FACULTAD DE TECNOLOGA MDICA

ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO

Y
ANATOMA PATOLGICA

HEMATOLOGA

TEMA: TINCIONES HEMATOLGICAS

ALUMNA: BUITRN LLANTOY MARA ELENA

PROFESOR: BERNAOLA UCHUYA JOS

-2017-
INTRODUCCIN

Las tinciones hematolgicas tienen una finalidad importante por ello es una de
primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio. Este procedimiento de
coloracin nos va a permitir diferenciar los eritrocitos, los leucocitos y las
plaquetas. Adems, de la morfologa y diferenciacin de cada uno permite
observar patologas en clulas sanguneas. Por ende, para el estudio
satisfactorio del frotis sanguneo, es necesario colorearlo para poder observar
con mayor facilidad estructuras internas y poder diferenciarlas en el
microscopio. En la mayora de los laboratorios los colorantes ms empleados
para la tincin hematolgica se basa en el de Romanowsky constituido
fundamentalmente con la mezcla de eosina (cido) y azul de metileno (bsico).
Adems se ha incorporado el empleo de derivados por oxidacin del azul de
metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los azures los
responsables dela coloracin prpura o rojo de ciertas estructuras.
En esta prctica realizaremos la preparacin del colorante de Wright. El
colorante de Wright es una solucin de eosina y una mezcla de azul de
metileno (del 50 al 75%) y azul B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del
alcohol metlico. La eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las
variaciones de pH de los diferentes estructuras celulares, de forma que las
estructuras que tienen carcter bsico fijan la eosina mientras que las
estructuras que poseen propiedad cidas fijan principalmente el azul de
metileno. Esto explica que las estructuras basfilos se tian de color azul
mientras que los componentes acidfilos adquieren un color rosado. La
diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmticas por dichos
colorantes permite clasificar y diferenciar a los leucocitos polimorfonucleares.
OBJETIVOS

1. Obtener un frotis sanguneo bien teido para poder facilitar la

visualizacin de las clulas sanguneas mediante el microscopio ptico y
asi poder diferenciar cada tipo de clula.

2. Conocer el fundamento de la coloracin de Wright y aprender a preparar

el colorante Wright.

3. Aprender y adquirir destreza a teir los frotis sanguneos con el

colorante Wright.
MARCO TEORICO
TINCIONES HEMATOLGICAS

Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la

coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene
por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las
rodea, y permite por tanto que las clulas sean visualizadas microscpicamente
con mayor facilidad.
TIPOS DE TINCIONES
Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se pretenden colorear, se
dividen en tinciones vitales y no vitales.
Atendiendo a su frecuencia de realizacin en el diagnostico hematolgico
cotidiano, se dividen en tinciones habituales y especiales.
DENOMINACION DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS
Estructuras acidfilas u oxfilas: son aquellas que fijan colorantes de
naturaleza cida.
Estructuras basfilas; son aquellas que fijan colorantes de naturaleza
alcalina.
La diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmticas por el colorante
permite clasificar a los leucocitos polimorfonucleares en 3 grupos:
Granulocitos eosinfilo, en los que la granulacin especfica contiene
sustancias de carcter bsicos que fijan los colorantes cidos y se tien de
color rojo- naranja.
Granulocitos basfilos, en los que la granulacin especfica posee
sustancias de carcter cido que fijan colorantes bsicos y se tien de color
azul oscuro.
Granulocitos neutrfilos, en los que la granulacin especfica posee
compuestos de carcter neutro por lo que fijan ambos colorantes
simultneamente, de ah que se tien de color pardo.
 COLORANTE WRIGHT

Es un tipo de coloracin Romanowsky y eso proviene de una modificacin de la

coloracin de Leishman. Los componentes principales de la coloracin de
Wright es el azul B (un producto de oxidacin del aazul de metileno) y la eosina
Y.
FUNDAMENTO
La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares determina su avidez
por los componentes del colorante policromtico de Wright.
Los cidos nucleicos se tien con azul B que es el bsico y la hemoglobina con
la eosina Y ya que es cida. Otras estructuras se tien por una combinacin de
ambos y se denominan neutrfilas.
MATERIALES
MICROSCOPIO PUENTE DE TINCIN

COLORANTE WRIGHT AGUA DESTILADA

MARCADOR DE PH FROTIS SANGUINEO

PROCEDIMIENTO
1. El primer paso que hicimos en el laboratorio, fue la preparacin del
colorante y la solucin amortiguadora.

