarrollado diferentes estudios encaminados al aislamiento y bioaumentacin
de bacterias nativas degradadoras de crudo en suelos impactados por derrames
del oleoducto Cao Limn Coveas (Vargas et al., 2004; CIMIC, 2007). En otros
estudios, Pardo et al., (2004) trataron suelos a travs de landfarming con adicin
de nutrientes in vitro, obteniendo porcentajes de degradacin de hidrocarburos
totales del petrleo (HTP) hasta del 91% luego de cuatro meses de tratamiento.
Vallejo et al., (2005) evaluaron la bioestimulacin con sales inorgnicas simples y
con un fertilizante inorgnico compuesto, en la biodegradacin de HTP
empleando mesocosmos de suelo contaminado artificialmente, de lo cual
obtuvieron una degradacin del 39% a 41% luego de 125 das de tratamiento.
Adems del estudio realizado por Vsquez et al., (2010) bajo el macroproyecto
de Biorremediacin de lodos contaminados con aceites usados de la
Universidad de Santander, en el cual, analizaron la degradacin mediante la
bioaumentacin con cepas nativas de bacterias y hongos, en biopilas formadas
por lodos contaminados con residuos de aceites usados, provenientes de
lavaderos de carros y lodos de alcantarillado de una zona industrial mezclados
con lodos deshidratados obtenidos a partir del tratamiento primario de aguas
residuales domsticas, logrando un porcentaje de remocin de hasta 95% luego
de 120 das de tratamiento.

A nivel internacional, las investigaciones desarrolladas apuntan principalmente al

tratamiento de aguas residuales y de suelos, pero, de acuerdo con los objetivos
de esta revisin, se hace nfasis en las segundas, ya que los residuos slidos en
general, se disponen directamente sobre el suelo. La mayora de estudios, evala
y compara los efectos de la atenuacin natural, la bioestimulacin y la
bioaumentacin sobre la degradacin de HTP en suelos contaminados por
actividades industriales o contaminados especficamente a nivel experimental
(Agnello et al., 2015; Arrieta et al., 2012; Gonzlez et al., 2012; Lee et al., 2007;
Llad et al., 2012; Menndez-Vega, 2007; Menezes et al., 2003; Thangarajan et al.,
2011).

11 Transformar la materia orgnica contaminante a dixido de carbono, agua y biomasa (Megharaj

et al., 2011).
Para la bioestimulacin, en general, se utilizaron sales inorgnicas simples como
fuente de nitrgeno y fsforo(Arrieta et al., 2012; Lee et al., 2007; Llad et al., 2012;
Menezes et al., 2003; Thangarajan et al., 2011), aunque otros se atrevieron a
aplicar sustancias ms especficas, como fertilizantes oleoflicos que solubilizan los
nutrientes en la interfase agua-petrleo y agentes tensoactivos (Llad et al., 2012;
Menndez-Vega et al., 2007), que aumentan la superficie de contacto agua-
petrleo acelerando la degradacin. Por otro lado, para la bioaumentacin
utilizaron consorcios bacterianos donde predominaban cepas de los gneros
Pseudomonas y Bacillus, seguidos de Arthrobacter, Acinetobacter, Enterobacter,
Flavobacetirum, y algunos representantes de los gneros Achoromobacter,
Microbacterium, Ochrobactrum, Rhodococcus, Streptomyces, Arthrobacter,
Staphylococcus, Delftia, Exiguobacterium, Paenibacillus, Sanguibacter, entre otros
(Agnello et al., 2015; Arrieta et al., 2012; Gonzlez et al., 2012). Llad et al., (2012)
adems del consorcio bacteriano, introdujeron la cepa ligninoltica Trametes
versicolor con lo que se produjo un cambio significativo en la biodiversidad
detectable de la comunidad bacteriana endgena y se obtuvo mayor
degradacin. Otros investigadores se apoyaron en la tecnologa de compostaje
de los suelos con aplicacin de compost estabilizados como enmienda orgnica
(Piotrowska-Cyplik et al., 2013; Sayara et al., 2010; Taiwo et al., 2016) y compostaje
combinado con fitorremediacin (Taiwo et al., 2016). Los porcentajes de
remocin de grasas y lubricantes, fueron muy variables de acuerdo al tratamiento
aplicado, alcanzando entre el 50% (Arrieta et al., 2012) y el 91% (Gonzlez et al.,
2012) de degradacin.

