Saliendo del retculo endoplasmtico: que sabemos y que no

La vasta mayora de protenas que son transportadas a diferentes compartimentos celulares y

secretados desde la clula requiere el complejo proteico de revestimiento (COPII) para
exportar desde el retculo endoplasmtico. Muchos de los mecanismos moleculares detrs del
ensamblaje del COPII son entendidos en gran detalle, pero est volvindose cada vez ms
evidente que esta maquinaria bsica es insuficiente para tener en cuenta los diversos aspectos
de la exportacin de protenas desde el ER que son observadas en vivo. Aqu nosotros
repasaremos recientes datos que han fomentado nuestro entendimiento mecanicista del
ensamblaje del COP II y, en particular, como las enfermedades genticas asociadas con la va
secretora temprana han aadido las ideas fundamentales dentro de la regulacin de la
formacin de transportadores derivados del ER. Nosotros tambin resaltaremos algunos
problemas sin resolver que futuros trabajos podran dirigir para entender mejor la fisiologa del
transporte mediador del COPII

Exportacin desde el retculo endoplasmatico

Despus del correcto plegamiento, las protenas sintetizadas en el ER deben salir hacia
diferentes zonas del sistema de endomembranas. Un estimado de un tercio de las protenas
codificadas por el genoma de los mamferos es exportado desde el ER. As, los sistemas
exportadores del ER deben tener suficiente espacio para la gran cantidad de clientes
heterogneos en trminos de sus destinatarios finales, topologa [solubles, asociados a
membranas, anclados a membranas, integrales de membrana con nmeros variables de
dominios transmembrana (TM)], el estado de agregacin y el tamao (que, en el caso de
quilomicrones y fibrillas de pro colgeno, puede llegar a 250-300 nm). La demandante tarea de
lidiar con tal variedad de cargamento no es exclusiva del ER, porque la membrana plasmtica
(PM) similarmente importa una gran variedad de cargamento desde el medio extracelular y la
superficie de la clula. Aunque las vas en la PM son mejor entendidas [1], el nmero de vas
exportadoras conocidas originadas desde el ER es mucho menor e incluye el sistema COPII que
opera en puertos de exportacin dedicados al RE, identificando estos lugares como sitios de
salida del ER(ERESs) [2,3]. Adems la convencional va dependiente del COPII, las poco
convencionales vas independientes del COPII se han reportado para cargamentos
seleccionados [4-10]. En algunos casos, las condiciones que inducen tensin al ER o dificultan
el transporte antergrado convencional pueden desencadenar una va independiente del COPII
que haga uso poco convencional de algunos componentes de autofagia [11,12]. De hecho, la
autofagia est emergiendo como una importante ruta alternativa para la secrecin [13].
Aunque aumentan constantemente en nmero, las vas independientes de COPII siguen siendo
una excepcin, ya que la gran mayora de protenas neosintetizadas salen del ER mediante las
vas dependientes del COPII.

La pregunta sigue siendo: cmo puede el sistema COPII tratar con la gran variedad de
cargamento que debe ser exportado? Responder a esta pregunta requiere una comprensin
profunda no slo de los mecanismos moleculares que rigen el ensamblaje de la capa del COPII,
sino tambin de la organizacin morfofuncional y el ciclo de vida de los transportadores
dependientes de COPII, Aunque hemos obtenido una comprensin a nivel atmico de la
organizacin molecular de la capa del COPII gracias a enfoques reduccionistas basados en la
reconstitucin de la formacin de vesculas in vitro y en el anlisis de estructuras de los
componentes de COPII, nuestro conocimiento de la organizacin morfofuncional de los
transportadores del COPII est emergiendo recientemente. Estudios recientes de
enfermedades humanas causadas por defectos genticos de los componentes de la va de
secrecin temprana estn aumentando gradualmente nuestra conciencia de la fisiologa de los
mecanismos de exportacin de ER. Esta resea resalta algunos de los avances ms recientes en
nuestro entendimiento de la biognesis de los transportadores de exportacin en el ER y
discute las muchas incertidumbres y desafos que dominan el campo.

COPII componentes bsicos y el ciclo COPII

La salida de la protena desde el ER se produce a travs de transportadores de membrana cuya

generacin depende en la accin del complejo COPII en los sitios especializados del ER
llamados ERESs [2,3]. La estructura y ensamblaje de los componentes del COPII y su
contribucin a la flexin de la membrana ha sido descifrado en gran detalle y son los temas de
muchos anlisis recientes [2, 3, 14-16]. Anlisis bioqumicos, genticos y estructurales han
definido la secuencia exacta de eventos a travs de los cuales los componentes de la
maquinaria COPII (Es decir, la GTPasa Sar1, los componentes de revestimiento de la capa
interna Sec23 y Sec24, y los componentes de revestimiento de la capa exterior Sec13 y Sec31)
se unen y propician la generacin de los transportistas- (Recuadro 1).

