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Objetivo: El objetivo principal de los tres estudios presentados en este trabajo fue evaluar los

efectos de los nuevos dentfricos que contienen 1,5% de arginina, un compuesto de calcio insoluble
y fluoruro por su capacidad para promover la remineralizacin del esmalte desmineralizado y para
prevenir la prdida mineral del sonido muestras de esmalte Un objetivo secundario fue determinar
los efectos sobre el metabolismo de la placa con respecto a la conversin de arginina en amonaco
y sacarosa en cido lctico.

Mtodos: en el Estudio 1, se utiliz un modelo clnico de remineralizacin / desmineralizacin


intraoral para evaluar la capacidad de promover la remineralizacin del esmalte de dos dentfricos
que contienen 1,5% de arginina y 1,450 ppm de fluoruro, como monofluorofosfato de sodio (MFP),
en relacin con un control positivo con diclcico fosfato dihidrato (Dical) y 1450 ppm de fluoruro, y
un control negativo con Dical y 250 ppm de fluoruro. Uno de los dentfricos que contena arginina
contena Dical y el otro contena carbonato de calcio como fuente de calcio insoluble. La
microrradiografa y el anlisis de imgenes se usaron para medir los cambios minerales. El estudio
utiliz un diseo cruzado doble ciego con un perodo de tratamiento de dos semanas. Cada perodo
de tratamiento fue precedido por un perodo de lavado de una semana. Cada producto se us dos
veces al da durante dos semanas. En los otros dos estudios, se evalu la capacidad de los dentfricos
que contenan 1,5% de arginina y fluoruro para prevenir la desmineralizacin de los bloques de
esmalte sano utilizando un modelo clnico de desmineralizacin / remineralizacin intraoral y un
diseo cruzado doble ciego con un perodo de tratamiento de cinco das. Un perodo de lavado
mnimo de una semana precedi a cada fase de tratamiento. Se us microdureza para evaluar los
cambios minerales. Se administraron desafos cariognicos sumergiendo cada retenedor intraoral
en una solucin de sacarosa al 10% cuatro veces al da. Cada producto se us dos veces al da
durante el perodo de tratamiento. La placa se recolect de los especmenes para medir la capacidad
de la placa para convertir arginina en amonaco (Estudios 2 y 3) y sacarosa en cido lctico (Estudio
3) al final de cada perodo de tratamiento. En el Estudio 2, se compar un dentfrico que contena
1.5% de arginina, Dical y 1450 ppm de fluoruro como MFP con un control positivo emparejado que
contena 1450 ppm de fluoruro y un control negativo emparejado que contena 250 ppm de
fluoruro. En el Estudio 3, se compar un dentfrico que contena 1.5% de arginina, carbonato de
calcio y 1000 ppm de fluoruro como MFP con un control positivo emparejado que contena 1000
ppm de fluoruro y un control negativo emparejado que contena 0 ppm de fluoruro.

Resultados:

En el estudio 1, el porcentaje de cambios minerales fue de +18.64, +16.77, +4.08 y -24.95 para el
arginina al 1.5% / fluoruro Dical / 1450 ppm, el arginina al 1.5% / carbonato clcico / 1450 ppm
fluoruro, el control positivo y dentfricos de control negativo, respectivamente. La validacin del
estudio se logr con xito al mostrar que el control positivo fue estadsticamente significativamente
mejor que el control negativo para promover la remineralizacin (p = 0,0001). Los dos productos de
prueba que contenan arginina fueron estadsticamente significativamente mejores que el control
positivo (p <0,05). No se observ una diferencia significativa en la eficacia entre los dos productos
que contienen arginina, lo que indica que la eficacia en la promocin de la remineralizacin fue
independiente de la eleccin de Dical o el carbonato de calcio como fuente de calcio insoluble. En
el Estudio 2, los valores porcentuales de desmineralizacin fueron -8.50, +1.67 y +12.64 para el 1.5%
de arginina / Dical / 1.450 ppm de fluoruro, el control positivo y el control negativo de los dentfricos,
respectivamente. La validacin del estudio se logr con xito al mostrar que el control positivo fue
estadsticamente significativamente mejor para prevenir la desmineralizacin que el control
negativo (p <0,0001). Se demostr que el dentfrico que contena arginina era estadsticamente
significativamente mejor para prevenir la desmineralizacin del esmalte que el control positivo (p
<0,0001). Las medidas del metabolismo de la placa para la placa expuesta a los tres tratamientos
dieron los siguientes valores para la produccin de amonaco despus de una prueba de arginina-
sacarosa, expresada en nanomoles por placa de miligramos: 162.7; 105,4; y 115.9 para el 1.5% de
arginina / Dical / 1.450 ppm de fluoruro, control positivo y control negativo de dentfricos,
respectivamente. No se observaron diferencias estadsticamente significativas entre los tres
tratamientos, pero el dentfrico basado en arginina mostr una produccin de amoniaco
direccionalmente ms alta que los controles positivos y negativos. En el Estudio 3, los valores
porcentuales de desmineralizacin fueron +1,16, +4,96 y +15,34, para el 1,5% de arginina /
carbonato de calcio / 1000 ppm de fluoruro, el control positivo y el control negativo de los
dentfricos, respectivamente. La validacin del estudio se logr con xito al mostrar que el control
positivo fue estadsticamente significativamente mejor para prevenir la desmineralizacin que el
control negativo (p <0,0001). Se demostr que el dentfrico que contena arginina era
estadsticamente significativamente mejor para prevenir la desmineralizacin del esmalte que el
control positivo (p <0,05). Las medidas del metabolismo de la placa para la placa expuesta a los tres
tratamientos dieron los siguientes valores para la produccin de amonaco despus de una prueba
de arginina-sacarosa, expresada en nanomoles por placa de miligramos: 99.6; 56,2; y 42.2 para el
1.5% de arginina / carbonato de calcio / 1000 ppm de fluoruro, el control positivo y el control
negativo de los dentfricos respectivamente

La placa tratada con dentfrico que contena arginina produjo significativamente ms amonaco que
los dentfricos control positivo y negativo (p <0.05). No se observ una diferencia significativa en la
produccin de amonaco entre los dos controles. La produccin de cido lctico despus de una
prueba de sacarosa dio los siguientes valores, expresados en nanomoles por placa de miligramos:
4,06; 5,12; y 4.64 para el 1.5% de arginina / carbonato de calcio / 1000 ppm de fluoruro, el control
positivo y el control negativo de los dentfricos, respectivamente. No se observ ninguna diferencia
significativa entre los tres tratamientos, pero el tratamiento basado en arginina mostr una
produccin de cido lctico direccionalmente ms baja.

