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GRUPO: 151009_6
TUTORA
DIANA CAROLINA PARRA
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Grupo 151009_6
Laboratorio de Biologa Celular y Molecular
INFORME DE LABORATORIO
BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR
OBJETIVOS
La gua de prcticas del curso de Biologa Celular y Molecular tiene como objetivo
dar herramientas al estudiante para comprender las propiedades, estructura,
funciones, orgnulos celulares y las interacciones bioqumicas, genticas, con el
ambiente y su ciclo vital desarrollando su pensamiento cientfico y crtico respecto a
las relaciones que se dan en la Biologa celular y Molecular.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Conocer y poner en prctica el conjunto de normas que se deben seguir para
evitar poner en riesgo la integridad fsica o vital de las personas reunidas en el
laboratorio.
Concientizar la importancia del uso adecuado de elementos de proteccin
personal
Conocer la forma correcta de usar los contenedores de desechos y el guardin
Conocer los riesgos a los que se expone al momento de trabajar con algunos
agentes patgenos e infecciosos como hongos y sangre en el laboratorio.
Reconocer los equipos que se utilizan en el laboratorio y su funcin
Reconocer la importancia de limpiar el rea de trabajo antes y despus de
trabajar en ella.
Conocer el material que se emplea para el trabajo en el laboratorio y la forma
correcta de usarlo
Conocer las partes del microscopio y la funcin de cada una
Aprender a manipular correctamente el microscopio
Aprender a realizar un montaje hmedo para las observaciones en el
microscopio
Aprender a calcular el dimetro de visin en el microscopio durante el trabajo con
el papel milimetrado
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Observar los procesos de isotnicos, hipotnicos e hipertnicos en clulas
sanguneas y vegetales usando la elodea
Observar los cambios que sufren las clulas durante su proceso reproductivo
(meiosis- mitosis)
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NDICE
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DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No. 1
BIOSEGURIDAD
Introduccin
Objetivo
Se socializ la informacin descrita a continuacin y el uso adecuado de los elementos
de proteccin personal, se verific que los integrantes del grupo portaran la bata blanca
y se dio a conocer su importancia ya que es ella la que brinda proteccin evitando que
la ropa se contamine y contamine a otras personas fuera del laboratorio, a su vez,
permite identificar si en algn momento se tuvo contacto con algn tipo de reactivo o
fluido que ponga en riesgo la salud.
El lavado de manos es esencial antes y despus de cada prctica y debe hacerse de la
forma correcta para que estn seguras y libres de contaminacin.
Es indispensable limpiar el rea de trabajo antes y despus de cada prctica, ya que es
imposible conocer qu tipo de sustancias, fluidos o agentes se usaron durante la
actividad anterior en el laboratorio.
Es esencial aprender a identificar y separar el tipo de residuo que va en cada recipiente
de desechos ubicado en el laboratorio, se da a conocer el guardin, recipiente adicional
donde se almacenan para desechar todo tipo de elementos corto-punzantes y/o que
han tenido contacto con fluidos como sangre.
Bata
Gorro
Guantes
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Tapabocas
Gafas de bioseguridad
Toallas desechables
Jabn antisptico
Alcohol Antisptico
Procedimiento:
1. Normas de Bioseguridad
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El lavado de manos se hizo al empezar el laboratorio y antes de
abandonarlo
4. Manejo de residuos.
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5. Uso de Reactivos.
Se recibi informacin de que todos los reactivos que se utilizan en las operaciones y
reacciones en el laboratorio son potencialmente peligrosos por los que, para evitar
accidentes, debern trabajarse con cautela. Numerosas sustancias orgnicas e
inorgnicas son corrosivas o se absorben fcilmente por la piel, produciendo
intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto directo; si este
ocurriera, deber informar inmediatamente al docente
6. Uso Equipos.
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Equipos del Laboratorio:
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Agitador: Equipo que permite mezclar lquidos y para ello se debe poner dentro
del recipiente una cpsula que permite que gire.
Centrfuga: Equipo que permite introducir tubos de ensayo, permite graduar las
revoluciones y el tiempo que debe permanecer las muestras dentro de ella.
Microscopio: Equipo que aumenta el tamao de un objeto de forma que pueda
ser observado por el ojo humano.
Balanza:
Verificar siempre la nivelacin de la balanza.
Limpie la balanza de derrames y salpicaduras, estando apagada.
