Toksisitas Subkronik Dekokta Daun Pulutan (Urena lobata L.

)
Pada Fase Juvenile Ikan Zebra (Danio rerio)
[Studi pada Nilai LC50 dan Perubahan Kecepatan Berenang]
Muhammad Rubangi*, Marindra Firmansyah **, Yudi Purnomo **
*Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang
**Staff Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang
Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang
Email: Muhammadrubangi@gmail.com

ABSTRAK

Pendahuluan: Dekokta daun Urena lobata (DUL) berpotensi sebagai obat perlu dilakukan uji toksisitas untuk menjamin
keamanannya. Keamanan penggunaan herbal pada fase juvenile perlu dievaluasi untuk memastikan dampaknya terhadap
pertumbuhan dan perkembangan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas subkronik daun pulutan berdasarkan nilai
Lethal Concentration 50 (LC50) dan kecepatan berenang ikan zebra fase juvenile.
Metode: Penelitian bersifat eksperimental laboratorium dengan desain control group post test only menggunakan ikan zebra fase
juvenile. Perhitungan nilai LC50 menggunakan dosis 500, 1.000, 4.000, 8.000, dan 10.000 mg/L, dengan ulangan sebanyak 3 kali
kemudian persentase kematian masing-masing dosis pada hari ke 28 dianalisis menggunakan regresi linier dan probit. Efek DUL
terhadap kecepatan berenang digunakan dosis terapi (500 mg/L), MATC (600 mg/L), MATC (1.200 mg/L), dan LC 50 (6.200
mg/L) pengamatan menggunakan software tracker kemudian dianalisis menggunakan One Way ANOVA dilanjutkan Pos Hoc
LSD test dengan nilai signifikan p<0,05.
Hasil: Nilai LC50 subkronik DUL ikan zebra fase juvenile sekitar 6.200 mg/L yang termasuk kategori toksisitas ringan.
Pemberian DUL dosis MATC dan MATC meningkatkan kecepatan berenang ikan zebra fase juvenile berturut-turut sekitar 3
kali lipat dan 2 kali lipat dibandingkan kelompok kontrol (p<0,05) sedangkan dosis terapi dan LC50 tidak signifikan
meningkatkan kecepatan berenang (p>0,05).
Kesimpulan: Nilai LC50 subkronik DUL termasuk kategori toksisitas ringan dan pemberian DUL dosis MATC dan MATC
meningakatkan kecepatan berenang ikan zebra fase juvenile.

Kata Kunci: ikan zebra fase juvenile, kecepatan berenang, LC50, subkronik, Urena lobata.

Subchronic Toxicity of Ceasarweed Leaf Decoction (Urena lobata L.)

In the Juvenile Phase of Zebra Fish (Danio rerio)
[Study on LC50 Value and Swimming Speed Changes]
Muhammad Rubangi *, Marindra Firmansyah **, Yudi Purnomo **
* Medical Faculty Student of Islamic University of Malang
** Medical Faculty Lecturer of Islamic University of Malang
Faculty of Medicine, Islamic University of Malang
Email: Muhammadrubangi@gmail.com

ABSTRACT

Introduction: Urena lobata Leaf decoction (ULD) has potential as drug, but needs to be tested for its toxicity. The safety of the
herbal use in the juvenile phase needs to be evaluated to ensure its impact on growth and development. The aim of this research is
to know the subchronic toxicity of caesarweed leaf based on Lethal Concentration 50 (LC50) value and juvenile zebra fish
swimming speed.
Methods: this was Laboratory experimental research with post test only control group design using zebra fish on juvenile phase.
Doses of 500, 1.000, 4.000, 8.000, and 10.000 mg/L with 3 times repetition and 28 days exposure were used to determine LC50
value. Doses of therapy (500 mg/L), MATC (600 mg/L), MATC (1.200 mg/L), and LC 50 (6.200 mg/L) with tracker software
observation were used to determine swimming speed. The LC50 data was analyzed using linear regression and probit, and the
swimming speed data was analyzed using One Way ANOVA followed by Pos Hoc LSD (p<0.05).