Resultados:

Los resultados de estos tres estudios muestran que los dentfricos que contienen 1,5% de arginina,
un compuesto de calcio insoluble y fluoruro tienen una capacidad significativamente mejorada para
promover la remineralizacin y prevenir la desmineralizacin del esmalte en comparacin con los
dentfricos que contienen el mismo nivel de fluoruro solo. Se evaluaron dos fuentes diferentes de
calcio insoluble, Dical y carbonato de calcio. Los dentfricos con Dical y con carbonato de calcio, cada
uno en combinacin con 1.5% de arginina y fluoruro, proporcionaron una eficacia superior en
comparacin con los dentfricos combinados con fluoruro solo, y los dos productos demostraron
una eficacia comparable para promover la remineralizacin. Los resultados de estos estudios
demuestran que la adicin de 1.5% de arginina a dentfricos fluorados a base de carbonato clcico
y Dical proporciona una eficacia superior para prevenir la desmineralizacin y promover la
remineralizacin y, adems, indican que los dentfricos que contienen arginina mejoran la capacidad
de la placa para metabolizar arginina a amoniaco.

INTRODUCCIN.

La caries dental es un problema de salud bucal prevalente y omnipresente. En trminos ms simples,


la caries dental implica la prdida del diente mineral como resultado del ataque por los cidos
producidos a travs de la fermentacin de azcares en la dieta por bacterias productoras de cido
(cariognicas). Las caries pueden afectar a los nios a una edad muy temprana y seguirn afligiendo
a la mayora de las personas a lo largo de la adolescencia y la edad adulta, presentando as una
importante preocupacin por la salud oral y la salud pblica a nivel mundial. Muchas dcadas de
investigacin cientfica han aumentado considerablemente nuestra comprensin de la caries dental
y la aplicacin de este conocimiento ha llevado a la implementacin exitosa de terapias basadas en
fluoruro para ayudar a prevenir y detener el desarrollo y la progresin de la caries. Sin embargo, la
caries dental sigue siendo una enfermedad prevalente, en gran parte debido a su compleja etiologa
y naturaleza multifactorial. La existencia de caries dental, sin embargo, no solo lo amerita como un
problema de salud importante. La enfermedad debe tener un impacto o costo medible para la
sociedad si se quiere elevar al nivel de un importante problema de salud. El informe del Cirujano
General de los Estados Unidos en 2000 identific claramente la importancia de una buena salud oral
como parte integral de la salud y el bienestar general. Los dientes sanos y fuertes son atributos
importantes de una buena salud oral.

Existen varias maneras de expresar los costos de la caries en la sociedad, lo ms tangible, por
supuesto, son los costos asociados con las restauraciones dentales. Aproximadamente el 60% de los
costos de atencin mdica dental para las aseguradoras dentales en los EE. UU. Estn asociados con
las restauraciones dentales, y esto se traduce en aproximadamente $ 45 mil millones por ao. Esto
no tiene en cuenta a las personas sin seguro dental. Para las poblaciones del mundo que no pueden
pagar o no tienen acceso fcil a un dentista, el costo es menos tangible, pero, sin embargo, es
importante. El dolor y el sufrimiento asociados con la caries es un verdadero costo porque disminuye
la calidad de vida. La prevalencia mundial y los costos asociados no han escapado a la atencin de
la academia, las organizaciones de salud del gobierno, la profesin odontolgica y las compaas
asociadas con el desarrollo de productos de cuidado bucal. Como resultado, el desarrollo de
estrategias ms efectivas para la prevencin de la caries sigue siendo un rea clave de inters.

En el rea de tratamientos preventivos, la mayora de los regmenes preventivos de caries utilizan


fluoruro, que es, sin lugar a dudas, un agente preventivo de caries altamente exitoso. La dramtica
disminucin de la prevalencia y la severidad de la caries observada en las ltimas dcadas se ha
atribuido al uso generalizado de fluoruro. De hecho, el uso generalizado de dentfricos fluorados ha
sido ampliamente reconocido por los expertos acadmicos, la profesin odontolgica y las
organizaciones profesionales de salud como el factor ms importante que contribuye a la
disminucin observada en las caries en las ltimas dcadas.

La caries es una enfermedad causada por el contacto prolongado de la placa dental con la superficie
del diente, acompaada de la ingestin frecuente de azcares en la dieta. El proceso de caries es un
proceso cclico y dinmico con orgenes biolgicos. La ingesta frecuente de azcar, junto con la
eliminacin incompleta de la placa asociada con malos hbitos de higiene bucal o un cepillado
inadecuado, son claves para la progresin de la caries. Las bacterias cariognicas que residen
naturalmente en la placa dental, como parte de la comunidad bacteriana, utilizan azcares para
obtener energa y usan el subproducto cido de la fermentacin de sacarosa para proliferar en la
biopelcula y obtener una ventaja competitiva, ya que muchas bacterias comunitarias no patgenas
no contienen mecanismos de proteccin para sobrevivir a la exposicin prolongada y frecuente a
los cidos. El ambiente cido tambin es daino para el diente. Normalmente, el fluido en contacto
con el diente es neutro en pH y sobresaturado con respecto al esmalte. Cuando el pH cae despus
de una exposicin a la sacarosa y la consiguiente formacin de cido en la superficie de la placa y el
diente, el lquido de la placa se vuelve inferior al del esmalte y el mineral dental comienza a
disolverse. La saliva desempea un papel protector al servir como fuente de calcio y fosfato, y ayuda
a restaurar el pH de la placa a un estado ms neutral despus de un desafo cariognico para que
comiencen los procesos de reparacin. La ingesta frecuente de azcar crea un cambio en la
comunidad de la placa, desde uno que apoya un ambiente dental sano hasta un estado ms
patgeno que favorece a las bacterias cariognicas. Esto expone el diente a perodos ms largos de
subsaturacin y cambia el equilibrio mineral a favor de la prdida neta de minerales del diente

