PRCTICA 1

DIAGNSTICO VIRAL

Resumen
Los mtodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden clasificarse en directos e
indirectos. Gran parte de las tcnicas utilizadas en el diagnstico clnico se basan en pruebas serolgicas que
identifican anticuerpos especficos frente a diversas protenas antignicas. En algunas infecciones virales es
posible detectar la presencia de antgenos virales previamente al desarrollo de la seroconversin. Igualmente, la
deteccin del genoma viral puede favorecer la precocidad del diagnstico viral y su confirmacin. En el momento
actual, la tendencia en el diagnstico virolgico consiste en emplear nuevas y ms sensibles tecnologas de
deteccin de antgenos y de investigacin de cidos nucleicos con el propsito de lograr un diagnstico viral ms
rpido.
Palabras clave: Virus, diagnstico, infeccin viral

OBJETIVO antignicas. Sin embargo, existen

Conocer tericamente los principales circunstancias en las cuales son necesarias
mtodos de diagnstico de virus humanos y pruebas que detecten precozmente la
sus diferencias con respecto a los mtodos infeccin viral (tratamientos especficos,
para bacterias y otros microorganismos medidas profilcticas, etc.). (Jewetz,
humanos. Melnick, & Adelberg, 2011)
La serologa es una disciplina basada en la
INTRODUCCIN
deteccin de anticuerpos especficos contra
Los mtodos utilizados para reconocer las
un determinado microorganismo. Debera
infecciones por virus humanos pueden
llamarse con mayor propiedad
clasificarse en DIRECTOS e INDIRECTOS,
Inmunodiagnstico, ya que serologa es un
segn persigan demostrar la presencia del
trmino antigo que alude a la utilizacin de
virus o de alguno de sus constituyentes
suero como material biolgico en el cual se
(antgeno o genoma viral) o bien la
realiza el estudio. De todos modos, ambos
respuesta de anticuerpos especficos por
trminos se consideran sinnimos (Murray,
parte del husped en el curso de la
Rosenthal, & Pfaller, 2006). Existen algunas
infeccin. (Garca, 1996)
creencias que consideramos deben ser
Gran parte de las tcnicas utilizadas en el
descartadas. La primera es que la serologa
diagnstico clnico se basan en pruebas
resuelve todos los problemas diagnsticos.
serolgicas que identifican anticuerpos
Nada ms alejado de la realidad, que
especficos frente a diversas protenas
cualquier lector de las bases elementales de
la inmunologa no puede desconocer. A pueden mantener por un perodo
diferencia de lo que ocurre en Qumica relativamente largo o de aun das, cuando
Clnica, en Serologa se buscan sustancias se transportan en un medio adecuado y en
(anticuerpos o eventualmente antgenos) hielo a 4 C4.
normalmente ausentes, por lo cual un A continuacin, se describen las principales
resultado se expresa como Positivo o tcnicas para diagnstico viral.
Negativo, lo cual merece una interpretacin TCNICAS DIRECTAS PARA LA
diferente. Por otro lado, los informes no se DEMOSTRACION VIRAL
expresan en unidades concretas sino Dentro de las tcnicas directas es posible
relativas y, asimismo, se establece un valor incluir:
de corte arbitrario que puede no ser el Las que visualizan la partcula viral o
mismo para distintas regiones geogrficas, su efecto celular especfico como las
por la presencia en alguna de ellas de otros tinciones para microscopa de luz, la
parsitos que puedan interferir en el microscopa electrnica y el cultivo o
diagnstico, dando reacciones cruzadas. aislamiento viral.