Results: Subcrhonic ULD LC50 value in juvenile zebra fish phase is about 6.200 mg/L and belong to mild toxicity. Doses of
MATC and MATC increase the rate of juvenile zebrafish fish swimming speed respectively by 3 times and twice higher than
control group (p <0.05). LC50 dose did not significantly increase swimming speed (p> 0,05).
Conclusions: Subchronic ULD LC50 value include in mild toxicity and ULD doses of MATC and MATC increase juvenile
zebra fish swimming speeds.

Keywords: juvenile zebra fish phase, swimming speed, LC50, subchronic, Urena lobata.
 PENDAHULUAN
Pulutan (Urena Lobata) merupakan salah
satu herbal yang memiliki potensi sebagai obat.
Secara empirik ekstrak dari daun dan akar Urena
lobata digunakan oleh masyarakat untuk mengobati
beberapa penyakit seperti batuk, malaria, luka, dan
rematik1. Penelitian secara in vitro dan in vivo
membuktikan bahwa ekstrak daun pulutan (Urena
lobata) memiliki efek antidiabetes melalui
mekanisme menghambat enzim DPP-IV (dipeptidyl
peptidase IV) sehingga menurunkan kadar glukosa
darah2,3. Salah satu senyawa kimia pada ekstrak
Urena lobata yaitu alkaloid dan tanin yang bersifat
sitotoksik sehingga dapat menghambat pertumbuhan
serta merusak sel kanker maupun sel normal4,5. Uji
preklinik ekstrak metanol daun Urena lobata
menunjukkan efek sedatif ansiolitik yang ditandai
dengan penurunan aktivitas motorik dan peningkatan
waktu tidur tikus yang diinduksi thiopental6.
Keamanan penggunaan Urena Lobata untuk
pengobatan perlu diperhatikan. Penggunaan herbal
Urena lobata selama 18 hari menimbulkan nekrosis
sel tubulus kontortus proksimal ginjal mencit7.
Penelitian uji toksisitas pada tikus yang di papar
ekstrak air Urena lobata selama 28 hari tidak terjadi
perubahan berat badan dan hati, namun terjadi
perubahan secara signifikan pada profil histologis
dan biokimia hati yang ditandai dengan perdarahan
ringan sampai berat dan infiltrasi sel mononuklear
seiring dengan bertambahnya kadar AST (aspartat
transaminase), ALT (alanin transaminase) dan ALP
(alkaline phosphatase) pada serum8. Studi toksisitas
menggunakan kelinci normal selama 24 minggu
menunjukkan bahwa ekstrak akar Urena lobata
memiliki efek menurunkan kadar glukosa darah yang
signifikan. Sedangkan pada fungsi hati, terjadi
penurunan fungsi pada 10 minggu pertama akan
tetapi kembali ke fungsi normal pada perlakuan
minggu berikutnya9.
Uji toksisitas Urena Lobata perlu di lakukan
untuk menjamin keamanannya. Uji toksisitas
merupakan prasyarat formal keamanan kandidat obat
untuk pemakaian pada manusia10. Uji toksisitas yang
di lakukan antara lain uji toksisitas umum dan
khusus. Lethal Concentration 50 (LC50) merupakan
parameter uji toksisitas umum yang menjadi prioritas
utama untuk menilai keamanan herbal. Nilai LC50
menunjukkan derajat toksisitas dan dosis yang
mampu menimbulkan kematian 50% organisme uji.
Selain toksisitas akut, uji toksisitas subkronik dan
kronik juga perlu dilakukan untuk evaluasi keamanan
penggunaan herbal jangka panjang. Peningkatan
dosis dan lama paparan herbal dapat meningkatkan
toksisitas yang ditandai dengan gangguan struktur
dan fungsi organ.
