CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los
ms importantes son aquellos que se basan en:

a) Su consistencia

b) Su utilizacin

c) Su composicin

d) Su origen

SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).

1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose

por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo
nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se
utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin
bacteriana de una determinada concentracin.

2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles

un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es
una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque
su punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no
puede utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento
para muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polmero de azcares
obtenido de algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero
soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32
y 39C y nose funde por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez
fundido alrededor de los 45C. Tiene el inconveniente de que introduce
compuestos orgnicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las
necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una mezcla
de polisacridos, Araki, en 1937, los dividi en dos grupos:- agarosa, con
poco sulfato, libre de cido pirvico, y- agaropectina, con mucho sulfato y
gran cantidad de cenizas. La proporcin de agarosa a agaropectina en el agar
vara segn el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines,
aunque los ms importantes son: agar comercial para la industria alimenticia,
agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis
en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza
en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la ausencia de metales
txicos.
3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos,
agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para
preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad
de las bacterias

SEGN SU UTILIZACIN.

1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten
requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar
nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo.
Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar
Columbia, etc.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias

nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo,
bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del
mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita
cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la
sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de

ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento
de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una
poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo
selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de enterobacterias.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo

impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante
ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen
habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra
que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un
medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes
Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.

5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas

bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un
azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El
medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo
son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS
(que es doblemente diferencial), etc.

6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad

especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que
vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar
Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya
aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados
en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran
cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos
microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y
reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios
CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes
urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin
de sustratos cromognicos especficos.

7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de

clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin
de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados
para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn
(BHI), es un ejemplo tpico de estos medios.

8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por

diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como
controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de
Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:

a) haciendo pases peridicos de placa a placa,

b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y

c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que

no pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse
introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior
delmedio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los
medios de Stuart-Amies,Cary-Blair, etc.

ATENDIENDO A SU COMPOSICIN.
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios
de cultivo pueden ser clasificados en:

1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se

preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su
composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es
rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en
condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta.
En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms
empleados.

2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin

exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composicin
perfectamente definida.

3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento

exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico
para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan
los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo
(extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en
ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente
en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo
son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

Segn su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma
de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
 DESCRIPCIN Y UTILIZACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.

Son los ms corrientemente utilizados, y aunque no vamos a enumerarlos

todos, s son los ms conocidos en un laboratorio de Microbiologa.

Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que
no presentan exigencias particulares. No es diferencial.

Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la

investigacin de los diversos tipos de hemlisis(, gamma ). Se utiliza
para el crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se
puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que
estn en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores
del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que
puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que
se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles.La sangre
utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al
5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies
(caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o
contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias
inhibidoras del crecimiento de determinados grmenes. Agar chocolate: El
agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio
base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al
medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina
termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al
aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero
en l pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar
chocolate puede convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si
aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre.
Estas mezclas, denominadas de forma diferente segn las casas comerciales
(Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de compuestos que
confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin
de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos
para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es
el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra
cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de
tres antibiticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la flora
acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e
identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los grmenes
Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para
enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su composicin lleva un
azcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio
diferencial. Los grmenes que fermenten la lactosa producen una acidificacin
del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes.
Las colonias lactosa negativas sern incoloras, apareciendo del mismo color
que el medio subyacente (naranja).

Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente)

est recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los
microorganismos de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita
la invasin de los cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su
composicin le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la
interpretacin sea diferente al anterior medio por la incorporacin de otro
indicador: el azul de bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecern de
color amarillo y las lactosa negativas lo harn con un color verdoso, blanco o
azulado.

Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de

Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales
biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y
grmenes Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos
permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de
las que no lo hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no
fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar
todas las colonias que no cumplan este requisito. El agar SS es doblemente
diferencial, porque adems de indicarnos el comportamiento de los grmenes
con relacin a la lactosa, nos muestra los grmenes que son capaces de
producir cido sulfhdrico, que se manifiesta como un precipitado de color
negro en el centro de la colonia. As, una colonia incolora y con un punto
negro central es sospechosa de Salmonella, y ser exclusivamente a estas
colonias a quienes se hagan las pruebas bioqumicas confirmatorias de esta
especie. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el
crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. Por
esta razn debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como
el Hektoen.

