Criminalstica biolgica

Autor(es): Pinheiro, M. Ftima

Publicado por: Imprensa da Universidade de Coimbra
URL URI:http://hdl.handle.net/10316.2/38503
persistente:
DOI: DOI:http://dx.doi.org/10.14195/978-989-26-0957-7_2

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PRINCPIOS
DE GENTICA
FORENSE
FRANCISCO CORTE-REAL
DUARTE NUNO VIEIRA
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica 41

Captulo 2
CRIMINALSTICA BIOLGICA

M. Ftima Pinheiro
Professora Afiliada do ICBAS, Universidade do Porto
Professora Afiliada da Faculdade de Medicina, Universidade do Porto
Membro do CENCIFOR (Centro de Cincias Forenses)
DOI | HTTP://DX.DOI.ORG/10.14195/978-989-26-0957-7_2
42
RESUMO
So abordados os objetivos das percias de Gentica
Forense na perspetiva da identificao gentica de amos-
tras biolgicas (problema e de referncia) colhidas no
mbito das percias de criminalstica biolgica, bem como
os captulos e as particularidades a mencionar no respetivo
relatrio pericial. Para alm da referncia aos marcadores
genticos mais usados na atualidade, para a resoluo
deste tipo de percias, so indicados os principais tipos
de crimes relacionados com os quais so solicitadas as
referidas percias. Acresce as respetivas amostras bio-
lgicas colhidas nos diferentes delitos (sangue, smen,
saliva, pelos e clulas epiteliais). Por fim, so enumeradas
as concluses possveis do relatrio pericial, assim como
a respetiva valorizao da prova, quando se verifique a
concordncia de perfis genticos da(s) amostra(s) proble-
ma com a amostra de referncia.
PALAVRAS-CHAVE
Criminalstica biolgica; amostras biolgicas; relatrio
pericial.
M. FTIMA PINHEIRO
SUMMARY
The objectives of the exam of Forensic Genetics are
addressed from the perspective of genetic identification
of biological samples (problem and reference) collected
within the expertise of biologic criminalistics, as well as
chapters and particularities to mention at the appropriate
expert report. Apart from the reference to the genetic
markers most used today, to solve this kind of expertise,
are listed the main types of related crimes with which
these exams are required, and the respective biological
samples taken at different crimes (blood, semen, saliva,
hair and skin cells). Finally, the possible conclusions of
the expert report are listed, as well as the respective
weighing of the evidence, if there is agreement from
genetic profiles of unknown sample(s) with the refe-
rence sample.
KEYWORDS
Biologic criminalistics; biological samples; expert report.
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
1. I N T RO D U O
A identificao gentica em material biol-
gico relacionado com percias do mbito da in-
vestigao de parentesco, criminalstica biolgica
e identificao individual (em especial de restos
cadavricos), com a utilizao de marcadores ge-
nticos, tambm chamados polimorfismos de DNA
(cido Desoxirribonucleico), tem sido ao longo dos
tempos o principal objetivo da Gentica Forense.
Na atualidade, o recurso s mais eficazes e ino-
vadoras metodologias e tecnologias possibilita o
estabelecimento de concluses, no contexto de
relatrios periciais, inimaginveis h ainda escas-
sas dcadas. No presente, para alm dos meios
usados no quotidiano laboratorial, existe uma
panplia de solues inovadoras que, num futuro
prximo, podero propiciar a obteno de resul-
tados conducentes cabal e rpida identificao
gentica individual. Esta circunstncia ter uma
utilidade irrefutvel em vrios contextos, designa-
damente na investigao criminal (Pinheiro, 2009).
Em relao aos trs tipos de percias men-
cionadas, so colhidas amostras biolgicas e/ou
recebido material biolgico de natureza diversa,
sendo efetuada a interpretao e valorizao es-
tatstica dos resultados, aps o percurso labora-
torial apropriado para cada caso. As concluses
da percia constam no relatrio pericial, enviado
entidade requisitante, que ir constituir prova
em tribunal (Pinheiro, 2009).
Criminalstica, de acordo com Villanueva
Caadas, a cincia que estuda os indcios
deixados no local do delito, graas aos quais
possvel estabelecer, nos casos mais favorveis,
a identidade do criminoso e as circunstncias
que concorreram para o referido delito. O seu
43
interesse reside no facto de se procurar vest-
gios anatmicos, biolgicos ou humorais que
permitam estabelecer a identidade do autor do
crime, sendo que a criminalstica biolgica se
ocupa dos de natureza estritamente biolgica.
Estas amostras ou vestgios biolgicos so
colhidos, em geral, no local do crime, corpo ou
peas de vesturio da vtima ou do suspeito.
A identificao gentica destas amostras feita
atravs do estudo do DNA. Para se realizar este
estudo necessrio qualquer tipo de mancha ou
produto que contenha material gentico. Este
material gentico encontra-se em todas as clulas
nucleadas do organismo humano e possui caracte-
rsticas importantes para a identificao gentica,
j que o DNA nuclear (DNAnu) dos autossomas
(cromossomas no sexuais), estudado no mbito
da Gentica Forense, nico para cada indivduo
(excetuando os gmeos monozigticos), sendo
idntico em todas as suas clulas; ou seja, estu-
dando qualquer vestgio biolgico pode-se iden-
tificar o indivduo ao qual esse vestgio pertence.
Deste modo, a percia de Gentica Forense
realizada em amostras biolgicas de natureza
diversa (sangue, smen, pelos, saliva, clulas
epiteliais), colhidas em distintos suportes (corpo
da vtima ou do suspeito, peas de vesturio,
roupa de cama, entre outros), no contexto da
investigao da prtica de um crime, consiste no
seu estudo laboratorial, a fim de se estabelecer
o perfil gentico. A anlise dos resultados inci-
de sobre a comparao do perfil gentico das
amostras biolgicas relacionadas com o delito
(amostras problema) com os perfis genticos da
vtima e do suspeito (amostras de referncia).
A existncia de concordncia entre o perfil ge-
ntico da amostra biolgica relacionada com o
44
delito e o perfil gentico do suspeito fortemente
indicativa de que este foi o seu dador. Neste caso,
faz-se a valorizao dos resultados atravs da
determinao do Likelihood Ratio (LR).
No relatrio pericial deve constar, entre ou-
tras particularidades do caso em estudo, informa-
o relativa entidade requisitante, referncia ao
material enviado para exame, descrio porme-
norizada desse material, metodologias usadas e
respetivas referncias bibliogrficas, resultados
e concluses, nas quais pode ser includo o LR.
Sero efetuadas referncias ao Servio de
Gentica e Biologia Forense da Delegao do
Norte, do Instituto Nacional de Medicina Legal,
IP, identificado no texto por SGBF, DN.
2 . P O L I M O R F I SM OS D E D N A
(M A RC A D O R ES G E N T I COS)
M A I S USA D OS
Nas clulas nucleadas humanas existem dois
tipos de DNA, o DNA nuclear (DNAnu) e o DNA
mitocondrial (DNAmt).
O DNA do ncleo das clulas est organi-
zado em cromossomas, apresentando-se alta-
mente compactado e protegido por protenas
denominadas histonas. Uma nica cpia do ge-
noma humano constituda por cerca de 3.200
milhes de pb (pares de bases), sendo que cada
clula somtica possui 22 pares de autossomas
e dois cromossomas sexuais (X,Y no homem e
X,X na mulher). Assim, cada clula somtica hu-
mana normal possui 46 cromossomas (23 pares
de cromossomas), sendo, por isso, designada de
diplide. As clulas germinais ou gmetas (ov-
citos e espermatozoides) encontram-se na forma
M. FTIMA PINHEIRO
haplide, por possurem apenas um conjunto de
23 cromossomas. Aquando da fecundao o zigo-
to, derivado da juno dos dois gmetas, resulta
diplide (Pinheiro, 2010b).
A resoluo dos casos forenses consta da
identificao gentica das amostras biolgicas
com eles relacionadas e baseia-se na caracteriza-
o de polimorfismos do DNA, tambm chamados
de marcadores genticos, das regies no codifi-
cantes do genoma humano. Atualmente, para a
concluso das percias forenses usa-se preferen-
cialmente o DNAnu, podendo em circunstncias
especiais utilizar-se o DNA mitocondrial (DNAmt).
Para alm das suas diferenas de tamanho e es-
truturais, apresentam distintas formas de herana,
pois, o DNAnu herdado de ambos os progenito-
res, exceo do cromossoma Y, sendo o DNAmt
de herana uniparental materna (Pinheiro, 2010b).
Aproximadamente 3% do genoma humano
constitudo por repeties em tandem. Trata-se
de sequncias de DNA no codificante que se
repetem sucessivamente, cuja diferenciao entre
indivduos da mesma espcie reside no nmero de
repeties que cada indivduo apresenta para um
determinado locus de um par de cromossomas
homlogos. A herana do nmero de repeties
obedece s Leis da Hereditariedade estabelecidas
por Mendel, tal como a de qualquer outro poli-
morfismo usado com fins forenses. Assim, este
DNA repetitivo, excetuando o DNA satlite que
se encontra nas proximidades dos centrmeros
dos cromossomas, classificado em dois grupos,
minissatlite e microssatlite, de acordo com o
tamanho da sequncia de repetio (unidade de
repetio) (Pinheiro, 2010b).
So, fundamentalmente, as regies micros-
satlite do genoma que constituem a base da
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
identificao gentica. Trata-se de marcadores
genticos, designados de STRs (Short Tandem
Repeats), que consistem em sequncias de DNA
de 2-7 pb, dispersas pelo genoma, que se repetem
em tandem, cujo tamanho dos alelos inferior
a 350 pb.
A importncia da anlise destas sequncias
de DNA no codificante, em percias de Gentica
Forense, prende-se com o facto de no estarem
relacionadas com a sntese de protenas e, por isso,
no haver qualquer correlao que permita dedu-
zir a predisposio do dador da amostra biolgica
para manifestar uma determinada patologia.
O nmero de repeties para cada polimor-
fismo pode variar de indivduo para indivduo.
Esta caracterstica permite diferenciar indivduos
de uma determinada populao, mesmo irmos
germanos (filhos do mesmo pai e da mesma
me) e at gmeos dizigticos, porque os mo-
nozigticos possuem para estes marcadores in-
formao gentica idntica, salvo raras excees
(existncia de mutaes). Evidencia-se que as
sequncias de DNA codificante, que possuem
informao gentica para a produo de pro-
tenas, so praticamente idnticas para todos
os indivduos, razo pela qual estas regies do
genoma no so as indicadas para distinguir
indivduos de uma populao, no sendo, por
isso, as eleitas em Gentica Forense. Esta prer-
rogativa desmistifica o argumento, por vezes
apresentado, de que se pode inferir, a partir da
anlise de amostras biolgicas, a predisposio
de um determinado indivduo para contrair uma
certa doena, circunstncia que podia ser apro-
veitada por empregadores para rejeitar contratos
ou por seguradoras para onerar a prestao de
um seguro, entre outras consequncias.
45
No obstante existirem STRs com o tamanho
da unidade de repetio varivel (2-7 pb), os mais
usados em Gentica Forense so os tri, tetra e
pentanucleotdicos, sendo os tetranucleotdicos
(unidade de repetio com 4 nucletidos, por
ex. GATA) os mais utilizados. Calcula-se que o
genoma humano contenha, aproximadamente,
500.000 STRs, dos quais 6.000 a 10.000 so tri
ou tetramricos.