Ikan zebra dapat di gunakan sebagai hewan
coba dalam uji toksisitas herbal. Penggunaan ikan
zebra sebagai hewan uji memiliki beberapa
keuntungan antara lain sensitif terhadap racun dari
polusi lingkungan, embrio yang transparan sehingga
mudah melakukan pengamatan secara langsung pada
organ-organ dalam. Selain itu, ikan zebra juga mudah
di pelihara, berukuran kecil, jumlah telur yang
banyak dan perkembangannya yang cepat11. Terdapat
70% gen pengkode protein pada manusia juga di
temukan pada ikan zebra sehingga memungkinkan
penyakit yang terkait dengan gen pada manusia juga
bisa terjadi pada ikan zebra12. Masa juvenile ikan
zebra merupakan fase usia tumbuh kembang ikan
zebra yang pesat pada rentang usia 4 minggu sampai
12 minggu pasca-fertilisasi13. Keamanan penggunaan
herbal perlu di evaluasi pada kelompok usia tumbuh
kembang untuk memastikan dampaknya terhadap
gangguan pertumbuhan dan perkembangan. Efek
toksisitas herbal dapat mengganggu fungsi organ
salah satunya adalah sistem saraf pusat. Gangguan
sistem saraf pusat khususnya aspek motorik dapat
dievaluasi dengan mengamati kecepatan
berenangnya14. Hingga saat ini penelitian tentang
derajat toksisitas dan efek toksisitas dekokta Urena
lobata pada sistem saraf pusat fase juvenile belum
pernah dilakukan. Berdasarkan uraian tersebut, maka
perlu dilakukan pengujian toksisitas dekokta daun
pulutan (Urena lobata) dengan menentukan nilai
LC50 dan menilai kecepatan berenang fase juvenile
ikan zebra (Danio rerio).
METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode
observasi dan eksperimental laboratorik secara in
vivo menggunakan desain penelitian control group
post test only dengan tujuan mengetahui efek toksik
dekokta daun pulutan (Urena lobata) terhadap Danio
rerio fase juvenile. Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Terpadu Fakultas Kedokteran
Universitas Islam Malang pada bulan maret 2017
juni 2017 dan telah mendapat surat laik etik dari
Komisi Etik Kesehatan Penelitian Universitas
Brawijaya No. 656-KEP-UB dan disetujui pada
tanggal 13 Desember 2016.
Hewan coba yang akan diberi perlakuan
adalah Danio rerio fase juvenile dengan usia 1-2
bulan yang didapatkan dari petani ikan Desa Pelem
Kecamatan Campur Darat Kabupaten Tulungagung
dan telah disertifikasi di Fakultas Pertanian
Peternakan Universitas Muhammadiyah Malang
dengan nomor 01/Analisa/Lab.Perikanan/FPP-
UMM/I/2017. Ikan zebra Fase Juvenile diadaptasikan
dan dipelihara selama tujuh hari didalam aquarium
berukuran 60 x 30 x 35 cm yang dilengkapi dengan
filter, aerator set, termeometer dan heater sebelum
dilakukan perlakuan. Air yang digunakan selama
pemeliharaan adalah air hasil penyaringan dengan
purified water yang dijaga pada suhu 25-28oC. Siklus
hidup ikan zebra diatur dalam 14 jam terang dan 10
jam gelap. Ikan zebra diberi makan satu kali sehari
dengan tetramin..
HASIL PENELITIAN
Nilai Lethal Concentration (LC50) Dekokta Daun
Urena lobata L. pada Ikan Zebra Fase Juvenile
Nilai LC50 dekokta daun Urena lobata L. (DUL)
dapat dilihat pada Tabel 1. Dan gambar 1. dibawah
ini:

Tabel 1. Rerata Persentase Kematian Ikan Zebra

Pembuatan Dekokta Daun pulutan (Urena lobata
L.) % Kematian ( rerata SD )
Simplisia daun pulutan (Urena lobata L.)