Una caracterstica distintiva del ensamblaje del COPII es una aparente inestabilidad intrnseca
debida a actividades opuestas que a primera vista presenta una paradoja. El Sar1 activado, que
se inserta en la membrana e induce la curvatura de la membrana, se requiere para reclutar
otros componentes del COPII; sin embargo, el reclutamiento de Sec23/24 y Sec13/31 inactiva a
Sar1, promoviendo el desensamblaje de la cubierta. Las respuestas a esta paradoja son
mltiples e incluyen actividad de carga prolongada de GTP sobre Sar1 por Sec12, la separacin
espacial de la carga GTP y actividades promotoras de la GTPasa (Sec12 localizada en la
membrana planar y la GTPasa estimulando a Sec23 y Sec31 en la yema naciente), el rol activo
de los cargamentos en la dinmica del COPII (ver ms abajo), la unin cooperativa de los
componentes del COPII, y la influencia de las protenas accesorias en la modulacin del ciclo
COPII [17-19].

Adems, los componentes bsicos de la COPII se sufren modificaciones post-traduccionales

como ubiquitinacin y fosforilacin que pueden regular la funcin/dinmica del COPII. Sec31
sufre monoubiquitinacin por CUL3-KLHL12, que impulsa el ensamblaje de grandes capas
COPII requeridas para la secrecin de fibras pro-colgenas, pero no para el transporte de
molculas ms pequeas [20]. El anlisis estructural de Sec13 / 31 sugieren que, en lugar de
tener un papel estructural en la creacin de grandes capas de COPII, la ubiquitinacin de Sec31
podra implican el reclutamiento de factores reguladores y/o la actividad de la co-protena
aceleradora de la actividad GTPasa (GAP) de Sec31 hacia Sar1 - GTP [21].Adicionalmente, la
fosforilacin de Sec31 por la protena quinasa CK2 modula la afinidad de Sec31 para Sec23 y es
necesario para el trfico regular de ER a Golgi. Por ltimo, la fosforilacin de la yeast Sec23 por
la quinasa Hrr 25 localizada en el Golgi (un ortlogo de CK1d) parece ser requerida para la
fusin vesicular con el Golgi. Actuando despus de la liberacin de vesculas del ER y el
reclutamiento de factores de anclaje, este evento de fosforilacin confiere direccionalidad en
el trfico post-ER, previniendo la retrofusin de vesculas con el ER. Esta fosforilacin de Sec23
tambin podra influir en la generacin de vesculas del ER porque la desfosforilacin
subsecuente de Sec23 puede ser necesaria para su reciclaje al ER para ms rondas de
formacin de vesculas [23].El uso de un inhibidor CK1 en clulas de mamferos produjo
resultados compatibles con este sistema, tambin opera en otros sistemas celulares. La
importancia de la fosforilacin del Sec24 por la misma quinasa sigue siendo desconocida [23].
As, la maquinaria bsica COPII puede ser regulada en mltiples niveles y muchos ms quedan
por descubrir, incluyendo lo que influye y regula a los reguladores.

Recuadro 1. El ciclo COPII

El ensamblaje de COPII en la membrana del ER se inicia por la activacin (es decir, El

intercambio GDP-GTP) de la pequea GTPasa Sar1 promovida por el factor de intercambio de
nucletidos guanina Sec12, una glicoprotena integral de la membrana del ER. El Sar1 activado
inicia la formacin de vesculas insertando una hlice N-terminal anfiptica en la membrana
ER, generando curvaturas de la membrana, y reclutando los componentes del revestimiento
Sec23 /24 (capa interna), estableciendo el complejo pre incipiente, y posteriormente Sec13 /
31 (capa exterior) (Figura 1).

Sar1, que tiene una muy baja actividad intrnseca de hidrolizacin de GTP, es inactivada a
travs de la actividad GAP de la subunidad de capa interna Sec23, que es mejorado an ms
por la capa externa de COPII que comprende el complejo tetramrico Sec13 / 31. El complejo
Sec13 / 31 es reclutado para el complejo de pre incipiente y forma estructuras en forma de
jaula que imponen la curvatura de la membrana y tienen un papel organizativo confiriendo
rigidez estructural a la COPII [15]. El siguiente paso en la biognesis de transportadores de
COPII es la fisin de la membrana, un proceso impulsado por la habilidad el hlice N-terminal
anfiptico de Sar1-GTP para insertar en la membrana e inducir asimetra superficial entre el
exterior y el interior membrana foliar, as promoviendo inicialmente la curvatura y
posteriormente creando defectos en el empaquetado de lpidos en el envoltorio interno que
resultan en hemifusin y fisin [79,80]. El papel preciso en la fisin de factores adicionales,
incluidos los lpidos y protenas, queda por definir [80,81].