En la Tabla 3.1 se hace una sntesis de las tcnicas aplicadas, microorganismos

utilizados y otros aspectos relevantes encontrados en estos estudios
experimentales.
Tabla 3.1. Comparacin de los estudios experimentales realizados sobre biorremediacin de suelos contaminados con grasas y
aceites.
Microorganismos
Autor Residuo Tratamiento Condiciones experimentales Conclusiones
utilizados
La bioaumentacin en el suelo
de Long Beach, mostr la
mayor la tasa de degradacin
Muestras de 450g en bandejas de semanal y el mayor porcentaje
aluminio con aireacin constante. de degradacin de las
Incubacin a temperatura fracciones ligeras (75%) y
Suelos
ambiente (27C) y riego semanal, Bacillus cereus, pesadas (73%) de hidrocarburos
contaminados Atenuacin
durante 12 semanas. Bacillus sphaericus, totales del petrleo (HTP).
con disel natural,
Bioestimulacin: adicin de 250 Bacillus fusiformis, Entre los dos suelos, la muestra
Menezes et obtenidos de bioestimulacin
mg/kg de (NH4)2SO4 y 100 mg/kg Bacillus pumilus, de Long Beach mostr mayor
al., (2003) Long Beach, (adicin de N y
de K2HPO4. Acinetobacter junii degradacin en los HTP.
California (EE.UU.) P), y
Bioaumentacin: adicin de 40 and Pseudomonas En el suelo de Hong Kong, la
y Hong Kong bioaumentacin
mL de 2,6*108 clulas/ml de un sp. atenuacin natural, mostr un
(China).
consorcio bacteriano mayor porcentaje de
previamente aislado del suelo de degradacin de las fracciones
Long Beach. ligeras, mientras que la
bioestimulacin tuvo el menor
efecto de degradacin sobre
cualquiera de los tratamientos.
Suelo de una Montaje de mesocosmos con
finca ubicada en suelo contaminado con petrleo Los mesocosmos con nutrientes
Zipaquir, Landfarming crudo tipo Castilla. Adicin de mostraron porcentajes de
Corynebacterium
Pardo et al., Colombia con fertilizante inorgnico Triple 15, el remocin total entre el 67% y
propinquum,
(2004) contaminado bioestimulacin cual contiene nitrgeno 91%.
Bacillus brevis.
experimentalment in vitro. amoniacal y orgnico, fsforo Los controles biticos
e con petrleo asimilable (P2O) y potasio soluble degradaron entre el 37% y 65%.
crudo. (K2O). 4 meses de tratamiento.
Suelos Aislamiento y seleccin de
El landfarming es una buena
impactados con bacterias degradadoras de
Landfarming opcin de biorremediacin in
petrleo por hidrocarburos. Pseudomonas y
Vargas et al., con situ, especialmente cuando se
derrames del Aplicacin del consorcio bacterias lactasa
(2004) bioaumentacin complementa con la
oleoducto Cao seleccionado. positiva
in situ. bioaumentacin con
Limn-Coveas, No se especifican las condiciones
microorganismos nativos.
Colombia. fisicoqumicas.
 Sthenotrophomona
Montaje de mesocosmos con
s maltophilia, La mayor degradacin de TPH
suelo contaminado con de
Suelo de una Acinetobacter se evidenci durante los
petrleo crudo tipo Castilla.
finca ubicada en iwoffii, primeros 28 das de tratamiento.
Adicin de nutrientes (N y P) en
Zipaquir, Landfarming Burkholderia El tratamiento con sales
forma de sales inorgnicas simples
Vallejo et al., Colombia con cepacia, inorgnicas simples tuvo mayor
(NH4NO3 y K2HPO4) y un fertilizante
(2005) contaminado bioestimulacin Pseudomonas porcentaje de remocin (40%)
inorgnico compuesto (Triple 15),
experimentalment in vitro. putida, que el fertilizante compuesto
los das 0 y 63. Relacin final de
e con petrleo Crhomobacterium (34%), aunque no fueron
C:N:P es de 100:10:1.
crudo. violaceum, significativamente diferentes
125 das de tratamiento con
Flavimonas del control sin nutrientes (30%).
muestreos cada 25 das.
oryzihabitans.
La bioestimulacin es una
opcin viable para la
No se realiz remediacin de aceites
identificacin minerales lubricantes.
Microcosmos de 300g en microbiana; slo Aunque la mayor actividad de
Suelo recipientes de vidrio con pruebas de degradacin se estimul con el
contaminado con capacidad de 1L, incubados a catalasa, como tratamiento de menor
disel, aceites temperatura ambiente (20-25C), indicador de la concentracin de nutrientes, no
Bioestimulacin
lubricantes y otros humedad del 70% y adicin de actividad de se alcanz una degradacin
con tres
hidrocarburos (NH4)2SO4 y K2HPO4 en relacin microorganismos completa, ya que el mximo
Lee et al., relaciones
(C20-C40), 100/10/1, 200/10/1, y 500/10/1. aerbicos y de la rendimiento fue de 60%.
(2007) diferentes de
obtenido de un Aireacin por volteo manual dos actividad La biodegradacin puede ser
nutrientes
taller de veces por semana. deshidrogenasa, evaluada mediante parmetros
(C/N/P).
reparacin de Determinacin del contenido de correlacionada con biolgicos del suelo, como
carros del ejrcito lubricantes y la actividad la tasa de respiracin, actividad
abandonado. microbiana cada 15 das desde el eliminacin de deshidrogenasa y catalasa.
da 0 hasta el 105. aceites y la Los mtodos biolgicos deben
respiracin. complementarse con mtodos
qumicos para mejorar la
descontaminacin de
lubricantes.
Subsuelo Bioestimulacin Temperatura del subsuelo: 22- Achromobacter La aplicacin del fertilizante, el
contaminado con in situ, mediante 26C. xylosoxidans, agente tensioactivo y el
Menndez-
hidrocarburos, inyeccin de Anlisis previos: Acinetobacter sp., perxido de hidrgeno fue
Vega et al.,
proveniente de perxido de Extraccin de hidrocarburos con Microbacterium exitosa para lograr la
(2007)
una antigua hidrgeno, un diclorometano y cuantificacin oxydans, biorremediacin in situ en un
planta fertilizante por cromatografa de gases. Ochrobactrum sitio contaminado con
 metalmecnica olefilo y un Monitoreo de microorganismos anthropi, y hidrocarburos, ya que mejoran
del Norte de agente endgenos, mediante recuentos Pseudomonas la biodisponibilidad de los
Espaa. tensoactivo. en placa, identificacin putida. contaminantes y el nivel de
morfolgica y viabilidad oxgeno disuelto.
bacteriana por tcnicas Los anlisis qumicos
microscpicas e identificacin confirmaron la desaparicin de
molecular con Gapped BLAST. los contaminantes y por lo tanto
Bioestimulacin: la eficacia del tratamiento,
Inyeccin de fertilizador oleoflico sobre todo durante los dos
S200 ajustado a una relacin C: N primeros meses de tratamiento.
de 10:1. Se necesitan estudios
Aplicacin de una dilucin de moleculares para entender
H2O2 (250mg/L) de acuerdo a la completamente el
demanda estequiomtrica de comportamiento de las
oxgeno de los contaminantes. comunidades microbianas
Infiltracin de Bioversal HC, como durante la biorremediacin en
agente de lavado de ambientes contaminados.
hidrocarburos absorbidos en las
zonas no saturadas.
El suelo utilizado
A pesar de que los compost
en este estudio se Muestras de 3,5 kg, producto de la
ms estables pueden promover
recogi de una mezcla manual del suelo
la degradacin rpida de los
explotacin contaminado y la enmienda
PHA, el compost menos estable
agrcola libre de orgnica (1:1) y luego con un
no es adecuado para este tipo
cualquier PHA en agente de volumen (astillas de
de remediacin.
Tarragona, madera y residuos de poda), en
La materia hmica aceler ms
Espaa, al cual se relacin 1:1, en vasos Dewar de
No se realizaron la tasa de degradacin, que las
le aade una Compostaje 4,5 L. Adicin de agua para
pruebas de altas temperaturas, ya que
Sayara et al., mezcla de PHA llevado a cabo asegurar humedad del 50-60%.
identificacin y facilita la desorcin de los
(2010) similar a la en condiciones Incubacin durante 30 das.
cuantificacin contaminantes y aumenta la
creosota de laboratorio. Enmienda orgnica:
microbiolgica. biodisponibilidad para la
(30% fluoreno, 29% Cinco tipos de compost derivados
actividad microbiana.
fenantreno, 9% de la fraccin orgnica de los
La concentracin de PHA
antraceno, 20% residuos municipales, cuya
afecta el proceso, ya que si es
fluoranteno, 3,5% principal diferencia es el grado de
muy baja, se puede disminuir la
pireno y 8,5% estabilidad, que va desde
biodisponibilidad y por lo tanto,
57enzo- totalmente inestable a abono
disminuir la tasa de
antraceno). Esta estable.
degradacin.
mezcla se aadi
 al suelo en
concentraciones
de 0,1-2 g/kg.
Se aislaron 22 microorganismos
Aislamiento e identificacin de de importancia en procesos de
microorganismos para preparar el biorremediacin, dentro de los
Lodos aceitosos
inculo. que se encuentran bacterias
provenientes de
Biopilas construidas con una Gram positivas, Gram negativas
lavaderos de Acinetobacter sp.,
inclinacin de 15, un rea de 1 y hongos.
carros, lodos de Bacillus sp.,
m2 con un peso de 50 kg y Se lograron porcentajes de
sistemas de Micrococcus sp.,
Biopilas en polisombra para la proteccin remocin de TPH entre el
alcantarillado de Citrobacter sp.
campo con contra los rayos solares. Remojo 74,03% y 87,09% en 40 das y
Vsquez et zonas industriales Nocardia sp.,
bioaumentacin constante, volteo manual y 87,94 y 95% en 120 das con la
al., (2010) de la ciudad de Pseudomonas sp.,
y adicin de NPK los das 8,16 y 24. aplicacin de los consorcios
Bucaramanga, y Aspergillus sp.,
bioestimulacin. Grupo 1: Aplicacin de inculo los microbianos obtenidos.
lodos estabilizados Trichoderma sp.,
das 1, 10, 20 y 30. Tiempo total: 40 El uso de la bioaumentacin
del tratamiento Fusarium sp.
das. con microorganismos nativos
de aguas
Grupo 2: Aplicacin de inculo los representa una alternativa para
residuales
das 1, 30, 60 y 90. Tiempo total: reducir la contaminacin
domsticas.
120 das generada por residuos
peligrosos y recuperacin de
zonas impactadas.
Suelo recogido en
Inculo alctono:
marzo de 2008 de
Montaje de microcosmos: Delftia tsuruhatensis,
un campo
1. Suelo con inculo bacteriano. Bacillus cereus,
abandonado
2. Suelo con disel y metales Pseudomonas La introduccin de un inculo
situado en Piana
pesados. resinovorans, microbiano con capacidad
di Monte Verna
3. Suelo con disel e inculo Pseudomonas degradadora de hidrocarburos
(Npoles, Italia).
bacteriano. fluorescerens, previamente comprobada,
Se dispersaron Bioaumentacin
Sprocati et 4. Suelo con disel, metales Exiguobacterium como agente de
soluciones de Zn y a nivel de
al., 2011 pesados e inculo bacteriano. sp., Pseudomonas bioaumentacin fue capaz de
Pb como ZnSO4 laboratorio.
La bioaumentacin se realiz 3 jessenii, promover la biodegradacin
como Pb(NO3)2
das despus de la Arthrobacter sp., de hidrocarburos cerca de 75%
de manera
contaminacin, aadiendo 12mL Rhodococcus en el suelo, sin perturbar la
uniforme hasta
de medio mineral a una erythropolis, comunidad microbiana nativa.
alcanzar una
concentracin de 5108 UFC/mL. Bacillus subtilis,
concentracin
Paenibacillus
final de 1000mg
polymixa.
Zn/kg y
 500 mg Pb/kg en
la capa superior
del suelo; despus
de 15 das, se
vertieron 30g de
aceite disel
para simular una
contaminacin
accidental (1%).
Microcosmos de suelos en frascos
de 1L.
Atenuacin natural: 200g de suelo
Pila de suelo del sin modificaciones. La tasa de degradacin de HTP
Depsito de Bioaumentacin: Adicin del en todas las muestras fue
Residuos del Sur, cultivo de hongos (0,4mg/g de rpida del da 0 al da 21
Adelaida, suelo). (>50%). Sin embargo, este
Australia del Sur, Atenuacin Bioestimulacin: proceso puede ser afectado
formada por la natural, Adicin de solucin nutritiva estril negativamente por la
mezcla de suelos bioestimulacin, (25%). disminucin de la
contaminados bioaumentacin Bioestimulacin combinada con Rhodococcus sp., biodisponibilidad de HTP.
Thangarajan
con hidrocarburos y bioaumentacin: Scedosporium No se observaron diferencias
et al., (2011)
(aceites de motor, bioestimulacin Adicin de hongos y solucin apiospermum significativas en los tratamientos
lodos, residuos de combinada con nutritiva estril en las mismas luego del sptimo da, lo que
disel y petrleo bioaumentacin concentraciones. insina que la bioestimulacin y
crudo) que estuvo . Contenido de agua al 50% con la bioaumentacin tienen
sujeta a riego constante para mantener la pocos efectos a largo plazo y
atenuacin humedad. que la aireacin y el riego son
natural durante Cubrimiento con papel aluminio suficientes para la degradacin
dos aos. perforado, e incubacin a 30 C de HTP por atenuacin natural.
durante 56 das. Muestreo y
mezclado, para asegurar la
aireacin, semanal.
Suelo extrado de Bandejas con 2 kg de suelo base Enterobacter sp, Se alcanz una reduccin
los predios de la Atenuacin seca, mantenidas a temperatura Bacillus sp, significativa al final del
Universidad natural y ambiente durante 4 semanas. Staphylococcus experimento en las
Arrieta et al.,
Nacional de bioestimulacin Bioestimulacin: aureus, concentraciones de los HTP. El
(2012)
Colombia, a escala de Adicin de fsforo como Na5P3O10 Sanguibacter tratamiento de bioestimulacin
Facultad de laboratorio. y nitrgeno como rea al 46%, soli, Arthrobacter sp present un 50,99% de
Agronoma de la grado agroqumico. y Flavobacterium remocin, mientras que el
 Sede Medelln sp. tratamiento de atenuacin
(Colombia), entre natural alcanz un 36,86% de
0,25m y 1,00m de remocin respecto a la
profundidad, concentracin inicial.
contaminado
artificialmente
con disel (40.000
ppm).
Se aislaron 5 cepas bacterianas,
que por las pruebas
Caracterizacin e identificacin bioqumicas y API, se
bioqumica de bacterias identificaron como
endgenas, utilizando un medio pertenecientes a los gneros
Residuo graso mnimo mineral suplementado Pseudomonas, Enterobacter y
industrial con el Residuo Graso Industrial Bacillus.
suministrado por (RGI) para su aislamiento. El consorcio bacteriano
Bioaumentacin
una empresa Inculo bacteriano: constituido Pseudomonas, degrad el 91,4% del contenido
Gonzlez et de la flora
procesadora de por una mezcla en volmenes Enterobacter y graso del residuo; disminuyendo
al., (2012) bacteriana
cerdos, ubicada iguales de las cepas aisladas. Bacillus en un 33,6% la DBO5, y un
endgena.
en Valencia, Biotratamiento: 59,8% la DQO, en 21 das de
Estado Carabobo, Mezcla del consorcio, el residuo tratamiento.
Venezuela. graso y medio mnimo mineral en Aunque las cepas de Bacillus
relacin 5:1:5; incubacin a presentaron la mayor actividad
temperatura ambiente (20-24C) lipoltica, no existieron
durante 21 das. diferencias notables en sus
actividades enzimticas.