Al encender la balanza djela estabilizar por 10 minutos como mnimo.
Utilice siempre un recipiente para pesar, no ubique las sustancias o
especmenes directamente en el platillo.
Al pesar mantener las puertas cerradas para mejorar la estabilidad.
No pese sustancias corrosivas, calientes o que puedan degradar el interior de la
balanza.
No mover bajo ninguna circunstancia las balanzas de su posicin.
Revise la capacidad mxima del equipo.
Espectrofotmetro:
Estos equipos son muy delicados por lo cual es conveniente leer las instrucciones de
uso antes de ser utilizados.
Permitir que el instrumento se caliente antes de hacer algn procedimiento.
Verificar el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando vare
la longitud de onda.
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Asegurarse de que las cubetas estn limpias y libres de ralladuras y huellas
digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse.
Pipeta: Permite tomar la solucin y para ello se usa junto con una pieza
llamada Pipeteador. No se debe dejar sobre el mesn sin ningn tipo de
proteccin y se debe procurar que la punta est libre de cualquier tipo de
contaminacin.
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Presentacin de resultados
Teniendo en cuenta la frmula V1xC1=V2xC2; en una tabla presente diluciones al
0.5%, 1%, 1.5% y 5% de hipoclorito de sodio que tiene una concentracin inicial de
10% indicando la concentracin inicial, concentracin final, volumen inicial de
hipoclorito, volumen de agua y volumen final para cada dilucin.
Cuestionario:
Defina que es Bioseguridad: la bioseguridad se integra por medidas y normas que
tratan de preservar la seguridad del medio ambiente en general y de los trabajadores,
pacientes y visitantes de algn lugar donde se utilizan elementos fsicos, qumicos o
biolgicos, sobre todo sangre y fluidos corporales que puedan provocar dao, por su
carcter potencialmente infecciosos o contaminante.
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microorganismos que se encuentran en el cuerpo y en los diferentes
entornos en donde se encuentren las personas.
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ACTIVIDAD PRCTICA No. 2
MICROSCOPA
Introduccin
El microscopio es un instrumento que permite
aumentar el tamao de un objeto un nmero
determinado de veces. Existen dos grandes tipos
de microscopio: el microscopio ptico (que usa
luz) y el microscopio electrnico (que usa
electrones). El microscopio ptico fue el
instrumento que llev al descubrimiento de la
clula, mientras que el microscopio electrnico,
dado su enorme poder de resolucin, permiti
establecer una descripcin detallada de las
estructuras subcelulares (como por ejemplo los
organelas celulares).
El microscopio ptico funciona en base a lentes de
vidrio convergentes, que como su nombre lo
indica, provocan que los rayos de luz converjan en
un punto, al cual se le llama foco. Al lograr que un
nmero de rayos de luz que normalmente
veramos separados, enfoquen en nuestra retina,
podemos interpretar esa imagen (que es una imagen virtual) como una ampliacin de la
imagen real.
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Objetivo
Comprender el funcionamiento del microscopio y reconocer los diferentes poderes del
microscopio mediante diferentes montajes.
1. El procedimiento de microscopa comenz identificando las partes del microscopio
que se describen a continuacin:
o Oculares, pueden ser de 10x o de 16x (veces de aumento), tiene dos juegos de
lentes de los cuales un juego invierte la muestra y el otro aumenta su tamao.
o Porta-oculares
o Tornillo ojo izquierdo, conocido tambin como graduador de Dioptras para
personas con defectos visuales.
o Cabeza, es la parte que sostiene los porta-oculares y el tornillo de graduacin.
o Brazo, sirve para sostener con una mano el microscopio mientras se mueve, la
otra mano debe ir debajo de la base.
o Revolver, es la pieza giratoria que sostiene los objetivos. Estos pueden ser de 4x
(anillo color rojo), 10x (anillo color amarillo), 40x (anillo color azul) y 100x (anillo
color blanco) se llama objetivo de inmersin; para ello se usa con una gota de
aceite sobre la muestra ya que permite una mayor refraccin en la observacin y
se usa en montajes secos o permanentes.
o Platina o carro mecnico, tiene una pinza que permite coger y sostener la muestra.