As principais vantagens dos STRs prendem-
-se, fundamentalmente, com o facto de possu-
rem alelos de tamanhos prximos, o que possi-
bilita a realizao da sua anlise em simultneo
(multiplex) e a capacidade de gerarem produtos
de amplificao de pequeno tamanho, o que
benfico, tendo em considerao a anlise de
DNA de amostras degradadas.
O percurso laboratorial das amostras pro-
blema no contexto da criminalstica biolgica
inclui, habitualmente, os seguintes passos: a)
observao do material recebido; b) descrio
do material recebido; c) testes preliminares para
determinao da natureza da amostra biolgica
(sangue, smen, saliva); d) extrao do DNA;
e) quantificao do DNA (Real-Time qPCR); f)
amplificao do DNA por PCR (em termocicla-
dores); g) anlise dos produtos amplificados
(em sequenciadores automticos); h) anlise
dos resultados obtidos (comparao do perfil
gentico da(s) amostra(s) problema(s) com o(s)
da(s) amostra(s) de referncia(s)); i) valorizao
estatstica dos resultados (por vezes no includa
no relatrio pericial); j) elaborao do relatrio
pericial.
A(s) amostra(s) de referncia segue(m) o
mesmo percurso laboratorial, exceo dos 3
primeiros passos.
46
2.1. STRS AUTOSSMICOS
2.1.1. Consideraes gerais
O estudo de STRs autossmicos realiza-
do na resoluo de todo o tipo de percias de
Gentica Forense, recorrendo-se anlise de ou-
tros grupos de polimorfismos do DNA quando se
pretende obter informao adicional, ou quando
o material gentico se encontra em quantidade
exgua e/ou degradado, e no possvel a ob-
teno de resultados. Esta circunstncia deve-se
ao facto dos marcadores autossmicos sofrerem
recombinao gentica (processo atravs do qual
a descendncia produz uma combinao de genes
diferente dos seus progenitores). Por isso, apre-
sentam uma grande variabilidade, o que propor-
ciona um maior poder de informao. Os STRs do
cromossoma Y e o DNA mitocondrial, por serem
haplides, no sofrem recombinao, exibindo,
por isso, uma variabilidade gentica inferior.
Para a tipagem de STRs autossmicos so
usados, em geral, kits que possibilitam a anlise
simultnea de 15 loci STR (sistemas multiplex) e a
Amelogenina. Os que tm sido mais utilizados so
o AmpFlSTR Identifiler (Applied Biosystems) e
o Powerplex 16 (Promega). Em casos complexos,
em que manifesta a necessidade de incrementar
o poder informativo, tm sido usados outros kits
para a caracterizao de marcadores genticos
adicionais.
Em estudo realizado em amostras prove-
nientes de indivduos no relacionados do Norte
de Portugal, foram determinadas as frequncias
dos alelos, bem como os parmetros de interesse
forense, com o AmpFlSTR Identifiler (Pinheiro
e col., 2005).
M. FTIMA PINHEIRO
Estas duas empresas fizeram, recentemente,
grandes investimentos na produo de kits para
a caracterizao destes marcadores genticos,
tendo em considerao trs aspetos fundamen-
tais: a) introduo de novos polimorfismos que
proporcionem um maior poder de informao
(poder de discriminao); b) caraterizao de po-
limorfismos de pequeno tamanho (miniSTRs), que
permitam a obteno de resultados em amostras
degradadas e/ou com quantidades diminutas de
material gentico; c) alterao da sua qumica para
obviar o passo de extrao do DNA no percurso
laboratorial, o que torna mais rpida a anlise de
amostras biolgicas.
Estas modificaes tm tido um grande
impacto no desempenho laboratorial, em parti-
cular as duas primeiras, com especial repercus-
so no maior poder informativo proporcionado.
, tambm, de destacar a obteno de melhores
resultados no contexto da anlise de amostras
com quantidades deficientes de DNA degrada-
do, circunstncia bastante frequente em percias
de criminalstica biolgica e de identificao de
restos cadavricos.
Estes resultados otimizados aliados ao in-
cremento do poder informativo so traduzidos
no relatrio pericial, em especial quando existe
concordncia de perfis (do vestgio e do suspeito)
no caso da criminalstica biolgica, sendo que a
relao da probabilidade do vestgio pertencer ao
suspeito e a probabilidade de pertencer a qualquer
outro indivduo da populao ser extraordina-
riamente elevada (LR). Por outro lado, quando
se trata da identificao de restos cadavricos,
por exemplo no mbito de uma investigao cri-
minal, esse incremento de informao genti-
ca reveste-se do maior interesse, uma vez que,
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
frequentemente, a comparao feita entre as
caractersticas genticas desses restos cadavricos
e as dos seus possveis familiares, cujo grau de
parentesco no , algumas vezes, to prximo
como o que seria desejvel. Por isso, a utilizao
de um maior nmero de marcadores altamente
informativos e que proporcionem resultados mes-
mo com material degradado de grande interesse
para a concluso da percia.
H, tambm, um outro aspeto de especial
importncia quando se est a analisar material
gentico de uma amostra biolgica, que a deter-
minao do sexo do indivduo do qual ela provm.
Esta determinao feita concomitantemente
com o estudo de STRs autossmicos. Esta pos-
sibilidade de determinao do gnero, atravs
do estudo da Amelogenina, reveste-se do maior
interesse, uma vez que h percias em que esta
determinao relevante.
Nas investigaes de parentesco biolgico
a determinao do gnero poder no ter muito
interesse, uma vez que, habitualmente, as amos-
tras biolgicas so colhidas aos intervenientes no
prprio servio onde ir ser realizada a percia.
Por isso, aquando da colheita dos dados pessoais/
processuais e das amostras biolgicas o gnero
fica estabelecido. H, no entanto, casos excecio-
nais, j identificados em diversas ocasies, que
surgem quando se analisa o DNA extrado das
amostras e o perito depara-se com resultados
que no eram expectveis. A ttulo de exemplo,
refere-se a identificao de um perfil gentico
feminino obtido a partir de uma amostra de
sangue colhida a um pretenso pai. A explicao
para a obteno deste resultado ficou clarificada,
depois da confirmao, por parte do dador da
amostra, de ter sido submetido a um transplante
47
de medula, tendo a dadora da medula sido a sua
irm (Pinheiro, 2010b).
No que criminalstica biolgica diz respeito,
a identificao de um perfil gentico masculino
em amostras relacionadas com um crime, em que
a vtima mulher e o perpetrador homem, o
estudo do gene homlogo da Amelogenina
extremamente importante. A presena de dois
picos resultantes da amplificao do DNA de
um vestgio biolgico, com os kits comerciais
geralmente usados nos laboratrios forenses,
indicativa de que o dador desse vestgio do
gnero masculino, sendo que o pico de menor
tamanho corresponde ao do cromossoma X (com
a deleo de 6 pb no intro 1 da Amelogenina)
e o restante, que difere do anterior em 4 pb, ao
cromossoma Y.
So, atualmente, comercializados kits (Next-
Generation STR Kits) que podem colmatar as de-
ficincias relativas aos disponveis at h pouco
tempo, em termos de proporcionarem um aumen-
to do poder de discriminao. Para alm disso, os
produtos de amplificao (alelos) de alguns dos
polimorfismos includos so de pequeno tamanho
(miniSTRs), indicados para a anlise de amostras
degradadas e/ou com escassa quantidade de
material gentico. Acresce o incremento do seu
desempenho na presena de inibidores, tais como
o grupo heme (componente da hemoglobina) exis-
tente no sangue. Como foi atrs referenciado, o
seu uso pode viabilizar a supresso de um dos
passos do percurso laboratorial, a extrao do
DNA, quando as amostras se encontrarem em
suporte apropriado.
Os miniSTRs so produtos de amplificao de
tamanho consideravelmente reduzido em relao
ao dos STRs convencionais, constituindo uma boa
48
alternativa, ou mesmo um complemento de um
perfil gentico parcial obtido a partir da caracte-
rizao dos STRs correspondentes. No obstante
terem j sido descritos miniSTRs dos autossomas
e dos cromossomas sexuais, apenas os primeiros
esto disponveis em kits comerciais.
Assim, em 2007, foi lanado no mercado o kit
AmpFSTR MiniFiler , que permite a amplificao
TM
simultnea de 8 loci (D13S317, D7S820, D2S1338,
D21S11, D16S539, D18S51, CSF1PO, FGA) e a
Amelogenina, todos eles includos no AmpFSTR
Identifiler , proporcionando uma reduo de ta-
TM
manho (pb) de 58% e de 48%, respetivamente,
nos alelos de menor e de maior tamanho.
O kit AmpFSTR NGM
inclui 15 STRs,
dos quais 5 tm tamanho reduzido (D10S1248,
D22S1045, D2S441, D1S1656, D12S391), tendo
sido recomendados pelos grupos ENFSI (European
Network of Forensic Science Institutes) e EDNAP
(European DNA Profiling Group), com a finalida-
de de serem adotados na anlise de amostras
degradadas, a fim de aumentar o desempenho
das bases de dados nacionais e apoiar a estan-
dardizao das bases de dados na Europa (Gill e
col. 2006a; Gill e col. 2006b; Lareu e col. 1996;
Lareu e col. 1998; Coble & Butler, 2005).
O estudo efetuado em amostras colhidas,
aps consentimento, a 213 indivduos sos e no linearidade dos mesmos.
relacionados da populao do Norte de Portugal,
envolvidos em percias de investigao de paterni-
dade, permitiu concluir que os resultados apoiavam
o anunciado incremento do poder informativo pro-
porcionado por este kit para fins forenses, aumen-
tando consideravelmente o poder de discriminao
nas anlises de rotina, principalmente quando
necessrio o estudo de mais marcadores genticos.
Adicionalmente, a anlise de miniSTRs incrementa
M. FTIMA PINHEIRO
a possibilidade de tipagem de amostras degradadas
(Pontes & Pinheiro, 2011).
Mais recentemente, foi lanado no mercado
o NGM SElect que, para alm dos STRs referencia-
dos para o NGM, inclui o locus SE33 que possui
um elevado poder de discriminao. Em estudo
realizado numa amostra da populao do Norte
de Portugal foram identificados 27 alelos para
este marcador gentico, proporcionando um valor
de Pex (Probabilidade de excluso a priori) de
0,8909, tendo em considerao que o valor de
Pex acumulado para os 16 STRs autossmicos foi
de 0,99999994 (Pinheiro e col., 2005).
A Promega tambm tem vindo a acompa-
nhar esta evoluo, traduzida na produo de
sistemas multiplex com interesse forense, tendo
vindo a comercializar kits que, basicamente, in-
cluem os mesmos polimorfismos dos da Applied
Biosystems, sendo que os de ltima gerao so o
PowerPlex ESX e o PowerPlex ESI, comparveis
aos atrs mencionados.
A Qiagen tem tambm investido na produ-
o de kits para a caracterizao de STRs autos-
smicos com fins forenses, como por exemplo o
Investigator ESSplex Plus e o Investigator ESSplex
SE, evidenciando a rapidez da obteno dos re-
sultados sem comprometer a sensibilidade e a
A nossa experincia com kits da Qiagen,
designadamente, o IDPlex STR Kit, que permite a
caracterizao dos marcadores genticos includos
no Identifiler, atrs referenciado, indicativa de
se tratar de um kit com bom desempenho, em
face dos resultados obtidos em testes de valida-
o efetuados.
boa prtica, em termos de confirmao da
reprodutibilidade dos resultados, usar dois kits
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
comerciais, quando se trata de efetuar compa-
raes indiretas (comparao de perfis genticos
de familiares). A seleo dos kits a utilizar com
poder de discriminao similar deve ser objeto
de ponderao. Esta ponderao pode incidir
em vrios aspetos, entre os quais se destaca:
a) monitorizao da sua qualidade, atravs da
realizao de testes de validao; b) seleo de
kits de empresas distintas tendo em considerao
a identificao de alelos raros ou nulos, uma
vez que os primers usados para a amplificao
dos distintos polimorfismos so diferentes para
kits idnticos (caracterizao dos mesmos STRs)
de empresas distintas; c) avaliao dos kits em
termos de qualidade/preo, tendo presente que
nem sempre o que mais oneroso melhor.