Atenuacin Microcosmos con 60 g de suelo. La adicin de nutrientes y

Suelos
natural, Durante 100 das se mantiene la Bacillus consorcios bacterianos no
contaminados
bioestimulacin humedad del suelo al 60% y se selenatarsenatis, muestran mejoras significativas
con aceite de
(con nutrientes airea por medio de mezcla Dietzia maris, frente a la degradacin de
corte, tomados
inorgnicos, con mecnica con una varilla de Arthrobacter hidrocarburos conseguida a
de una ex fbrica
Llad et sustrato vidrio dos veces a la semana. sulfonivorans, partir del mantenimiento de la
de tornillos en la
al.,(2012) fcilmente Luego, se somete durante 180 das Flavobacterium sp., humedad ptima y la aireacin
ciudad de
biodegradable y a los siguientes tratamientos. Streptomyces sp. constante, mientras que la
Barcelona
con 1. Tratamiento bsico: introduccin de un hongo
(Espaa), que fue
biosurfactante) Igual que los primeros 100 das. Inculo fngico: ligninoltico, si se muestra como
abandonada en
y 2. Bioestimulacin con nutrientes Trametes versicolor una estrategia eficaz de
1990.
bioaumentacin inorgnicos: adicin de NH4NO3 y remediacin, ya que logra
 (con consorcio K2HPO4 durante los primeros 30 aumentar la degradacin.
bacteriano y das para obtener una relacin El inculo fngico produce un
con inculo C:N:P equivalente a 300:10:1. aumento y cambio significativo
fngico). 3. Bioestimulacin con sustrato en la biodiversidad detectable
fcilmente biodegradable: de la comunidad bacteriana
adicin de nutrientes y glucosa al autctona ya que promueve el
2%. establecimiento de
4. Bioestimulacin con comunidades microbianas
biosurfactante: degradadoras de HTP.
Adicin de nutrientes y el Es necesario, combinar las
biosurfactante MAT10 en dos pruebas de degradacin
concentraciones diferentes. microbiana, con la evaluacin
5. Bioaumentacin con inculo de toxicidad y genotoxicidad
bacteriano: adicin de nutrientes para dar ms claridad a estos
y un consorcio bacteriano en una procesos de biorremediacin
concentracin de 108 de suelos contaminados
microorganismos/g de suelo. El industrialmente.
inculo se ha mantenido usando
disel como nica fuente de
carbono y de energa durante 10
aos.
6. Bioaumentacin con inculo
fngico:
Adicin de nutrientes y la cepa
ligninoltica Trametes versicolor.
Tierra de El residuo graso tratado con
blanqueo Biorreactor A: compostaje, sufri la
engrasada, Mezcla de 8,75 kg de tierra de biodegradacin ms rpida en
No se realizaron
obtenida del blanqueo engrasada (19%), 35 kg la fase termfila del proceso.
aislamientos ni
mayor procesador de lodos deshidratados de Las actividades de las enzimas
caracterizacin de
de oleaginosas y Compostaje en depuradora (77%) y 1,6 kg de paja fueron ms altas en la fase
Piotrowska- las comunidades
fabricante de biorreactor de de maz (4%). termfila.
Cyplik et al., de
grasas vegetales dos cmaras Biorreactor B: Como resultado del proceso de
(2013) microorganismos
en Polonia, con (125 dm3 c/u). Mezcla de 43 kg de lodos de compostaje, se elimin la
presentes durante
un contenido de depuradora (96%) y 1,6 kg de paja fitotoxicidad inicial de los
el proceso de
55% de grasas y de maz (4%). residuos tratados, por lo cual,
compostaje.
lodos de Muestreo en los das 0, 5, 14, 22, ninguno de los compost
depuradora 32, 40 y 44. maduros muestran efectos
deshidratados de fitotxicos ni mutagnicos.
 una Planta de
Tratamiento de
Residuos
Municipales de
Polonia.
El tratamiento de
bioaumentacin asistida por
Suelo obtenido de
La fitorremediacin se realiz con fitorremediacin present el
una zona urbana
alfalfa (Medicago sativa L.), las grado ms alto de eliminacin
cerca de una Atenuacin
plantas se cosecharon despus de HTP, seguido por la
estacin de natural,
de 30, 60 y 90 das del crecimiento bioaumentacin, la
combustible con fitorremediacin
en el suelo co-contaminado. fitorremediacin y la
antecedentes de ,
Agnello et La bioaumentacin con Pseudomonas atenuacin natural.
contaminacin bioaumentacin
al., (2015) Pseudomonas aeruginosa, cada aeruginosa Las asociaciones planta-
por metales y
15 das, con el objetivo de bacteria y, en particular, alfalfa
pesados e fitorremediacin
mantener un nmero elevado de - P. aeruginosa podran ser un
hidrocarburos de asistida con
microorganismos durante todo el enfoque adecuado para
petrleo, bioaumentacin
experimento. reducir el tiempo de
principalmente
degradacin, sin embargo,
disel.
deben estudiarse bajo
condiciones in vivo.
Suelo tomado de Al final del tratamiento, el
tres zonas compost present una relacin
industriales en el C/N idnea para el cultivo
estado de Ogun y agrcola.
La mezcla compost/suelo se hizo
una mina de oro El compost fue eficaz en la
en cinco relaciones diferentes No se estudiaron las
en Iperindo, Osun, Compostaje eliminacin de metales de los
(1:1, 1:2, 1:3, 1:4 y 1:5) y se comunidades
Taiwo et al., que se mezcl asistido por suelos contaminados.
plantaron las semillas de Kenaf microbianas
(2016) con un compost fitorremediacin Los parmetros de crecimiento
(Hibiscus cannabinus), con una presentes durante
orgnico maduro . de H. cannabinus (Kenaf),
duracin del experimento de el proceso.
de doce como la longitud y amplitud de
cuatro semanas.
semanas, hecho a la hoja y la altura del tallo,
partir de estircol mostraron incrementos desde la
de vaca, jacinto semana 1 a la semana 4
de agua y aserrn. despus de la siembra.
Fuente: Elaboracin propia
3.2 Aspectos claves en la biorremediacin de residuos contaminados con
grasas y lubricantes

3.2.1 Caractersticas fisicoqumicas tenidas en cuenta a nivel

experimental

A pesar de la variedad de tratamientos reportados para la biorremediacin de

residuos contaminados con grasas y lubricantes (atenuacin natural,
bioestimulacin, bioaumentacin, compostaje, landfarming, biopilas, entre otros),
existen condiciones fsico-qumicas generales que deben ser controladas en
dichos procesos, tales como la aireacin, la temperatura, el contenido de
humedad, la relacin de nutrientes y el pH (Abarrataldea, 2005; Arrieta et al.,
2012; Lee et al., 2007; Llad et al., 2012; Thangarajan et al., 2011; Vallejo et al.,
2005).

3.2.1.1 Aireacin

Generalmente, la biorremediacin aerobia de contaminantes orgnicos es ms

rpida que la biorremediacin en forma anaerobia (Izquierdo, 2013; Llad, 2012;
Thangarajan et al., 2011; Vargas et al., 2004;), ya que la aireacin facilita la
migracin de la fase voltil de los contaminantes y, siendo el oxgeno, el aceptor
final de electrones en la cadena transportadora de electrones de las clulas, se
libera una mayor cantidad de energa que estimula el crecimiento de la biomasa,
logrando un aumento en el consumo del sustrato (contaminantes
hidrocarbonados) (Gmez et al. 2008; Realp et al., 2008; Thangarajan et al., 2011).

Adems, en el metabolismo microbiano de degradacin aerbica de

hidrocarburos, el oxgeno, es un reactivo indispensable en el mecanismo de
activacin de las oxigenasas (monooxigenasas para hidrocarburos alifticos o
dioxigenasas para hidrocarburos aromticos). Como se observa en la Figura 3.3.,
los tomos de oxgeno, se incorporan directamente al contaminante para
promover la degradacin gradual de la molcula mediante rutas de oxidacin
perifricas que dan lugar al Acetil-CoA necesario para activar el ciclo de los
cidos tricarboxlicos que produce finalmente los productos estabilizados
(Izquierdo, 2013; Llad, 2012; Pardo et al., 2004; Widdel & Rabus, 2001).

De modo que es primordial la oxigenacin constante de los sistemas de

tratamiento mediante el volteo del material o empleando compresores y/o
sopladores (Agnello et al., 2015; Arrieta et al., 2012; Gonzlez et al., 2012; Lee et
al., 2007; Menndez-Vega, 2007; Menezes et al., 2003; Sprocati et al., 2011;
Thangarajan et al., 2011; Vsquez et al., 2010).
 Fuente: Izquierdo, 2013.

Figura 3.3. Ruta bsica de degradacin microbiana aerobia de los hidrocarburos.

3.2.1.2 pH

La mayora de bacterias hetertrofas se desarrollan ptimamente en pH cercanos

a la neutralidad (Pardo et al., 2004). Algunos estudios han establecido que el
rango ptimo de pH para la biodegradacin de lodos aceitosos en suelo se
encuentra entre 5,5 y 8,0 (Lee et al., 2007; Llad et al., 2012; Menndez-Vega et
al., 2007; Pardo et al., 2004; Taiwo et al., 2016; Vallejo et al, 2005), con
disminuciones notables luego de los tratamientos, debido a la transformacin de
los materiales orgnicos y procesos de nitrificacin, lo cual contribuye a que el
suelo sea ms cido (Gmez et al., 2008; Taiwo et al., 2016; Vallejo et al, 2005). En
tratamientos de compostaje, el valor ptimo inicial est entre 6,5 y 8,0, y presenta
fluctuaciones durante el proceso de acuerdo a la sucesin de microorganismos y
los subproductos que stos generan (Negro, 2000).
 3.2.1.3 Temperatura

De acuerdo a Pardo et al., (2004) la temperatura, adems de influenciar la

presencia y actividad microbiana durante los tratamientos de biodegradacin,
ejerce una gran influencia sobre la naturaleza fsica y qumica de las grasas y
aceites. Cuando la temperatura es baja, la viscosidad de los aceites aumenta
variando su solubilidad en agua y disminuyendo la volatilizacin de algunas
fracciones txicas que pueden afectar la actividad degradadora de los
microorganismos, mientras que a temperaturas muy altas, se incrementa la
toxicidad de los hidrocarburos inhibiendo la actividad microbiana. Como se
puede comprobar en los estudios realizados por Agnello et al., (2015); Arrieta et
al., (2012); Gonzlez et al., (2012); Lee et al., (2007); Llad, (2012); Piotrowska-
Cyplik et al., (2013); Taiwo et al., (2016); Thangarajan et al., (2011); Vallejo et al,
(2005) y Vsquez et al., (2010) entre otros, el rango de temperatura ms
apropiado para la biorremediacin se presenta en el rango mesoflico (20C-
40C), a la que se intensifica la actividad enzimtica de los microorganismos
acelerando al mximo los procesos de biodegradacin.

3.2.1.4 Relacin Carbono/Nitrgeno/Fsforo (C/N/P)

La disponibilidad de nitrgeno y fsforo en el medio es un factor limitante en la

degradacin microbiana de hidrocarburos, por lo cual se debe ajustar la relacin
C/N/P mediante la adicin al medio de Sales Inorgnicas Simples (SIS) o
Fertilizantes Inorgnicos Complejos (FIC) que permitan acelerar el proceso de
biodegradacin (Gmez et al., 2008; Llad et al., 2012; Pardo et al., 2004; Taiwo et
al., 2016). La relacin C/N/P ms utilizada en los procesos de bioestimulacin es
de 100/10/1, con la cual se reportan porcentajes de degradacin entre 40-50%
(Menndez-Vega et al., 2007; Menezes et al., 2003; Vallejo et al., 2005), aunque en
el estudio de Lee et al., (2007) se obtuvo una mayor actividad de degradacin
(60%) utilizando una relacin de 500/10/1.

3.2.1.5 Humedad

Debido a que los microorganismos requieren agua para cumplir con sus
necesidades fisiolgicas, la biodegradacin de hidrocarburos en ecosistemas
terrestres puede ser limitada por la cantidad de agua disponible en el medio para
su crecimiento y metabolismo(Gmez et al., 2008; Negro, 2000). Los estudios
analizados reportan que las tasas ptimas de biodegradacin se dan cuando la
saturacin de agua en el suelo se encuentra en el rango de 30% a 70% (Lee et al.,
2007; Llad, 2012; Pardo et al., 2004; Piotrowska-Cyplik et al., 2013; Thangarajan et
al., 2011; Vsquez et al., 2010).
 3.2.2 Aislamiento de microorganismos

Tal como afirman Menendez-Vega et al. (2007), antes de aplicar protocolos de

biorremediacin, es importante establecer el potencial degradador de los
microorganismos endgenos para aprovechar sus caractersticas y evaluar los
factores limitantes a controlar durante el tratamiento.

