Departamento de Qumica

Tratamento do bambu Dendrocalamusgiganteus com nano partculas

de prata revelam possvel associao com o amido

Aluno: Guilherme Borba Neumann

Orientadores: Fatima Ventura Pereira Meirelles
Omar Pandoli

Introduo
Em um mundo desejoso por solues sustentveis, o bambu apresenta-se como
forte aliado construo civil, substituindo de forma eficiente, em muitos casos, a
explorao da madeira convencional, devido a sua alta durabilidade, resistncia
mecnica, disponibilidade na natureza, crescimento rpido e fcil manejo.
A compreenso acerca da matriz biolgica destes vegetais de grande utilidade
para que ocorra o seu tratamento contra o ataque de pragas como insetos e fungos, a fim
de maximizar o seu uso. Dendrocalamus giganteusMunro, pertencente famlia
Poaceae, uma espcie nativa da Malsia - com crescimento mdio de 22cm ao dia,
podendo chegar at 30 metros de altura e 30cm de dimetro, de grande importncia
econmica no Brasil e no mundo [1].
Trabalhos recentes comprovaram a eficincia de nano partculas de prata (NPs-
Ag) como agentes antimicrobianos, a partir da larga rea de superfcie x volume
associada s propriedades fsico-qumicas j conhecidas deste metal [2]. Tais nano
partculas apresentaram grande potencial antimicrobiano mesmo em bactrias
patognicas resistentes aos antibiticos, sendo estveis em altas temperaturas e pouco
volteis [2].
sabido que nas clulas parenquimticas do colmo localiza-se o amido,
principal polmero utilizado como reserva energtica, na alimentao dos
microorganismos, e tambm de certos invertebrados (besouros, por exemplo). Tal
observao tornou-se objeto de investigao neste trabalho.
O amido armazenado no rizoma e no colmo do bambu, como fonte de energia
para a produo de novos brotos. O crescimento destes brotos se d principalmente por
via da gliclise, que utiliza dos carboidratos sintetizados na fotossntese, armazenados
em forma de amido [3]. Entretanto, devido as diferenas quantitativas[4], o amido para
armazenamento temporrio, sintetizado nos cloroplastos e, o amido para
armazenamento de longo-prazo sintetizado nos amiloplastos das partes no
fotossintticas das plantas razes, sementes e tubrculos (caules subterrneos).
A quantidade de amido varia em diferentes estaes, em diferentes regies do
colmo e em diferentes idades do indivduo. Regies da base apresentam menor
quantidade do que as regies medianas e do pice do colmo. Perodos mais secos so
mais suscetveis sntese de amido, j que o armazenam para ser utilizado no
brotamento, nas estaes mais midas do ano. Indivduos jovens no possuem grandes
quantidades de reserva de amido, visto que metabolizam a glicose para o crescimento
vegetativo, enquanto que indivduos mais velhos apresentam reservas mais abundantes
[3].
O parnquima, comumente tratado como tecido fundamental ou de
preenchimento a principal sede de atividades essenciais, como a fotossntese,
assimilao, respirao, armazenamento, secreo e excreo. Suas clulas possuem
paredes delgadas, primrias e no lignificadas [5]. Assim como as demais espcies de
monocotiledneas, as espcies da famlia Poaceae no possuem diferenciao entre
Departamento de Qumica

crtex e medula, com seus feixes vasculares dispersos no parnquima, nossa zona de
observao.

Objetivo
Analisar a estrutura anatmica do colmo de Dendrocalamus giganteus,
identificando seus respectivos tecidos, assim como a distribuio das nano partculas de
prata no rgo, buscando testar e estabelecer a metodologia para extrair e quantificar o
principal polissacardeo de interesse, o amido.

Metodologia
Sntese de NP-Ag
A sntese das NPs-Ag foi realizada como previamente descrito em [6], utilizando
nitrato de prata (AgNO3) na presena do agente redutor borohidreto de sdio (NaBH 4) e
de agente ligante citratotrissdico (Na3C6H5O7), numa concentrao molar de 10-2 mol
L-1, pelo processo em batelada.

Anlise anatmica do bambu

Para a anlise anatmica do bambu foram realizadas duas fotomicrotomografias
(Tomgrafo Zeiss - Xradia 510, tenso de 50 kV, corrente de 80 Ampere, lente 4X,
com tempo de exposio por projeo de 1 segundo)da seo interna do colmo de D.
giganteus tratadas com a soluo coloidal de Ag-NPs na concentrao molar de 10-2 mol
L-1, com e sem lavagem. Na amostra em que houve a lavagem, esta foi realizada duas
vezes com gua 25 e 50C [7].