Kelompok n
diperoleh dari UPT Balai Materia Medika, Kota Batu, K1 (500 mg/L) 3 00.00 00.00
Jawa Timur dan telah dideterminasi dengan nomor K2 (1000 mg/L) 3 20.00 00.00
surat 074 / 306 / 101.8 / 2016. Simplisia daun Urena K3 (4000 mg/L) 3 30.00 00.00
lobata L. ditimbang sebanyak 80 gram kemudian K4 (8000 mg/L) 3 53.33 00.57
dimasukkan ke dalam panci dekok berisi 1 liter air K5 (10.000 mg/L) 3 90.00 01.00
yang sudah dipanaskan pada suhu 900C selama 30
menit sambil sesekali diaduk. Setelah dingin dekokta
diperas dan disaring menggunakan kasa lalu LC50
dimasukkan dalam labu Erlenmeyer menggunakan
corong. 100
80 y = 0.0079x + 1.6249
Perhitungan Nilai Lethal Concentration (LC50) 60 R = 0.922
Penelitian ini menggunakan 150 ekor ikan zebra 40
fase juvenile yang terbagi dalam 5 kelompok dengan
20
dosis 500, 1000, 4.000, 8.000, dan 10.000 mg/L.
Perlakuan dilakukan dengan 3 kali ulangan, masing- 0
masing ulangan terdiri dari 10 ikan. Penggantian 0 5000 10000 15000
herbal dilakukan 24 jam sekali selama 28 hari. Setiap
Gambar 1. Grafik Regresi Linier LC50
kensentrasi dihitung persen kematian ikan dan nilai
LC50 ditentukan dengan metode analisis regresi linier.
Tabel 2. Nilai LC50 berdasarkan analisis probit

Pengukuran Kecepatan Berenang

Penelitian ini menggunakan 30 ekor ikan zebra
fase juvenile yang terbagi menjadi 5 kelompok yaitu:
kelompok kontrol, terapi, MATC, MATC, dan
LC50. Dosis MATC (Maximum Allowable Toxicant
Concentration) ditentukan berdasarkan nilai NOEC
(No-Observed Effect Concentration) dan LOEC
(Lowest-Observed Effect Concentration)
menggunakan rumus: ()(). Ikan zebra
dipapar selama 30 menit kemudian dilakukan
perekaman selama 1 menit dan hasil video dianalisis
menggunakan software tracker dengan satuan
kecepatan cm/s13,14. Berdasarkan rumus pada hasil analisis regresi
linier dan probit menunjukkan dekokta daun Urena
Analisis Data lobata L. memiliki nilai LC50 berturut-turut sebesar
Perubahan kecepatan berenang dianalisis 6.123,43 mg/L dan 6.296,74 mg/L. Nilai tersebut
menggunakan One Way ANOVA untuk menguji tidak jauh berbeda dan termasuk dalam kategori
hipotesis dilanjutkan Post Hoc LSD Test untuk toksisitas ringan15.
menentukan perbedaan antar kelompok perlakuan.
Hasil dinyatakan berbeda signifikan bila p<0,05.
Efek Dekokta Daun Urena lobata L. terhadap Efek toksik ini dikendalikan oleh komponen dan
Perubahan Kecepatan Berenang Ikan Zebra Fase komposisi zat aktif dalam daun Urena lobata L
juvenile seperti alkaloid, saponin dan tanin.
Efek dekota daun Urena lobata L. terhadap Beberapa jenis alkaloid dalam Urena lobata L.
perubahan kecepatan berenang ikan zebra dapat diduga bekerja sebagai anti-mitosis dengan mengikat
dilihat pada Tabel 3. dan Gambar 2. dibawah ini: tubulin dan memblokade polimerasi protein ke dalam
mikrotubulus sehingga terjadi penghancuran
`Tabel 2. Rerata Hasil Pengukuran Kecepatan mikrotubulus. Hal ini menimbulkan gangguan fungsi
Berenang Ikan Zebra mikrotubulus dan gangguan enzim telomerase yang
Kecepatan dapat menghambat pembelahan dan perkembangan
Kelompok n Berenang sel16. Alkaloid dapat merubah materi genetik seperti
(cm/s)
DNA sehingga menghasilkan protein unfungsional
1.15 0,33a
KN (Kontrol Negatif) 6 yang menimbulkan kerusakan serta kematian sel. 17.