El modo de accin del fluoruro tiene un beneficio favorable en el equilibrio mineral. Su papel
principal en la prevencin de la caries es modular la qumica del fosfato de calcio en la superficie del
diente, pero no influye en el origen biolgico de la caries. Especficamente, ayuda a prevenir la
desmineralizacin de la superficie del diente en condiciones cidas y ayuda a promover la
remineralizacin a pH neutro cuando ya no existe el desafo de la caries. Una limitacin del fluoruro
es que hace poco para influir en la causa primaria de caries., Produccin de cido por bacterias
cariognicas en la placa dental. Debido a esto, no se puede esperar que el fluoruro, as como otras
tecnologas que se basan nicamente en mecanismos de reparacin de proteccin del diente dental,
proporcionen una proteccin completa.

Un enfoque prometedor para mejorar la eficacia del fluoruro es combinarlo con una tecnologa que
apunte a la causa de la caries; es decir, uno que sea capaz de reducir el potencial cariognico general
de la placa dental. El potencial cariognico de la placa tiene componentes qumicos y biolgicos. La
naturaleza proporciona un plan sobre cmo disminuir el potencial cariognico de la placa. La saliva
es un sistema de defensa natural clave utilizado por la cavidad oral para ayudar a proteger contra la
caries. Aparte de la capacidad de la saliva para lavar y diluir los cidos, contiene factores de
proteccin qumicos y biolgicos que ayudan a modular el potencial cariognico de la placa. Como
se seal, la saliva es neutra en pH y rica en calcio y fosfato, lo que ayuda a mantener la
sobresaturacin con respecto al mineral dental para ayudar en la remineralizacin y la prevencin
de la desmineralizacin. Desde una perspectiva biolgica, la saliva es una fuente clave de
metabolitos basados en nitrgeno, como la arginina y la urea, que se derivan de la descomposicin
de los pptidos y protenas por las enzimas salivales. La arginina es metabolizada por bacterias
arginolticas usando el sistema arginina deiminasa para producir energa en forma de trifosfato de
adenosina y amonaco y dixido de carbono. La caracterstica importante de esta ruta es la
produccin de amonaco que neutraliza los cidos y promueve un pH ms alcalino que es
desfavorable a las bacterias cariognicas. Por lo tanto, al utilizar la arginina como un mecanismo de
supervivencia contra las condiciones cidas creadas por las bacterias cariognicas, las bacterias
arginolticas ayudan a mantener un pH neutro, una condicin en la que las bacterias cariognicas,
como S. mutans, son competidores pobres en la biopelcula y su capacidad dominar la comunidad
de la placa y causar dao al diente se reduce.

Kleinberg ha desarrollado una tecnologa de anticaries sin flor altamente efectiva basada en los
beneficios protectores que brinda la saliva. Esta tecnologa se basa en una combinacin de arginina,
carbonato de calcio y un anin cariosttico, como el bicarbonato, para proporcionar beneficios
anticaries. Esta tecnologa se ha propuesto para reducir el potencial cariognico de la placa al
proporcionar calcio para ayudar a mantener la sobresaturacin en condiciones de exposicin al
cido, bicarbonato para la capacidad de almacenamiento intermedio y arginina como sustrato
metablico para la produccin de lcali. ColgatePalmolive ha ampliado el alcance de esta tecnologa
patentada combinando arginina con un compuesto de calcio insoluble y fluoruro para proporcionar
un dentfrico con beneficios anticaries superiores clnicamente probados. Este artculo resume los
resultados de itres estudios clnicos de caries intraoral que demuestran la eficacia mejorada de los
dentfricos que contienen 1,5 % de arginina, un compuesto de calcio insoluble y fluoruro para
promover la remineralizacin y prevenir la desmineralizacin del esmalte en comparacin con los
dentfricos combinados con fluoruro solo. Las medidas complementarias de la capacidad de los
dentfricos que contienen arginina para mejorar el metabolismo de la placa de arginina
proporcionan una mejor comprensin de cmo esta nueva tecnologa puede funcionar para
proporcionar un beneficio mejorado cuando se combina con fluoruro.