Extrao do amido
Antes do procedimento de extrao foram construdas curvas padres para
glicose (10mol/mL) e para a hidrlise do amido (4mg/mL), pelo mtodo de DNS.
Cada curva continha cinco amostras, e o branco que era descontado. O teste foi
realizado em duplicata.
Para a extrao do amido do bambu, aproximadamente 4,0g de bambu pr-
triturado foram submetidos fervura em banho-maria por 1 hora 100C em 100mL de
gua destilada, sob agitao. O indivduo amostrado possua 4 anos de idade, sendo
utilizado parte do corte da base do colmo.
Aps a extrao, o material foi peneirado, sendo a soluo depositada em uma
proveta de 100mL seguindo o mtodo de obteno de precipitados de Azzini [8], que
descreve sucessivas decantaes, em diferentes tempos. Aps trs decantaes a soluo
sobrenadante restante foi dividida em frascos menores de mesmo volume, a fim de que
a secagem ocorresse mais rapidamente. O experimento foi realizado duas vezes, como
resumido na figura 1.
Departamento de Qumica

Figura 1- Mtodo utilizado para extrao do amido em D. giganteus

Algumas diferenas ocorreram entre os experimentos 1 e 2, a fim de melhor

implementar a tcnica de extrao do amido.
No experimento 1, aps 10 minutos da filtrao, a primeira amostra de
precipitados foi retirada com o auxlio de uma pipeta graduada (P1). A segunda
decantao se seguiu por 24 horas, retirando-se uma segunda amostra de precipitados
(P2) tendo sido armazenada juntamente com a primeira amostra que j havia secado em
temperatura ambiente. Depois da segunda decantao, a soluo sobrenadante foi
dividida em 7 frascos com o mesmo volume da amostra dos precipitados,
aproximadamente 8,7mL cada, denominados S1,S2 ... S7. Todo o material foi seco na
estufa 60C durante o perodo de 4 dias. Com este experimento determinamos o erro
da metodologia
J no experimento 2 trs amostras de precipitados foram obtidas, em diferentes
tempos de decantao (20 minutos, 24 horas e 48 horas, respectivamente), sendo
armazenadas separadamente (P1, P2 e P3). A amostra sobrenadante foi dividida em trs
frascos com aproximadamente 11,67mL cada (S1, S2 e S3).
A amostra P3 do experimento 2 no foi quantificada e ser usada para anlise do
amido extrado por espectro Raman e infravermelho.
Departamento de Qumica

Aps secas, as amostras foram ressuspendidas individualmente em 2,00mL de

gua destilada e utilizadas nas etapas subsequentes.
Hidrlise do amido
Alquotas nos valores de 0,50mL de cada uma das amostras foram submetidas ao
processo de hidrlise do amido com HCl [9] por 30 minutos e posterior quantificao da
glicose produzida pelo mtodo de DNS[9]. Alquotas de 0,10 e 0,30 mL tambm foram
submetidas ao procedimento. Em cada umas das alquotas foram adicionadas 0,50 mL
de soluo de HCl 2N (avolumando-se as amostras 1mL com gua destilada), para que
todos os volumes fossem iguais, durante 30 minutos em banho-maria 100C.
Aps hidrolisadas, 1,00mL de soluo de NaOH 1N foi adicionada em cada uma
das amostras a fim de reajustar o pH. Homogeneizadas, foram retiradas alquotas de
1,00mL de cada uma das amostras e realocadas para outros tubos para quantificao da
glicose gerada, pelo mtodo do DNS.
O procedimento encontra-se esquematizado na Figura 2

Figura 2 - Mtodo utilizado para quantificao do amido extrado em D. giganteus (DNS)

Dosagem de glicose pelo mtodo do DNS

*Aos tubos contendo 1,00 mL do hidrolisado foi adicionado 1,00mL de soluo
DNS. Recebida a soluo DNS, cada uma das solues fora levada banho-maria por 5
minutos. Aps este tempo foi acrescentado mais 10,00ml de gua destilada para que
fosse realizada a leitura no espectrofotmetro, 540nm [9].

Demais metodologias
Concomitantemente aos testes do amido foram realizados testes
microbiolgicos, junto com outro membro da equipe. Nestes experimentos foram
necessrias a utilizao de mtodos de preparo de meios de cultura, de plaqueamentos,
repiques etc, como descritos anteriormente [6].

Resultados e Discusso
Microtomografia
As figuras de 3 a 9 apresentam as tomografias do colmo do bambu. Os
agregados metlicos podem ser observados em branco, visto que os raios X no so
capazes de atravess-los, o que significa dizer que as nano partculas esto se
Departamento de Qumica

distribuindo dentro do tecido parenquimtico, numa possvel associao com o amido, o

qual armazenado nos cloroplastos das clulas deste tecido (figura 10).