Para el aislamiento de los microorganismos con capacidad degradadora de

hidrocarburos, algunos autores proponen hacer un enriquecimiento previo en
medios de cultivo ricos en nutrientes que estimulen su crecimiento en condiciones
de laboratorio (Arrieta et al., 2012; Gonzlez et al., 2012; Menndez-Vega, 2007;
Thangarajan et al., 2011; Vsquez et al., 2010). Estos medios pueden ser caldos
mnimos minerales de composicin definida de sales (Gonzlez et al., 2012;
Narvez-Flrez et al., 2008; Vsquez et al., 2010), o medios nutritivos comerciales
como Caldo Nutritivo, formado por pluripeptona y extracto de carne; BD Tryptic
Soy Broth, medio de digerido de soja y casena, o caldo Luria Bertani LB (caldo LB)
con peptona de casena y extracto de levadura; que se suplementan con
pequeas cantidades del residuo a tratar (1% a 10%) para proporcionar al medio
los nutrientes necesarios para el desarrollo ptimo de los microorganismos
degradadores(Arrieta et al., 2012; Menndez-Vega, 2007; Thangarajan et al.,
2011). Luego de este pre-enriquecimiento, se toma una muestra y se siembra por
agotamiento en medio selectivo Bushnell Hass Sales Minerales (BHMS) que es el
recomendado para estudios de degradacin microbiana de hidrocarburos, ya
que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos, excepto la fuente de carbono que se complementa con el
residuo a analizar (Arrieta et al., 2012; Thangarajan et al., 2011), o en Agar
Cetrimide, que es especial para el aislamiento de Pseudomonas, por el gran
reconocimiento de este gnero como biodegradador (Rodrgues et al., 2015;
Sprocati et al., 2011). La temperatura de incubacin oscila entre los 24C y los
30C, pues se buscan los microorganismos con metabolismo activo en las
condiciones que se va a aplicar el tratamiento posteriormente.

3.2.3 Microorganismos relevantes

Las comunidades microbianas con capacidad enzimtica para metabolizar los

compuestos contaminantes generalmente estn conformadas por bacterias,
pero tambin algunos hongos y levaduras intervienen en el proceso (Das & Dash,
2014; Mehta et al., 2014).

Los estudios sobre la biodegradacin de suelos contaminados con aceites y

residuos grasos, demuestran que los principales gneros de bacterias que utilizan
estos contaminantes como fuente de carbono y energa, son: Acinetobacter,
Achromobacter, Bacillus, Burkholderia, Corynebacteria, Delftia, Flavobacterium,
Marinococcus, Methylobacterium, Mycobacterium, Micrococcus, Nocardia,
Planococcus, Pseudomonas, y, Rhodococcus (Agnello et al., 2015; Astashkina et
al., 2015; Llad et al., 2012; Rodrgues et al., 2015; Sprocati et al., 2011). Adems se
ha indicado que varias de estas especies poseen diferentes genes catablicos
homlogos a genes alcano-monooxigenasa que codifican enzimas que
participan en la mineralizacin de hidrocarburos, entre los que se incluyen: alcano
monooxigenasa (alkB) a partir de Pseudomonas putida; alcano monooxigenasa
(alkM) a partir de Acinetobacter sp., cepa ADP-1; alkB1, alkB2, alcano
monooxigenasa de Rhodococcus sp.; xylE, catecol-2,3-dioxigenasa de P. putida;
naftaleno dioxigenasa (ndoB) por P. putida; y nidA, pireno dioxigenasa subunidad
grande de Mycobacterium sp., cepa PYR-1; y, por lo tanto, tienen la posibilidad
de producir protenas con alcano-monooxigenasas funcionales (Das et al., 2015;
Wang et al., 2013).

Otro mecanismo que tiene incidencia directa en los procesos de

biorremediacin, es la sntesis de agentes extracelulares biotensoactivos
(glicolpidos, lipopolipptidos y complejos protena lipopolisacrido), por parte
de numerosos representantes bacterianos y fngicos tales como Pseudomonas,
Rhodococcus, Acinetobacter, Bacillus, Candida, y, Torulopsis (Petrikov et al., 2013;
Thavasi et al., 2011); ya que estas sustancias amfiflicas, es decir, que presentan
una cabeza polar hidroflica, formada por mono, oligo o polisacridos, pptidos o
protenas, y una cola apolar hidrofbica que por lo general contiene cidos
grasos o alcoholes grasos (Izquierdo, 2013), aumentan el rea superficial y la
biodisponibilidad de las sustancias hidrfobas a las clulas microbianas y facilitan
la fijacin de los microorganismos sobre el sustrato a degradar, mediante la
formacin de emulsiones (Pacwa-Ptociniczak et al., 2011). Este proceso se puede
esquematizar en tres etapas como se muestra en la Figura 3.4; la primera, es el
transporte de la micela solubilizada con el sustrato, la segunda, es el intercambio
de las molculas del surfactante (micelas) con la clula (proceso para la
degradacin) y la tercera, es la transferencia del sustrato a la clula microbiana.

Unos de los biosurfactantes ms estudiados son los ramnolpidos producidos por

Pseudomonas sp., y los trehalolpidos producidos por Mycobacterium tuberculosis,
Rhodococcus erythropolis, Arthrobacter, Nocardia, Gordonia y Corynebacterium
(Izquierdo, 2013; Jimnez et al., 2010; Souza et al., 2014).
 Fuente: Riojas et al., 2010.

Figura 3.4. Transferencia de masa de micelas a la clula bacteriana.

De acuerdo a la informacin expuesta, se puede inferir que el gnero bacteriano

Pseudomonas es de los ms relevantes y promisorios en los procesos de
biorremediacin, ya que posee mltiples vas metablicas que favorecen la
degradacin de sustancias txicas; por esta razn, se utilizar como modelo para
profundizar ms en el estudio de dichas rutas y el genoma que le confieren estas
facultades.

3.2.3.1 Pseudomonas sp.

El gnero Pseudomonas fue descrito por primera vez por Migula en 1894, basado
en caractersticas fenotpicas generales (bastones Gram negativos, aerbicos no
esporulados, flagelados) que no permitan una diferenciacin de otras bacterias
Gram negativas (Cornelis, 2008; Peix et al., 2009).

ste gnero ha tenido una gran variacin en su clasificacin taxonmica a lo

largo de los aos; en la actualidad, est clasificado en el dominio Bacteria,
phylum Proteobacteria, clase Gammaproteobacteria, orden Pseudomonadales y
familia Pseudomonaceae (Slabbinck et al., 2010) y, a pesar de que las secuencias
del gen rpoB permiten una mayor diferenciacin de especies estrechamente
relacionadas, como las del gnero Pseudomonas (Bou et al., 2011), an se
necesitan ms datos de la hibridacin DNA-DNA (DDH) y la realizacin de
extensos anlisis fenotpicos para validar los agrupamientos (Peix et al., 2009;
Slabbinck et al., 2010). En consecuencia, en marzo del 2008 se publicaron 95
especies vlidas pertenecientes al gnero, de acuerdo a la secuenciacin del
gen 16S rRNA, las cuales se pueden observar en el rbol filogentico mostrado en
la Figura 3.5 (Slabbinck et al., 2010).

Fuente: Slabbinck et al., 2010.

Figura 3.5. rbol filogentico de mxima similitud de gnero Pseudomonas basado en la

secuencia del gen 16S rRNA. El rbol filogentico se elabor mediante el algoritmo de
mxima similitud en el software RAxML y es visualizado con la herramienta de la web iTol
(Slabbinck et al., 2010.). El software RAxML es un programa para la Mxima Verosimilitud
secuencial y paralela basada en la probabilidad de grandes rboles filogenticos
(Stamatakis, A., 2014).
Los miembros del gnero Pseudomonas son bastones rectos o ligeramente
curvados con flagelos polares, de respiracin aerbica, no fermentativos12 y han
demostrado una gran ubicuidad, ya que se han aislado de todo tipo de entornos
alrededor del mundo, desde la Antrtida hasta los Trpicos en aguas, suelos,
tejidos vegetales y animales (Peix et al., 2009). Aunque algunas de sus especies
son patgenos oportunistas de plantas, animales y humanos (Stover et al., 2000),
este gnero bacteriano es de gran importancia en los procesos de tratamiento
de suelos y aguas residuales debido a su alta capacidad de biodegradacin de
muchos compuestos orgnicos (Yong et al, 2014).

La especie tipo del gnero es Pseudomonas aeruginosa, la cual fue descubierta

originalmente por Schroeter en 1872 (Slabbinck et al., 2010) y su genoma
completo (Pseudomonas aeruginosa PAO1) fue presentado desde el ao 2000
por Stover et al. Sin embargo, apenas en el 2015, Das et al., realizaron un anlisis
profundo del genoma de P. aeruginosa cepa N002, respecto a los factores
genticos asociados con la adaptacin a ambientes contaminados con
hidrocarburos. Para esto, secuenciaron el genoma de la cepa N002 de
Pseudomonas aeruginosa aislada de un suelo contaminado con petrleo de
Assam, India, obteniendo las caractersticas que se resumen en la Tabla 3.2 y la
representacin grfica del cromosoma que se observa en la Figura 3.6. En esta
figura, tambin se puede observar la clasificacin de los 5629 genes codificantes
de protenas de acuerdo a la funcin que cumplen, en la cual se le asignaron 347
genes a la categora de transduccin de seales y 74 genes a la categora de
sistema de dos componentes, aspectos de gran relevancia en la regulacin del
metabolismo celular y la adaptacin a las diferentes condiciones del entorno.

Tabla 3.2. Caractersticas generales del cromosoma de P.aeruginosa

COMPONENTE DEL CROMOSOMA CANTIDAD

Tamao total (pb) 6.537.648
Total bases codificantes DNA 5.491.038
Contenido G+C (%) 62,36
Nmero total de genes 5.764
Genes codificantes de protenas (CDS) 5.629
Genes RNA 135
Genes rRNA 12
5S rRNA 4
16S rRNA 4
23S rRNA 4
Genes tRNA 63
Nmero de ORF 11.038

12 Su metabolismo siempre es respiratorio, aunque la mayora de las especies utiliza como aceptor
final de electrones al oxgeno, algunas usan otras molculas inorgnicas (NO-).
 Fuente: Das et al., 2015.

Tambin, analizaron las regiones del cromosoma con probabilidad de poseer

genes de transferencia horizontal, conocidas como Islas Genmicas (GI), ya que
la transferencia de material gentico entre bacterias, les permite adquirir
funciones que facilitan su adaptacin a distintos entornos, entre ellas, la
capacidad de degradar sustancias txicas, la resistencia a los antibiticos y la
produccin de metabolitos secundarios, para as generar tratamientos de
biorremediacin ms eficientes (Rozo & Dussan, 2010).

Con este anlisis, Das et al. (2015), encontraron 40 Islas Genmicas que
comprenden 537 genes en total, lo cual equivale al 30,3% del cromosoma. Uno
de estos genes, corresponde al gen de la alcano 1-monooxigenasa (AlkB,
A222_02440) que se encuentra en la regin del ncleo del genoma y es
homlogo al gen AlkB de Pseudomonas putida GPo1, que es la primera enzima
involucrada en la oxidacin de hidrocarburos alifticos, y es una de las mejor
caracterizadas, por lo cual se utilizar como modelo para explicar la ruta de
degradacin.

Fuente: Das et al., 2015.

Figura 3.6. Mapa del cromosoma circular de Pseudomonas aeruginosa N002.