LO QUE ESTA DE ROJO, SE REFIERE A LO QUE SE REALIZO EN


3 ESTUDIOS.

Materiales y mtodos

La Tabla I proporciona una descripcin general de los detalles del estudio para los tres estudios informados
en este artculo. Esta descripcin incluye el diseo del estudio, las caractersticas del sujeto, la ubicacin del
estudio, los dentfricos de prueba, el tipo de aparato, el tipo de muestra de esmalte, el tratamiento intraoral,
las medidas de resultado y las estadsticas. Sobre la base de los estudios previos de remin / demin y demin /
remin, se ha establecido que estos diseos de estudio tienen desviaciones estndar residuales de 30 unidades
y 10 unidades, respectivamente. Los estudios reportados en este artculo tuvieron la capacidad de detectar
diferencias entre los tratamientos de una desviacin estndar con un 80% de probabilidad, lo que requiere un
tamao de muestra mnimo de 30 y 10 sujetos para los estudios de remin / desmin y demin / remin,
respectivamente. En todos los estudios, cada fase de tratamiento fue precedida por un mnimo de un perodo
de lavado de una semana, durante el cual los sujetos se cepillaron los dientes dos veces al da con un cepillo
de dientes de cerdas suaves adultas Colgate y un dentfrico sin fluoruro basado en slice. La duracin de este
perodo de lavado se bas en estudios previos que no mostraron evidencia de efectos remanentes. Cada
estudio utiliz un diseo aleatorio, doble ciego, cruzado, con una presentacin de orden equilibrada para
minimizar an ms los posibles efectos de arrastre. Los tiempos de tratamiento se basaron en estudios previos
en los que se diferenciaron las diferencias clnicas relevantes del producto. Todos los dentfricos se
envolvieron y codificaron para ocultar los estudios. En cada estudio, se requiri que los sujetos cumplieran
con todos los criterios de inclusin y exclusin descritos en el protocolo y que leyeran y firmaran un
consentimiento informado antes de comenzar el estudio. Cada protocolo de estudio fue revisado por, y recibi
la aprobacin tica de, la Junta de Revisin Institucional apropiada.
Estudio 1
Diseo. El estudio 1 utiliz un modelo clnico de remineralizacin / desmineralizacin intraoral en el que los
sujetos llevaban un aparato intraoral que consista en una prtesis parcial inferior de la mandbula (Figura 1).
Los aparatos intraorales contenan cada uno secciones delgadas de esmalte que tenan una lesin de caries
inducida artificialmente. Los cambios minerales en las secciones delgadas del esmalte se midieron mediante
microradiografa y anlisis de imagen para determinar el porcentaje de cambio mineral o la remineralizacin
neta de las lesiones inducidas artificialmente. Este estudio se realiz para determinar si los dentfricos que
contienen 1,5% de arginina, un compuesto de calcio insoluble como carbonato de calcio o Dical y 1450 ppm
de fluoruro como MFP, mejoran significativamente la remineralizacin, en comparacin con un dentfrico que
contiene un compuesto de calcio insoluble y 1450 ppm de fluoruro solo , y para determinar si los dos
dentfricos que contienen arginina fueron igualmente efectivos. Este estudio incluy cuatro perodos de
tratamiento para probar los siguientes dentfricos: 1.5% de arginina con 1450 ppm de fluoruro como MFP en
una base Dical (prueba de dentfrico); 1.5% de arginina con 1450 ppm de fluoruro como MFP en una base de
carbonato de calcio (prueba de dentfrico); 1450 ppm de fluoruro como MFP en una base Dical emparejada
(control positivo); y 250 ppm de fluoruro como MFP en una base Dical emparejada (control negativo).
Procedimiento para preparar secciones delgadas de esmalte.
Los detalles de la preparacin y el uso de secciones delgadas de esmalte se han dado en varias publicaciones
anteriores. Los bloques de esmalte de aproximadamente 3 mm de ancho se cortaron a partir de molares
humanos extrados o dientes caninos que no tenan grietas grandes, manchas blancas o decoloracin. Luego
se limpiaron frotando con un cepillo de dientes y un detergente lquido diluido, y se esterilizaron durante
cuatro horas usando xido de etileno. Los bloques se montaron luego en un soporte de muestra usando
adhesivo de cianoacrilato, y se seccionaron con una sierra de microtomo Leica 1600 (Leica, Bannockburn, IL,
EE. UU.) A un espesor de 150 micrmetros. Luego, las secciones delgadas se incrustaron en una pelcula de