Figura 3 - Fotomicrotomografia de corte transversal do colmo de D. giganteus

Figura 4 - Fotomicrotomografia da seo longitudinal do colmo de D. giganteus.

Departamento de Qumica

Figura 5 - Sees longitudinal e transversal de D. giganteus

Figura6 - Agregados metlicos (branco) na matriz do colmo de D. giganteus.

Departamento de Qumica

Figura 7 - Agregados metlicos (branco) na matriz do colmo de D. giganteus.

Figura 8 - Agregados metlicos (branco) na matriz do colmo de D. giganteus.

Departamento de Qumica

Figura9 - Agregados metlicos (branco) na matriz do colmo de D. giganteus.

Figura 10 Amido nas clulas parenquimticas do colmo do bambu por Liese [3]
Departamento de Qumica

Curva Padro
As curvas padres tpicas de glicose e de hidrlise do amido pelo mtodo de
DNS so apresentadas nos grficos 1 e 2, respectivamente.

Grfico 1 Grfico do padro de glicose pelo mtodo de DNS

Grfico 2 - Grfico do padro de amido hidrolisado em glicose pelo mtodo de DNS

Por questes operacionais, a hidrlise foi feita por 30 minutos, entretanto como
observado em hidrlises anteriores realizadas pela equipe, com1 hora h o dobro de
formao de produtos, sendo no muito significante as diferenas nas hidrlises com
mais de 1 hora. Assim pode-se dizer que para as concentraes testadas a hidrlise total
alcanada em 1h.

Extrao do amido do bambu

Os resultados da extrao do amido do bambu so apresentados a seguir. Os
valores da glicose obtida pela hidrlise do amido extrado, em mg, foi dada pela razo
entre absorvncia e coeficiente angular da reta do padro da glicose. Para cada
experimento foram utilizadas novas curvas da glicose feitas no dia da extrao.
glicose (mg) = abs/coef. Angular glc
Departamento de Qumica

O amido hidrolisado (Tabela 1) foi quantificado a partir da razo entre a massa

de glicose quantificada e o coeficiente angular da curva padro de hidrlise do amido,
apresentado no grfico 2.
Amido hidrolisado (mg) = glicose (mg) /coef. Angular amido

Tabela 1 Resultados da hidrlise do amido extrado do bambu - Experimento 1

Alquotas de amido Amido
hidrolisado (mL) hidrolisado
(mg) mdia+dp (mg) Erro (%)
Precipitado 0,1 0,8155 0,8155 -
0,3 2,5167 2,5167 -
0,5 1,4600 1,4600 -
Sobrenadante 0,1 0,1354 0,1136 + 0,0196 17,2
0,1076
0,0976
0,3 0,5143 0,4275 0,0753 17,6
0,3895
0,3788
0,5 1,3008 0,9894 0,2699 27,2
0,8445
0,8230

Foi obtido um maior erro nas alquotas de 0,5, que podem ser reflexo da
dificuldade de homogeneizao de amostras, do tempo de hidrlise, entre outros. As
alquotas de 0,3 e 0,1 apresentaram menor erro, o que indica que alquotas maiores
talvez necessitem maior tempo de hidrlise. Entretanto, devido aos baixos valores de
absorvncia, com valores abaixo dos encontrados na curva padro, os resultados em
negrito na tabela no so confiveis para anlise e no foram, portanto utilizados no
clculo do total de amido extrado.
O grfico 3 apresenta os resultados do experimento 2. As barras representam o
desvio padro das amostras do sobrenadante.

Grfico 3- Quantidade de glicose quantificada na extrao do amido no experimento 2

Departamento de Qumica

Segundo Azzini [8], o primeiro precipitado corresponde aos resduos da

extrao, que decantam em alguns minutos. J a segunda decantao, com durao de
24 horas corresponde precipitao do amido. A partir disso, o grfico pode ser
observado luz destas informaes - embora anlises moleculares ainda no possam
provar a natureza qumica de tais precipitados -, p2 seria a glicose quantificada do
amido e p1 a glicose quantificada do resduo.
De acordo teste estatstico de Kruskal Wallis, no h diferena significativa
entre os valores dos frascos do sobrenadante nem no experimento 1 (p-value =0.6703)
nem no experimento 2 (p-value=0,8371) [10], ou seja, estatisticamente S1=S2=S3.
O amido total obtido em ambos os experimentos diverge daqueles encontrados
na literatura por AZZINI 29,66% - 41,07% [8] e por HINO 3,28% - 9,40% [11],
quantificados a partir da massa extrada da haste do bambu. No corrente estudo, foram
encontrados teores de 2,2 % , quantificados como amido hidrolisado em glicose, a partir
do mtodo de DNS. Tal resultado advm de 4g de uma nica regio da haste - a base -,
que apresenta menor quantidade de amido [12]. Portanto, a comparao entre os dados
atuais com a literatura de difcil realizao.

