Laboratorio 2: Catlisis de

Enzimas
Conceptos:

Las enzimas catalizan reacciones bajando la activacin de energa necesaria para que
una reaccin ocurra. Una enzima es una clase de protena que sirve como cataltico,
agentes qumicos que cambian la velocidad de una reaccin sin ser consumidas por
la reaccin. La activacin de energa es la energa que deben poseer los tomos o molculas
para reaccionar. La molcula en la que acta la enzima se conoce como substrato.

En una reaccin mediada por enzimas, molculas sustrato cambian y se forma el producto.
La molcula de la enzima permanece sin cambios y puede catalizar el mismo tipo
de reaccin una y otra vez. Cada enzima es especfica para la reaccin que va a catalizar. Si
se aade una pequea cantidad de catalasa al perxido de hidrgeno se podrn observar
burbujas de oxgeno formndose.

Enzima = Catalasa
Sustrato = Perxido de Hidrgeno (H2O2)
Productos = Agua y Oxgeno

Las enzimas son protenas globulares y su conformacin doblada crea un rea conocida como el
sitio activo. La naturaleza y distribucin de los aminocidos en el sitio activo es especfico para
el sustrato. Aun cuando hay diferentes molculas sustrato estn presente, las que tienen slo la
forma complementaria al sitio activo se unirn con el sitio activo de la enzima. Cuando una
enzima se une al sustrato apropiado, cambios sutiles en el sitio activo se producen. Esta
alteracin del sitio activo se conoce como un ajuste inducido. El ajuste inducido aumenta la
catlisis, como la enzima convierte el sustrato en producto. La liberacin de los productos de la
enzima restaura su forma original. La enzima puede repetir esta reaccin una y otra vez, siempre
y cuando las molculas de sustrato estn presentes.

Algunos Factores que Afectan la Reaccin de una Enzima

La conformacin de una enzima se mantiene por las interacciones entre los diversos
aminocidos que la componen, y esta conformacin es sensible a cambios en el entorno de la
enzima. Dos influencias importantes son el pH y la temperatura. Cuando la conformacin de una
enzima es alterada de manera significativa debido a la variacin de temperatura o pH, la enzima
ya no puede catalizar reacciones. Una enzima se desnaturaliza cuando pierde su forma
funcional.

Ph y la Funcin de la Enzimas

Cada enzima funciona mejor dentro de un cierto intervalo de pH. Por ejemplo, la enzima
pepsina, que trabaja en el estmago, funciona mejor en un ambiente fuertemente cido. La
lipasa, una enzima que se encuentra en el intestino delgado, funciona mejor en un entorno de
base. Cuando el pH cambia, el sitio activo se distorciona progresivamente y afecta a la funcin
enzimtica. Qu ocurre con la catlisis cuando una enzima se somete a un pH lejos de su rango
ptimo?

En la presencia de cualquiera, exceso de H + o exceso de iones OH-, la forma de la protena

globular es alterada. El sitio activo se distorsiona y la enzima no puede catalizar reacciones.

Temperatura y Funcin de la Enzima

Las reacciones qumicas avanzan segn va aumentando la temperatura, por lo que, en general,
la catlisis aumentar a temperaturas ms altas. Sin embargo, cada enzima tiene una
temperatura ptima, y ms all de este punto se pierde la forma funcional de la enzima.
Temperaturas de ebullicin desnaturalizan la mayora de las enzimas.

Diseo del Experimento

En este experimento, se investigar la velocidad a la que la enzima catalasa convierte sustrato

en producto. Esto permitir a la catalasa reaccionar con perxido de hidrgeno para cantidades
variables de tiempo y luego se detiene la reaccin mediante la adicin de H2SO4.

Para determinar la cantidad de perxido de hidrgeno que queda despus de la reaccin, se va

a hacer una valoracin con KMnO4. En tal valoracin, se aade lentamente una sustancia
qumica (KMnO4) que causar un cambio de color hasta que se logra un color objetivo.
Para determinar la cantidad de perxido de hidrgeno (sustrato) que se ha descompuesto por
la catalasa a diferentes tiempos, se mide la cantidad de perxido que queda en cada matraz.

Lentamente aadir KMnO4, que es de color prpura, al matraz. El perxido en el matraz hace
que el KMnO4 a perder color cuando la solucin se mezcla a fondo. Cuando todo el perxido ha
reaccionado con KMnO4, cualquier KMnO4 adicional seguir siendo de color marrn claro o
rosado, incluso despus de agitar la mezcla. Este es el punto final. Anote la cantidad de KMnO4
que ha utilizado. (El KMnO4 ms se utiliza, el perxido es ms en el frasco.)

Sugerencias de Laboratorio:

1. Asegrese de valorar slo 5 ml de la muestra a la vez. De esta manera, si se excede o tiene un

error en la titulacin, tendr muestra suficiente para repetir la valoracin.

2. Puesto que usted estar comparando cantidades de H2O2 que permanecen en la muestra
despus de diferentes tiempos de reaccin, asegrese de que todas las muestras son del mismo
tamao (5 ml).

3. Ponga la solucin a titular sobre un pedazo de papel blanco para que pueda ver los cambios
de color con facilidad.

4. Haga un remolino (sin agitar) el frasco despus de cada pocas gotas para mezclar bien.

5. Para cada ensayo, asegrese de detener la titulacin en el mismo color.

Leyendo la Bureta

Supongamos que la bureta se llena hasta el punto indicado en la figura a la izquierda. Se podra
grabar el punto inicial como 3,30 ml, el punto final sera 3,90 ml. Por lo tanto, la valoracin habra
requerido 0,60 ml. Recuerde que usted debe leer el nmero que est en la parte inferior del
menisco.
Anlisis de Resultados:

Se puede calcular la velocidad de una reaccin mediante la medicin del tiempo, ya sea por la
desaparicin de sustrato (como en nuestro ejemplo catalasa) o la aparicin del producto
(como en la grfica anterior). Por ejemplo, en el grfico anterior, la tasa es en moles / segundo,
durante el intervalo de 0 a 10 segundos?

Calcula la tasa en moles/segundo entre 40 y 50 segundo

La respuesta es cero ya que no hay ms molculas sustrato.

Quiz

1. Durante que tiempo de intervalo la enzima trabaja a su mxima velocidad?

Respuesta:

A. De cero a 30 segundos. Durante este intervalo la enzima est trabajando a su mximo ya

que la molcula enzima encuentra otra molcula sustrato tan pronto libera el producto.

2. Con el fin de mantener la velocidad constante durante el transcurso de tiempo completo,

que es lo siguiente que se debe hacer?

Respuesta:

C. Se aade ms sustrato, ya que la reaccin baja al la enzima no tener un nmero mximo de

molculas de sustrato para interactuar.

3. Cul de las siguientes grficas representa la velocidad de la reaccin que se muestra arriba?

Respuesta:
B. Esta grfica muestra la tasa en su valor mximo durante los primeros segundos del
experimento, luego de esto la tasa de reaccin baja a cero.

4. Cul es el papel de cido sulfrico (H2SO4) en este experimento?

Respuesta:

E. Se desnaturaliza la enzima mediante la alteracin del sitio activo ya que el cido sulfrico
baja el pH. De esta manera la enzima ya no funcionar.

5. Un estudiante estaba realizando una valoracin para este laboratorio, y accidentalmente se

excedi en el punto final. Cul sera el mejor paso para obtener buenos datos de este punto?

Respuesta:

B. Repetir la valoracin con la muestra restante reservado.

Mantener todas las muestras hasta que se termine la titulacin.