polister junto con un marcador niquelado para garantizar una medicin uniforme del rea a lo largo del
estudio. Las muestras se almacenaron a temperatura ambiente durante la preparacin. En el ltimo paso de
la fase preparatoria, se formaron lesiones tipo caries en los bordes esmaltados expuestos de las secciones
delgadas sumergindolas en cido actico 0,1 N (Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.), PH 4,6, durante 48 horas a 37
C. Las secciones delgadas de esmalte se eliminaron de la solucin desmineralizante, se enjuagaron con agua
desionizada y se secaron al aire a temperatura ambiente.
las secciones delgadas del esmalte antes de la formacin de la lesin (sonido), despus de la formacin de la
lesin (no tratada) y despus del tratamiento con el dentfrico que se prueba (trata). Se utiliz el anlisis de
imagen para obtener los perfiles de densidad mineral. Las reas de lesin antes y despus del tratamiento se
calcularon restando el perfil de sonido del perfil de los perfiles no tratados y tratados para generar perfiles de
diferencia. El rea bajo la curva de un perfil de diferencia representa el rea de la lesin. Se utiliz un programa
diseado a medida para superponer los perfiles y medir las reas de la lesin. Los cambios minerales se
expresan como el cambio porcentual del tamao inicial de la lesin despus del tratamiento, como se indica
en la frmula siguiente:
Cambio mineral = rea de lesin antes del tratamiento - rea de lesin despus del tratamiento% Cambio
mineral = Cambio mineral / (rea de lesin antes del tratamiento) X 100.
Colocacin de secciones delgadas del esmalte en la dentadura inferior mandibular parcial.
Dependiendo del espacio disponible para las secciones delgadas de esmalte, se perforaron agujeros en el lado
izquierdo o derecho de la prtesis parcial inferior mandibular, un poco ms grande que el tamao de la
muestra. Luego se montaron dos secciones delgadas de esmalte en este sitio y se mantuvieron en su lugar
mediante el uso de un compuesto dental no fluorado curado a la luz.
Procedimiento clnico.
Treinta sujetos sanos en Mumbai, India, con edades entre 18 y 70 aos, con al menos 20 dientes naturales y
una prtesis parcial de la mandbula, fueron reclutados en este estudio. Despus del perodo de lavado de
una semana, los sujetos colocaron la prtesis parcial inferior con las secciones delgadas de esmalte
implantadas en sus bocas. Los sujetos fueron instruidos para mantener el aparato en la boca durante las 24
horas del da durante las fases de tratamiento de dos semanas. Con el aparato en la boca, se les indic a los
sujetos que se cepillaran los dientes y las muestras con el dentfrico asignado dos veces al da (maana y tarde
antes de acostarse), durante un minuto cada vez, seguido de un aclarado de diez segundos con un grifo agua.
A los sujetos se les permiti quitar el aparato despus de las comidas para limpiarlos. Se permiti la limpieza
mediante el enjuague del aparato solo bajo el agua del grifo. No se utiliz ningn otro producto de cuidado
bucal durante el curso del estudio clnico.
Despus de cada perodo de tratamiento experimental de dos semanas, los sujetos devolvieron los
electrodomsticos y se retiraron las muestras para su anlisis. Los sujetos luego comenzaron un perodo de
lavado de una semana antes del siguiente perodo de tratamiento de dos semanas
Anlisis estadstico.
La principal respuesta medida fue el cambio en el rea de la lesin (% de cambio mineral) antes y despus del
tratamiento. Se realiz un ANOVA de dos factores con el sujeto y el tratamiento como factores. Una diferencia
entre los tratamientos se consider significativa si se alcanz un nivel de confianza del 95%. Si se detect una
diferencia significativa, se utiliz una prueba de comparacin mltiple de Tukey para validar el estudio
(comparacin del control positivo versus negativo). Si se valid el mtodo de prueba, se realiz un segundo
ANOVA de dos factores, excluyendo el control negativo, para comparar los dos productos de prueba versus el
control positivo. Una diferencia entre los tratamientos se consider significativa si se alcanz un nivel de
confianza del 95%. Si se detect una diferencia significativa, se us una prueba de comparacin mltiple de
Tukey para determinar qu tratamientos eran significativamente diferentes entre s.