No obstante terem surgido ao longo dos
ltimos anos marcadores genticos para fins
de identificao gentica humana, bem como
para outros propsitos, os STRs autossmicos
continuam a ser os preferidos em Gentica
Forense, por vrias razes, algumas das quais
j foram explanadas. Todavia, as abordagens
metodolgicas e tecnolgicas tm sofrido uma
evoluo assinalvel, com a introduo de kits
mais evoludos e, concomitantemente, equipa-
mentos cada vez mais sofisticados e exigentes
em termos econmicos, mas que podero cons-
tituir uma mais-valia, quando se refere ao seu
superior desempenho no controlo da qualidade
dos resultados.
2.1.2. Anlise de misturas
H situaes em que so identificadas mis-
turas de perfis genticos, em especial nas percias
de criminalstica biolgica.
49
Estas misturas surgem quando dois ou mais
suspeitos deixam material gentico no mesmo
objeto (ponta de cigarro fumado, uma lata de
refresco, um copo, entre outros suportes).
H trs tipos de amostras, cuja anlise
gentica proporciona, habitualmente, mistura
de perfis genticos: a) zaragatoas usadas para
colheita de clulas da cavidade vaginal, anal e/
ou bucal, quando tenha ocorrido ejaculao e a
colheita tenha sido realizada precocemente; b)
zaragatoas/estiletes utilizados para colher ves-
tgios subungueais queixosa e/ou ao suspeito;
c) zaragatoas empregues para a colheita de c-
lulas da cavidade bucal em marcas de mordida.
A correta e acessvel interpretao da mistura
dependem, entre outros fatores, da existncia
de amostras de referncia dos contribuidores
da mistura (queixosa e suspeito).
As misturas identificadas no contexto da
anlise de amostras biolgicas relacionadas com
crimes sexuais so uma realidade frequente,
quando no so utilizadas metodologias e tec-
nologias que permitam a separao do material
gentico masculino do feminino. Existem, pois,
vrias limitaes metodolgicas que complicam
a interpretao dos resultados. Importa tambm
sublinhar que grande parte da bibliografia dispo-
nvel, referente identificao gentica de clulas
epiteliais femininas e clulas masculinas (esper-
matozoides), reporta-se a estudos experimentais,
utilizando misturas destas clulas em diferentes
concentraes. O comportamento destas misturas
pode divergir substancialmente do que acontece
nos casos reais, uma vez que nestes est subja-
cente a interferncia de fatores que promovem a
degradao do material gentico daquelas clulas,
entre outros (Pinheiro, 2011).
50
de todo o interesse efetuar a colheita de
amostras de referncia vtima e ao suspeito, para
que a interpretao dos resultados decorrentes
da mistura das suas clulas seja facilitada. Assim,
aquando da colheita de amostras biolgicas re-
lacionadas com o crime em vtimas vivas ou em
cadveres (amostras problema) sempre solicita-
da, ao mdico que realiza a percia, a colheita de
uma amostra de referncia. Quanto ao suspeito,
a colheita , em geral, feita pela entidade que
realiza a investigao criminal.
Evidencia-se que sem a amostra de refern-
cia colhida ao suspeito no pode ser realizada a
comparao de perfis. Todavia, o perfil da amostra
problema poder ser inserido na base de dados
de perfis de ADN, de acordo com a alnea d) do
artigo 15 da Lei 5/2008.
O uso de marcadores genticos altamen-
te polimrficos, como alguns dos includos nos
kits para a amplificao de STRs autossmicos,
aumenta a probabilidade de serem detetadas di-
ferenas entre os dois componentes da mistura.
No entanto, a interpretao e a determinao do
nmero de dadores podem ser tarefas difceis,
especialmente quando esto presentes 3 ou mais
contribuidores na mistura.
Em geral, as misturas identificadas na reso-
luo de percias so constitudas apenas por 2
contribuidores, a vtima (habitualmente mulher)
e o agressor (habitualmente homem). Mesmo
neste caso a interpretao da mistura pode ser
um processo complicado, desde logo porque
cada um dos dadores das clulas constituintes
da mistura possui um mnimo de um alelo para
cada um dos marcadores analisados, podendo ser
detetados, neste caso, um mximo de 4 alelos.
Situao ainda mais complexa verifica-se quando
M. FTIMA PINHEIRO
a vtima e o suspeito partilham 1 ou os 2 alelos.
A estas limitaes acresce o facto da contribui-
o de cada um deles para a mistura poder ser
muito desproporcionada. Por exemplo, quando
h uma grande prevalncia de DNA feminino,
aquando da anlise de STRs autossmicos, o
perfil feminino pode mascarar o masculino ou
o DNA das clulas femininas competir com o
das clulas masculinas durante a amplificao
do DNA.
A probabilidade do sucesso na interpretao
de uma mistura depende de vrios fatores: a)
uso de um nmero elevado de marcadores ge-
nticos, em que haja uma elevada incidncia de
heterozigotia; b) relao da quantidade de DNA
proveniente de cada contribuidor; c) combinaes
especficas dos gentipos; d) quantidade total de
DNA amplificado (Butler, 2010).
O uso de marcadores genticos com elevado
polimorfismo, traduzido na presena de um eleva-
do nmero de alelos, aumenta a possibilidade de
se determinar diferenas entre os componentes
da mistura. A quantidade de DNA de cada con-
tribuidor faz toda a diferena, no que se refere
capacidade para se detetar todos os contribui-
dores de uma mistura. Assim, por exemplo, se o
DNA proveniente de dois indivduos est presente
em quantidades similares ser muito mais fcil
interpretar a mistura. O menor componente da
mistura no usualmente detetado se estiver
presente na mistura numa quantidade abaixo de
5% (proporo de 1:20), pois os alelos do menor
contribuidor podem estar mascarados, devido aos
efeitos estocsticos, que ocorrem durante a PCR,
poderem afetar negativamente a amplificao do
componente presente em muito menor quanti-
dade (Butler, 2010).
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
Podem ser usados softwares para ajudar no
processo de decifrar os componentes de uma
mistura, determinar relaes entre as quantidades
desses componentes, bem como efetuar clculos
estatsticos. A decomposio da mistura, usando
estes softwares so considerados ajudantes do
perito, porque as decises finais, no que respeita
interpretao da mistura, incide no perito que
realiza a anlise de DNA.
Entre outros softwares, refere-se o Investi
gator IDproof Mixture Software, da Qiagen, sendo
mencionado pelo fornecedor que proporciona a
atribuio otimizada dos tamanhos e a designao
dos alelos, apoiando as anlises de PCR multiplex
(http://www.qiagen.com/products/investigatori-
dproofmixturesoftware.aspx).
2.2. STRS DO CROMOSSOMA Y
2.2.1. Consideraes gerais
O cromossoma Y um cromossoma estru-
turalmente pequeno, com parte do brao longo
(q) formado por heterocromatina. A maior parte
do cromossoma Y no recombina, exceo de
duas pequenas regies distais pseudoautossmicas
(PAR1 e PAR2), por serem homlogas com frag-
mentos do cromossoma X; por este facto, estas
regies no apresentam as propriedades especficas
deste cromossoma. A parte no recombinante do
cromossoma Y (NRY) apresenta algumas semelhan-
as com o DNAmt, devido falta de recombinao
durante a meiose e ao modo de herana, neste
caso haplide, uniparental materna. Por isso, a in-
formao gentica deste cromossoma vai passando
de pai para filho imutvel, excluindo as mutaes
gradualmente acumuladas.
51
A anlise do cromossoma Y possui trs prin-
cipais aplicaes na rea forense: a) identificao
do sexo (masculino); b) identificao do perfil
gentico, bem como da linhagem masculina (e
de todos os homens com ele relacionados pela
via paterna); c) identificao da possvel origem
geogrfica dessa linhagem, tambm designada
de ancestralidade gentica. A sua principal uti-
lizao em criminalstica biolgica tem incidido,
fundamentalmente, na identificao do perfil
gentico de amostras problema e respetiva com-
parao com amostra(s) de referncia colhida(s)
a suspeito(s).
A sua relevncia em criminalstica biolgica
deve-se ao facto dos perpetradores serem, maio-
ritariamente, do sexo masculino, com especial
nfase para os crimes sexuais. Contudo, esta sua
importncia assume a maior utilidade quando os
resultados da caracterizao destes marcadores
corroboram os dos autossomas; caso contrrio,
e de acordo com o atrs mencionado, a identi-
ficao de um perfil gentico masculino numa
amostra apenas pode fornecer informao parcial
sobre a sua provenincia, uma vez que o perfil
gentico identificado pode pertencer a qualquer
outro familiar aparentado pela via paterna com
o suspeito ou, ainda, remotamente, com outro
qualquer indivduo da populao que, por coin-
cidncia, com ele partilhe idntica informao
gentica para este cromossoma.
A informao gentica proporcionada,
atravs da anlise dos STRs do cromossoma Y
(Y-STRs), por uma amostra de referncia do sus-
peito (zaragatoa bucal) partilhada por todos
os homens com ele aparentados pela linhagem
paterna, como foi dito; ou seja, o seu av pater-
no, pai, irmo, filho e at tio paterno partilham
52
a mesma informao para este cromossoma. No
entanto, o facto de ele ser suspeito pressupe a
existncia de provas que sero consubstanciadas
pela prova pericial de Gentica Forense. Por outro
lado, frequentemente, a informao proporcio-
nada pelos Y-STRs suportada pela fornecida
pelos STRs dos autossomas, o que incrementa
substancialmente a informao da prova pericial.
H, no entanto, casos em que apenas obtido
um perfil gentico de Y-STRs.
Os Y-STRs exibem alelos nicos para os dife-
rentes polimorfismos, pelo facto do homem pos-
suir apenas um cromossoma Y (herdado do pai),
sendo que o outro cromossoma o X (herdado
da me). Os alelos dos diferentes Y-STRs, que
semelhana dos STRs autossmicos so estudados
em conjunto (multiplex), segregam como haplti-
pos intimamente ligados na linhagem masculina
de uma famlia. Por isso, a transmisso faz-se
de pai para filho como um nico bloco (herana
haplide, uniparental paterna).
A presena de um perfil de Y-STRs nos casos
em que a observao microscpica de esperma-
tozoides negativa pode proporcionar evidncia
de contacto sexual independentemente da ejacu-
lao, sucesso da lise diferencial (tcnica usada
para a extrao e separao da frao feminina
da masculina) ou proporo das clulas femininas
no extrato, podendo ser usada para corroborar
o testemunho da vtima feminina de agresso
sexual (Pinheiro, 2011).
H autores que consideram que a obteno
de um perfil gentico de Y-STRs s tem interesse
se estiver identificado o perfil gentico de STRs
autossmicos, porque o poder de discriminao
dos primeiros marcadores muito inferior (Gill e
col., 1985). Opinies diversas foram j explanadas,
M. FTIMA PINHEIRO
que se consideram consistentes, na medida em
que prefervel ter-se um resultado, embora me-
nos vinculativo do que o dos STRs autossmicos,
uma vez que na presena de outras provas incri-
minatrias poder coadjuv-las.