(Bennett, 1964) Las pruebas para demostracin de
Para el aislamiento viral, las muestras antgenos virales: los inmunoensayos
clnicas se deben tomar en el momento (ELISA, IFA, RIA) y las pruebas de
indicado y rpidamente inocularlas en ltex.
clulas vivas. En su defecto se guardan en Las que evidencian la presencia de
nevera entre 4 C-8 C o en hielo de agua material gentico viral como: ensayos
hasta que sea posible su inoculacin. Si el de amplificacin gentica (reaccin
tiempo de inoculacin se prolonga ms de 4 en cadena de la polimerasa, PCR,
das, se congelan a -70 C y se utiliza un por sus siglas en ingls, LCR, etc.) e
medio de transporte segn sea el tipo de hibridizacin (sondas, ADN
muestra. Se pueden utilizar algunos ramificado, etc.)
criopreservantes para mejorar la Visualizacin de la partcula viral
recuperacin de los agentes virales, entre Microscopa de luz. Se efecta mediante
ellos dimetil sulfxido (DMSO), suero, leche tinciones especiales, generalmente son
descremada, protenas, sacarosa, glicerol y coloraciones con Wright o Giemsa en
sorbitol5. Muy pocos agentes virales se extendidos provenientes de lesiones
vesiculares donde se visualizan las
inclusiones o los cambios celulares
ocasionados por la invasin viral. Un
ejemplo de esto lo constituye el estudio de
inclusiones producidas por el
citomegalovirus (CMV) en sedimento
urinario y la prueba de Tzank para observar
las clulas infectadas por herpes (o varicela
zster), para sta se hace un raspado de la
base de las vesculas y despus de fijarla
con metanol, se hace la tincin y se
observan las clulas, que se tornan
agrandadas, con mltiples ncleos y un
citoplasma que se tie de oscuro adems de
inclusiones intranucleares eosinoflicas. La
sensibilidad de esta tcnica depende de su
preparacin, tincin y la experiencia del
observador, generalmente es menor que la
de la inmunofluorescencia y el cultivo viral.
La microscopa electrnica. Permite
visualizar la partcula viral debido a la gran
resolucin del microscopio electrnico. Para
este fin se utilizan dos tinciones especiales
con sales de metales pesados como el
uranio o el tungsteno. La primera es la
tincin negativa donde el acetato de uranilo
forma una especie de molde viral que
permite detallar la estructura del virus. La
segunda tincin es la del sombreado, donde
las partculas virales se ponen en un ngulo
donde el metal que se utiliza en ella se
deposita sobre el virus, pero no sobre su
sombra y slo se visualiza lo que no se ha
cubierto con el metal. Esta tcnica no revela
las estructuras internas del virus sino su
forma y dimensiones. El uso de equipo
especializado y costoso, el elevado nivel
tcnico que requiere, la baja sensibilidad
cuando hay un bajo nmero de partculas
virales y el hecho de que en algunos casos
la morfologa per se no es suficiente para un
diagnstico viral definitivo, hacen que este
sistema sea poco usado y slo se emplee a
nivel investigativo o acadmico. La
microscopa electrnica se ha utilizado para
el diagnstico del agente Norwalk,
adenovirus entricos, calicivirus, astrovirus y
coronavirus en materia fecal, as como de
otros virus para los cuales no se tiene
disponibilidad de otras pruebas diagnsticas
comerciales o aquellos que no son
cultivables.
Aislamiento viral en cultivo. Los virus son
microorganismos intracelulares y para
evidenciarlos, se deben utilizar sistemas
basados en lneas celulares que permitan su
desarrollo. La invasin viral se evidencia a
travs de un cambio celular o efecto
citoptico (EC) y mediante pruebas
complementarias. Los sistemas de cultivo
ms utilizados son:
a) Cultivos primarios. Se caracterizan por
tener varios tipos de clulas. La mayora son
de crecimiento limitado in vitro,
generalmente resisten 5 a 10 subcultivos y
son permisivas a un amplio rango de virus;
p. e., clulas de rin embrionario humano
(REH).
b) Cepas de clulas diploides. Derivadas de
tejidos normales, se utilizan en la produccin
de vacunas, aislamiento viral y como
sustratos para probar materiales txicos.