Estudio 2
Diseo. El estudio 2 utiliz un modelo clnico de desmineralizacin / remineralizacin intraoral en el cual los
cambios de minerales (antes y despus de cada tratamiento) se midieron por microdureza. Los sujetos
llevaban un retenedor palatino superior (Figura 2) que contena cuatro especmenes de esmalte bovino
preparados. Estos bloques de esmalte fueron cubiertos con malla metlica para acumular placa durante el
perodo de tratamiento. Este estudio se realiz para determinar si un dentfrico que contiene 1,5% de arginina,
un compuesto de calcio insoluble y 1450 ppm de fluoruro evita que la desmineralizacin sea
significativamente ms efectiva que un dentfrico emparejado que contenga 1450 ppm de fluoruro solo. Este
estudio incluy tres periodos de tratamiento para probar los siguientes dentfricos: 1.5% de arginina con 1450
ppm de fluoruro como MFP en una base Dical (prueba de dentfrico); 1450 ppm de fluoruro como MFP en una
base Dical (control positivo); y 250 ppm de fluoruro como MFP en una base Dical (control negativo).
Procedimiento para la preparacin de bloques de esmalte bovino.
Para preparar las muestras de esmalte bovino, cada diente bovino se cort en bloques con una medida final
de aproximadamente 5 mm por 5 mm. Luego, los bloques se limpiaron, se enjuagaron con agua destilada y se
esterilizaron con xido de etileno durante cuatro horas. Cuando no se usaron durante la fase preparatoria, los
bloques se almacenaron en agua destilada en un refrigerador.
En la etapa de molienda, los bloques se aplanaron usando una pulidora / pulidora de velocidad variable con
tres anillos de retencin y un disco de pulido de diamante de 15 (Buehler, Lake Bluff, IL, EE. UU.). El disco de
pulido se humedeci con agua, y se colocaron tres portadores de muestra, que son capaces de contener 49
bloques cada uno, en el disco. Los bloques se colocaron en el lado de la dentina en los portadores de muestras
y la dentina se mordi durante 2,5 minutos a 100 rpm, ya que aproximadamente tres litros de agua se
vertieron lentamente en el centro del disco. Despus de la molienda, se retiraron los bloques y se examin
visualmente la planeidad, y el procedimiento se repiti hasta que los bloques aparecieron planos por
inspeccin visual. Despus de este procedimiento, los bloques se colocaron en el lado del esmalte hacia abajo
en los portadores de muestras, y el esmalte se mordi durante cinco minutos a 100 rpm, ya que
aproximadamente cuatro litros de agua verti lentamente en el centro del disco. Despus de la molienda, los
bloques se eliminaron y se examin visualmente para determinar la planeidad.
Los bloques que pasaron la inspeccin visual fueron luego pulidos usando el mismo aparato. Se coloc un
pao de pulido en el disco de pulido, y se pulveriz una suspensin de diamante, METADI 6 (Buehler, Lake
Bluff, IL, EE. UU.), Para cubrir uniformemente la tela. Los bloques se colocaron hacia el lado del esmalte, como
se describi anteriormente, y el sistema se ejecut durante diez minutos a 100 rpm, agregando ms
suspensin de diamante segn sea necesario. A continuacin, los bloques y la tela de pulido se enjuagaron
con dos litros de agua durante un perodo de tiempo de dos minutos. Los bloques se pulieron luego durante
otros diez minutos, usando el mismo procedimiento y la segunda suspensin de pulido, Masterprep 0,05
(Buehler, Lake Bluff, IL, EE. UU.). Los bloques se lavaron luego vertiendo 25 ml de solucin de Alconox al 10%
p / p (VWR, West Chester, PA, EE. UU.) Sobre el pao de pulido y ejecutndolo durante un minuto antes de
que los bloques tuvieran un enjuague final usando cuatro litros de agua otro perodo de cinco minutos. Se
retiraron los bloques y se sonicaron con agua destilada durante diez minutos, lo que se repiti hasta que
desapareci toda apariencia de espuma, espuma y turbidez. La altura final de los bloques fue determinada
por un micrmetro.
Ensayo de microdureza de bloques de esmalte bovino.
La microdureza de los bloques de esmalte se determin utilizando un probador de microdureza Micromet
5101 con Knoop Diamond Indenter y una carga de 50 gramos (Buehler, Lake Bluff, IL, EE. UU.). Se requiri que
las sangras de base fueran simtricas, y lecturas no superiores a 55-60 micrones. Los bloques se pulieron
suavemente con un microcloth seco antes de realizar la prueba, tanto para secar el bloque como para eliminar
cualquier contaminante de la superficie. Los micrmetros de la etapa se pusieron a cero y se ubic un bloque
con una esquina a 0,0. Bajo el aumento de baja potencia, el bloque se coloc en su lugar para encontrar un
rea limpia. Una vez encontrado, el penetrador se coloc sobre el bloque y se lanz. Despus de 15 segundos,
se recogi el indentador, se ajust el micrmetro en la direccin x otro 0.01 mm y se dej caer otra
indentacin. Esto se repiti hasta que se hicieron cinco guiones. Las muescas se midieron con una lente de
mayor potencia, y se obtuvo el promedio para la microdureza de referencia (M1). Despus de cada perodo
de tratamiento de cinco das, los bloques se volvieron a evaluar para la microdureza (M2) como se describi
anteriormente. Los cambios porcentuales en la longitud de la muesca 100 * (M2 - M1) / M1 se utilizaron para
determinar los cambios en la dureza del esmalte, ya que estn directamente correlacionados con el contenido
mineral.
Preparacin de los retenedores para el estudio intraoral.
Los retenedores personalizados se prepararon haciendo una primera impresin del paladar maxilar superior
de cada sujeto. Una vez que se hicieron las impresiones, se molde una lmina de material plstico de vaco
de 0.020 cm de espesor (Buffalo Dental Mfg. Syosset, NY, EE. UU.) Para adaptarse al techo de cada sujeto de
la boca y formar dientes molares a cada lado del boca.
Colocacin de bloques de esmalte bovino en retenedor.
Se perforaron agujeros en cada uno de los retenedores para exponer la superficie de los bloques de esmalte
bovino al tratamiento que se est usando. Dos bloques, midiendo aproximadamente 4 mm por 4 mm por 1
mm, se colocaron tanto en el lado derecho como en el izquierdo del retenedor. Fueron asegurados en los
retenedores perforando varios agujeros pequeos en los lados de los agujeros perforados, y cosiendo hilo
dental en la parte posterior de los bloques. Una lmina delgada de bandeja de ortodoncia dental suave Se
coloc cera (Kerr, Romulus, MI, EE. UU.) en la parte posterior de los bloques para asegurarlos en su lugar.
Antes de colocar los bloques en el retenedor, se cubrieron con una lmina de malla metlica. La malla de
alambre se us para acumular placa durante el perodo de tratamiento de cinco das.
Produccin total de amonaco a partir de muestras de placa formadas in situ.