Agar Hektoen :Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar

SS. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia
de tres azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder
diferencial de este medio. Este medio es capaz de detectar los grmenes
formadores de SH2, igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se
deben a su riqueza en peptonas y azcares, que neutralizan el efecto inhibidor
de las sales biliares respecto a ciertos grmenes de cultivo delicado (Shigella
en particular).El crecimiento de Salmonella es excelente, igual que el de
Shigella, obtenindose colonias ms numerosas y voluminosas que en los
medios selectivos usuales. La inhibicin tiene lugar, esencialmente, sobre E.
coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Hay que sealar que el
vibrin colrico crece bien en este medio.

C.P.S. ID3. :Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la

identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin
del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn).
La identificacin solo requiere la adicin de un reactivo para confirmar o
descartar la especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren
los sistemas de identificacin habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New
GBS: Medios utilizados para deteccin de Streptococcus agalactiae, mediante
la utilizacin de un sustrato cromognico especfico de este microorganismo.

Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la

realizacin de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los
antimicrobianos. A l nos referiremos ms ampliamente en el captulo
correspondiente

Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de

grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio
muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es
un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de
aerobios, anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al
aumentar, se manifiesta por un color rosa del medio.

Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos.

Su elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de
los otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este
medio en diferencial: as se puede identificar presuntivamente el
Staphylococcus aureus, ya que estegrmen crece bien en medios salados y
fermenta el manitol (colonias amarillas).

Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa

positivos, a la vez que los diferencia del resto.

Medio de Loeffler: Es un medio especfico para el cultivo de

Corynebacterium difteriae.

Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS):Similar al agar SS. Es

un medio diferencial e inhibidor a la vez.

Agar Kligler: Medio especfico para pruebas de identificacin de

enterobacterias. Aunque de l hablaremos conms detenimiento en el captulo
de pruebas de identificacin bacteriana, podemos ir adelantando que se tratade
un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del
microorganismo ante dos azcares (glucosa y lactosa), investigar la formacin
de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a
partir del tiosulfato sdico.

Agar Levine EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de

enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia
muy bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo
metlico caracterstico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para
enriquecimiento de Salmonellas.

Agar Cetrimida. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas,

inhibiendo Gram positivos y la mayora de enterobacterias.El segundo pone
adems de manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz
UV.

Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el

cultivo de anaerobios.

Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos

que permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis

Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales

creciendo a 42 C en microaerofilia.

Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se utiliza para el aislamiento

de bacterias del gnero Legionella

Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium

tuberculosis. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el
crecimiento de otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de
enriquecimiento.

Los medios de cultivo en microbiologa

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en

composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se
aadirn otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la

preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en l.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos

ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias
y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y
amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

Condiciones generales para el cultivo de

microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos
por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,

como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes
o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de
los factores nutritivos lbiles.

Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y
otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a

muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.

Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como

indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer
de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo

productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en
una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que
se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.

6- pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y

43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y
los saproftos tienen rangos ms amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)

La evolucin de los medios de cultivo

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en
el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios
de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos
de inflexin en su evolucin.

La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo

Brefeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos
realizados a base de gelatina.

Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao)
y no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo
puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.

Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata

como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido,
diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido
transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.

En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin

con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal

planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre

las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron
gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.
Disearon este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica
favoreca el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus
procesos metablicos, eran los nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos
nutrientes del medio.

En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores

de pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin
de cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.

Tipos bsicos de medios de cultivo

atendiendo a su estado fsico:

lquidos

semislidos

slidos

atendiendo a su utilidad prctica:

Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia

variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX,
FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se

aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las
sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac
Conkey, Kanamicina-Vancomicina)

enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora

competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas

especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de
bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein).

Medios para identificacin:

 diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las
peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo)
especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se
puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-
Fermentacin)