Em meados da dcada de 90 j tinham sido
descritos 13 Y-STRs, dos quais foram seleciona-
dos 9 loci (DYS19, DYS389I, DYS389II, DYS390,
DYS391, DYS392, DYS393, DYS385a/b), cujas
unidades de repetio so de trs (DYS392) ou
quatro nucletidos (todos os outros), sendo o seu
conjunto conhecido pela designao de haplti-
po mnimo. Este hapltipo foi recomendado pelo
International Forensic Y User Group como o grupo
mnimo de Y-STRs a usar na rea forense, com o
objetivo de promover a individualizao de uma
amostra do sexo masculino humano (Pinheiro,
2010b).
O kit AmpFSTR Yfiler PCR Amplification
Kit (Applied Biosystems) permite a amplificao
dos loci includo no hapltipo mnimo, bem como:
DYS438, DYS439, DYS437, DYS448, DYS456,
DYS458, DYS635, YGATAH4, proporcionando
o mais elevado poder de discriminao dos kits
comerciais disponveis no mercado para a carac-
terizao deste tipo de marcadores.
Em estudo realizado na populao do Norte
de Portugal foi utilizado este kit, tendo sido publi-
cadas as frequncias dos hapltipos identificados,
os parmetros de interesse forense e a compa-
rao das frequncias haplotpicas encontradas
com as de outras populaes. Para alm disso,
foi descrito um caso, que consistiu na existncia
de uma duplicao para o DYS19 em simultneo
com uma inconsistncia de transmisso allica
entre pretenso pai (15,17)/filho (15,16), compatvel
com a ocorrncia de mutao, uma vez que o
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
ndice de Paternidade era de 1190284082, tendo
em considerao os STRs autossmicos (Pontes
e col., 2007).
Butler (2011), entre outros autores, descre-
vem este fenmeno da existncia de produtos
de PCR presentes em mltiplas cpias, por estes
marcadores genticos se situarem em regies
palindrmicas do cromossoma Y.
Foi estabelecida, por Lutz Roewer e cola-
boradores uma base de dados de hapltipos de
Y-STRs (Y-STR haplotype reference database
YHRD), disponibilizada online em 2000, tendo sido
atualizada em 2007 (Willuweit & Roewer, 2007).
Esta de livre acesso na internet (http://www.
yhrd.org/), sendo a mais difundida das bases de
dados com interesse em Gentica Forense. Para
alm dos marcadores mencionados, referentes
ao hapltipo mnimo, inclui outros (DYS438,
DYS439, DYS437, DYS448, DYS456, DYS458,
DYS635, YGATAH4).
O principal objetivo da utilizao da base
de dados a determinao da frequncia de um
determinado hapltipo. Neste momento possui
36.477 hapltipos provenientes de 245 popu-
laes, tendo em considerao todas as popu-
laes e 14.309 hapltipos de 99 populaes identificados). Por isso, quanto mais hapltipos
Euroasiticas, incluindo o Norte de Portugal. Esta
base de dados representa o repositrio mais im-
portante de dados populacionais referentes ao
cromossoma Y. Por isso, deve ser usada na estima
das frequncias dos hapltipos na valorizao das
percias de criminalstica biolgica, em particular
quando apenas so obtidos resultados relativos
aos Y-STRs. Esta circunstncia relativamente fre-
quente, tendo em considerao a maior sensibili-
dade dos kits para a caracterizao de Y-STRs. Este
facto tem sido constatado em estudos efetuados
53
por vrios autores. de salientar que esta base
de dados permite no s a introduo de perfis
completos, mas, tambm, de perfis parciais.
Reala-se os resultados de um estudo efe-
tuado em amostras colhidas a 3 mulheres em
intervalos ps-coitais superiores a 48 horas (72,
96, 120, 144 e 168 horas), usando kits para a tipa-
gem de Y-STRs. Apesar de se saber que as clulas
masculinas se mantm no crvix pelo menos uma
semana aps a ejaculao, segundo os autores at
realizao deste estudo no tinha sido possvel
obter um perfil gentico do dador a partir de
amostras colhidas 3 ou mais dias aps o coito.
Estes mencionam terem identificado perfis mas-
culinos completos, analisando zaragatoas colhidas
no crvix 3-4 dias aps a ejaculao, afirmando
ainda terem conseguido perfis incompletos 5-6
dias aps o coito (Pinheiro, 2011). Esta constata-
o comprova o que foi dito anteriormente em
relao sensibilidade destes kits.
O clculo da concordncia ao acaso de ha-
pltipos de Y-STRs efetuado usando o counting
method (nmero de vezes que um determinado
hapltipo observado numa determinada popu-
lao a dividir pelo nmero total de hapltipos
estiverem introduzidos na base de dados, mais
corretos sero os clculos estatsticos, relativa-
mente estima da frequncia da concordncia
de hapltipos (Szibor, 2007).
2.2.2. Anlise de misturas
A anlise de misturas, tendo em conside-
rao os Y-STRs, bem mais fcil de efetuar do
que com os STRs autossmicos, usando primers
especficos para o cromossoma Y, uma vez que
54
aumenta a probabilidade de serem detetados bai-
xos nveis de DNA do perpetrador na presena
de uma elevada quantidade de DNA feminino da
vtima (Hall & Ballantyne, 2003). Esta facilidade
na interpretao dos resultados prende-se com
a circunstncia dos indivduos do sexo masculi-
no possurem apenas um alelo por cada um dos
marcadores analisados (exceto o DYS385).
Em face do exposto, se a amostra em causa
corresponder a uma mistura, na qual est includo,
por exemplo, o DNA da vtima do sexo feminino,
o do companheiro e o de um agressor, expec-
tvel que para os STRs autossmicos possa estar
presente um conjunto de seis picos para cada mar-
cador gentico, se os trs indivduos envolvidos
forem heterozigticos e no partilhem nenhum
dos alelos para esse locus. No que concerne ao
perfil gentico do cromossoma Y, apenas estaro
presentes dois picos, um do companheiro e o
outro do suspeito, uma vez que para alm dos
homens s possurem um alelo por locus, a frao X proporcionam um poder informativo menor, no
feminina da mistura no amplificada, porque os
primers para a caracterizao dos Y-STRs so es-
pecficos para o sexo masculino (Pinheiro, 2010a).
Quando usada a informao conjunta
proporcionada pelos STRs do cromossoma Y e a
dos autossomas deve ser evitada a expresso dos
resultados num nico valor (Likelihood Ratio), por
se tratar de marcadores com modos de herana
distintos (Amorim, 2008).
2.3. STRS DO CROMOSSOMA X
2.3.1. Consideraes gerais
Os STRs do cromossoma X so menos usados
na prtica forense, podendo ser interessantes:
M. FTIMA PINHEIRO
a) em percias de investigao de maternidade;
b) casos de filiao que envolvam familiares que
partilham este cromossoma, na ausncia do pre-
tenso pai; c) em trios ou duos entre pai e filha;
d) em casos de identificao gentica de restos
cadavricos, atravs do estudo de familiares pr-
ximos. Em criminalstica biolgica a sua utilidade
mais restrita (Pinheiro, 2009).
O poder de discriminao (PD) dos marcado-
res do cromossoma X varia com o gnero ao qual
pertence a amostra biolgica. Assim, quando a
amostra em estudo comparada com indivduos
do sexo feminino, os marcadores do cromossoma
X devem ser considerados como se de autossomas
se tratassem; no caso de a comparao ser feita
entre amostras pertencentes a indivduos do sexo
masculino, os valores do poder de discriminao
so, em geral, inferiores, porque o nico cromos-
soma X do homem apenas possui um alelo por
cada STR. Por isso, os marcadores do cromossoma
que respeita anlise de amostras biolgicas re-
lacionadas com crimes do que os autossmicos,
uma vez que, como sabido, a grande maioria dos
crimes so praticados por homens (Pinheiro, 2009).
Quando os marcadores genticos se locali-
zam muito prximos num cromossoma no se-
gregam de forma independente, sendo, por isso,
herdados em conjunto (hapltipo), semelhana
do que ocorre com os STRs do cromossoma Y.
O cromossoma X possui 4 grupos de marcadores
localizados nas regies Xp22.2, Xq12, Xq26 e
Xq28, que podem proporcionar informao ge-
notpica independente. Todavia, atualmente,
proposto usar clusters na prtica forense para
ser definido o correspondente hapltipo. Os pa-
res: DXS10135-DXS8378, DXS7132-DXS10074,
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
HPRTB-DXS10101 e DXS7423-DXS10134 so um
exemplo destes clusters. A caracterizao destes
4 pares pode ser feita usando o kit Argus-X-8
(Szibor, 2007).
O GEP-ISFG (Grupo Espanhol e Portugus
da Sociedade Internacional de Gentica Forense),
hoje conhecido pela designao de GHEP-ISFG
(Grupo de Habla Espanhola e Portuguesa da
Sociedade Internacional de Gentica Forense),
promoveu a realizao de um exerccio colabora-
tivo inter-laboratorial que envolveu a participao
de mais de 20 laboratrios oriundos da Pennsula
Ibrica e de vrios pases Latino-Americanos.
Neste exerccio, foi proposta a anlise de amos-
tras, usando 10 STRs do cromossoma X (X-STR
Decaplex), alguns dos quais comuns ao Argus
X-8: DXS8378, DXS9898, DXS7133, GATA31E08,
GATA172D05, DXS7423, DXS6809, DXS7132,
DXS9902 e DXS6789. Os autores e intervenientes
neste exerccio referem tratar-se de um multiplex
robusto, uma vez que a maioria dos laborat-
rios participantes caracterizaram com sucesso
as amostras distribudas pelos seus promotores,
mencionando a necessidade de dar continuidade
a estudos relacionados com este cromossoma
(Gusmo e col., 2008). Posteriormente, foram
realizados outros estudos com este multiplex, em
colaborao com distintos laboratrios (Zarrabeitia
e col, 2008; Gusmo e col., 2009).
Recentemente, a Qiagen iniciou a comercia-
lizao do kit Investigator Argus X-12, no qual foi
adicionado um STR a cada um dos clusters atrs
referenciados para o Argus X-8. Assim, este kit
permite a amplificao simultnea dos 4 grupos
de ligamento: grupo 1: DXS10148, DXS10135
e DXS8378; grupo 2: DXS7132, DXS10079
e DXS10074; grupo 3: DXS10103, HPRTB e
55
DXS10101; grupo 4: DXS10146, DXS10134 e
DXS7423. Em estudo realizado em 150 homens
da populao do Norte de Portugal, usando este
kit, foram determinados os parmetros forenses,
os quais permitiram inferir tratar-se de X-STRs
promissores, em especial nalgumas percias de
determinao de parentesco biolgico. Descreve-
se um caso em que a incluso destes marcadores
numa investigao de paternidade, com pretenso
pai ausente, em que se dispunha de amostras bio-
lgicas da sua me, bem como da pretensa neta e
da respetiva me, se mostrou de grande interesse
para a concluso da percia. Esta importncia foi
expressa nos valores de LR, que era de 14 apenas
para os STRs autossmicos, tendo aumentado
para 6947364312, quando foram includos os 12
X-STR (Cain e col., 2011).
2.4. DNA MITOCONDRIAL
A herana uniparental materna da infor-
mao gentica do DNAmt permite determinar
a ancestralidade atravs de vrias geraes, ao
contrrio dos marcadores autossmicos que
sofrem recombinao. Por isso, os marcadores
de linhagem (DNAmt e o cromossoma Y), que
possibilitam inferir a origem ancestral de uma
amostra de DNA, proporcionam um potencial
desenvolvimento de meios capazes de conduzir
a investigao criminal.