Como se dijo previamente, la degradacin de hidrocarburos alifticos inicia con
la monooxigenacin de la cadena hidrocarbonada, que de acuerdo a la
posicin en que se produce, da lugar a las tres rutas metablicas que se muestran
en la Figura 3.7: la oxidacin terminal, la oxidacin subterminal y la - Oxidacin,
siendo la primera la ms comn (Llad, 2012). Los productos hidroxilados
obtenidos mediante estas rutas de degradacin, son conducidos a la ruta de la -
oxidacin, en la cual se forma el Acetil-CoA necesario para activar el ciclo de los
cidos tricarboxlicos y promover la degradacin final hasta biomasa, agua y
dixido de carbono (Izquierdo, 2013; Llad, 2012; Pardo et al., 2004; Widdel &
Rabus, 2001).

Fuente: Izquierdo, 2013.

Figura 3.7. Rutas de degradacin microbiana de n-alcanos

AlkB, es una monooxigenasa integral de membrana de dihierro no hemnico, que

hidroxila alcanos en la posicin terminal y requiere dos protenas de transferencia
de electrones solubles llamadas rubredoxina (AlkG) y rubredoxina reductasa
(AlkT). Rubredoxina reductasa, a travs de su cofactor FAD, transfiere electrones
de NAD(P)H a la rubredoxina, que a su vez transfiere los electrones a AlkB, como
se muestra en la Figura 3.8 (Di Martino, 2015).
De esta forma, uno de los tomos de oxgeno, es transferido al grupo metilo
terminal del alcano, convirtindolo en alcohol, mientras que el otro es reducido a
agua por los electrones transferidos por la rubredoxina (Izquierdo, 2013). A
continuacin, la enzima alcohol deshidrogenasa produce un aldehdo que es
convertido a cido graso por accin de una aldehdo deshidrogenasa, y ste
mediante la ruta de la - oxidacin, produce las molculas de Acetil-CoA que
ingresan al metabolismo central.

Fuente: Di Martino, 2015.

Figura 3.8. Oxidacin de n-alcanos por alcano hidroxilasas pertenecientes a la familia AlkB.

En la Figura 3.9, se resaltan las enzimas producidas por Pseudomonas aeruginosa

PAO1, que participan en la - Oxidacin y en la tabla 3.3 se decodifica el nombre
de la enzima correspondiente.

Tabla 3.3. Codificacin de las enzimas producidas por Pseudomonas aeruginosa que
participan en la - Oxidacin de los cidos grasos.
CDIGO ENZIMA
1.14.15.3 Alcano 1-monooxigenasa
1.1.1.1 Alcohol deshidrogenasa
1.2.1.3 Aldehdo deshidrogenasa
6.2.1.3 Acil-CoA de cadena larga sintetasa
1.3.99 / 1.3.8.7 Acil-CoA deshidrogenasa
4.2.1.17 / 1.1.1.35 3-Hidroxiacil-CoA deshidrogenasa
2.3.1.16 Acetil-CoA aciltransferasa
1.3.8.1 Butiril-CoA deshidrogenasa
2.3.1.9 Acetil-CoA C- acetiltransferasa
1.3.8.6 Glutaril-CoA deshidrogenasa
Fuente: KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes
 Fuente: KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes

Figura 3.9. Enzimas producidas por Pseudomonas aeruginosa que participan en la

degradacin de los cidos grasos.

En el contexto de la produccin de biosurfactantes, Pseudomonas sp., tambin es

considerado un modelo por el conocimiento que se ha alcanzado sobre los
genes involucrados en la sntesis (L-ramnosil transferasa (RhlC), glicosil transferasas
(RhlB) y fosfomanomutasa (AlgC)) y regulacin de ramnolpidos (MvfR y PtxR,
como reguladores transcripcionales y AlgR como regulador de respuesta) en
P.aeruginosa (Das et al., 2015), as como los anlisis del transcriptoma que indican
que el control de la produccin de biosurfactantes se asocia con el control de
otros procesos celulares (Okkotsu et al., 2014) ya que, la va metablica que
interviene en la biosntesis de los ramnolpidos est estrechamente ligada a la ruta
de biosntesis de cidos grasos y est relacionada con molculas que contienen
L-ramnosa o sus precursores, tales como el alginato, tal como se observa en la
Figura 3.10 (Jimnez et al., 2010). Por otro lado, Jirku et al. (2015), asociaron los
pasos finales de un modelo de biosntesis de ramnolpidos con la funcin de tres
enzimas (RhlA, RhlB, RhlC), que catalizan la dimerizacin de dos cadenas de
cido -hidroxidecanoico (RhlA) y dos reacciones de ramnosilacin secuencial,
primero produciendo mono-ramnolpidos (RhlB) y luego di-ramnolpidos (RhlC).

Fuente: Okkotsu et al., 2014.

Figura 3.10. Representacin esquemtica del reguln AlgR de P. aeruginosa. AlgR

fosforilada (AlgR-P), activa la expresin del opern fimU-pilVWXY1Y2, as como modula la
expresin de rhlA (bosntesis de ramnolpidos), pero reprime a rhlI. AlgR no fosforilada
(AlgR), activa la expresin de los genes de biosntesis de alginato.
Entre las investigaciones realizadas sobre los sustratos utilizados por Pseudomonas
en la produccin de tensoactivos, Jimnez et al., (2010) reportaron que la
produccin de ramnolpidos es estimulada por diferentes tipos de sustratos
insolubles, los cuales van desde hidrocarburos alifticos y aromticos hasta
aceites de origen vegetal; Thavasi et al., (2011) demostraron que P. aeruginosa
tena la mxima adhesin celular con petrleo crudo (95,3%), en un tratamiento
de biorremediacin en microcosmos, degradando por completo las fracciones
de C12 y C21, seguido por Corynebacterium kutscheri (49,7%), y Bacillus
megaterium (40,2%) y Petrikov et al., (2013) demostraron que el hexadecano fue
el sustrato que ms promovi la produccin de glicolpidos. Por ltimo, Jirk et al.
(2015), sugirieron que las bacterias que no pertenecen a los gneros
Pseudomonas sp., o Burkholderia sp y que producen ramnolpidos, han adquirido
esta capacidad a travs de la transferencia horizontal de genes, ya que entre los
genomas secuenciados se encuentran pocos genes ortlogos a Rhl. Esta
disposicin a la transferencia es una oportunidad para la insercin cromosmica
dirigida (mediante transposones) de genes RhlA/B en cepas no productoras y con
lo cual se pueden empezar a superar las limitaciones en el volmen de
produccin de los biosurfactantes (Souza et al., 2014).

3.2.4 Evaluacin de la degradacin microbiana

Debido a su relacin con procesos de gran importancia en el suelo, se han

utilizado mtodos biolgicos como biomarcadores, es decir, indicadores de la
calidad del suelo, especialmente cuando ha sido sometido a contaminacin con
hidrocarburos del petrleo y se desea realizar el monitoreo y evaluacin de la
recuperacin (Henrquez et al., 2014; Lee et al., 2007). Entre estos mtodos se
encuentran:

3.2.4.1 Actividad deshidrogenasa

La actividad de la deshidrogenasa indica la tasa de oxidacin de la materia

orgnica y como depende de los procesos microbianos que ocurren en el suelo
es tambin considerada un indicador de la actividad microbiana (Lee et al.,
2007). El mtodo est basado en la suposicin de que en ausencia de O2 el
cloruro de 2, 3, 5-trifenil tetrazolium (TTC) acta cuantitativamente como el
aceptor terminal de H para el sistema dehidrogenasa con la formacin del rojo
de trifenil tetrazolium formazan (TPF), tal como se describe en la Ecuacin 3.1.

Ecuacin 3.1.

+ 2 + + 2 +
La actividad deshidrogenasa se expresa como M TPF. 1 . 1. (Piotrowska-Cyplik
et al., 2013).

3.2.4.2 Respirometra

La respirometra es una tcnica basada en la medicin del consumo de oxgeno

por parte de microorganismos que trabajan sobre un sustrato orgnico, el cual es
degradado y oxidado a CO2. Este mtodo es til para evaluar la biodegradacin
de sustancias qumicas especficas, la tratabilidad de residuos orgnicos
industriales, el efecto de cantidades conocidas de compuestos txicos en la
reaccin de consumo de oxgeno en una muestra de agua residual o de
sustancias qumicas orgnicas, entre otros. Cuando se evala la mineralizacin de
hidrocarburos en el suelo, el xito del proceso se interpreta con un aumento inicial
en la respiracin del suelo (Ahumada & Gmez, 2009; Lee et al., 2007).

3.2.4.3 Actividad lipoltica

Las lipasas (triacilglicerol hidrolasa EC 3.1.1.3) son enzimas extracelulares

inducibles, es decir que se expresan nicamente cuando el sustrato se encuentra
presente y la clula las requiere para poder utilizar dicho sustrato; estas enzimas
catalizan la hidrlisis de los triglicridos en cidos grasos libres y glicerol (Castiglioni
& Costa, 2015). Ya que los hidrocarburos pueden considerarse lpidos simples y
durante su catabolismo generan cidos grasos, la actividad de las lipasas es una
herramienta til para monitorear la biodegradacin de los derivados del petrleo,
sin embargo, no se puede tomar como nico indicador de la biorremediacin, ya
que algunos microorganismos como Bacillus sp, degradan hidrocarburos pero no
expresan la enzima (Cervantes et al., 2013).

La actividad de las lipasas bacterianas se puede determinar mediante diversos

mtodos como exponen Hasan et al. (2009), pero los ms reportados en la
literatura son la titulacin potenciomtrica de los cidos grasos liberados cuando
se usa una suspensin aceite de oliva como substrato, o por colorimetra, que
evala la hidrlisis de para-nitrofenil fosfato (p-NPP) y define la actividad lipasa
como la cantidad de enzima que libera 1,0 mol de nitrofenol por hidrlisis de p-
NPP por minuto bajo condiciones estndar (pH 8,0, temperatura 30 C y 400 nm)
(Gonzlez et al., 2012; Jiang et al., 2015).

Como se puede observar, la implementacin de un sistema de biorremediacin

debe corresponder a un conocimiento holstico de todo el proceso, partiendo de
las condiciones fsico-qumicas y microbiolgicas del material a biorremediar,
pasando por un estudio profundo de la ecologa, genoma, rutas metablicas de
los microorganismos, hasta el seguimiento y evaluacin continua de los procesos.
 4 ASPECTOS TECNOLGICOS DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL PARA
TRATAMIENTO POR BIORREMEDIACIN DE RESIDUOS ORGNICOS
CONTAMINADOS CON GRASAS Y LUBRICANTES

Debido a la importancia que la industria metalmecnica tiene sobre la economa

de la ciudad de Manizales, y el impacto ambiental que genera por la diversidad
de residuos que produce, algunos de ellos peligrosos; a lo largo de esta revisin
del estado del arte, se ha analizado la biorremediacin como una alternativa
interesante para el tratamiento de residuos contaminados con hidrocarburos. Es
as como se revisaron los avances realizados en la biodegradacin de sustratos
slidos contaminados con hidrocarburos, los aspectos que influyen en la
biodisponibilidad de los contaminantes, la bsqueda, identificacin, aumento y/o
estimulacin de la cantidad de microorganismos degradadores, la comprensin
del metabolismo que les confiere dichas capacidades y los mtodos de
seguimiento y evaluacin de la eficacia del proceso, aplicando conceptos de
bioqumica y microbiologa industrial.