Concluso
As imagens obtidas permitiram verificar que as nano partculas de prata so
encontradas na mesma regio onde se localiza o amido. Tais resultados sugerem uma
possvel interao entre estas espcies qumicas.
Variaes do protocolo de extrao de Azzini permitiram verificar que o amido
pode ser extrado do bambu triturado, em diferentes tempos e propores, sendo
necessria a escolha da alquota adequada em cada experimento, por ser determinante
no resultado.
A utilizao do mtodo de DNS foi eficaz para a determinao dos baixos teores
de amido (na forma de glicose) presentes no bambu visto que outras metodologias so
menos sensveis e fornecem resultados duvidosos, como a dosagem de antrona, muitas
vezes utilizadas.
Por fim, podemos dizer que o tratamento do bambu com NPs-Ag demonstra ser
uma estratgia protetora eficiente para melhorar as propriedades do vegetal com vistas a
sua utilizao em diversos setores, como por exemplo, a construo civil.

Referncias
1- MARINHO, N. P. Caractersticas das Fibras de Bambu(Dendrocalamus
giganteus) e Potencial Aplicao em Painis de Fibra de Mdia Densidade
(MDF). 2012. 144 folhas. Dissertao de Mestrado. Universidade Federal do
Paran Curitiba.
2- RAI M., YADAV A., GADE A. Silver nanoparticles as a new generation of
antimicrobials. Biotechnology Advances, Volume27, Issue 1, JanuaryFebruary
2009, Pages 76-83.
3- LIESE, W. The anatomy of Bamboo Culms. Tech. Rep. 18, International
Network for Bamboo and Rattan (INBAR). Beijing, 1998.
4- NELSON, D.L., COX M.M. 2011. Princpios de Bioqumica de LEHNINGER,
5 ed. Coord. Trad. F. Horn. Editora ARTMED, Porto Alegre.
5- EVERT, R.F. 2013. Anatomia das plantas de Esau, meristemas, clulas e tecidos
do corpo da planta: sua estrutura, funo e desenvolvimento, 3ed. Coord. Trad.
C.R.Marcati. Editora Edgard Blucher, So Paulo.
Departamento de Qumica

6- PANDOLI, O, PEREIRA-MEIRELLES, F.V., LUZ, E, DEL ROSSO, T,

ASSUMPO, A., MARTINS, R., GHAVAMI, C. Sintesys of silver
nanoparticle with potential antifungical activity for treatment of bambu. Livro
de trabalhos (Full paper)15th International Conference on Non-conventional
Materials and Technologies: Construction for sustainable development
(NOCMAT 2014), Pirassununga, Brazil (Novembro 2014).
7- PANDOLI, O, MARTINS, R, LUZ, E, ROMANI, E.C., PACIORNIK, S.
ALVES, H., MAURCIO, M.H.P., PEREIRA-MEIRELLES, F.V., LUZ, E,
GHAVAMI, C. Microtomography study of bamboo empregnated with silver
nanoparticles (nps-ag) Livro de trabalhos (Full paper)16th International
Conference on Non-conventional Materials and technologies : Construction for
sustainable development (NOCMAT 2015), Winnipeg, Canada (Agosto 2015).
8- AZZINI, Ansio. Amido a partir de bambu. Bragantia, Campinas , v. 43, n.
1, p. 45-50, 1984
9- PEREIRA-MEIRELLES, F.V Apostila de Laboratrio de Bioquimica,
Departamento de Qumica, PUC-Rio, (2000) adaptado de MILLER, G. L. Use
of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar.
AnalyticalChemistry, Washington, US, v. 31, n. 3, p. 426- 428, Mar. 1959.
10- R Core Team (2014). R: A language and environment for statistical computing.
R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria.URL http://www.R-
project.org/.
11- HINO, I. Iconesfungorumbambusicolorumjaponicorum. Yamagutiensi.
FacultateAgriculturae in Universitate., 1961. 336p. il.
12- AZZINI,A. GONDIM-TOMAZ, R.M.A. Extrao de amido em cavacos de
bambu tratados com soluo diluda de hidrxido de sdio. Bragantia,
Campinas, 1996.