Estn constituidas por un tipo de clulas que
retienen su nmero cromosmico diploide
original; por ejemplo, los fibroblastos de
pulmn.
c) Lneas celulares. Son clulas
inmortalizadas en el laboratorio, resisten (n)
nmero de pases y se caracterizan por
derivarse de tejidos normales o de tumores
malignos y se han pasado por los menos 70
veces in vitro; por ejemplo, clulas Vero
(rin de mono verde africano), LLC-MK2
(rin mono rhesus) y BSC-1 (tambin de
tejido normal de rin de mono) y HeLa y
HEp-2 derivadas de clulas humanas
malignas. stas generalmente tienen un
nmero variable de cromosomas y a veces
tambin son denominadas lneas celulares
heteroploides. Para los cultivos virales se
utilizan monocapas celulares adheridas al
lecho de un tubo, que requieren de sustratos
esenciales para su mantenimiento, una
solucin amortiguadora y un pH adecuado,
adems se deben suplementar con suero
fetal bovino, que contiene mltiples factores
promotores de crecimiento celular7,9,10. Una
vez que la monocapa se inocula con una
muestra pretratada que proviene de un
individuo infectado, el virus se puede
descubrir por el desarrollo de un efecto
celular EC morfolgico degenerativo visible
o ste puede aparecer despus de 3 4
das. El tipo de EC que se observa es a
menudo la clave para identificar el virus
infectante, el EC puede ser de varios tipos:
la formacin de sincicios, o de vesculas o
inclusiones o el redondeamiento y
desprendimiento de la monocapa celular.
Hay diversas lneas celulares que se pueden
utilizar en el laboratorio de virologa, lo que
depende del virus que se quiera evidenciar.
Las que se emplean con ms frecuencia son
las clulas Hep-2, HeLa y Vero, en cuanto a
clulas diploides las ms utilizadas son las
lneas de fibroblastos de pulmn (MRC5)
que se usan para el aislamiento de
citomegalovirus (CMV). El cultivo primario
ms utilizado es el rin humano
embrionario (RHE) que es permisible a los
virus de circulacin frecuente como el
herpes (HSV), adenovirus (ADV),
enterovirus, virus sincicial respiratorio (RSV)
etc. Aunque el aislamiento viral es una
buena tcnica para el diagnstico de
infecciones virales asintomticas, crnicas y
recurrentes, su eficacia depende
momento en que se tome la muestra, del
transporte ptimo y rpido de las muestras;
adems que se debe escoger el tipo de
clulas que sean permisivas para el virus
que se va a demostrar.
Existen otros mtodos para descubrir y
caracterizar un virus en cultivo celular
cuando todava no se produce el EC, o ste
no es evidente o en los casos en que el virus
se debe reconocer por otras propiedades o
caractersticas en cultivo. Dentro de las
tcnicas que ayudan a identificar estas
propiedades virales estn:
La hemadsorcin. Consiste en que cuando
el virus infectante incorpora protenas virales
con propiedad de hemaglutininas en la
membrana celular, las clulas infectadas se
pueden descubrir por la adsorcin de
eritrocitos de ciertas especies animales, que
se puede observar al microscopio de luz5,8.
Es el caso de los ortomixovirus
paramixovirus que se pueden reconocer por
la hemadsorcin de eritrocitos de cobayo a
las clulas; la identificacin se confirma con
la inmunofluorescencia directa mediante
anticuerpos especficos.
Pruebas para la demostracin directa del
antgeno
Mediante esta tcnica se pueden descubrir
del antgenos virales circulantes o los que se
encuentran en los tejidos del husped. La
sensibilidad de estas pruebas depende de la
cantidad de antgeno presente y su
especificidad depende de la calidad de los
antisueros disponibles para este efecto.