A sequenciao do DNAmt tem vindo a ser
validada para anlises forenses em vrios labora-
trios, tendo vantagens em relao ao DNAnu,
tais como: a) proporcionar resultados quando o
estudo do DNAnu falha, por estar presente num
elevado nmero de cpias por clula (cerca de
100.000); b) permitir a comparao direta de
56
sequncias de DNA de membros da famlia da
mesma linhagem materna em processos de iden-
tificao, por ser transmitido unicamente pela via
materna aos descendentes, sem recombinao.
Estas duas vantagens so de especial importncia
na resoluo de casos em que o material biol-
gico no contm ou tem pouca quantidade de
clulas, designadamente as hastes de cabelos,
restos cadavricos e pele.
A maior desvantagem do DNAmt, em com-
parao com o DNAnu, a organizao do seu
genoma que muito compacta e, consequente-
mente, menos polimrfico, sendo cerca de 90%
do seu genoma codificante.
A anlise da regio D-loop do DNAmt, em
especial as regies hipervariveis HVI e HVII, per-
mite determinar relaes familiares, quando existe
um hiato de vrias geraes entre um ancestral
e descendentes vivos. Esta caracterstica, que
comum ao cromossoma Y, permite a compara-
o de hapltipos entre familiares, podendo o
seu grau de parentesco no ser obrigatoriamente
prximo, nos casos de catstrofes, quando os
restos cadavricos esto degradados e a anlise
de STRs autossmicos j no possvel. O mesmo
estudo poder ser realizado em cadveres no
identificados. No entanto, o DNAmt no possui
o poder de discriminao dos STRs. Esta anlise
tem sido usada no SGBF, DN, entre outros casos,
no estudo de pelos (cabelos) cortados que foram
colhidos de para-brisas e para-choques em ve-
culos relacionados com casos de atropelamento
seguidos de fuga.
A utilidade do DNAmt na prtica forense
refere-se, fundamentalmente, sua anlise pro-
porcionar resultados quando a do DNA nuclear
falha, aplicando-se em casos em que as nicas
M. FTIMA PINHEIRO
amostras de referncia disponveis so as de pa-
rentes de linhagem materna comum, bem como
naqueles em que o DNAnu est praticamente
ausente (por ex. hastes de pelos) (Pinheiro, 2010b).
Os humanos possuem um mitotipo ancestral
comum com origem na populao da frica sub-
sariana, h cerca de 150.000 200.000 anos. As
mutaes acumuladas desde ento deram origem
a diferenas, que constituem a base da identifica-
o gentica individual. Neste longo perodo de
tempo as populaes migraram e expandiram-se,
originando diferenas geogrficas nas linhagens
do DNAmt. Este processo reflete-se na distribui-
o irregular dos tipos de sequncias em vrias
populaes.
O DNAmt possui limitaes na rea forense,
em especial, quando os mitotipos identificados
so comuns. Outros mitotipos so mais raros,
havendo uma grande assimetria na sua distribui-
o. Cerca de 7% da populao possui hapltipos
idnticos para HVI e HVII e 50% da populao
pertence a um haplogrupo nico (H). Esta consta-
tao permite inferir que o facto de duas amostras
possurem idntico hapltipo para estas regies
(HVI e HVII) no significa que sejam provenientes
do mesmo indivduo ou, ainda, de familiares da
mesma linhagem materna (Butler, 2005).
Estudos efetuados nas duas regies hiperva-
riveis do DNAmt, bem como noutras variaes
do genoma mitocondrial, permitiram concluir que
os haplogrupos A, B, C, D, E, F e G esto carac-
teristicamente associados a asiticos, enquanto
os nativos americanos pertencem aos haplogru-
pos A, B, C e D. Os haplogrupos L1, L2 e L3 so
africanos e os haplogrupos H, I, J, K, T, U, V, W
e X so tipicamente pertencentes a populaes
europeias.
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
A utilizao de SNPs (Single Nucleotide
Polymorphisms) do DNAmt, hoje amplamente di-
vulgada, permite a diferenciao de indivduos que
pertencem aos haplogrupos mais comuns, como
o caso do haplogrupo H em populaes europeias.
A maior vantagem do DNAmt, em termos de
sequenciao, que haplide e, por isso, existe e col., 2008). Este facto revelador da comple-
apenas um tipo para cada indivduo (exceto as
heteroplasmias). Contudo, as amostras correspon-
dentes a misturas de indivduos no aparentados
pela linhagem materna, frequentes no contexto
da criminalstica biolgica, no tm sido alvo de
tentativa de decifrar os seus componentes, devido
sua complexidade. No entanto, tem vindo a ser
demonstrado que as misturas de DNAmt podem
ser interpretadas, atravs da clonagem e subse-
quente sequenciao das regies HVI e HVII das
colnias individuais.
Sob a gide do GEP-ISFG foi efetuado o
estudo de 5 manchas de sangue de diferentes
dadores (M1 M5), numa mistura (M6) e em 4
fragmentos de hastes de pelos do mesmo indiv-
duo (M7). Um dos objetivos do trabalho incidiu
sobre a possibilidade da amostra M6 ser compa-
tvel com a mistura de M4 e M5 (Crespillo e col.,
2006). Verificou-se haver um menor nmero de
participantes nesta vertente do exerccio, o que
demonstra que o DNAmt no um marcador
de eleio na resoluo de mistura de perfis em
amostras com misturas, bem como na complexi-
dade de interpretao dos resultados.
Tendo como finalidade desenvolver a quali-
dade e estandardizao das anlises de DNAmt,
para alm de aspetos tcnicos e de interpretao,
o mesmo grupo promoveu a realizao de um ou-
tro exerccio. Destacaram-se 3 amostras forenses,
sendo que a identificada por M6 correspondia a
57
uma mistura de sangue (amostra de referncia
M5) e saliva de um dador desconhecido. Do total
dos 26 laboratrios participantes, apenas 18 re-
portaram o hapltipo correto da mistura, sendo
que destes s 2 individualizaram os respetivos
hapltipos nos 2 potenciais contribuidores (Prieto
xidade de interpretao de misturas, usando a
anlise de DNAmt.
A anlise de 80 amostras biolgicas colhidas
a indivduos no relacionados da populao de
Santa Catarina (Brasil) efetuada no SGBF, DN,
revelou tratar-se de uma populao extremamente
heterognea, principalmente devida ao impac-
to produzido por ondas de migrao recentes
de populaes europeias. A elevada diversidade
de sequncias indicativa de que as anlises de
DNAmt so muito informativas nesta populao,
no que respeita identificao gentica (poder
de discriminao de 97,69%) (Valverde e col.,
2009). No que se refere populao do Norte de
Portugal este fenmeno no observado, pelo
que as frequncias haplotpicas se mantm simi-
lares ao longo de geraes, o que condiciona o
seu poder informativo.
3 . A M OS T R A S ( V ES T G I OS)
D E I N T E R ESSE E M
C R I M I N A L S T I C A B I O L G I C A
Para a anlise de DNA com interesse na
resoluo de casos relacionados com crimes
necessrio qualquer tipo de mancha ou produto
que contenha material gentico, como j foi refe-
rido. Este material encontra-se em todas as clulas
nucleadas do organismo e possui caractersticas
58
importantes em estudos de identificao, j que
o DNA nico para cada indivduo, e idntico
em todas as suas clulas; ou seja, estudando-se
qualquer vestgio biolgico pode-se identificar o
indivduo ao qual este pertence (Pinheiro, 2008b).
Os vestgios biolgicos envolvidos em casos
com interesse forense, mais frequentes, so as
manchas de sangue, normalmente relacionadas
com homicdios, roubos, furtos ou agresses f-
sicas, e o smen com agresses sexuais.
As amostras biolgicas podem encontrar-se
em suportes porosos e absorventes existentes no
local do crime, como sofs, tapetes, alcatifas e
mesmo na roupa da vtima ou do autor do crime;
ou em suportes no porosos, como diferentes
tipos de revestimentos de cho ou paredes de
residncias, vidros ou cermicas (Pinheiro, 2008b).
H amostras que se encontram em supor-
tes que, pelas suas dimenses ou outras carac-
tersticas, no so suscetveis de serem enviadas
para os servios que realizam as respetivas pe-
rcias forenses. Neste caso, pode-se proceder
transferncia do vestgio do suporte original para
uma zaragatoa humedecida com gua ultrapura
(MilliQ), sendo a extrao do DNA realizada a
partir deste ltimo suporte.
As manchas existentes em pedaos de ma-
deira, pedras ou terra, podem proporcionar maus
resultados, devido s caractersticas de absoro
destes suportes, bem como presena de inibi-
dores. Um requisito imprescindvel para o xito
da anlise que as manchas sejam rapidamente
secas e adequadamente acondicionadas, de forma
a preservar o seu material gentico.
As amostras biolgicas que mais vezes esto
relacionadas com percias de Gentica Forense so:
o sangue, smen, saliva, pelos e clulas epiteliais.
M. FTIMA PINHEIRO
Os crimes relativos aos quais so solicita-
das percias de Gentica Forense so, em geral,
homicdios, agresses sexuais, agresses fsicas,
roubos e furtos. O objetivo do envio de amos-
tras biolgicas, para os laboratrios forenses,
existentes em suportes variados, reside na sua
identificao gentica.
de realar que a maioria delas referem-se
ao estudo de DNA humano; todavia, podem-se
tambm efetuar percias em amostras de DNA no
humano. Este DNA no se reporta exclusivamente
a DNA animal, sendo, contudo, este o DNA mais
vezes envolvido em delitos. Os pelos de animais
so, provavelmente, as amostras biolgicas no
humanas mais vezes presentes, por serem en-
contradas em locais de crime, sendo, por isso,
consideradas potenciais evidncias na resoluo
de crimes violentos. Esta constatao explicada
pelo facto de haver uma grande percentagem de
gatos e ces domsticos que coabitam com os
seus donos, em especial nos pases ocidentais.
Os pelos detetados em peas de vesturio, em
casas, carros, entre outros locais, so facilmen-
te transferidos nas atividades domsticas dirias
(Pinheiro, 2010c).
Os resultados obtidos das anlises efetuadas
a amostras biolgicas no mbito da criminalstica
biolgica traduzem-se na identificao de per-
fis genticos. Como a maioria dos delitos so
perpetradas por homens, o que se pretende a
identificao de um perfil gentico masculino que
venha a ser concordante com o de um suspeito.
As amostras biolgicas podem ser colhidas
no corpo da vtima, do suspeito e/ou do local do
crime. Em relao s amostras biolgicas exis-
tentes noutro tipo de suportes que no o corpo
da vtima, a sua recuperao, em geral, no
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
urgente, uma vez o material gentico permane-
ce intacto num perodo de tempo longo, exceto
se for submetido a fatores adversos (humidade,
temperaturas muito elevadas, luz solar, raios UV),
durante o tempo suficiente para ocorrer a sua
degradao total. Estes suportes podem ser peas
de roupa de cama, peas de vesturio e material
no transportvel ou outro, cuja remoo do local
perfeitamente evitvel (cho, mveis, objetos
diversos), porque a colheita dos vestgios pode
ser feita com recurso a zaragatoas ligeiramente
humedecidas (Pinheiro, 2011).