Tiene dos tornillos ubicado uno encima de otro, el de arriba mueve la platina y el
otro mueve la pinza.
o Diafragma, controla la cantidad de luz y la lleva a un punto.
o Tornillo macromtrico y micromtrico para desplazamientos grandes y dar enfoque
a las observaciones respectivamente.
o Fuente de Luz
o Base, da soporte y estabilidad al microscopio.
o Las observaciones se deben hacer bien sentados, con los brazos sobre el mesn
de trabajo.
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o La intensidad de la luz se puede variar con una palanca que trae el condensador o
en el botn que hay al lado del botn de encendido.
Planta acutica Elodea, Microscopio ptico. Lamina con extendido coloreada, Aceite de
inmersin, Papel de Arroz o de ptica, Alcohol isoproplico.
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Procedimiento:
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4. Observacin con el objetivo de inmersin 100X
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5. Comprobacin de los poderes o capacidades del microscopio
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Se hizo el montaje de los hilos de la siguiente forma:
o Se cortaron hilos de colores
o Se ubicaron sobre una lmina portaobjetos humedecindolos un poco.
o Se cubrieron con una laminilla cubreobjetos.
o Se ubic la lmina sobre la platina y se sostuvo con la pinza.
o Sube la platina hasta el tope.
o Se ajustaron los oculares.
o Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
o De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x
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6. Clculo del dimetro del campo de visin
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Cuestionario
1. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:
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PRCTICA No. 3
CLULA: CRENACIN, HEMLISIS, PLASMLISIS Y TURGENCIA
Introduccin
Se record que las clulas sanguneas y vegetales permiten la entrada y la salida de
agua la cual modifica su forma dependiendo del estado de hidratacin la cual se
determina de la siguiente por los siguientes fenmenos:
Objetivo
El objetivo de este procedimiento fue reconocer el estado de hidratacin de las clulas
sanguneas y vegetales. Se observ los fenmenos de hipotona, isotona e hipertona
en clulas animales y vegetales.
Material
Microscopio compuesto.
6 portaobjetos y 6 cubreobjetos.
Vasija con agua destilada.
Pipeta Pasteur.
Solucin de NaCl al 0.6%
Solucin de NaCl al 0.9%
Solucin de NaCl al 1.2%
Solucin de NaCl al 10%
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Para empezar el trabajo se dispuso la balanza en situacin de encendido
Clulas sanguneas:
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De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x
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Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x
Presentacin de resultados
Cuestionario
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b) Difusin: Es el movimiento que hacen los tomos y las molculas de una regin
de mayor concentracin a una de menor concentracin
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PRCTICA No. 4
Cuando un eritrocito es colocado en una solucin isotnica, que contiene molculas que
pueden atravesar la membrana, la molcula penetrante entra en la clula ocasionando
que sta estalle. Este estallamiento de los eritrocitos es llamado hemlisis y puede ser
detectado por medio de un espectrofotmetro, que mide el cambio en la absorcin de la
luz, debido al paso de la hemoglobina hacia el exterior.
Objetivo
Material
Reactivos
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Procedimiento
Es de resaltar que los datos obtenidos sirvieron para realizar la curva estndar para
Hemlisis de la sangre, graficando % de Transmitancia contra % de Hemlisis.
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Se tomaron las lecturas de cada una de las soluciones las cuales arrojaron los
siguientes datos:
0% Hemolisis 2.8076
Butanol 62.793
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PRCTICA No. 5
Accin de lisosomas
Introduccin
Los lisosomas promueven la digestin intracelular, tanto del material exgeno que
penetra en la clula por pinocitosis, como tambin el material endgeno. Este ltimo
puede estar constituido por orgnulos degenerados o por productos de desasimilacin
del metabolismo celular.
Objetivo
Material
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Termmetro.
Hoja de papel aluminio.
Reactivos
Solucin de Rojo Congo al 0.4%
Material biolgico
Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.)
Procedimiento
Al hacer las observaciones al microscopio de cada uno de los tubos, poniendo atencin
al grado de tincin que se presentaron se observ que cuando se presentaron los
cambios fuertes de temperatura y con la exposicin a la luz el color se hizo ms oscuro,
mientras que el tubo que estuvo protegido de la exposicin su color se mantuvo claro.
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PRCTICA No 6
Introduccin
La clula es la unidad bsica de la vida que contiene una amplia variedad de distintos
tipos de orgnulos. Si se requiere estudiar la funcin particular de los cloroplastos u otro
orgnulo resulta de gran valor poder aislar en estado puro el orgnulo que interesa. La
separacin de un orgnulo, por lo general se hace mediante la tcnica de centrifugacin
diferencial, la cual depende del principio de que las partculas de tamao diverso se
desplazan hacia el fondo del tubo de centrifuga a diferentes velocidades cuando se les
coloca en un campo centrfugo.