Estas pruebas permiten una demostracin
rpida y son muy prcticas para el
diagnstico, pues los cultivos virales
requieren de una infraestructura adecuada y
personal entrenado y slo se pueden
realizar en centros de docencia o de
investigacin. Adems, los resultados del
cultivo viral requieren por lo menos hasta 8
das. Las tcnicas ms utilizadas para el
descubrimiento directo de antgeno son:
Aglutinacin de ltex. Las partculas de ltex
son esferas de poliestireno que se unen
fcilmente al fragmento cristalizable (Fc) de
molculas de inmunoglobulina G (IgG) o
inmunoglobulina M (IgM), esta ltima es
y mucho ms eficiente en aglutinar partculas
naturales. Los fragmentos de unin del
anticuerpo (FAb) quedan expuestos y son
capaces de unirse al antgeno que se
encuentra en la muestra. Cuando los
antgenos tienen varios eptopes (o
estructuras antignicas repetitivas), los
anticuerpos multivalentes acoplados a fluorescencia. La IFA ha tenido gran
mltiples partculas de ltex se unen al aplicacin y se usa con frecuencia para el
antgeno y se produce un entramado de las diagnstico de infecciones virales del tracto
partculas de ltex que dan como resultado respiratorio en nios. La muestra, que puede
una aglutinacin visible. Esta tcnica se ser un aspirado nasal, se concentra
aplica ampliamente en el laboratorio de mediante centrifugacin y se hacen placas
microbiologa, porque es fcil de realizar, que se fijan y se prueban con el antisuero
requiere slo unos minutos y no necesita para el virus por descubrir1,8,13. Esta tcnica
equipo, pues se lee a simple vista. Sin se sigue para el diagnstico del virus de
embargo, ofrece como desventaja la influenza, el RSV, paperas, sarampin,
presencia de reacciones cruzadas sobre coronavirus, ADV, HSV y CMV.
todo con otros antgenos en la muestra y Particularmente para RSV y sarampin tiene
tambin ocurren interferencias por el una sensibilidad mayor que el cultivo viral.
fenmeno de prozona, en el que un exceso La IFA tambin es til para confirmar los
de anticuerpos no permite la formacin del hallazgos de cultivo viral y la combinacin de
entramado. Esta tcnica se usa estos dos mtodos mejora el diagnstico7.
comnmente para la demostracin de Este mtodo es fcilmente aplicable en
antgenos de rotavirus en materias tejidos que se pueden colocar sobre una
fecales11,12. placa a manera de huella y a partir de sta
Inmunofluorescencia directa (IFA). La aplicar la tcnica; un ejemplo es el caso de
demostracin de antgeno se hace mediante biopsias de cerebro para el diagnstico de
la utilizacin de un anticuerpo marcado con encefalitis por herpes simplex y para rabia
un fluorocromo (conjugado) que es en cerebros de animales. Esta tcnica se ha
especfico para el antgeno que se ha de desarrollado para el diagnstico de CMV
descubrir. Este proceso implica la (Shell vial)7,9 que se basa en el cultivo viral
preparacin de un extendido en placa de la combinado con tincin de anticuerpos por
muestra, del tejido o de una monocapa IFA donde la positividad al segundo da es
celular, inoculada con la muestra, luego se de 52% mientras que con el cultivo
fija, se coloca el conjugado con fluorescena solamente es 2%; al octavo da con el
y despus de una incubacin y un lavado, la mtodo combinado la positividad aumenta a
placa se observa en el microscopio de 85% comparada con el cultivo donde slo
alcanza 27%. Este aumento de la positividad
se atribuye a la IFA; su eficiencia evidente
amerita su empleo14-16.
Inmunoensayos: Ensayos de captura del
antgeno (sandwich), inmunocromatografa.
Son inmunoensayos en fase slida donde se
fijan los anticuerpos especficos para el virus
en la superficie de una matriz, tubo o
microplaca y luego se pone en presencia del
suero o muestra que contiene el antgeno
que se quiere demostrar; una vez ocurre la
reaccin antgeno-anticuerpo, se hace un
lavado y se agrega un anticuerpo marcado,
que depende de la marcacin del
anticuerpo. La prueba se denomina
radioinmunoensayo (RIA) o inmunoensayo
ligado a enzimas (ELISA o EIA)
dependiendo del trazador que se utilice para
evidenciar la reaccin. Se denomina RIA
cuando el anticuerpo se marca con un
istopo radioactivo, el ms utilizado es el
yodo-125, el anticuerpo que reacciona a
manera de sandwich, se pega a los eptopes
del antgeno que han quedado expuestos;
despus de varios lavados, se mide o
cuantifica la radioactividad mediante un
contador de centelleo. El nmero de
destellos por minuto es directamente
proporcional a la concentracin del antgeno
que reacciona y de acuerdo con una serie de
estndares de concentracin conocida, se
realiza una curva y se extrapolan los valores
de la muestra. En la tcnica ELISA el
anticuerpo se marca con una enzima que
puede ser la fosfatasa alcalina (FA) o la
peroxidasa de rbano (PR) y para revelar la
reaccin se coloca el sustrato especfico
para la enzima que es modificado por sta y
produce un compuesto coloreado. En el
caso de la FA el sustrato es el
paranitrofenilfosfato y para la PR es el
perxido de hidrgeno en una solucin de
ortofenilendiamina (OPD) que hace visible la
reaccin. Para la cuantificacin se mide la
absorbancia en una longitud de onda
determinada en un espectrofotmetro. La
absorbancia ser directamente proporcional
a la cantidad de antgeno descubierto. Estas
tcnicas se utilizan ampliamente en el
diagnstico de hepatitis A y B, rotavirus, el
agente Norwalk, ADV, el RSV,
parainfluenza, influenza A y B. Para la
hepatitis B la demostracin de antgeno de
superficie diagnstica la infeccin activa y
en VIH la demostracin del antgeno p 24 es
til en el diagnstico de la infeccin en nios
y en pacientes que se encuentran en
ventana inmunolgica, adems es de gran
utilidad en el pronstico y la progresin de la
infeccin as como en el control de la terapia
antirretroviral.