Con el fin de brindar un anlisis ms completo que pueda guiar futuras

investigaciones sobre el tema y para cerrar las brechas entre los conocimientos
adquiridos en la academia y su aplicacin, dando solucin a los problemas de la
cotidianidad, es necesario proponer un protocolo para la implementacin a nivel
industrial de un tratamiento de biorremediacin sobre efluentes contaminados
con grasas y lubricantes, que en este caso se han dirigido a la industria
metalmecnica, pero que puede ser utilizado como base de investigacin en
residuos anlogos de cualquier tipo de industria. Es de resaltar, que sta
propuesta estar soportada por algunas pruebas y resultados experimentales que
se realizaron durante un ejercicio de investigacin complementario con el fin de
adquirir mayor conocimiento de los procesos.

4.1 Metodologa para la aplicacin a nivel industrial

Como se indic anteriormente, en la Figura 1.2., se puede observar el diagrama

de flujo para aplicar un proceso de biorremediacin sobre residuos slidos
contaminados con grasas y lubricantes. A continuacin se detallarn los
procedimientos necesarios para llevar a cabo cada una de estas etapas.

4.1.1 Sitio de muestreo y recoleccin de muestras

Luego de un anlisis de los diferentes residuos producidos por las empresas

metalmecnicas, de los volmenes de produccin, los costos de disposicin final
y el impacto ambiental generado, se prioriza la zona y el tipo de residuo a tratar,
del cual se recolectan las muestras. Si es necesario, se almacenan en
refrigeracin a 4C hasta su tratamiento.

4.1.2 Composicin de los residuos industriales

La velocidad de la degradacin microbiana de sustancias contaminantes, se ve

afectada por los parmetros fisicoqumicos del sustrato, tales como la presencia
de nutrientes, la temperatura, pH, contenido de sales, tamao de partculas,
humedad y porosidad, entre otros, ya que estos influyen en la biodisponibilidad
de los contaminantes para la accin microbiana (Arrieta et al., 2012). Por esto, se
debe realizar la caracterizacin fisicoqumica del material a tratar previo a
cualquier tratamiento, para poder garantizar las condiciones mnimas de
supervivencia de los microorganismos.

4.1.3 Aislamiento y purificacin de bacterias degradadoras de

hidrocarburos

Segn Arrieta et al., (2012), el conocimiento de la diversidad microbiana del suelo

es de gran importancia para determinar qu poblaciones pueden estar
implicadas en la degradacin de hidrocarburos, ya que stos microorganismos
nativos estn adaptados a las variables ambientales y fisicoqumicas del material
a tratar y producen enzimas extracelulares que les permite ser viables durante
ms tiempo y aumentar la velocidad de transformacin de los contaminantes en
sustancias ms inocuas y asimilables (Gonzlez et al., 2012; Rodrgues et al., 2015).

Para el aislamiento, se recomienda someter las muestras a un pre-

enriquecimiento, adicionando 100 g de cada una de stas a 250 mL de caldo
bsico de sales (CBS) a 32C, en agitacin constante a una velocidad de 140
rpm, durante un perodo de siete das (Narvez- Flrez et al., 2008; Vsquez et al.,
2010). Al finalizar el pre-enriquecimiento, se toma un inculo y se hacen diluciones
seriadas hasta 10-6 en agua peptonada con dos gotas de Tween 80, realizando
siembra por superficie de las tres ltimas diluciones en placas de Agar Cetrimide,
para aislamiento de Pseudomonas; Agar Tributirina, para identificacin de
microorganismos lipolticos; y/o en medio selectivo de Sales Minerales Bushnell
Hass (BHMS), utilizado en estudios de degradacin microbiana de hidrocarburos,
ya que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos, excepto la fuente de carbono que se complementa con la
muestra a analizar (HiMedia Labs, 2015). Estas placas deben incubarse a 30C
durante 72 horas.
Luego del aislamiento, se purifican las colonias obtenidas por repiques individuales
en placas del agar elegido y se incuban bajo las condiciones previamente
establecidas.

4.1.4 Caracterizacin e identificacin microbiana

4.1.4.1 Caracterizacin fenotpica

La caracterizacin morfolgica de una bacteria depende de su factibilidad de

cultivo, y se basa en las caractersticas observables a nivel macroscpico
formando colonias, o a nivel microscpico, por la estructura celular. Las pruebas
bioqumicas permiten complementar la caracterizacin morfolgica, dando
informacin sobre el metabolismo del microorganismo (Bou et al., 2011).

Para tener una descripcin ms detallada de las caractersticas fenotpicas de los

microorganismos degradadores de hidrocarburos, se recomienda realizar adems
la Tincin Azul de Nilo, que es un anlisis cualitativo de la acumulacin de PHA
(Rodrgues et al., 2015) y pruebas bioqumicas rpidas como la batera de pruebas
API 20NE.

4.1.4.2 Caracterizacin genotpica

Las dificultades en el cultivo de algunos microorganismos, la ausencia de

concordancia entre las caractersticas morfolgicas del aislamiento en estudio y
las correspondientes a las cepas de la especie tipo, hacen que los mtodos
genotpicos de identificacin bacteriana sean considerados como
procedimientos complementarios o alternativos a la caracterizacin fenotpica
(Bou et al., 2011; Fernndez et al., 2010).

Para los estudios taxonmicos o de filogenia bacteriana, se puede utilizar una

amplia variedad de genes como dianas moleculares, como el ARNr 16S, ARNr 16S-
23S, ARNr 23S, rpoB (subunidad de la ARN polimerasa) y gyrB (subunidad de la
ADN girasa), entre los cuales el primero es el ms utilizado (Bou et al., 2011).

Segn Rodrigues et al., (2015) la identificacin genmica incluye las etapas

relacionadas en la Figura 4.1.
 Fuente: elaboracin propia.

Extraccin de ADN genmico

Se realiza con un kit comercial

Amplificacin

Amplificacin del gen 16S rRNA por PCR Electroforesis en gel de agarosa al 0,8%.

Secuenciacin parcial del gen 16S rRNA

Anlisis de la secuencia
Comparacin con otras
Correccin de errores Trazado del rbol filogentico
secuencias

Figura 4.1. Etapas de la identificacin genotpica.

4.1.5 Tolerancia y degradabilidad de grasas

Luego del aislamiento y la caracterizacin microbiolgica, es indispensable

realizar pruebas de biofactibilidad para determinar las concentraciones y tipos de
contaminantes sobre los cuales pueden sobrevivir los microorganismos
seleccionados, y los estudios de biodegradabilidad para cuantificar el porcentaje
de remocin de hidrocarburos a nivel de laboratorio, con el objetivo de predecir
el tiempo que tomar la biodegradacin en campo (Arrieta et al., 2012).

La tolerancia y degradabilidad de los microorganismos endgenos sobre los

residuos grasos y diferentes hidrocarburos, se determina mediante el empleo del
caldo de sales Bushnell Hass o caldo nutritivo, suplementado con el hidrocarburo
a evaluar en diferentes concentraciones para estimar la concentracin mxima
del contaminante que es soportada por el microorganismo. Los cultivos se deben
incubar a 30C y realizar evaluaciones de turbidez durante 21 das (Narvez et al.,
2008). A las muestran que tengan crecimiento, se les evala el contenido de
cidos grasos.

La variable respuesta de la degradabilidad de los microorganismos

seleccionados, es el contenido de cidos grasos en las diferentes
concentraciones evaluadas a travs del tiempo de contacto y las diferentes
evaluaciones de actividad microbiana expuestas en el captulo 3.

4.1.6 Alternativas de aplicacin industrial

Por las caractersticas del residuo evaluado, la opcin ms comn de tratamiento

que es posible proponer, es el compostaje; sin embargo, para tener un panorama
ms general y controlado del proceso, esta tecnologa se puede encarar como
un sistema de Fermentacin en Estado Slido, en la cual se apliquen variables de
diseo que sean susceptibles a la optimizacin. A continuacin se exponen los
fundamentos tericos de ambas tecnologas.

4.1.6.1 Compostaje

De acuerdo a la informacin previa relacionada en el apartado 2.3.2, sobre la

tecnologa del compostaje, sta alternativa se tiene en cuenta con el fin de
obtener un lodo estabilizado sin contaminantes hidrocarbonados, que puede
disponerse como residuo ordinario por su composicin inocua para el medio
ambiente.

4.1.6.2 Fermentacin en estado slido (SSF)

La fermentacin en estado slido (SSF, por sus siglas en ingls) es un proceso

biotecnolgico para el cultivo de microorganismos en sistemas heterogneos de
tres fases, que comprende un sustrato slido de baja humedad (la suficiente para
apoyar el crecimiento y la actividad metablica del microorganismo) y una fase
gaseosa determinada por la porosidad de las partculas (Bck et al., 2015;
Robinson et al., 2002).

Las principales aplicaciones de la tecnologa SSF son la produccin de sustancias

de valor agregado, tales como alimentos fermentados, combustibles, enzimas y
otros metabolitos secundarios como cidos orgnicos, antibiticos,
biosurfactantes y compuestos aromticos (Durand, 2003; Robinson et al., 2002;
van de Lagemaat & Pyle, 2001). En los ltimos aos tambin ha tenido un gran
desarrollo en las reas de biorremediacin y biodegradacin de compuestos
peligrosos, la produccin de compost y el enriquecimiento nutricional de alimento
animal a partir de residuos slidos (Behera & Ray, 2015; Bck et al., 2015; Thomas et
al., 2013). Una de las principales ventajas de la SSF es la posibilidad de utilizar
subproductos y residuos agroindustriales como sustratos (fuente de carbono) con
el fin de generar productos de alto valor aadido (Bck et al., 2015), resolviendo
el problema de la eliminacin de dichos residuos, que de otro modo causaran
contaminacin; reflejndose en la viabilidad econmica y la ecosostenibilidad
de esta tecnologa (Thomas et al., 2013), adems de mostrar altos rendimientos en
cortos perodos de tiempo (Robinson et al., 2002).

Autores como Behera & Ray (2015); Bck et al., (2015); Durand (2003); Farinas
(2013) y Thomas et al., (2013); afirman que durante la ltima dcada ha habido
una mejora sustancial en la comprensin fundamental de los aspectos de
ingeniera bioqumica, al considerar las relaciones que existen entre la fisiologa de
los microorganismos y los factores fisicoqumicos del proceso, lo que permite
hacer una seleccin de microorganismos orientada al sustrato, la optimizacin de
los parmetros biolgicos y fisicoqumicos y la purificacin de los productos
deseados. No obstante, el escalado de los procesos de SSF ha sido un desafo por
la naturaleza heterognea de los sustratos, ya que, al ser generalmente residuos
agroindustriales, presentan diversas composiciones, tamaos de partcula,
resistencia mecnica, porosidad y capacidad de retencin de agua, lo que
afecta los parmetros de diseo, el modelamiento matemtico, la cintica y, el
control de la transferencia de oxgeno y la temperatura, razn por la cual se han
desarrollado varios diseos para los biorreactores SSF (Thomas et al., 2013), que se
clasifican ya sea por la escala en que operan o por las caractersticas de
aireacin y mezclado.