P1 (Terapi) 500 mg/L 6 1,31 0,43a Gangguan dan kerusakan sel atau jaringan
menginduksi kematian organisme.
P2 (1/2 MATC) 600 mg/L 6 2.88 0.55b
Saponin memiliki aktivitas menurunkan tegangan
P3 ( MATC) 1.200 mg/L 6 2.01 0.80b permukaan vaskuler sehingga mengakibatkan
P2 (LC50) 6.200 mg/L 6 1.24 0.35a hipovolemia17. Kondisi hipovolemia menurunkan
jumlah oksigen yang diangkut ke sel dan jaringan
Keterangan:
sehingga terjadi hipoksia seluler. Saponin juga dapat
a,b,c : notasi yang berbeda menunjukkan perbedaan
melisiskan sel darah merah sehingga menurunkan
kecepatan berenang yang bermakna (p<0,05). jumlah ikatan oksigen-hemoglobin dalam darah,
keadaan ini menimbulkan hipoksia sel. Hipoksia sel
Kecepatan berenang dapat mengganggu respirasi oksidatif dan
menurunkan produksi ATP sehingga memicu
4.00 b b kematian. Deplesi ATP dapat meningkatkan
pembentukan ROS (Reactive Oxygen Species) yang
3.00
akan menyebabkan kerusakan dan kematian sel.
2.00 a a a Kematian sel yang kompleks menimbulkan kematian
organisme18.
1.00 Tanin merupakan merupakan senyawa metabolit
0.00 sekunder golongan polifenol. Tanin menghambat
kontrol terapi 0.5 matc matc lc50 kerja enzim dan mengganggu metabolisme
pencernaan sehingga organisme mengalami
Gambar 2. Histogram Rerata Kecepatan kekurangan nutrisi dan menimbulkan kematian.
Berenang Ikan Zebra Fase juvenile Tanin diduga dapat merusak membran ikan fase
juvenile sehingga cepat mengalami paralisis dan
Berdasarkan Tabel 3. dan Gambar 2 pemberian kematian19.
dekokta daun Urena lobata L. dosis MATC dan Pada umumnya kandungan metabolit sekunder
MATC meningkatkan secara signifikan kecepatan dalam herbal berkadar rendah sehingga kurang
berenang ikan zebra fase juvenile berturut-turut menimbulkan efek toksik. Beberapa senyawa
sekitar 3 kali lipat dan 2 kali lipat dibandingkan metabolit sekunder dalam Urena lobata L memiliki
dengan kontrol (p<0,05) sedangkan dosis terapi dan konsentrasi yang kecil sehingga efek farmakologi dan
LC50 meningkatkan tidak signifikan kecepatan toksisitasnya rendah. Metabolit sekunder dalam
berenang (p>0,05). Pemberian dekokta Urena lobata herbal pada umumnya bersifat toksik dan diproduksi
L. dosis MATC dan MATC tidak berbeda untuk perlindungan terhadap kondisi yang tidak
signifikan dalam meningkatkan kecepatan berenang menguntungkan, tetapi dalam jumlah kecil memiliki
senyawa ini memiliki efek terapi21.
(p>0,05).
Interaksi beberapa zat aktif dalam daun Urena
lobata L. diduga bersifat antagonis sehingga dapat
PEMBAHASAN menurunkan potensi toksisitas dari herbal tersebut.
Nilai Lethal Concentration (LC50) Dekokta Daun Selain interaksi yang bersifat antagonis dapat pula
Urena lobata L. pada Ikan Zebra Fase juvenile terjadi interaksi sinergistik sehingga dapat
Nilai LC50 subkronik dekokta daun Urena lobata memperkuat aktifitas biologis dari senyawa yang
L. pada ikan zebra fase juvenile adalah 6.200 mg/L melakukan interaksi22.
yang termasuk dalam kategori toksisitas ringan15.