 Tcnicas de diagnstico
molecular. Comprenden las tcnicas
que evidencian o descubren
material gentico especfico viral
conservado y replicable ya sea que
se encuentre en un fluido, en una
clula o tejido, ya sea activo o latente.
Estas tcnicas, que son ms rpidas
que las tradicionales, permiten hacer
estudios en tejidos almacenados y se
pueden clasificar en dos categoras:
Ensayos de hibridizacin.
Tcnicas para la amplificacin del
cido nucleico17,18.
Ensayos de hibridizacin:
Hibridizacin con sondas. Los recientes
avances en el campo de la biologa
molecular y el conocimiento cada vez mayor
de los virus que causan infecciones
importantes en la comunidad, han hecho
posible que en el momento se disponga de
fragmentos de ADN del material genmico
especfico y altamente conservado de un
determinado virus que se utiliza como
sonda. sta frente a sus secuencias
complementarias se hibridiza para formar
una molcula dplex. Esta tcnica se puede
aplicar ya sea para confirmar
identificacin de un virus en cultivo o
descubrirlo directamente en una muestra.
Se pueden utilizar clulas o tejidos fijados
con sustancias que conserven la morfologa
celular y la integridad del ADN o ARN. Para
el estudios de ARN se requieren tejidos
frescos congelados rpidamente con
nitrgeno lquido y para estudios de ADN se
pueden emplear tanto tejidos fijados como
congelados. Las sondas preparadas a partir
del ADN o ARN especfico se pueden
purificar por clonacin o copia en un
plsmido del ADN o del ADNc
(complementario) obtenido de
transcripciones de ARN. Utilizando el
plsmido como vector y bacterias como
huspedes, es posible producir sondas
genticas en grandes cantidades. Los
fragmentos de ADN o ARN (sondas) se
someten a un anlisis de hibridizacin (o
apareamiento con el complementario que se
encuentra en el material que se va a probar);
ste se puede hacer ya sea con ADN o ARN
tisular en solucin, directamente en tejidos o
clulas por hibridizacin in situ, o se puede
efectuar sobre ADN o ARN transferidos en
membranas de nitrocelulosa a partir de una
electroforesis en gel de agarosa. Las sondas
se pueden marcar con radioistopos (P32,
I125, S35), enzimas, avidina o molculas
la quimioluminiscentes para que la formacin
de las molculas dplex sea descubierta.