PREPARACIN DEL
COLORANTE WRIGHT
Reactivos
Colorante de Wright...................... 0,3 gr
Glicerina.... 3ml
Metanol. 100 ml

PREPARACIN DE LA SOLUCIN
AMORTIGUADORA TAMPONADA
Hidrxido de sodio 3,76 g
Agua destilada c.s.p 1000 cc
Nota: el PH debe ser 7.2

PROCEDIMIENTO:
2. Disolver en el mortero el colorante de Wright con el glicerol, una
vez disuelto se adiciona el metanol.
. Metanol o etanol
(alcohol) sirve como
un fijador del frotis
sanguneo al
portaobjetos

FIG1: Mezclamos y disolvemos el colorante Wright con el glicerol

 3. Luego lo trasvasamos a un frasco oscuro (color caramelo)
mediante mtodo de filtracin.

Fig 2: Usando la tcnica de filtracin trasvasamos el colorante de Wright preparado

con la ayuda del embudo de filtracin y el papel filtro.

4. Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejar secar entre 15 y

20 minutos.

Fig3: Frotis sanguneo frescos

5. Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre con el
colorante de Wright, dejndolo por espacio de x minutos

Fig4: Frotis sanguneo dispuestos en el puente de tincin

Fig5: Vertiendo el colorante Wright a los frotis sanguneos

 6. Posteriormente, se aade solucin amortiguadora tamponada en
partes iguales soplando ligeramente con la pipeta hasta obtener un
brillo metlico, dejndolo por x minutos.

Agua destilada acta como una

solucin amortiguadora
tamponada manteniendo el pH
del colorante y favorece la
mejor absorcin por los
diferentes componentes
celulares.

Fig6: En este caso se aadi como tampn agua destilada, previamente se midio el PH para
verificar si se poda utilizar.

NOTA: Para comprobar la calidad de colorante realizamos el

procedimiento en diferentes tiempos

T colorante T Solucin
Wright amortiguadora

2 3

2 4

2 5

3 3

3 4

3 5
 7. Finalmente, lavar los frotis teidos con agua destilada o agua
corriente hasta eliminar los restos de colorante y se dej secar por
x minutos

Fig7: Dejando los frotis sanguneos teidos secar por x minutos

8. Observar las preparaciones al microscopio ptico para comprobar
la calidad de la tincin.
El frotis que se pudo visualizar las clulas sanguneas con buenas
caractersticas fue el que se uso 3 minutos con el colorante 5 minutos con agua
destilada.

Fig8: Observando en el microscopios las lminas y comprobando la calidad de

tincin.
CONCLUSIONES.

1. En definitiva, el uso de las tinciones hematolgicas nos ayuda para

poder mejorar la visualizacin de las estructuras celulares con el uso del
microscopio

2. Entendiendo el fundamento podemos comprobar que a diferencia de las

otras tinciones hematolgicas, en la tincin con Wright ya no necesita el
paso previo de fijacin ya que el etanol es un componente de la misma
coloracin que va a permitir fijar el frotis hacia el portaobjetos.

3. Los pasos descritos son esenciales para realizar una buena coloracin,
Esta tcnica de coloracin es la ms usada para poder visualizar las
clulas sanguinas y lo realizaremos habitualmente, as adquiriremos
destreza que es el objetivo de la prctica.
BIBLIOGRAFIA
1. Tincin de Wright Practica n2 [en linea]
http://wiki.fisiologia.me/images/4/40/Pr%C3%A1ctica2carlamarco.pdf

2. Martnez. Cuadernos de prctica de hematologa 2014 [en linea]

http://deliamm96cuadernopracticashema14.blogspot.pe/2014/11/practica
-tincion-de-wright.html

3. Practica guiada 2017.

ACTIVIDADES
Comente sobre la coloracin de Romanowsky. Fundamente

Una tincin Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de

oxidacin, as como la eosina Y. Se utiliza para preparar frotis para anlisis
sanguneos como base de diversos colorantes, como los de Wright, Giemsa o
Leishman. La tincin de la muestra permite distinguir la forma, tamao y
contorno de los hemates, leucocitos, plaquetas, el ncleo, citoplasma y
granulaciones de las distintas clulas ya que adquieren diferentes colores: azul,
prpura, rosa o salmn. Esta separacin por colores es el llamado efecto
Romanowsky, que tie de prpura a los ncleos y grnulos neutroflicos y de
color rosa a los eritrocitos. Los cidos nucleicos, las protenas y el citoplasma
se tien de azul, delatando a los posibles parsitos