Un ltimo componente fundamental de facto de COPII es Sec16, una larga protena perifrica
de la membrana de 250 kDa que interacta con todos los componentes COPII. Sec16 acta
como un andamio para el ensamblaje de COPII [82-84] y media la capacidad de ERK2 para
controlar el nmero y la funcin de ERESs [85]. Adems, los datos recientes describen un papel
regulador para Sec16 en la formacin de vesculas COPII, ya que puede dificultar la capacidad
de Sec31 para estimular la actividad GAP Sec23 hacia Sar1 a travs de su interaccin con Sec23
y Sar1 [86,87]
Cargas: no solo pasajeros del transportadores dependientes de COPII

Las protenas que salen del ER pueden influenciar directamente en la biognesis de

transportistas. Muchos de los cargos que siguen el camino de COPII no son solo pasajeros
pasivos pero ejercen un papel activo en el control de la estabilidad, dinmica y geometra de la
envoltura misma del COPII y en la formacin de sus propios transportistas (Figura 1) La clave
para mediar este papel activo es la habilidad de algunas protenas cargo para interactuar a
travs de sus seales de exportacin (como LXXLE, DXE diacdico, YNNSNP, y triple Arg [3R]
motifs) con sitios de unin especficos en Sec24 [24,25] o con Sar1 [26]. Para la seleccin e
inclusin de los transportadores de COPII, las protenas cargo que no pueden interactuar
directamente con COPII, como algunas protenas luminales solubles, glicosilfosfatidilinositol
(GPI) anclado a protenas, y algunas protenas TM, dependen de la unin a los receptores de
TM o adaptadores que interactan con Sec24 [27,28]. Curiosamente, la interaccin de los
cargo con Sec24 puede ser regulado por fosforilacin de cargo [29] y por el estado de
ensamblaje de cargos oligomricos [30].

El papel activo de cargo en el ensamblaje del COPII en el ERESs puede tomar diferentes formas.
Primero, la cantidad de cargo transportado puede estimular la formacin de COPII, dirigiendo
un aumento en el nmero y la extensin de ERESs (Figura 1A) [18,31]. Segundo, a travs de su
interaccin con COPII, cargo podra estabilizar complejos pre-incipientes durante varias rondas
de intercambio Sar1 GDP-GTP, haciendo as posible disociar la envoltura COPII de la hidrlisis
de Sar1 GTP (Figura 1B) [19,32]. Tercero, cargos pueden estimular la actividad Sar1 GAP de
Sec23/24 [33] mejorando el desacoplamiento entre Sar1 y el ciclo COPII y ejerciendo una
correccin cintica que asegura que solo las cargos correctamente ensamblados se incorporan
eficientemente en los transportadores de COPII(Figura 1C). Cuarto, cargos tienen el potencial
de moldear la carga de Sec13/31. La carga de COPII puede adoptar diferentes geometras
debido a la flexibilidad de su regin de curvatura entre las barras de Sec13/31 [21, 34, 35],
que puede ser influenciado por Sec24. Las estructuras formadas por Sec13/31 tienen una
geometra cuboctadrica con un dimetro de 600 comparada con la geometra
icosidodecadrica de 1000 adoptada por Sec13/31 en presencia de Sec23/24. La unin del
cargo al Sec24 puede producir una fuerza que modifique el ngulo entre los bordes opuestos
de Sec13/31 para asegurar que el tamao de la carga se adapte a la demanda fsica del cargo
(Figura 1D) [21, 34, 35] Quinto, las cargas abundantes y asimtricas que contienen a una
porcin luminal masiva, como GPI anclado a protenas y adaptadores p24, pueden influenciar
en las propiedades fsicas de las membranas del ER afectando as a las vesculas en formacin.
Se ha propuesto que estos cargos son capaces de influir en la rigidez de la membrana
produciendo fuerzas que se oponen a la curvatura generada por la cubierta COPII [36]. Estas
fuerzas pueden imponer una sobrecarga que exigira la mxima eficiencia de la propia
maquinaria COPII (Figura 1E) Finalmente, mediante la modulacin del ciclo del COPII, algunos
receptores de cargo pueden ayudar al embalaje eficiente de sus clientes, actuando como un
temporizador para la fisin de la membrana. Por ejemplo, un SH3 como dominio dentro del
dominio N-terminal del receptor procolgeno TANGO1 [37, 38] puede unir al procolgeno VII
en el lumen del ER, mientras une a Sec23/24 a travs de su dominio C- terminal citoplasmtico
rico en prolina [37]. Fue propuesto que TANGO1 junto con un antgeno 5 asociado a linfoma de
clula T cutneas (cTAGE5), que dimeriza con TANGO1 y tambin interacta con Sec23/24,
retrasa el reclutamiento de Sec13/31 demorando as la hidrolizacin del GTP por Sar1 [37,39] y
promoviendo el crecimiento del transportador de COPII que puede acomodar largas fibras de
procolgeno (300nm) (Figura 1F) As, la naturaleza de las molculas cargo a transportar
pueden influenciar fuertemente en la biognesis de transportadores de COPII, que puede
tener implicaciones para el tipo de transportadores formados y al menos parcialmente explicar
los efectos diferenciales sobre el transporte causados por el cargo y disfunciones asociadas de
COPII.