Las sondas radioactivas requieren el empleo
de autorradiografa para su descubrimiento
mientras que las sondas marcadas con complemento (FC), hemaglutinacin
enzimas se demuestran por mtodos indirecta (HI), aglutinacin por ltex.
colorimtricos. La sensibilidad de las sondas b. Los que miden la capacidad de los
depende de la cantidad de material gentico anticuerpos para bloquear la funcin viral
para la hibridizacin y su especificidad especfica como la neutralizacin, la
depende de la calidad de la sonda. Una de inhibicin de la hemaglutinacin (IH), la
las principales limitaciones de esta tcnica inhibicin de la neuraminidasa (que mide la
se ve cuando existe una baja cantidad de capacidad de los anticuerpos para bloquear
ADN o ARN y ste no se descubre. Muchas la infectividad viral), la hemaglutinacin viral
de estas pruebas tienen una sensibilidad y la actividad de neuraminidasa.
que les permite descubrir 105-106 molculas c. Los que miden directamente la interaccin
o aun 103-104 molculas; sin embargo, esto antgeno-anticuerpo como, por ejemplo: la
puede ser insuficiente en muchas IFA indirecta, el RIA, ELISA y el Western
situaciones clnicas. blot.
TECNICAS INDIRECTAS PARA EL Tcnicas indirectas tipo a:
DESCUBRIMIENTO VIRAL Fijacin de complemento. La FC es un
Estas son las tcnicas serolgicas proceso de dos pasos, esta tcnica emplea
tradicionales para descubrir anticuerpos el complemento para lisar los eritrocitos que,
contra determinado agente viral, teniendo en a su vez, funcionan como indicadores.
cuenta que la exposicin al agente produce Durante el primer paso, el antgeno
una respuesta por parte del sistema inmune reacciona con el anticuerpo que se
que genera la produccin de anticuerpos encuentra en la muestra de suero del
especficos. Estos ensayos se pueden paciente, en presencia de complemento
clasificar en tres grupos con base en la (casi siempre de suero de conejo) titulado
cuantificacin de la reaccin antgeno- previamente. Si el antgeno y el anticuerpo
anticuerpo. reaccionan, se activa la va clsica del
a. Los que dependen de la capacidad del complemento, luego se aade el indicador
anticuerpo que se une al antgeno para constituido por eritrocitos cubiertos con
ejercer alguna funcin no relacionada con el anticuerpos y de esta forma, si el
virus, por ejemplo: la fijacin del complemento se fija y se activa por el
complejo antgeno viral-anticuerpos del
paciente, los eritrocitos no se lisarn. Si
durante la primera fase no hay unin
antgeno-anticuerpo el complemento
permanece libre y se une al complejo
indicador y produce la lisis de eritrocitos.
Este es un sistema semicuantitativo y es una
de las pruebas serolgicas tradicionales
utilizada como estndar de comparacin
(gold standard) para las nuevas pruebas
comerciales5,12,25. Una de sus aplicaciones
es determinar anticuerpos contra agentes de
baja prevalencia como los virus Coxsackie.
Los anticuerpos que fijan el complemento
aparecen tardamente comparados con los
descubiertos por otras pruebas y tienen una
vida corta, lo que puede ser til para
determinar la actividad de ciertas
infecciones, como por ejemplo la rubola.
Hemaglutinacin indirecta. Los eritrocitos se
pueden sensibilizar con diversos antgenos
y se pueden utilizar como sistema indicador.
As, si se descubren los anticuerpos, la
reaccin se revelar como una
hemoaglutinacin que se puede advertir
fcilmente a simple vista. Existe una amplia
variedad de antgenos que se pueden unir a
los glbulos rojos, entre ellos los
carbohidratos que se adhieren con rapidez,
en el caso de las protenas se requiere un
proceso de pretratamiento con cido tnico
o con cloruro de cromo. Este sistema se usa
para demostrar anticuerpos contra toxinas
como la de la difteria o del ttanos. Tambin
para descubrir anticuerpos contra el virus de
fiebre amarilla, VZV, influenza,
parainfluenza y dengue.
Aglutinacin de ltex. Es similar a la tcnica
de ltex ya descrita slo que en este caso el
antgeno se encuentra fijo a la partcula de
ltex y, por tanto, se espera descubrir los
anticuerpos que se encuentran en la
muestra. Estos ensayos generalmente son
pruebas de filtro (tamizaje) pues slo
determinan la presencia o no de
anticuerpos. Los resultados se pueden
interpretar como inmune (si es positivo) o
susceptible (si es negativo), como en el
caso de determinar el estado inmune para el
virus de la rubola. La informacin que
suministra corresponde a exposicin al
agente o infeccin pasada y aunque, como
se ha afirmado, la IgM es una aglutinina muy
buena, generalmente las pruebas de ltex
no son especficas para sta. En virologa se
utiliza con ms frecuencia la tcnica de
aglutinacin de ltex directa.