Em 1997, Sweet e col. preconizaram a utiliza-
o deste procedimento seguido do uso de uma
zaragatoa seca (tcnica da dupla zaragatoa). Os
autores efetuaram, posteriormente, um estudo
comparativo dos dois mtodos de colheita, tendo
concludo no haver diferenas significativas na
recuperao da amostra biolgica. Esta metodolo-
gia de colheita pode aplicar-se a amostras relativas
a outro tipo de crime (Graham & Rutty, 2008).
So aconselhados procedimentos para que
as amostras biolgicas mantenham a sua auten-
ticidade e integridade, a fim de terem valor pro-
batrio em sede de julgamento. A autenticidade
certifica que as amostras submetidas anlise e
elaborao do respetivo relatrio pericial foram
as colhidas, tendo sido no momento da colheita
devidamente identificadas. A integridade constitui
uma garantia de que o material gentico mantm
as suas caractersticas que, em princpio, assegu-
raro a possibilidade de serem obtidos resultados
(Pinheiro, 2011).
indispensvel que seja assegurada a ca-
deia de custdia das amostras biolgicas subme-
tidas a percia de Gentica Forense. A cadeia de
custdia um processo usado para documentar
59
o seu trajeto cronolgico, a fim de ser atestada
e acautelada a sua autenticidade em processos
judiciais. Existem sistemas de gesto e de in-
formao teis, os sistemas LIMS (Laboratory
Information Management System), podendo ser
adquiridas e adaptadas verses especialmente
concebidas para laboratrios forenses que inte-
gram vrias tarefas, entre as quais se destaca o
registo de todo o trajeto das amostras biolgicas.
Estes sistemas conjuntamente com documenta-
o/registo, especialmente criados para o efeito
asseguram de forma cabal a referida custdia
(Pinheiro, 2011).
3.1. HOMICDIOS
Nos crimes de homicdio podem ser en-
contrados no local do crime e/ou no corpo da
vtima qualquer um dos tipos, alguns dos tipos
ou, ainda todos os tipos de amostras biolgicas
atrs referenciadas.
A utilizao de objetos contundentes, cor-
tantes, perfurantes, entre outros na prtica de
crimes violentos, pode resultar na produo de
ferimentos com a consequente perda de sangue.
Por sua vez, o smen tambm pode estar
presente, sendo que poder resultar da ejaculao
do perpetrador antes ou depois de ocorrer a mor-
te da vtima. A sua localizao pode ser diversa,
podendo ser identificado nas cavidades vaginais
e/ou anais da vtima, bem como na cavidade bu-
cal. Evidencia-se que a sua presena nas zonas
circundantes destas cavidades tambm podem
ser alvo de colheita. A sua localizao pode ser
identificada noutras zonas exteriores do corpo do
cadver, em peas de vesturio, roupa de cama,
bem como em outros suportes.
60
A saliva pode ser encontrada no corpo da
vtima, salientando-se as marcas de mordida que
sero, em princpio, os nicos pontos onde esta
amostra poder ser colhida, uma vez que a haver
saliva noutras zonas, se no existirem marcas,
ser difcil identificar a sua localizao, sem a
contribuio da prpria vtima, que neste caso
cadver. A saliva pode estar em objetos encontra-
dos no local do crime, sendo bvia a sua presena
nalguns deles, como copos, garrafas, latas de
refresco, entre outros. Assinala-se a importncia
da recolha de cigarros fumados, detetando-se, por
vezes misturas (em geral de dois contribuidores).
Os pelos so omnipresentes em todos os
locais e nos mais variados suportes, pois o couro
cabeludo humano possui entre 100.000 a 150.000
folculos pilosos que produzem pelos, sem ter em
considerao outras zonas do corpo, das quais es-
tes tambm podem ser originrios. A circunstncia
de serem encontradas quantidades abundantes de
pelos de diferentes provenincias (de indivduos
diversos, de zonas corporais distintas e de pelos
animais) deve-se ao facto de estarem em fase
telognica do seu desenvolvimento; ou seja, na
etapa em que as clulas do folculo piloso e raiz
(tambm designada de bolbo) sofreram a apopto-
se celular e, por conseguinte, os pelos terem cado.
Caso diverso a eventualidade de ser encontrada
uma madeixa de pelos na mo de um cadver,
facto que altamente sugestivo de pertencer ao
agressor. Por outro lado, por se tratar de pelos
arrancados (confirmao microscpica) aumenta
a possibilidade de xito na identificao da sua
provenincia. Esta circunstncia advm dos pelos
possurem raiz em plena vitalidade (bolbo oco)
e, por isso, detentora de quantidades apreciveis
de material gentico, o que proporcionar a sua
M. FTIMA PINHEIRO
identificao gentica com recurso apenas ao
estudo do DNA nuclear.
As clulas epiteliais encontram-se com bas-
tante frequncia neste tipo de crimes violentos,
tanto nos vestgios subungueais colhidos vtima
como ao agressor. Importa, portanto, preservar as
mos da vtima, para que sejam colhidos aquando
da realizao da autpsia mdico-legal. Por isso,
as mos do cadver devem ser protegidas com
sacos de papel, aquando da realizao do exame
ao local do crime.
Estas clulas podem estar presentes nou-
tras localizaes, designadamente em objetos
existentes no local do crime, que foram tocados
pelo agressor.
Na superfcie da pele humana existem c-
lulas que podem ficar aderentes a uma qualquer
superfcie que seja tocada. Estas clulas tm ori-
gem na descamao da pele (perde-se cerca de
400.000 clulas por dia) e tambm em secrees
produzidas pelas glndulas sudorparas e seb-
ceas, que arrastam clulas da pele. Quando existe
um contacto da pele com qualquer objeto, o suor
e o leo sebceo ficam aderentes a esse objeto,
podendo tambm ficar depositadas algumas c-
lulas (Lagoa & Pinheiro, 2006).
Por isso, estas clulas podem estar presentes
em impresses dermopapilares, que sero objeto
de exame dactiloscpico; no entanto, a sua colhei-
ta, poder, para alm deste fim, ser usada para a
identificao gentica do seu dador. Esta colheita
deve ser feita antes de serem usadas substncias
para a sua revelao, no obstante haver estudos
indicativos da obteno de resultados mesmo
aps o uso de determinados tipos de produtos
para a revelao daquelas impresses (Balogh e
col., 2003; Lowe e col., 2003).
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
3.2. AGRESSES SEXUAIS
Durante o exame fsico efetuada uma mi-
nuciosa inspeo de toda a superfcie corporal
da vtima. Esta pode conduzir obteno de
amostras biolgicas que possam conter clulas
do suspeito que permaneam nos exsudados va-
ginais, bucais e/ou anais, raspados subungueais,
pelos, especialmente da regio pbica e manchas
existentes no corpo da vtima. de interesse rele-
vante a preservao e posterior anlise gentica
de roupas, pensos higinicos, objetos especficos
e amostras de referncia (Pinheiro, 2008a).
Qualquer dos tipos de amostras biolgicas
atrs mencionadas pode ser colhido no mbito de
crimes sexuais, quer s vtimas mortais ou vivas
quer no local do crime.
A presena de smen em amostras relacio-
nadas com delitos sexuais essencial para a pre-
suno da natureza sexual do crime. Contudo, a
circunstncia de ter sido identificado um perfil
gentico masculino em amostra de smen, no m-
bito de uma suposta agresso sexual em queixosa
do sexo feminino, no prova suficiente para a
comprovao da existncia de crime.
A identificao do perfil gentico do agres-
sor em manchas de material biolgico que lhe
pertena pode ser efetuada meses ou anos aps
a ocorrncia do crime, porque o material gen-
tico resistente degradao. Contudo, como
foi referido, neste tipo de crimes a amostra que
tem mais interesse o smen. Quando a colheita
deste efetuada nas cavidades vaginal, anal ou
bucal da vtima, os resultados genticos depen-
dem em grande parte do tempo que medeia entre
a prtica do crime, o exame vtima e a respetiva
colheita. Estes condicionalismos tambm esto
61
relacionados com agentes que existem nestas
cavidades responsveis pela degradao do DNA
(Pinheiro, 2011).
A presena de espermatozoides aparente-
mente intactos na cavidade vaginal associada a
um intervalo ps-coital prolongado pode invia-
bilizar a identificao gentica, por ter havido
degradao do DNA. Esta degradao pode ser
devida exposio prolongada dos espermato-
zoides na vagina, que desencadeia a adeso de
clulas femininas lisadas s suas cabeas, sendo
que desta interao resulta a produo de nu-
cleases e a consequente degradao do DNA
(Elliott, 2003).
Nesta perspetiva, evidenciam-se fatores po-
tenciadores da degradao dos espermatozoides
que atuam nas diferentes cavidades das quais so
colhidas evidncias. Assim, destaca-se o facto
da cavidade vaginal ser quente, cida e hmida.
A boca e o nus so tambm cavidades em que
tem sido verificada a rpida destruio dos es-
permatozoides pela atuao, respetivamente, de
enzimas salivares e de enzimas produzidas por
bactrias (Sibille, 2002).
Por vrias razes as vtimas no mortais de
agresses sexuais s so submetidas a exame
mdico, e respetiva colheita de amostras biol-
gicas, mais de 24-36 horas depois de ocorrido o
evento, sendo que neste perodo ainda possvel
identificar perfis de STRs autossmicos. Todavia,
quando este intervalo excede as 48 horas aquela
identificao no , em geral, vivel, embora esta
inviabilidade no seja devida ausncia de clu-
las masculinas. H estudos relacionados com a
reproduo demonstrativos da presena de vrios
espermatozoides no crvix humano 7 dias aps
o coito, o que consistente com o conceito de
62
que este local o repositrio de smen antes de
ocorrer a fertilizao (Hall & Ballantyne, 2003).
Esta verificao, ao contrrio do que seria
expectvel, no invalida o facto de se constatar
ausncia de resultados referentes identificao
de clulas masculinas, apesar de serem usados
mtodos sensveis na anlise de DNA.
O mtodo de lise diferencial foi a metodolo-
gia standard usada nos laboratrios forenses para
separar os espermatozoides das clulas epiteliais da
vtima. Este mtodo utiliza diferenas especficas na
composio qumica das membranas das respetivas
clulas. Nesta perspetiva, efetua-se uma primeira
lise das clulas no espermticas, procedendo-se de
seguida a lavagens para remover resduos de DNA
exgeno. Embora este mtodo possa, em geral,
proporcionar duas fraes celulares, a separao
no sempre completa, podendo haver transio
de clulas de uma frao para outra, fazendo com
que a interpretao dos resultados e a respetiva
anlise estatstica constitua um verdadeiro desafio.
As limitaes adicionais desta tcnica prendem-se,
fundamentalmente, com a lise prematura e perda
de espermatozoides na primeira digesto e nos
mltiplos passos de transferncias e lavagens, que
reduzem a recuperao das clulas. Uma alternativa
da separao qumica a separao atravs da do prprio crime sexual, mormente relacionada
seleo fsica direta de clulas alvo (espermato- com a ausncia de testemunhas (Pinheiro, 2011).
zoides) da mistura (Sanders e col., 2006).
Em 2003, a mesma equipa que descreveu o
mtodo de lise diferencial preconizou o uso da mi-
crodisseco a laser (Laser Microdissection LMD)
como sendo uma tecnologia til na anlise de DNA
para identificao e isolamento de espermatozoides
a partir de clulas epiteliais da vtima, em amos-
tras relacionadas com crimes sexuais. Trabalhos
posteriormente publicados vieram a demonstrar
M. FTIMA PINHEIRO
que a LMD tambm conhecida por LCM (Laser
Capture Midrodissection), apresenta algumas limi-
taes, designadamente o preo do equipamento
(microscpio) e a elevada quantidade exigida de
material gentico masculino, traduzida na presena
de espermatozoides preservados, para possibilitar a
obteno de um perfil gentico masculino completo
(STRs autossmicos) (Pinheiro, 2011).