La placa que se acumul en los bloques se recogi antes de la medicin de la microdureza despus del
tratamiento (M2), se reuni y se almacen a -20 C hasta el anlisis. El procedimiento de ensayo de placa se
adapt de un mtodo publicado previamente. En el procedimiento, la placa se mantuvo en hielo y la
concentracin se normaliz a 1 mg / ml en 1 solucin salina tamponada con fosfato, pH 7,4 (Gibco, Grand
Island, NY, EE. UU.). Las muestras se mezclaron con un vrtice y luego se sonicaron para romper los grupos de
placas y homogeneizar la muestra. A continuacin, cada muestra de placa se estimul con sacarosa (VWR,
West Chester, PA, EE. UU.) Y arginina (Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.) Para dar una concentracin final de 0,1%
y 5 milimoles, respectivamente. Las muestras se incubaron en un bao de agua con agitacin a 37 C durante
30 minutos antes de analizar la produccin de amonaco. Se utiliz un kit de prueba de diagnstico de
amonaco (Diagnostic Chemicals Limited, Oxford, CT, EE. UU.) Para cuantificar el amonaco producido en la
placa.
Procedimiento clnico.
Diecisis sujetos sanos de un conjunto establecido de sujetos en una base de datos clnica en Piscataway,
Nueva Jersey, EE. UU., De entre 18 y 65 aos, con un mnimo de 20 dientes naturales, fueron reclutados en
este estudio. Despus del perodo de lavado de una semana, los sujetos colocaron el retenedor personalizado
con los cuatro bloques de esmalte bovino en el paladar maxilar superior, y se les indic que cepillaran los
dientes, y no el retenedor que contena los bloques de esmalte bovino, con el dentfrico asignado dos veces
por da (maana y tarde antes de acostarse) durante un minuto cada vez, seguido de un aclarado de 10
segundos con agua del grifo. A los sujetos tambin se les indic que sumerjasen sus electrodomsticos en una
solucin de sacarosa al 10% cuatro veces al da aproximadamente a las 9:00 a.m., a las 11:00 a.m., a las 4:00
p.m. ya las 7:00 p.m. por diez minutos cada vez. El retenedor superior se us durante 24 horas por da por
cada perodo de tratamiento de cinco das. Los sujetos podan quitar el aparato solo durante la hora de la
comida y limpiarlos. Se permiti la limpieza mediante el enjuague del retenedor solo bajo el agua del grifo.
No se utiliz ningn otro producto de cuidado bucal durante el curso del estudio clnico.
Despus de cada perodo de tratamiento experimental de cinco das, los sujetos devolvieron sus retenedores,
y los bloques de esmalte bovino se eliminaron para su anlisis. Los sujetos luego comenzaron un perodo de
lavado de nueve das antes del prximo periodo de tratamiento de cinco das.
Anlisis estadstico.
Para las mediciones de microdureza, la respuesta primaria fue el cambio porcentual en la longitud de la sangra
antes y despus del tratamiento. El resultado secundario fue la produccin de amoniaco. Se realiz un ANOVA
de dos factores, con el sujeto y el tratamiento como factores, tanto en los resultados primarios como
secundarios para determinar si existan diferencias significativas entre los tratamientos. Una diferencia se
consider significativa si se alcanz un nivel de confianza del 95%. Si se detect una diferencia significativa, se
utiliz una prueba de comparacin mltiple de Tukey para validar el resultado del estudio (comparacin del
control positivo versus negativo) y determinar qu tratamientos eran significativamente diferentes entre s.
Estudio 3
Diseo. Este estudio sigui el modelo clnico de desmineralizacin / remineralizacin intraoral utilizado en el
Estudio 2. La nica diferencia en los anlisis de las muestras fue que la placa que se acumulaba en los bloques
de esmalte se analiz para la produccin de cido lctico, adems de la produccin de amonaco. Este estudio
se realiz para determinar si un dentfrico que contiene 1,5% de arginina, un compuesto de calcio insoluble y
1000 ppm de fluoruro evita la desmineralizacin y ofrece beneficios anticaries significativamente ms eficaz
que un dentfrico emparejado que contiene 1000 ppm de fluoruro solo. Este estudio incluy tres periodos de
tratamiento para evaluar los siguientes dentfricos: 1.5% de arginina con 1000 ppm de MFP en una base de
carbonato de calcio (prueba de dentfrico); 1000 ppm de MFP en una base de carbonato de calcio (control
positivo); y 0 ppm de MFP en una base de carbonato de calcio (control negativo). Dieciocho sujetos sanos de
la agrupacin establecida en la base de datos clnica en Piscataway, Nueva Jersey, EE. UU., Con edades entre
18 y 65 aos, con edad similar y perfiles orales, fueron reclutados en este estudio.
Produccin total de cido lctico a partir de muestras de placa formadas in situ.
La placa que se acumul en los bloques se recogi antes de la medicin de la microdureza despus del
tratamiento, se reuni y se almacen a -20 C hasta el anlisis. La muestra de placa se resuspendi por primera
vez en caldo de soja con tripticasa al 0.03% helado (TSB, Difco, Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD,
EE. UU.) Hasta una concentracin final de aproximadamente 0.03-0.04 mg de placa por ml de TSB. Luego se
aadi sacarosa a cada muestra de placa a una concentracin final del 10% antes de la incubacin durante
diez minutos a 37C con agitacin suave. Despus del tiempo de incubacin de diez minutos, primero se
calentaron las muestras a 80 C durante cinco minutos para eliminar las bacterias y se liberaron todos los
cidos, luego se enfriaron en agua helada durante cinco minutos adicionales. Despus de este enfriamiento,
las muestras se centrifugaron y el sobrenadante se filtr. La concentracin de lactato (anin de cido lctico)
en el sobrenadante se midi usando electroforesis capilar.
Una alta absorcin de fondo en el detector UV. En ausencia de analitos no absorbentes, la seal de fondo es
constante. Cuando se introducen analitos inicos, desplazan los iones aditivos absorbentes de UV sobre una
base de carga a carga, lo que da como resultado un pico negativo con respecto a las lneas base de absorcin
de UV altas. Con el anlisis, la muestra se inyect por presin durante diez segundos a 0,5 psi. La separacin
se realiz a -25 kV, y el capilar se termostat a 25 C. La longitud de onda para la deteccin UV indirecta se
seleccion a 254 nm, y la seal con picos negativos se invirti para obtener un electroferograma ms familiar
para integrar y procesar.
Para corregir los errores de inyeccin, se prob cada muestra con la incorporacin de un estndar interno de
nitrato de sodio 1,5 mM, y se construy una curva de calibracin usando estndares de lactato de sodio
(Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.). La concentracin de lactato presente en la muestra de placa se determin en
funcin de la relacin entre el rea del pico de lactato / nitrato y el peso inicial de la placa.