Tcnicas indirectas tipo b
Neutralizacin viral. Demuestra anticuerpos
por su efecto inhibitorio en la infectividad
viral. Este ensayo mide funciones virales
especficas, por lo que es bastante selectivo,
de esta forma la neutralizacin viral slo
mide anticuerpos para antgenos hacer una titulacin y determinar el nivel de
especficos sobre la superficie viral. Si los anticuerpos del paciente. Esta prueba al
anticuerpos se encuentran en el suero del principio se utiliz para demostrar
paciente que se pone a incubar con una anticuerpos contra rubola y dengue, pero
suspensin del virus, los anticuerpos se ha reemplazado por ELISA, pues la IH no
reaccionarn con los antgenos virales, y puede diferenciar entre anticuerpos tipo IgM
cuando la suspensin se ponga en (infeccin aguda) o IgG (infeccin antigua),
presencia de las clulas permisivas al virus sin embargo, an se utiliza para influenza y
(en cultivo celular) el resultado ser la para otros virus menos abundantes que
neutralizacin de la invasin celular y la no poseen actividad hemaglutinante como los
evidencia del EC. En caso de no existir arbovirus (p.e., virus de la fiebre amarilla),
anticuerpos en el suero de paciente, se reovirus y algunos enterovirus.
producir la invasin celular y como Tcnicas indirectas tipo c
consecuencia se har evidente el EC IFA indirecta. En una placa se ponen las
caracterstico. Para realizar esta prueba se clulas infectadas con un virus determinado,
debe disponer de lneas celulares que tienen antgenos de ste en su
adecuadas y por lo general se hace en membrana, y se fijan; luego se agrega el
laboratorios donde se tiene toda la suero del paciente y despus de una
infraestructura para los cultivos celulares. incubacin, si hay anticuerpos en el suero,
Esta tcnica se ha utilizado para el se forma un complejo antgeno-anticuerpo,
diagnstico de las infecciones por dengue26. que se revela por medio de un conjugado
Inhibicin de la hemaglutinacin fluorescente. Cuando existen los
(IH). Algunos antgenos virales tienen anticuerpos en el suero problema y se
capacidad para aglutinar eritrocitos de aade el conjugado fluorescente (anti IgG,
diversas especies, sin embargo, las IgA, IgM) ocurre una segunda reaccin
presencias de anticuerpos especficos en el antgeno-anticuerpo, que origina un patrn
suero del paciente evitan la aglutinacin de especfico de fluorescencia segn los
los eritrocitos por tales antgenos; cuando anticuerpos que reaccionen con el sustrato.
esto ocurre se evidencia la presencia de Este patrn slo se podr observar en un
anticuerpos. Para cuantificarlos se hacen microscopio de fluorescencia. Las
diversas diluciones del suero con el fin de caractersticas del patrn dependen de los
antgenos reconocidos por el anticuerpo ya observador en IFA y la necesidad del
sea intracitoplasmticos o intranucleares. microscopio de fluorescencia.
Este conjugado reacciona con anticuerpos CONCLUSIN
del tipo IgM, IgG e IgA, pero cuando se
Las pruebas de diagnstico viral se han
necesita descubrir la fase aguda de la
desarrollado de manera importante en los
infeccin, el conjugado debe ser especfico
ltimos aos, nuevas tcnicas ms rpidas,
para las cadenas pesadas de la IgM. No
simples, poco costosas, sensibles y
obstante, es posible que haya falsos
especficas se ofrecen hoy en da, sin
positivos debido a diversos factores, entre
embargo, la evaluacin de stas siempre se
otros la presencia del factor reumatoide y de
debe hacer con base en los estndares de
anticuerpos heterotpicos entre virus de la
oro (como los cultivos y la fijacin de
familia Herpes-viridae, pues pacientes
complemento, etc.) y de acuerdo con una
infectados con EBV o el virus varicela-zster
adecuada correlacin clnica. La
pueden mostrar anticuerpos IgM para CMV
disponibilidad de estas pruebas se debe
sin que haya infeccin por este virus. Las
acompaar de una ptima realizacin a nivel
pruebas para IgM tambin pueden tener
tcnico, y una adecuada recoleccin y
falsos negativos, si la IgG inhibe o compite
almacenamiento de la muestra, adems de
con la IgM por los sitios de unin al antgeno.