Objetivo:
Materiales y Reactivos
Linterna
Mortero y pistilo
Pipeta de 10 ml.
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Pipeta de un ml
Vaso de precipitados de 100 ml. Tijeras.
6 tubos de ensayo 15mm X 150 mm. y Gradilla.
Embudo.
Bolsa de hielo.
Sobre de gasas.
Charola metlica.
Pipeta Pasteur con goma.
Cubeta con agua destilada.
3 espectrofotmetros.
6 celdas para espectrofotmetro.
Una centrfuga clnica.
6 tubos para centrfuga.
Solucin de NaCl 0.35 M en Buffer de fosfatos 0.02 M, pH 8. (buffer salino)
Solucin de DCPIP 0.3 M.
Material biolgico
Procedimiento
Se desech el precipitado.
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Al final de este tiempo se descart el sobrenadante y el precipitado se suspende en
buffer salino fro utilizando en total 2 ml por cada tubo.
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Tubo 1 2 3 4
(este tubo no se
(Blanco)
expone a la luz)
Suspensin 0.2 ml __ __ __
cloroplastos con
SHOCK osmtico
Antes de proceder a tomar las lecturas correspondientes debe agitar perfectamente bien
todos los tubos.
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Presentacin de resultados
Tubo 1. Suspensin
cloroplastos con SHOCK 7.2021 9.3750
osmtico
Tubo 2. Suspensin de
Cloroplastos intactos 2.7954 3.2837
(expuesto a la luz)
Tubo 3. Suspensin de
Cloroplastos intactos (no 3.7354 5.707
expuesto a la luz)
Tubo 4. Blanco 10.022 11.365
Nota: el Buffer presenta contaminacin por lo tanto los valores deben ser confirmados.
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PRCTICA No 7
Meiosis y Mitosis
Son procesos de divisin celular, la meiosis consiste en que una clula madre al
dividirse produce dos clulas hijas que contienen la mitad de cromosomas que la clula
madre; la mitosis se da cuando la clula duplica su material gentico y produce dos
clulas hijas idnticas a la clula madre.
Objetivo
Material
Microscopio.
Aceite de inmersin.
Acetocarmn
Metanol
Bistur
Micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis.
Procedimiento mitosis
o Se gir el revolver hasta que el lente de 100 x y el de 40x deja el espacio libre
en el centro para aplicar la gota de aceite.
o Se subi el condensador hasta que la luz se concentr e indic el punto donde
se debe aplicar la gota.
o Se ubic la lmina micropreparada del pice radical de la cebolla
o Se ubic el objetivo de inmersin 100x
o Se subi la platina observando directamente hasta que la gota subi.
o Al terminar la observacin se limpi el objetivo con alcohol isoproplico.
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Presentacin de resultados
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Procedimiento meiosis
o Se gir el revolver hasta que el lente de 100 x y el de 40x deja el espacio libre
en el centro para aplicar la gota de aceite.
o Se subi el condensador hasta que la luz se concentr e indic el punto donde
se debe aplicar la gota.
o Se ubic la lmina micropreparada del corte transversal del testculo de ratn
o Se ubic el objetivo de inmersin 100x
o Se subi la platina observando directamente hasta que la gota subi.
o Al terminar la observacin se limpi el objetivo con alcohol isoproplico.
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REFERENCIAS
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Mecanismos De Accin Hormonal A Travs De Receptores Ubicados En La Membrana
Celular. Recuperado de: http://www.cpicmha.sld.cu/hab/pdf/vol11_1_05/hab08105.pdf
Bruce, A., Lewis J., Raff, M., Roberts K. & Walter P. (2004). Biologa Molecular De La
Clula. Editorial Omega. 4 Edicin
Campbell, Neil A., Reece Jane B. (2007). Biologa. Espaa:Ed. Mdica Panamericana.
De Robertis, E., Hib, J. & Ponzio, R. (2009).Biologa Celular y Molecular. Buenos Aires.
Ed. El Ateneo.
Freeman, Scott. (2009). Biologa. Pearson Ediciones. 3 edicin. Pierce B.A. 2005.
Gentica: Un enfoque conceptual. Mxico. Editorial Mdica Panamericana.
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