Durand (2003), realiz una clasificacin de acuerdo a la cantidad de material

seco a utilizar, en: biorreactores de escala de laboratorio, los cuales incluyen
cajas Petri, frascos de boca ancha, Erlenmeyer, y otros diseos ms o menos
sofisticados; y, biorreactores a nivel piloto y a escala industrial, donde se utilizan
desde varios kilogramos hasta toneladas del sustrato con diseos mucho menos
variados, debido a las restricciones en la transferencia de masa y calor, la
aireacin, las caractersticas fisiolgicas del microorganismo y a las necesidades
de manipulacin y mantenimiento. A este tipo de biorreactores, los clasific en
cuatro grupos, basado en la forma en que se mezclan y airean, de una forma
muy similar a la que cita Santis (2013):

Grupo I (Biorreactores sin agitacin forzada): son los ms antiguos y

sencillos, tambin conocidos como reactores tipo bandeja, donde el lecho
es esttico, de una altura mxima de 15 cm y al aire circula a su alrededor,
como se observa en la Figura 4.2. Esta tecnologa requiere de grandes
reas (salas de incubacin) y mano de obra intensiva.
 Fuente: Durand, 2003.

Figura 4.2. Reactor de bandejas

Grupo II (Biorreactores sin mezcla con agitacin forzada): tambin

conocidos como reactores de lecho empacado, donde el lecho es
esttico y se hace pasar aire forzadamente a travs de un tamiz que acta
como soporte del sustrato, tal como se observa en la Figura 4.3. El dimetro
del reactor y la altura de la capa de sustrato son alrededor de 40 cm, por
lo que son tiles para predecir el comportamiento en volmenes mayores.
Aunque no existe agitacin mecnica dentro de estos reactores, el medio
se puede agitar manualmente.
 Fuente: Durand, 2003.

Figura 4.3. Biorreactor de lecho empacado.

Grupo III (Biorreactores de mezcla continua con circulacin de aire): Esta

categora es esencialmente un tambor giratorio continuo que maximiza la
exposicin de las partculas del sustrato, al aire que circula libremente
alrededor del lecho, como se observa en la Figura 4.4.

Fuente: Durand, 2003.

Figura 4.4. Tambor giratorio discontinuo.

 Grupo IV (Biorreactores de lecho empacado con mezcla intermitente y
aireacin forzada): En general, estos biorreactores pueden ser descritos
como lechos a travs de los cuales se hace pasar el aire y se agitan
peridicamente mediante un dispositivo mecnico, como se observa en la
Figura 4.5. El diseo de estos reactores, cuya capacidad vara desde unos
pocos kilogramos a varias toneladas, est influenciado por la necesidad o
no de operar en condiciones estriles. A este grupo pertenecen los
biorreactores de lecho gas-slido fluidizado, el tambor basculante y
biorreactores aireado-agitados.

Fuente: Durand, 2003.

Figura 4.5. Esquema de un biorreactor de lecho empacado con mezcla intermitente y

aireacin forzada.

4.1.6.3 Produccin, extraccin y purificacin de lipasas por FSS

Al analizar la fermentacin en estado slido como una opcin ms controlada

para la biodegradacin de residuos contaminados con grasas y aceites
lubricantes, y con el fin de dar cumplimiento al objetivo general de esta revisin
con una visin ms amplia, surge la idea de integrar la ingeniera de bioprocesos
a la disciplina microbiolgica para aprovechar los residuos de la industria
metalmecnica para la produccin de enzimas lipolticas, a la par que se logra la
estabilizacin de los lodos generados por tal industria, minimizando la
contaminacin ambiental.

Las lipasas o enzimas lipolticas son producidas por una gran variedad de
microorganismos que incluyen mohos, levaduras y bacterias (Castiglioni & Costa,
2015; Hasan et al., 2009), los cuales proliferan y se pueden aislar de aguas
residuales y efluentes contaminados con grasas como los de la industria
metalmecnica (Hasan et al., 2009). Varios estudios han utilizado residuos
agroindustriales como sustratos para la produccin de lipasas por fermentacin
en estado slido, entre los que se encuentran la utilizacin de tortas de semillas de
Jatropha curcas (Joshi & Khare, 2013); torta de cacahuete, de salvado de arroz,
salvado de trigo, torta de neem, y tarta de coco (Neethu et al., 2015) y residuos
de la industria de produccin y refinado de aceites vegetales (Santis, 2013).

Luego de la fermentacin, la extraccin y purificacin de las enzimas obtenidas

son pasos determinantes en la valorizacin de residuos. Las tcnicas y
procedimientos para realizar estas operaciones, han sido estandarizadas por
varios autores como describen Hasan et al., (2009); Joshi & Khare, (2013); Neethu
et al., (2015) y Santis (2013), entre otros. En general, para la extraccin, se realizan
mezclas del sustrato fermentado con una solucin tampn seguida de agitacin y
una posterior centrifugacin de la suspensin, siendo el sobrenadante el extracto
enzimtico crudo; mientras que la purificacin se realiza por mtodos de
concentracin como la ultrafiltracin, seguida de cromatografa de filtracin en
gel y liofilizacin utilizada por Joshi & Khare (2013), o la concentracin por
precipitacin con acetona fra, seguida de centrifugacin y posterior aplicacin
en columna de intercambio aninico realizada por Neethu et al., (2015).

4.1.7 Seleccin del proceso e identificacin de las variables de diseo

Ya que la fermentacin en estado slido se puede realizar bajo condiciones

controladas y reproducibles, adems de que permite obtener productos de
mayor valor agregado que el compostaje, se selecciona como la alternativa de
tratamiento ms promisoria para los residuos evaluados.

Para establecer un sistema de tratamiento por medio de fermentacin en estado

slido, se deben tener en cuenta algunos criterios bsicos para el diseo del
biorreactor, como los que exponen Ruz et al., (2007):

rea de contacto suficiente entre las fases bitica y abitica del sistema,
es decir, con un sistema adecuado de aireacin y agitacin para cubrir las
necesidades metablicas de los microorganismos.
Consumo mnimo posible de energa.
Entradas para la adicin de nutrientes y el control de pH.
Control de transferencia de calor y estabilizacin de temperatura, ya que
el crecimiento microbiano es generalmente exotrmico.
Suministro de oxgeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.
 4.1.8 Diseo, anlisis de sensibilidad y optimizacin de variables

La optimizacin es una herramienta de la ingeniera que permite enfrentar

problemas como el costo de la energa, las regulaciones ambientales cada vez
ms estrictas, y la competencia global en el precio y calidad del producto
(Himmelblau, 2001).

En los procesos biotecnolgicos, la optimizacin se enfoca en tres aspectos:

optimizacin de sustratos, optimizacin de microorganismos y optimizacin de
procesos. Ya que el sustrato analizado en esta revisin es un residuo de
composicin definida y los microorganismos a utilizar son autctonos del material,
es decir estn adaptados a las condiciones del sustrato, en esta revisin, se
apunta a la optimizacin del proceso, con la cual se busca definir las mejores
condiciones para el tratamiento, que repercutan en disminucin de gastos
energticos, cumplimiento de la normativa ambiental, reduccin de costos de
operacin, mayor eficiencia y aumento de la rentabilidad.

Para optimizar un proceso qumico, es fundamental sintetizarlo en un diagrama de

flujo, analizando los pasos individuales de transformacin y las interconexiones
que entre ellos se presentan para lograr la transformacin global requerida (Smith,
2005). El diagrama de flujo para el tratamiento por fermentacin en estado slido
que se propone en este trabajo se muestra en la Figura 4.6.

Luego de definir este diagrama de flujo, es posible llevar a cabo la simulacin del
proceso con la cual se pretende predecir el comportamiento del proceso a nivel
experimental y as poder reducir costos de investigacin y desarrollo.

Fuente: elaboracin propia.

Figura 4.6. Diagrama de flujo para el tratamiento por fermentacin en estado slido.
La simulacin depende del modelo matemtico y de un software, que puede ser
comercial como ASPEN y SuperPro Designer o un lenguaje de programacin
como MATLAB. Luego de la generacin del modelo matemtico que para un
proceso biotecnolgico, depende directamente de la cintica del
microorganismo, se puede evaluar el rendimiento del diseo, mediante la
manipulacin y cuantificacin de variables como la concentracin de los
microorganismos, el tiempo de retencin, las necesidades de transferencia de
calor, las inhibiciones por sustrato o por producto, entre otras (Smith, 2005).

4.1.9 Seguimiento del proceso en escala piloto

Luego de la optimizacin de variables por medio de la simulacin y de ejercicios

experimentales a nivel de laboratorio, se procede a llevar el proceso a nivel piloto
o a escala industrial para evaluar el desempeo real del tratamiento.

4.1.10 Caracterizacin de productos y evaluacin econmica

Con la simulacin, tambin es posible evaluar el rendimiento del proceso

diseado. Esta evaluacin, puede realizarse desde la sostenibilidad ambiental,
que busca la eficiencia en la utilizacin de materias primas y la minimizacin en la
generacin de residuos y uso de energa y otros recursos naturales; aunque, segn
Smith (2005), el primer criterio de evaluacin es el econmico.

Con la estimacin cualitativa y cuantitativa de los productos a obtener en la

fermentacin en estado slido a nivel piloto o nivel industrial, es posible realizar la
evaluacin econmica para determinar si el proceso es factible, y permite
efectuar una proyeccin econmica de la inversin que debe hacerse para
implementar la tecnologa de biorremediacin y cunto tiempo es necesario
para recuperar dicha inversin.

4.2 Caso de estudio: biodegradacin por compostaje de un residuo slido

contaminado con grasas y aceites de una empresa metalmecnica
de la ciudad de Manizales

A continuacin se exponen y discuten los resultados obtenidos durante un

ejercicio de investigacin complementario que se ejecut con el fin de
ejemplificar la informacin terica suministrada, mediante la realizacin de
algunas de las pruebas sugeridas en la metodologa propuesta para la
implementacin de un sistema de biorremediacin a nivel industrial.
 4.2.1 Sitio de muestreo y recoleccin de muestras

Se eligi una mezcla de slidos orgnicos provenientes de la zona de pulido de

herramientas agrcolas de una empresa metalmecnica ubicada en la ciudad de
Manizales, Caldas, Colombia a una altura de 2150 m.s.n.m. y una temperatura
promedio de 18C (Alcalda de Manizales, 2015).

Las muestras fueron recogidas aleatoriamente en bolsas Ziploc de 500 g de las

canecas donde se almacena el residuo y/o de la zona de generacin
directamente.

4.2.2 Caracterizacin fisicoqumica de los residuos industriales

En el caso del residuo de pulido, que se observa en la Figura 4.7, se cuenta con
una muestra slida pastosa, producto de la mezcla de aserrn, fique, grasa animal
y residuos de aceite mineral, que segn el anlisis Soxhlet tiene una composicin
de grasa de 43,69% en base seca (Universidad Nacional de Colombia, 2014), y,
segn el Laboratorio de Nutricin Animal y Vegetal de la Universidad de Caldas,
contiene 0,47% de nitrgeno total, 5,82% de humedad y 94,18% de materia seca,
de la cual el 44,35% corresponde a cenizas totales y el 55,65% a materia orgnica
(Universidad de Caldas, 2015).