una interpretacin acertada. La
Aunque la especificidad de la
demostracin directa de antgenos tiene
inmunofluorescencia es muy buena y
valor en el diagnstico, pronstico y
depende del sustrato utilizado, la
seguimiento de la infeccin, as como en el
sensibilidad depende del nivel de
tratamiento mdico y es indicador
fluorescencia demostrable por el ojo
importante de infeccin activa. Sin embargo,
humano. Esta tcnica se ha utilizado para
en algunos casos la concentracin del
descubrir anticuerpos contra rubola, VIH,
antgeno puede no ser suficiente para su
CMV y HSV. Sin embargo, recientemente
descubrimiento. Por otro lado, la
ELISA la ha desplazado porque ofrece una
determinacin de anticuerpos es til
especificidad similar y se puede leer
particularmente cuando no se tiene la
mediante equipos automatizados lo que
posibilidad de realizar una demostracin
elimina la subjetividad inherente al
directa de antgeno o en caso de ser
negativa a pesar de la sospecha clnica o
porque haya pasado la fase aguda de la
infeccin. Estos casos constituyen
complemento para determinar el diagnstico
de una enfermedad. Las pruebas indirectas
o de anticuerpos tambin son importantes
para establecer los antecedentes
infeccin viral en la historia clnica de un
paciente y en una comunidad y son claves
en definir el modelo de diseminacin de un
serotipo determinado. Sin embargo, deben
tenerse criterios muy definidos para la
interpretacin de un ttulo de anticuerpos y
esto depende del tipo de la infeccin, la
naturaleza del virus, la clase de anticuerpos
y la condicin del husped.
REFERENCIAS
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CUESTIONARIO
1. Diga el nombre de cuatro virus que
puedan mantenerse en cultivo de tejidos.
Virus herpes simplex
Adenovirus
Virus de la parainfluenza
Poliovirus Retrovirus
6. Haga una lista de virus que se puedan
2. Qu son los cuerpos de inclusin
diagnosticar en sangre.
virales.
Zika
Estructuras subcelulares anormales
VIH
formadas como resultado de la infeccin
Virus de la gripe
viral. Frecuentemente corresponden a los
lugares donde se realiza el ensamblaje de la 7. Haga una lista de virus que se puedan
partcula viral. Su naturaleza y localizacin diagnosticar en L.C.R.
en la clula es caracterstica de cada VHS
infeccin viral. 8. Cundo se produce el Interfern y
Pueden ser visualizadas con un microscopio cmo acta contra los virus.
ptico y, en algunos casos, su visualizacin
se emplea en el diagnstico; por ejemplo, Los interferones (IFNs) son un grupo
los cuerpos de Negri son inclusiones de protenas sealizadoras producidas y
caractersticas producidas durante el secretadas por las clulas hospederas como
ensamblaje de las nucleocpsides del virus respuesta a la presencia de
de la rabia en el citoplasma de las neuronas diversos patgenos, tales
infectadas. como virus, bacterias, parsitos y clulas
tumorales. En un caso tpico, una clula
3. Haga una lista de virus que se puedan infectada por un virus secretar interferones,
diagnosticar en heces. generando una activacin en las defensas
Poliovirus anti-virales en las clulas cercanas a dicha
Virus coxsackie A clula infectada.
Virus coxsackie B
Echovirus
Enterovirus 68-71
4. haga una lista de virus que se puedan
diagnosticar en vas respiratorias.
Rinovirus
Coronavirus
Parainfluenza
Adenovirus
Virus respiratorio sincital
5. Haga una lista de virus que se pueden
diagnosticar en lesiones drmicas.
Herpes zoster
Herpes labial y genital
Citomegalovirus
VEB
Virus 6
Virus 7
Virus 8
Papovavirus
Poxvirus
Coxsackie