 Lama paparan mempengaruhi derajat toksisitas
suatu herbal. Hal ini sejalan dengan penelitian yang
dilakukan oleh Firdausi (2017), pada paparan akut
Urena lobata L. memiliki nilai LC50 8.900 mg/L.
Derajat toksisitas akut lebih rendah dibandingkan
dengan paparan subkronik.
Fase juvenile merupakan fase dimana terjadi
pertumbuhan dan perkembangan organisme yang
pesat. Pada fase ini organisme sensitif terhadap
senyawa xenobiotik seperti obat, herbal, polutan dan
bahan kimia asing. Hal ini terjadi karena
perkembangan fungsi organ ekskresi dan
metabolisme yang belum matur sehingga
meningkatkan resiko toksisitas suatu senyawa
xenobiotik. Enzim yang berfungsi untuk proses
metabolisme belum diproduksi optimal baik dari segi
jenis dan jumlah sehingga beresiko tinggi
menimbulkan efek toksik23.
Efek Dekokta Daun Urena lobata L. terhadap
Kecepatan Berenang Ikan Zebra Fase juvenile
DUL pada dosis MATC dan MATC dapat
meningkatkan kecepatan berenang ikan zebra fase
juvenile. Hal ini diduga berhubungan dengan
komponen zat aktif dan konsentrasinya dalam DUL
yaitu senyawa flavonoid dan alkaloid.
Flavonoid merupakan senyawa yang bekerja pada
susunan saraf pusat dengan cara menghambat
aktivitas asetilkolinesterase. Enzim ini berperan
mendegradasi asetilkolin menjadi kolin dan asetat
sehingga jumlah asetilkolin akan menurun23. Setelah
asetilkolin digunakan selanjutnya dilakukan proses
degradasi oleh enzim asetilkolinesterase untuk proses
repolarisasi sel otot skelet sehingga terjadi proses
relaksasi. Inhibisi enzim asetilkolinesterase
mengganggu proses degradasi asetilkolin sehingga
proses relaksasi terhambat. Kondisi ini meningkatkan
kontraksi otot-otot extremitas sehingga terjadi
peningkatan kecepatan berenang pada ikan zebra fase
juvenile23,24.
Beberapa alkaloid dalam herbal memiliki efek
stimulasi pada SSP. Alkaloid terikat sebagai agonis
pada reseptor kolinergik yaitu asetilkolin nikotinik
(nAChR) yang terletak pada otak, ganglia otonom
dan neuromuscular junction. Setelah terjadi ikatan
alkaloid dengan reseptor nAChR maka influk ion Ca
kedalam sel meningkat sehingga kadar Ca intrasel
meningkat. Kondisi ini akan meningkatkan kontraksi
sel otot sehingga meningkatkan kecepatan
berenang26.
Pemberian DUL dosis MATC dan MATC
meningkatkan kecepatan berenang lebih kuat
dibandingkan dosis LC50 Hal ini diduga karena
adanya mekanisme down regulation dan
desensitisasi. Mekanisme down regulation yaitu
penurunan jumlah reseptor akibat peningkatan dosis
zat aktif sehingga efek biologisnya menurun.
Sedangkan desensitisasi merupakan penurunan
kepekaan reseptor akibat stimulasi zat aktif dosis
tinggi dan jangka lama sehingga aktivitasnya
menurun. Kemungkinan lainnya zat aktif bekerja
lebih dari satu reseptor sehingga peningkatan dosis
tidak di iringi aktivitas biologisnya24,25.
KESIMPULAN
1. Dosis LC50 paparan subkronik dekokta daun
Urena lobata L. pada ikan zebra fase juvenile
adalah 6.200 mg/L yang termasuk kategori
toksisitas ringan.