Tem havido, por parte da comunidade cient-
fica forense, um grande investimento no progres-
so tcnico desta rea, conforme se pode avaliar
atravs da profusa bibliografia existente sobre
vrios aspetos relacionados com a identificao
gentica em amostras biolgicas referentes a
crimes sexuais. Contudo, as mltiplas variveis e
desafios que se podem colocar durante o estudo
destas amostras tm redundado em resultados
periciais que, por vezes, ficam aqum do espe-
rado. A esta inabilidade para alcanar resultados
laboratoriais conclusivos de percias em que seria
de esperar a identificao do perfil gentico do
agressor, acresce a impossibilidade de, num nme-
ro relativamente elevado de casos, a investigao
criminal no conseguir identific-lo. Este impedi-
mento deve-se falta de informao proporcio-
nada pela vtima acerca do perpetrador e ndole
No obstante poder haver outras provas ma-
teriais que no as genticas que possam contribuir
para a condenao de um suspeito, o valor proba-
trio destas ltimas significativamente superior.
Tm sido divulgados casos nos Estados Unidos
relativamente aos quais foram cometidos erros
judiciais graves, devido ausncia de provas de
acusao seguras. O Innocence Project uma
organizao dedicada reviso de casos julgados e
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
a modificar o sistema de justia criminal para pre-
venir futuras injustias. Desde 1992 conseguiu que
os tribunais reconhecessem a existncia de erros
judicirios, de tal modo que at finais de Maro de
2011 foi declarada a inocncia de 267 condenados
atravs de estudos de DNA (Pinheiro, 2011).
3.3. AGRESSES FSICAS, ROUBOS E FURTOS
Quanto a estes tipos de crimes a amostra
mais frequentemente detetada o sangue, apesar
de poderem existir os restantes tipos de amostras
biolgicas, exceo do smen; isto , saliva, haver suspeita de crime, e ter de se recorrer ao
pelos e clulas epiteliais.
4 . C A R AC T E R S T I C A S DA S A M OS -
T R A S ( V ES T G I OS) D E I N T E R ESSE
EM C R I M I N A L S T I C A B I O L G I C A
4.1. SANGUE
O sangue o tipo de amostra mais frequen-
temente analisada no mbito da investigao
criminal, sob a forma de manchas secas, pelo
facto de haver, no caso da prtica dos crimes
mencionados, um nmero elevado de objetos ou
peas de roupa e/ou do prprio local do delito
impregnados com este fludo biolgico.
O sangue uma suspenso de leuccitos
(glbulos brancos), eritrcitos (glbulos vermelhos
ou hemcias) e plaquetas (fatores de coagulao
sangunea), no plasma. Cada mililitro de sangue
de um adulto normal contm entre 3.800 a 9.800
milhes de leuccitos.
O DNA extrado dos leuccitos do sangue,
uma vez que os eritrcitos so clulas anucleadas.
63
Esta extrao efetuada mediante a utilizao
de diferentes protocolos, sendo os mais usados
os que utilizam o Chelex ou a extrao orgnica,
com fenol-clorofrmio-lcool isoamlico. Esta l-
tima metodologia quase exclusivamente empre-
gue no caso da amostra de sangue se encontrar
em precrias condies de conservao, como
o sangue cadavrico em estado lquido, colhido
e conservado durante bastante tempo antes da
realizao da sua anlise gentica. Normalmente
esta situao ocorre quando o patologista forense
no vislumbrou interesse na sua colheita, por no
remanescente da amostra de sangue enviada para
o Servio de Toxicologia Forense (Pinheiro, 2008b).
As percias que envolvem esta amostra biol-
gica so, habitualmente, concludas com sucesso,
havendo, porm, casos excecionais em que, no
obstante as manchas de sangue serem visveis e
serem envidados todos os esforos metodolgi-
cos e tecnolgicos no sentido de serem obtidos
resultados, a sua anlise apenas proporciona perfis
parciais ou mesmo ausncia de resultados. Esta
circunstncia interpretada como sendo devida
presena de inibidores (grupo heme), que con-
firmada quando se faz a quantificao do material
gentico da amostra por Real-Time qPCR, metodo-
logia que, para alm de determinar a quantidade
de DNA, identifica a presena de inibidores.
4.2. SMEN
O smen uma suspenso de espermato-
zoides no lquido seminal. Um mililitro de smen
contm entre 60 a 120 milhes de espermato-
zoides. Esta quantidade suficiente para que,
na maioria das percias em que esteja presente
64
smen, seja vivel a identificao gentica do
seu dador, no obstante as adversidades atrs
descritas, relacionadas com o meio de onde estes
so recuperados.
O DNA a analisar extrado, maioritaria-
mente, dos espermatozoides, efetuando-se, pre-
viamente, a confirmao microscpica da sua
existncia, no caso de serem presentes esfrega-
os em lmina, efetuados a partir de exsudados
colhidos queixosa. , tambm, prtica corrente
realizar testes preliminares, a fim de se averiguar
a presena de smen. Contudo, a sensibilidade
destes testes precria, diminuindo com v-
rios fatores, entre os quais se destaca o tempo.
O que significa que estes testes so meramente
de orientao, embora, no raras vezes, e ape-
sar de serem negativos identificado um perfil
gentico masculino. Por isso, e em qualquer das
circunstncias, deve proceder-se extrao do
DNA da amostra biolgica.
A ausncia de espermatozoides pode ser
devida a vrios fatores, designadamente: a) ao
longo perodo que medeia entre a ejaculao
e a colheita de amostras; b) penetrao sem
ejaculao; c) anomalias no aparelho reprodu-
tor do agressor. Nas duas ltimas situaes a
quantidade de DNA seminal muito escassa,
porque os espermatozoides representam a prin-
cipal fonte de DNA nos ejaculados necessrios
subsequente identificao dos perfis genticos
(Soares-Vieira, 2007).
O smen pode ser identificado em zaragatoas
colhidas nas cavidades (vaginal, anal, bucal) ou no
exterior do corpo da vtima, em peas de vesturio
que esta envergava aquando da prtica do crime,
evidenciando-se as cuecas e/ou outras peas de
roupa ntimas que, com frequncia, so suportes
M. FTIMA PINHEIRO
que contm manchas. Tem sido analisado outro
tipo de suportes com smen (Pinheiro, 2011).
4.3. SALIVA
Um indivduo saudvel produz entre 1 a 1,5
litros de saliva por dia, podendo ocorrer a sua
transferncia, bem como a de clulas epiteliais que
nela esto retidas. Esta transferncia pode suceder
por contacto, tais como em produtos alimentares,
contentores de bebidas, pontas de cigarro, envelo-
pes ou em crimes sexuais em que houve ejaculao
na cavidade bucal. A transferncia tambm pode
dar-se por deposio de partculas de saliva, tais
como as que aderem a uma mscara ou a um
telefone (Goodwin e col., 2007).
A saliva, apesar de no conter clulas na sua
constituio, por transportar clulas epiteliais da
cavidade bucal, possui DNA. As amostras que
contenham saliva, tais como mordidas infligidas
s vtimas, filtros de cigarros fumados, garrafas
ou latas de refrigerantes e, ainda, selos ou envelo-
pes, so suscetveis de permitir a identificao do
agressor. A saliva presente em peas de vesturio
e/ou roupa de cama s ser objeto de estudo
se houver indicaes da sua presena, uma vez
que se trata de um produto incolor e que no
d mais consistncia ao tecido, ao contrrio, por
exemplo, do smen.
A saliva contm gua e glicoprotenas, para
alm doutros componentes, designadamente a
enzima amlase (alfa-amlase, denominada ptia-
lina). As clulas presentes num mililitro de saliva
variam entre 100.000 400.000. A pesquisa da
alfa-amlase, em amostras biolgicas submetidas
a percia de Gentica Forense, pode ser efetuada
mediante a utilizao de produtos da Phadebas,
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
divididos em duas categorias: Press Test e Tube
Test, constituindo estes ensaios preliminares ape-
nas testes de orientao. A amlase est presente
na saliva numa concentrao superior a 50 relati-
vamente a outro fludo corporal (Goodwin e col.,
2007). O percurso laboratorial destas amostras
idntico ao realizado para as restantes amostras
biolgicas.
4.4. PELOS
Os pelos podem ser retirados de peas de
vesturio, das mos, ou de qualquer outra loca-
lizao do corpo da vtima, ou ainda do local do
crime, devendo ser colhidos e acondicionados
com precauo, por vrias razes, entre as quais
se destaca o facto de poderem ser provenientes
de pessoas distintas. Estes podem ser transferidos
durante o contacto fsico, por isso a sua presena
pode permitir a associao de um suspeito a uma
vtima ou a do suspeito/vtima a um local de crime.
Esta associao particularmente til em
crimes violentos, tais como homicdios, crimes se-
xuais e agresses fsicas, em que ocorreu contacto
fsico, podendo ter havido transferncia de pelos.
Outros crimes, como os assaltos a residncias e
roubos envolvem, em geral, a colheita de vestgios
subungueais e manchas de peas de roupa, que
podem conter pelos teis na identificao dos
suspeitos (Deedrick, 2000).
O tipo de pelos recuperados, as suas con-
dies morfolgicas e o nmero encontrado so que caram espontaneamente, sem tecidos do
fatores com impacto no seu valor, enquanto evi-
dncia, na investigao criminal.
Nos humanos existem pelos em diversas par-
tes do corpo, possuindo caractersticas que podem
possibilitar a determinao da sua provenincia,
65
no que respeita regio corporal. Todavia, na
perspetiva da Gentica Forense esta determinao
no relevante, o que importa o estabelecimen-
to do respetivo perfil gentico, pelo que no SGBF,
DN se usa o termo pelo, independentemente da
sua origem, mesmo que se trate de um pelo com
um comprimento apenas compatvel com o de um
pelo proveniente do couro cabeludo (cabelo). Esta
opo prende-se com a circunstncia de se evitar
usar terminologia inadequada, quando se trata
de uma percia que envolve um grande nmero
de vestgios deste tipo e, por isso, se torna difcil
usar a nomenclatura correcta, no que se refere
localizao corporal.
O couro cabeludo humano contm um ele-
vado nmero de folculos pilosos, que produzem
pelos, como anteriormente mencionado, atraves-
sando trs fases de desenvolvimento, a anagene,
em que o pelo se encontra em crescimento ativo,
e cuja durao varia de 2 a 8 anos; a catagene, em
que se verifica a paragem da actividade celular;
a telogene, quando ocorre a morte das clulas
(apoptose celular), havendo a quebra da dupla
cadeia do DNA das razes dos pelos, e estes aca-
bam por cair (Pinheiro, 2008b).
Os pelos so maioritariamente constitudos
por queratina (protena), pequenas quantidades
de metais, ar e pigmento, a melanina, sendo esta
ltima, um potente inibidor da amplificao (PCR).
Por isso, quando so presentes para estudo do
DNA hastes de pelos, ou mesmo razes de pelos
folculo piloso aderentes, no se obtm resultados
quando se estuda apenas DNA nuclear. Acresce
ainda a possibilidade da existncia de fatores que
possam impedir uma eficaz extrao do DNA,
como os tratamentos qumicos, resistentes aos
66
mtodos de digesto enzimtica que usam ditio-
treitol, proteinase K, detergentes e o aquecimento
para dissolver o pelo (Pinheiro, 2008b).