Anlisis estadstico.
Para las mediciones de microdureza, la respuesta primaria fue el cambio porcentual en la longitud de la sangra
antes y despus del tratamiento. Los resultados secundarios fueron las concentraciones de amonaco y cido
lctico. Se realiz un ANOVA de dos factores con el sujeto y el tratamiento sobre los resultados primarios y
secundarios para determinar si existan diferencias significativas entre los tratamientos. Una diferencia se
consider significativa si se alcanz un nivel de confianza del 95%. Si se detect una diferencia significativa, se
us una prueba de comparacin mltiple de Tukey para determinar qu tratamientos eran significativamente
diferentes entre s.
RESULTADOS
Estudio 1
Este fue un estudio de remineralizacin / desmineralizacin intraoral que compar cuatro dentfricos: 1.5%
de arginina con 1450 ppm de fluoruro en una base de carbonato de calcio; 1.5% de arginina con 1450 ppm de
fluoruro en una base Dical; 1450 ppm de fluoruro en una base Dical (control positivo); y 250 ppm de fluoruro
en una base Dical (control negativo)
Veintinueve de treinta panelistas completaron con xito el estudio. La incapacidad de un sujeto para
completar el estudio no estaba relacionada con el uso del producto, sino como resultado de razones
personales no relacionadas con el estudio.
Los resultados del estudio se resumen en la Tabla II. El uso de los tres dentfricos que contenan 1450 ppm de
fluoruro como MFP dio como resultado cambios minerales positivos en las secciones delgadas del esmalte, lo
que demuestra que el esmalte fue remineralizado. Esto est en contraste con el control negativo de 250 ppm
de fluoruro (como MFP), donde dos semanas de uso del producto dieron como resultado una prdida neta de
minerales en las secciones de la esmalte de la mina. Donde est en contraste con el control negativo de 250
ppm de fluoruro semanas de uso del producto dieron como resultado una prdida mineral neta en las
secciones de la esmalte de la piel.
Utilizando el conjunto de datos completo, un ANOVA de dos factores que utiliz el sujeto y el tratamiento
como factores indic que el efecto del tratamiento fue altamente significativo (p <0,0001). Para validar el
estudio, los resultados para el control positivo se compararon con los del control negativo usando una prueba
de comparacin mltiple de Tukey. Se demostr que el control positivo era significativamente mejor que el
control negativo para promover la remineralizacin (p = 0,0001), lo que demuestra la validez del estudio. Con
el estudio validado, se realiz un segundo ANOVA de dos factores en un conjunto de datos excluyendo el
control negativo. Este anlisis indic que el efecto del tratamiento fue altamente significativo (p = 0.01). Los
dos productos de prueba se compararon con el control positivo usando una prueba de comparacin mltiple
de Tukey. Se mostr que los dentfricos que contenan arginina (carbonato clcico y variantes Dical) eran
significativamente mejores que el control positivo al remineralizar las secciones delgadas del esmalte (p
<0.05). No hubo diferencias estadsticamente significativas con respecto a la remineralizacin de las secciones
delgadas de esmalte entre los dos dentfricos que contenan 1,5% de arginina.
Estudio 2
Este estudio de desmineralizacin / remineralizacin intraoral compar tres dentfricos: 1.5% de arginina con
1450 ppm de fluoruro en una base Dical; 1450 ppm de fluoruro en una base Dical (control positivo); y 250
ppm de fluoruro en una base Dical (control negativo).
Doce de los 16 participantes reclutados originalmente completaron con xito las tres fases de tratamiento en
este estudio. Los otros cuatro sujetos no completaron el estudio por razones relacionadas con molestias o
molestias al usar el retenedor palatino superior durante todo el curso del estudio. El uso del producto no fue
motivo para suspender el estudio.
Los resultados en la Tabla III muestran que el dentfrico que contena 1450 ppm de fluoruro como MFP en una
base Dical (control positivo) fue significativamente mejor que el dentfrico que contena 250 ppm de fluoruro
como MFP en una base Dical (control negativo) para prevenir la desmineralizacin (p <0,0001 ), lo que
demuestra que el estudio fue validado con xito. En este estudio, cuanto mayor sea el porcentaje de
desmineralizacin, mayor ser la cantidad de desmineralizacin o prdida de minerales. Comparado con el
dentfrico de control positivo que contena 1450 ppm de fluoruro solo, el dentfrico que contena arginina fue
significativamente mejor en la prevencin de la desmineralizacin (p <0,0001). Adems, el dentfrico que
contena arginina fue el nico dentfrico que tuvo una ganancia mineral o remineralizacin neta, lo que indica
un aumento en la dureza del esmalte despus del uso. Estos resultados demuestran que el nuevo dentfrico
que contiene 1,5% de arginina y 1450 ppm de fluoruro en una base Dical es significativamente ms efectivo
para prevenir la prdida del esmalte que un dentfrico emparejado con 1450 ppm de fluoruro solo.
La Tabla IV muestra los resultados de la cantidad de amonaco producida a partir de las muestras de placa
recolectadas despus de la prueba de argininasucrosa. Si bien hubo un aumento numrico en el amonaco
producido por la placa recolectada despus del uso del dentfrico de prueba que contiene arginina en
comparacin con el dentfrico de control positivo combinado que contena 1450 ppm de fluoruro solo, el
resultado no fue estadsticamente significativo. No se observ ninguna diferencia en la produccin de
amonaco entre los dentfricos que contenan 250 ppm de fluoruro (control negativo) y 1450 ppm de fluoruro
(control positivo).
Estudio 3
Este fue un estudio de desmineralizacin / remineralizacin intraoral que compar tres dentfricos: 1.5% de
arginina con 1000 ppm de fluoruro en una base Dical; 1450 ppm de fluoruro en una base Dical (control
positivo); y 250 ppm de fluoruro en una base Dical (control negativo). Los dieciocho de los sujetos completaron
con xito el estudio. Este estudio de desmineralizacin / remineralizacin intraoral tambin fue validado al
demostrar que el dentfrico control positivo que contena 1000 ppm de fluoruro como MFP en una base de
carbonato de calcio, fue significativamente ms eficaz para prevenir la desmineralizacin (p <0,0001) que el
dentfrico de control negativo que contiene 0 ppm de fluoruro en una base de carbonato de calcio (Tabla V).
Los resultados tambin demuestran que el dentfrico que contiene arginina con 1000 ppm de fluoruro en una
base de carbonato de calcio fue significativamente ms efectivo para prevenir la desmineralizacin que el
dentfrico de control positivo emparejado con fluoruro solo (p <0.05).
La Tabla VI muestra la cantidad de amonaco producida a partir de las muestras de placa in situ despus de la
prueba de arginina-sacarosa. Despus del cepillado dental con el nuevo dentfrico que contiene arginina, las
muestras de placa produjeron significativamente ms amonaco que las muestras de placa despus del
cepillado con el dentfrico de control positivo emparejado que contena 1000 ppm de fluoruro solo (p <0.05).
Como se observ en el Estudio 2, no hubo diferencias significativas en la produccin de amonaco a partir de
muestras de placa despus del cepillado con el dentfrico sin fluoruro (control negativo) y con el dentfrico
que contiene 1000 ppm de fluoruro (control positivo). Los resultados sugieren que el nivel de fluoruro no
afecta la actividad arginoltica de la placa.
Adems de determinar la produccin de amoniaco, el estudio determin la cantidad de cido lctico
producido por las muestras de placa formadas in situ. Aunque la diferencia en la produccin de cido lctico
no fue estadsticamente significativa en comparacin con el control positivo o el control negativo, el dentfrico
que contena arginina produjo la menor cantidad de cido lctico (Tabla VII).