Espectrometra ultravioleta-visible

La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UVVIS

implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin
ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes
(el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se
someten a transiciones electrnicas.

Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de

fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado
al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide
transiciones desde el estado basal al estado excitado.

La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra

ultravioleta-visible (UVVIS ) es una espectroscopia de emisin de
fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin
electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana
(UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico, es
decir, una longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiacin
absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca
transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos
grupos funcionales de molculas, y adems, para determinar el
contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los
componentes de soluciones de iones de metales de transicin y
compuestos orgnicos altamente conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica
para determinar pequeas cantidades de cierta sustancia, como las
trazas de metales en aleaciones o la concentracin de cierto
medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.

La ley de Beer-Lambert

establece que la absorbancia de una solucin es directamente

proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la
espectrometra UVVIS puede usarse para determinar la
concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez
cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser
obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de
extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de
una curva de calibracin.

La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos

compuestos, pero no sirve como relacin universal para la
concentracin y absorcin de todas las sustancias. En molculas
complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol
Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una
relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la
concentracin.

Ley de Beer-Lambert

No debe confundirse con Ley de Lambert.

En ptica, la ley de Beer-Lambert, tambin conocida como ley de

Beer o ley de Beer-Lambert-Bouguer es una relacin emprica que
relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material
atravesado.
La ley de Beer fue descubierta independientemente (y de distintas
maneras) por Pierre Bouguer en 1729, Johann Heinrich Lambert en
1760 y August Beer en 1852. En forma independiente, Wilhel Beer y
Johann Lambert propusieron que la absorbancia de una muestra a
determinada longitud de onda depende de la cantidad de especie
absorbente con la que se encuentra la luz al pasar por la muestra.

Limitaciones de la ley de Lambert-Beer

Esta ley permite establecer una relacin lineal entre absorbancia y

concentraciones de una especie absorbente a una temperatura
dada. La representacin de absorbancia frente a concentracin es
una recta que pasa por el origen. Sin embargo, se encuentran
frecuentes desviaciones con relacin a la proporcionalidad directa
entre absorbancias y concentraciones que limitan la aplicacin de la
ley. Las principales causas son:
La concentracin. Slo es aplicable a disoluciones diluidas (menor
10-2 M); en disoluciones concentradas la distancia entre partculas
absorbentes es tan pequea que se produce una modificacin en la
distribucin de cargas de las mismas, lo que se traduce en una
alteracin en la capacidad de absorcin a una longitud de onda
determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilucin.

La interaccin entre el soluto y la radiacin debida a mecanismos

diferentes a la absorcin pero que producen alteraciones en la
intensidad de la luz, tales como la dispersin, reflexin, la
fluorescencia, etc.

Utilizacin de radiacin no monocromtica, puesto que la ley est

definida para radiaciones con una sola longitud de onda. Sin
embargo, si la calidad del equipo no es buena, se obtienen bandas
de radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de onda.

Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o

presencia de impurezas.

Desviaciones qumicas, debidas a reacciones del absorbente con

el disolvente