Fuente propia.

Figura 4.7. Residuo slido de pulido contaminado con grasa animal y aceite lubricante
mineral.
 4.2.3 Aislamiento y purificacin de bacterias degradadoras de
hidrocarburos

Se tomaron 10 g de muestra y se aadieron a 90 mL de peptona (Dilucin 10 -1). Se

llev la mezcla a agitacin durante 24 horas a 24C.Luego se hicieron diluciones
seriadas de la muestra hasta 1X10-6 en agua peptonada con dos gotas de Tween
80, y se sembraron por superficie las tres ltimas diluciones en placas de Agar
Tributirina + glicerol y Agar Nutritivo, para identificacin de microorganismos
lipolticos. Cada una de las diluciones se sembr por duplicado y se incubaron a
30C durante 72 horas. En la Figura 4.8, se observa la dilucin 10-6 en agar
tributirina del residuo slido graso, luego de la incubacin.

Al obtener las colonias distribuidas en la caja, se pudieron diferenciar

macroscpicamente dos clases de colonias predominantes, que fueron
repicadas individualmente a cajas con Agar Nutritivo (por duplicado), realizando
siembra por agotamiento para obtener colonias aisladas totalmente y proceder a
su caracterizacin fenotpica.

Fuente propia

Figura 4.8. Dilucin 1x10-6 en Agar Tributirina de la muestra de residuo slido graso.

4.2.4 Caracterizacin fenotpica microbiana

La caracterizacin morfolgica se realiza con base en los criterios del Manual

Bergey, analizando colonias obtenidas en medio Nutritivo luego de una
incubacin a 30C durante 48 h. Para el residuo slido graso, se obtuvieron dos
colonias morfolgicamente diferentes, cuyas caractersticas se resumen en la
Tabla 4.1.
Tabla 4.1. Caracterizacin fenotpica de las colonias obtenidas del residuo slido graso.

CARACTERSTICAS MACROSCPICAS

MICROORGANISMO

C1 C2
COLOR Blanco Crema
ASPECTO Opaco Opaco
TEXTURA Cremosa Cremosa
SUPERFICIE Lisa superficial Lisa superficial
ELEVACIN Plana Plana
BORDE Entero con formacin de halo Entero con formacin de halo
FORMA Circular Circular
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS

TINCIN DE GRAM

100X 100X

Cocos Gram positivos Cocos Gram positivos

Fuente: elaboracin propia.

4.2.5 Alternativa de aplicacin industrial: Compostaje

Como ejercicio experimental, el 2 de febrero de 2.015, se realiz una prueba

piloto con una pila de compostaje de 500 kg del residuo graso, aplicndole un
inculo comercial con capacidad biodegradadora comprobada previamente,
en una concentracin de 2%. Se realiz volteo dos veces por semana, para
asegurar la aireacin y se hizo seguimiento de la temperatura al interior de la pila,
como variable indicadora de las fases del compostaje durante 95 das. Los
resultados de este proceso se muestran en la Tabla 4.2 y la Figura 4.9.
Tabla 4.2. Registro de temperatura para las pilas de residuo graso

FECHA T. PILA (C) FECHA T. PILA (C)

02/02/15 21 20/03/15 32
06/02/15 35 24/03/15 38
10/02/15 42 27/03/15 36
13/02/15 44 31/03/15 38
17/02/15 59 07/04/15 34
20/02/15 60 14/04/15 38
24/02/15 50 17/04/15 40
03/03/15 44 21/04/15 34
06/03/15 40 05/05/15 38
10/03/15 44 08/05/15 40
17/03/15 36
Fuente: elaboracin propia.

65
60

55
Temperatura (C)

50

45
40

35

30

25
20
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tiempo de proceso (das)

Figura 4.9. Temperatura mostrada durante el compostaje para la pila evaluada.

Luego de los tres meses de seguimiento, se realiz un anlisis Soxleth para evaluar
el contenido de grasa de la pila, obtenindose una reduccin al 33,17%.
 4.2.6 Discusin de resultados

4.2.6.1 Caracterizacin fisicoqumica

Segn Prez, (2009) un aceite mineral habitual est compuesto por cerca del 75%
de hidrocarburos parafnicos y, Bailey, (1984) afirma que la grasa de cerdo tiene
una composicin aproximada de 38,6% de cidos grasos saturados, 54,4% de
cidos monoinsaturados, como el cido oleico y 7% de cidos poliinsaturados
como el cido linoleico. De acuerdo al 43,69% de contenido de grasa13 obtenido
en la caracterizacin fisicoqumica, se puede deducir que los hidrocarburos
parafnicos y cidos grasos mencionados actan como fuente de carbono
durante el proceso de biorremediacin.

Por otro lado, el bajo porcentaje de nitrgeno (0,47%), sugiere que ste y otros
nutrientes, deben ser aadidos de forma suplementaria durante el tratamiento
para permitir el adecuado metabolismo de los microorganismos.

4.2.6.2 Aislamiento y purificacin de bacterias

Del aislamiento realizado en placas para identificacin de microorganismos

lipolticos, se obtuvieron colonias con diferencias macroscpicas, de las cuales
dos fueron predominantes y mostraron el halo lipoltico esperado. Este resultado,
demuestra que efectivamente, el residuo estudiado posee flora bacteriana
autctona con la capacidad metablica que la hace promisoria para su
aplicacin en procesos de biorremediacin, de manera similar al trabajo
conducido por Vsquez et al., (2010).

4.2.6.3 Caracterizacin fenotpica

Se obtuvieron dos colonias levemente diferentes a nivel macroscpico por su

tamao y coloracin. Con la tincin de Gram, se determin que ambas son Gram
positivas y por la forma celular se clasifican como cocos, observndose en la
colonia dos (C2) la tendencia a formar diplococos. Sin embargo; estas
caractersticas no permiten establecer exactamente si las colonias estudiadas
pertenecen a microorganismos diferentes o si solo se encuentran en diferentes
estadios de desarrollo.

Relacionando esta caracterizacin preliminar y los gneros bacterianos

reportados en la literatura por su capacidad biodegradadora de suelos
contaminados con aceites y residuos grasos, se sugiere continuar con la ruta de

13 Composicin en base seca.

pruebas bioqumicas recomendadas para Micrococcus y Rhodococcus, ya que
ambos gneros son cocos Gram positivos (Sprocati et al., 2011; Thangarajan et al.,
2011;Vsquez et al., 2010).

4.2.6.4 Compostaje

Es de anotar que, para tener resultados significativos estadsticamente, debieron

haberse realizado varias repeticiones del montaje, adems de inocular la muestra
con los microorganismos autctonos aislados previamente. No obstante; por ser
ste, un ejercicio preliminar que no busca presentar resultados contundentes, sino
ms bien, servir de abrebocas a futuras investigaciones, slo se hizo una prueba.

La reduccin de una composicin inicial de 43,69% de grasa al 33,17% presente

luego de los tres meses de compostaje, permite entrever que este proceso a
escala industrial, al contrario que los estudios realizados a nivel laboratorio y
escala piloto (Gonzlez et al., 2012; Sayara et al., 2010; Sprocati et al., 2011;
Vsquez et al., 2010), requiere altos tiempos de tratamiento los cuales seran
insostenibles en una industria generadora de grandes cantidades de residuos.
 5 CONCLUSIONES

El sector metalmecnico de la ciudad de Manizales tiene un alto impacto en la

generacin de empleo y economa de la ciudad. Aunque las empresas del sector
son muy diversas en cuanto al tipo y la trayectoria que tienen, es una necesidad
comn, la actualizacin de tecnologas y la innovacin para el desarrollo de
procesos ms amigables con el medio ambiente, ya que este es un punto crtico
que afecta las actividades de internacionalizacin y la posibilidad de entrar en
nuevos mercados, adems de que influye directamente en los indicadores de
sostenibilidad y competitividad de la ciudad.

En las diferentes etapas de los procesos metalmecnicos se produce una gran

cantidad y variedad de sustancias contaminantes para el medio ambiente y la
salud humana que al mostrarse recalcitrantes a los tratamientos convencionales
de degradacin, suelen ser descargados directamente al suelo o las fuentes
hdricas, o son incinerados, lo que genera emisiones gaseosas txicas. Para
contrarrestar esta situacin, y debido a las limitaciones que presentan los
tratamientos fsicos y qumicos, las tecnologas de biorremediacin se hacen cada
da ms atractivas.

Cada estrategia de biorremediacin tiene ventajas y desventajas especficas, los

cuales deben ser considerados para cada situacin. La evaluacin y eleccin del
mtodo de tratamiento requiere establecer un panorama general desde el
conocimiento fsico-qumico del residuo como los niveles de nutrientes y la
presencia de sustancias txicas, la diversidad microbiana presente y su potencial
metablico, la biodisponibilidad del contaminante, la temperatura a la que se
desarrolla el proceso, etc.

Las numerosas investigaciones cientficas que se describen en esta revisin, han

demostrado que las diferentes estrategias de biorremediacin evaluadas para el
tratamiento de efluentes metalmecnicos contaminados con grasas y lubricantes
son promisorias a nivel de laboratorio; pero, es necesario realizar mayores
investigaciones a nivel de planta piloto y a escala industrial, para estimar los
efectos del escalado en el rendimiento de los procesos.

El compostaje es un proceso incipiente de fermentacin en estado slido de bajo

costo que se puede considerar como alternativa para disminuir el volumen de
residuos generados por la industria metalmecnica; sin embargo, por los altos
tiempos de proceso y el poco control que se ejerce sobre las variables, sta
opcin puede ser insostenible en empresas con alta generacin de dichos
residuos. Adems de que demanda espacios considerables dentro de las
instalaciones para realizar este proceso.
El contenido de grasas y aceites presente en un residuo industrial, puede ser
reducido empleando biorreactores de fermentacin en estado slido, en el cual
se controlan las variables del proceso y adems, permite obtener otras sustancias
de alto valor comercial como son las enzimas lipolticas. Para hacer el diseo de
estos procesos se cuenta con herramientas de simulacin que permiten disminuir
los costos de investigacin, por lo cual se considera que la FSS es una estrategia
con alto potencial de aplicacin industrial que requiere de mayor investigacin.

La puesta en prctica de las pruebas experimentales, permiti confirmar la

importancia de poseer claridad y una vasta fundamentacin terica previa sobre
el proceso y las tcnicas a utilizar para realizar adecuadamente el aislamiento,
purificacin e identificacin de los microorganismos de inters; as como su
posterior aplicacin en campo.

Uno de los factores que probablemente influy en el bajo porcentaje de

degradacin obtenido en el ejercicio experimental de compostaje, es la alta
relacin C/N del material, ya que es rico en sustancias carbonadas y carece de
una fuente de nitrgeno clara. Por lo tanto, se recomienda repetir estas pruebas
experimentales, asegurando los requerimientos nutricionales para la actividad
eficiente de los microorganismos, y as poder evaluar el mximo porcentaje de
degradacin alcanzado para este residuo.
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