De acordo com o atrs referenciado, a ob-
servao microscpica do pelo no tem como
objetivo a determinao da regio corporal da sua
provenincia, mas desde logo permitir estabelecer
se o pelo humano ou animal, bem como obser-
var cuidadosamente a raiz, no sentido de se poder
inferir a sua fase de desenvolvimento (anagene,
catagene ou telogene), o que permitir decidir
acerca da estratgia a seguir com a finalidade de
determinar o seu perfil gentico.
Num indivduo so, 80% a 90 % dos fol-
culos pilosos da cabea (cabelos) esto na fase
anagnica, 2% catagnica e 10% a 18% telog-
nica. O perodo mdio de crescimento do pelo
(cabelo) aproximadamente 1.000 dias, sendo
que as restantes fases ocorrem num perodo de
100 dias. Aproximadamente 10% dos pelos da
cabea humana, os cabelos, representando entre
100 e 1.000, encontram-se na fase telognica.
Estes pelos destacar-se-o do folculo inativo se
a mnima fora, ou combinao de foras, forem (cor loura e ruiva). A medula representa a parte
exercidas (Deedrick, 2000).
Estruturalmente, o pelo constitudo por trs
partes principais: cutcula ou epidermcula, crtex
ou substncia cortical e medula ou canal medu-
lar. O exame microscpico do pelo pressupe a
observao cuidadosa destas estruturas e permite
distinguir pelos humanos de no humanos. Em
especial as caractersticas da medula podem fa-
cultar a determinao da espcie animal qual o
pelo pertence. Evidencia-se, no entanto, que este
tipo de percia apenas acessvel a peritos muito
experientes nesta rea, sendo que porventura os
resultados alcanados podem no trazer qualquer
M. FTIMA PINHEIRO
mais-valia para a investigao criminal. Por isso,
reitera-se a ideia de que a identificao da espcie
qual o pelo pertence, bem como a identificao
do respetivo perfil gentico, no caso dos pelos
humanos, se adequa mais ao que pretendido
em termos de identificao do seu dador do que
um exame exaustivo s suas caractersticas mor-
folgicas que, em qualquer circunstncia, nunca
permitir a identificao do seu dador.
A camada exterior das clulas do pelo, a
cutcula, composta por clulas sobrepostas ou
escamas, cuja principal funo manter a in-
tegridade do pelo e impedir a transferncia de
substncias solveis do exterior para o interior.
A disposio das clulas da cutcula diferente
nos pelos humanos e na dos animais.
Nos pelos humanos o crtex, que constitui
a maior parte do pelo, consiste, basicamente,
em clulas alongadas e material intercelular.
Os grnulos de pigmento so pequenos, esfricos
com um dimetro de 0,2 a 0,8 m. Estes so
compostos por melanina, sendo que h 2 tipos:
eumelanina (cor castanha e preta) e feomelanina
central do pelo, sendo que no est presente em
todos os pelos humanos e, quando presente, esta
pode ser contnua ou descontnua. Dependendo
do tipo de pelos e da sua provenincia (humana
ou no humana) o dimetro da medula muito
varivel. Pode constituir de 0% a 95% do pelo
(Gaudette, 2000a).
A fim de se determinar se os pelos so
humanos ou de animal, h vrios parmetros a ter
em considerao, designadamente, o comprimento,
dimetro, cor, tratamento, medula, ndice medular,
distribuio da pigmentao, haste, raiz, extremida-
de, escamas, seco transversal (Gaudette, 2000b).
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
Algumas destas caractersticas s so visveis ao
microscpio, como: o dimetro, a medula e, por
conseguinte, a determinao do ndice medular, a
distribuio da pigmentao, a raiz, a extremidade,
as escamas e a seco transversal.
Destas, sero apenas referenciadas as que
tm maior importncia no contexto das percias
de Gentica Forense. O dimetro do pelo humano
possui de 0,05 0,15 milmetros, o dos animais
pode ser idntico ou muito diferente; a medu-
la dos animais pode ter um complexo regular e
geomtrico de clulas; o ndice medular (razo
entre o dimetro da medula e o dimetro do pelo)
nos pelos humanos quase sempre inferior a
1/3 e nos animais , usualmente, superior a 1/3.
As escamas (clulas de revestimento) dos pelos
humanos formam um padro irregular e anular,
enquanto as dos animais possuem uma variedade
de tipos, podendo o mesmo pelo exibir mais do
que um tipo.
4.5. CLULAS EPITELIAIS
De acordo com o atrs referido as clulas
epiteliais podem ter diversas provenincias no que
respeita regio corporal, para alm de poderem
estar presentes em distintos suportes.
Importa, tambm evidenciar que estas c-
lulas podem ter origem em objetos tocados. A
quantidade de material celular transferido de-
pende do tempo que a pele esteve em contacto
com o objeto, da presso aplicada, da presena
de fluidos, como o suor que intervm na sua
transferncia. Alguns indivduos transferem clulas
da sua pele mais facilmente do que outros; estes
indivduos so classificados como bons dadores/
propagadores. Assim, qualquer superfcie com
67
que o perpetrador contactou no local do crime,
incluindo marcas de contacto com a vtima, pode
conter as suas clulas epiteliais. Na maioria dos
casos, o baixo nmero destas clulas, provenien-
tes apenas de contacto, proporciona um sucesso
muito limitado na obteno de um perfil de DNA.
Os mtodos de visualizao destes vestgios der-
mopapilares, como por exemplo o uso da ninidrina
(corante usado na rotina para visualizao de im-
presses digitais latentes), que deteta a presena
de aminocidos, podem ser teis na identificao
de amostras que contenham este tipo de clulas
(Goodwin e col., 2007).
O tipo de suporte sobre o qual a impresso
digital est depositada tambm muito impor-
tante. interessante perceber que as superfcies
habitualmente consideradas ideais para a visua-
lizao e transplante de impresses digitais (lisas
e no porosas, como vidro e metal) so menos
adequadas para a recuperao de DNA vestigial.
Enquanto superfcies habitualmente inadequadas
para fins lofoscpicos (superfcies rugosas), so
bons suportes para a recolha de DNA vestigial
(Lagoa & Pinheiro, 2006).
5 . VA LO R I Z A O DA P ROVA
As percias do mbito da criminalstica bio-
lgica tm, em geral, como principal objetivo a
identificao do autor do crime. Esta identificao
efetuada pelos rgos de investigao criminal que
solicitam percias aos laboratrios forenses, no sen-
tido de os coadjuvarem na descoberta da verdade.
Este tipo de percia pressupe vrias fases
que incluem o estudo laboratorial, a anlise dos
resultados tendo em vista a comparao dos perfis
68
genticos, a valorizao estatstica dos mesmos se
os perfis forem idnticos, e a elaborao do rela-
trio pericial. Este deve ser exaustivo, referindo-
-se e descrevendo-se todo o material recebido,
testes preliminares efetuados, tcnicas usadas
na extrao do DNA, mtodos de tipagem e re-
sultados obtidos. As concluses devem incluir
as comparaes das caractersticas genticas
das amostras biolgicas presentes a exame e as
mesmas caractersticas de amostras biolgicas
colhidas vtima e suspeito/suspeitos.
As concluses possveis so trs: a) os perfis
de DNA do suspeito e da(s) amostra(s) biolgica(s)
(cujas caractersticas genticas no so idnticas provir do indivduo mencionado, atendendo aos
s da vtima e que h indcios de que possam
pertencer ao suspeito) no so idnticos; b) h
concordncia dos referidos perfis; c) o estudo
no conclusivo.
Quando h concordncia de perfis genticos
efetua-se a valorizao estatstica dos resultados,
recorrendo ao teorema de Bayes, que permite
determinar as probabilidades finais de um sucesso
a partir de probabilidades iniciais. Esta probabili-
dade inicial, designada de probabilidade a priori,
deve ser fornecida pelo juiz face ao seu conhe-
cimento do processo judicial que deu origem
investigao (Carracedo, 1999).
Em face do exposto, para se fazer a valoriza-
o objetiva da prova cientfica basta multiplicar
o valor da probabilidade a priori (grau de crena,
por parte do juiz, de que a amostra pertena a
um determinado indivduo) pela razo de vero-
similhana ou Likelihood Ratio (razo bayesiana
de probabilidades), obtendo-se a probabilidade
a posteriori.
Quando o valor da probabilidade a priori no
fornecido atribui-se o valor de 0,5, considerando-se
M. FTIMA PINHEIRO
que a probabilidade da mancha provir de um
determinado indivduo igual de proceder de
indivduo distinto, no tendo em considerao a
prova gentica.
Se se analisar uma amostra biolgica, cujas
caractersticas genticas so idnticas do indi-
vduo com quem se pretende efetuar a compara-
o, normalmente o suspeito, para se determinar
a probabilidade de que a amostra provenha do
indivduo mencionado, tm de ser consideradas,
pelo menos, duas hipteses alternativas possveis
e que se excluem mutuamente. A hiptese H1,
que se refere possibilidade da amostra biolgica
resultados genticos observados; e a hiptese
H2 respeitante possibilidade da amostra provir
de outro indivduo que no aquele. Tendo em
considerao estas duas hipteses obtm-se a
razo de verosimilhana ou razo bayesiana de
probabilidades, tambm designada de LR, usando
a seguinte frmula:
LR = Prob. dos resultados genticos se H1 verdadeira
Prob. dos resultados genticos se H2 verdadeira
Se forem utilizados loci independentes,
o clculo do valor de LR ser simplesmente o pro-
duto do inverso das frequncias dos fentipos dos
resultados genticos dos marcadores estudados
para a resoluo do caso, tendo em considerao
a populao de referncia adequada.
O valor de LR encontrado (X) indica que
X vezes mais provvel que sejam observados os
resultados genticos, assumindo que a amostra
pertena ao indivduo em questo, comparada
com a possibilidade de no pertencer.
CAPTULO 2. Criminalstica Biolgica
Evett (1987), semelhana de Hummel para
os casos de filiao, elaborou uma escala em que
figuram os valores de LR obtidos e os correspon-
dentes predicados verbais, indicativos da fora da
prova (Tabela 1).
Tabela 1. Tabela de Evett.
Likelihoodo Ratio (LR) Evidncia da prova
1-33 Fraca
33-100 Regular
100-330 Boa
330-1000 Forte
Superior a 1000 Muito forte
O uso da escala de Evett deve ser evitado,
uma vez que difcil transmitir o significado dos
predicados verbais, para alm de hipervalorizar
a prova cientfica. Do ponto de vista prtico, tais
predicados podem induzir o juiz a tomar uma
deciso, baseada nos referidos predicados que
correspondam a valores de LR que, em deter-
minadas circunstncias (se o suspeito para al-
guns dos sistemas utilizados possui alelos pouco
frequentes na populao), no correspondam
realidade.
A probabilidade de concordncia, no raras
vezes, confundida com a probabilidade de coin-
cidncia ou probabilidade de matching. Trata-se,
porm, de uma probabilidade a posteriori, cal-
culada numa situao real e refere-se a um s
marcador gentico e a um determinado indivduo.
A probabilidade de concordncia acumulada
diz respeito ao conjunto dos polimorfismos de DNA
usados na resoluo de um caso, representando a
probabilidade de que um indivduo, tirado ao acaso
69
da populao, coincida para os fentipos relativa-
mente a todos os marcadores genticos estudados
com os fentipos da amostra biolgica (Fernndez,
1999). Para n sistemas dada pela frmula:
C = p1.p2...pn
Em que p1, p2...pn so as probabilidades
de concordncia dos sistemas 1, 2, n. (Pinheiro,
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