2. Pemberian dekokta daun Urena lobata L. pada
dosis terapi (500 mg/L) MATC (600 mg/L)
MATC (1.200 mg/L) dan LC50 (6.200 mg/L)
meningkatkan kecepatan berenang pada ikan
zebra fase juvenile.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian mengenai efek dekokta
daun Urena lobata L. terhadap perubahan
anatomi dan histologi serta kadar neurotransmiter
sebagai penanda kerusakan sel otak yang lebih
spesifik.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada IOM (Ikatan Orang Tua
Mahasiswa) yang telah memberi bantuan dana dalam
penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
1. Mathappan, Rinku., and Umachigi, Sanjay P.
Morpho Anatomical Studies Of Leaves Of Urena
lobata Linn. International Journal Of
Pharmaceutical Innovations. 2013. Volume 3,
Issue 1.
2. Purnomo, Y., Soeatmaji, D.W., Sumitro, S.B.,
Widodo, M.A. Incretin Effect of Urena lobata
Leaves Extract on Stucture and Function of Rats
Islet -cells. Journal of Traditional and
Complementary Medicine xxx. 2016. 1-6.
3. Onoagbe IO, Negbenebor EO, Ogbeide VO,
Dawha IH, Attah V, Lau Hu and Omonkhua
AA. A study of the antidiabetic effects of Urena
lobata and Sphenostylis stenocarpa in
streptozotocin-induced diabetic rats. Eur. J. Sci.
Res. 2010; 43: 6-14..
4. Mshelia, I.Y., Dalori, B.M., Hamman, L.L. dan
Garba, S.H. Effect of the Aqueous Root Extract
of Urena lobata (Linn) on the Liver of Albino
Rat. Research Journal of Applied Sciences,
Engineering and Technology. 2013. 5(1): 01-06.
5. Purwanto, Naton., Rismawati, Endah dan
Sadiyah, Esti. R. Uji sitotoksik ekstrak biji salak
(Salacca Zalacca (Gaert) Voss) dengan
menggunakan metode Brine Shrimp Lethality
Test (Bslt). Prosiding penelitian spesia Unisba
2015. ISSN 2460-6472.
6. Emran, T.B. dan Rahman, M.A. Sedative,
anxiolytic and analgesic effects of Urena sinuata
L. leaf extract in animal models. International
Food Research Journal. 2014. 21(5): 2069-2075.
7. Maisaroh, Siti., Handayani, Nursasi dan Gofur,
Abdul. Pengaruh Rebusan Simplisia Daun
Pulutan (Urena Lobata L.) Terhadap Nekrosis Sel
Tubulus Kontortus Proksimal Ginjal Mencit (Mus
Musculus) Galur Balb C. 2016. Malang: Jurusan
Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang.
8. Mshelia IY, Dalori BM, Hamman LL, and Garba
SH. 2013. Effect of the aqueous root extract of
Urena lobata (Linn) on the Liver of Albino Rat.
Res. J. Appl. Sci. Engine. Technol. 2013; 5(1):
01-06.
9. Omonkhua, Akhere. A, Lyere O. Onoagbe. 2011.
Evaluation of the long-term effects of Urena
lobata root extracts on blood glucose and hepatic
function of normal rabbits. Journal of Toxicology
and Environmental Health Sciences. 2011. Vol.
3(8) pp. 204-213.
10. Depkes RI. Menteri Kesehatan Republik
Indonesia Keputusan Menteri Kesehatan Republik
Indonesia Nomor 761/Menkes/Sk/Ix/1992 Tentang
Pedoman Fitofarmaka Menteri Kesehatan
Republik Indonesia. 1992. Jakarta.
11. Uwe Strhlea, Stefan Scholz b, Robert Geisler a ,
Petra Greiner c , Henner Hollert d , Sepand
Rastegar a ,Axel Schumacher a, Ingrid
Selderslaghs e, Carsten Weiss a, Hilda Witters e,
Thomas Braunbeckf. Zebrafish embryos as an
alternative to animal experimentsA
commentary on the definition of the onset of
protected life stages in animal welfare regulations
Reproductive Toxicology 33 (2012) 128132.
12. Howe, Kerstin. The zebrafish reference genome
sequence and its relationship to the human
genome. Letter Research. 2013 : 498| Nature| Vol
496.
13. Parichy, D.M., Elizondo, M.R., Mills, M.G.,
Gordon, T.N., and Engeszer, R.E. 2009. Normal
table of postembryonic zebrafish development:
Staging by externally visible anatomy of the
living fish. Developmental dynamics : an official
publication of the American Association of
Anatomists. 2009: 238(12):2975-3015.
14. Bencan Z, Sledge D, et al. Buspirone,
chlordiazepoxide and diazepam effects in a
zebrafish model of anxiety. Pharmacol Biochem
Behav. 2009;94(1):7580.
15. Dekant, W., Vamvakas,., Ullmanns Industrial
Toxicology. 2005. Weinheim; Wiley-VCH
16. Meles, D.K., Wurlina, I.D.P.A. Adnyana., S.
Zakaria., D.M.S. Putra., N. Suasanti. Efek
Antimitogenik Fraksi Alkaloid Achyranthes
aspera Linn. terhadap Induksi Apoptosis pada
Mencit yang Terinfeksi Mycobacterium
tuberculosis. ACTA VETERINARIA
INDONESIANA ISSN 2337-3202, E-ISSN 2337-
4373. 2015. Vol. 3, No. 1: 8-15.
17. Nurqolbiah, E., Indri, K., Siti, N.N. Uji Toksisitas
Fraksi Air Impatiens balsamina Pada Tikus
Betina Galur Sprague Dawley. Pharm Sci Res
ISSN 2407-2354. 2014. Vol. 1 No. 1.
18. Mitchell, R.N. & Cotran, R.S. Jejas, Adaptasi,
dan Kematian Sel. Dalam Kumar, V., Cotran,
R.S., Robbins, S.L. (eds). Buku Ajar Patologi
Robbins Volume 1. Edisi VII. Jakarta: EGC.3:7-
26. 2007.
19. ngajow, mercy., Abidjulu, Jemmy dan Kamu,
WS. Pengaruh Antibakteri Ekstrak Kulit Bawang
Matoa (Pometia pinnata) terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus secara In vitro. Jurnal
MIPA UNSRAT Online. 2013. 2(2) 128-132.
20. Noriko, N. Potensi Daun Teh (Camellia sinensis)
dan Daun Anting anting Acalypha indica L.
dalam Menghambat Pertumbuhan Salmonella
typhi. Jurnal Al-Azhar Indonesia Seri Sains Dan
Teknologi. 2013. Vol . 2, No. 2.
21. Purnomo, Y., J.W. Soeatmadji, S.B. Sumitro,
M.A. Widodo. Anti-diabetic Potential of Urena
lobata Leaf Extract Through Inhibition of
Dipeptidyl Peptidase IV Activity. Asian Pacific
Journal of Tropical Biomedicine. 2015. 5 (8).
645-649.
22. Goodman & Gilman. The Pharmacological Basis
of Terapeutics 10th ed. London. 2004.
23. Singgleman, Corinna., Holtzman, Nathalia G
growth and maturation in the Zebrafish, Danio
rerio: A staging tool for teaching and research.
PMC. 2014. Aug 1 1; 11(4): 396-406.
24. Jung, Mankil., Park, Moonsoo.
Acetylcholinesterase Inhibiton by Flavonoids
from Agrimonia pilosa. Molecules.2007.12, 2130-
2139
25. Ganong, WF. Review of medical phisiology 22th
edition. 2008. .Jakarta: EGC.
26. Setiawati, Agustina. Suatu Kajian Molekuler
Ketergantungan nikotin. Jurnal farmasi sains dan
komunitas. 2013. Hlm. 118-127.