FIGURA 1.

Funciones propuestas para las protenas cargo en la modulacin de la dinmica y geometra de

la envoltura del complejo protico de revestimiento II (COPII). (A) Regulacin de tamao y
nmero de sitio de salida del ER (ERES). La formacin de COPII y el nmero y la extensin de
los sitios de salida del ER bajo escasa cantidad de cargo (izquierda) incrementa cuando la
cantidad de cargo aumenta (derecha). (B) Estabilizacin de la envoltura COPII asociado a
membrana. Sar1 activo (crculos rojos llenos) recluta los otros componentes del COPII que
subsecuentemente inactivan a Sar1 (crculos rojos sin llenar) y lo libera de las membranas
(flechas punteadas, izquierda) que promovera el desensamblaje de la envoltura. Sin embargo,
cargo unido a Sec24 estabiliza la asociacin de la envoltura con las membranas a pesar de la
disociacin de Sar1 despus de la hidrlisis de GTP (cargo transmembrana, verde; receptor
cargo, marrn). (C) Aceleracin de la actividad Sar1 GTPasa. Cargo estimula la actividad Sar1
GTPasa durante la formacin de transportadores de GTP (flechas punteadas, derecha). (D)
Regulacin de la forma/tamao de las vesculas. Las cargas de COPII pueden adoptar
diferentes geometras en respuesta a los tipos de cargo. Cargos ms grandes ligados a Sec24
podran aplicar una fuerza en la capa exterior de la envoltura que aumenta el ngulo variable
entre los extremos ms (+) y menos (-) de los bordes de Sec13/31 incrementando as el
dimetro de la carga de COPII. (E) Impacto en la curvatura de la membrana. Cargos asimtricos
con porcin luminal masiva, como el GPI anclado a protenas (marrn) o adaptadores p24
(verde), podran imponer curvaturas negativas de la membrana (flechas rojas). Una fuerza
contraria necesaria para superar esto y conducir hacia afuera la deformacin de la membrana
(flechas verdes) es proporcionada por Sec13, que mejora la rigidez de la envoltura del COPII
necesaria para la formacin de transportadores de COPII. (F) Cronometraje del ensamblaje de
transportadores de COPII. TANGO1 interacta con cTAGE5 y ambas protenas interactan con
Sec23/24 en los transportadores del recubrimiento de COPII. TANGO1 une al procolgeno
(barra verde) al lumen del ER, que puede promover la posterior unin a Sec23/24, retardando
el reclutamiento de Sec13/31 a Sec23/24. Retrasando as la terminacin de la carga de COPII y
promoviendo el crecimiento de los transportadores de COPII ms grande que puede acomodar
las largas fibras de procolgeno. Ver la leyenda de la Figura I del Recuadro 1 para los smbolos
referentes a la maquinaria del COPII.
La morfologa de los transportadores derivados del ER.

Aunque hemos logrado una comprensin profunda de la organizacin molecular de la

envoltura del COPII, nuestro conocimiento de la morfologa de transportadores derivados del
ER es asombrosamente modesto. Nuestra comprensin actual de la morfologa de
transportadores derivados del ER se basa en estudios en clulas intactas (Figura 2A-D) y
sistemas reconstituidos (Figura 2E-H), que son descritas debajo.

Las vesculas de COPII de tamao de 60-90 nm pueden ser generadas por incubacin de
microsomas de la levadura Saccharomyces cerevisiae con Sar1-GTP, Sec23/24 y Sec13/31
[40,41] (Figura 2E) Vesculas ms grandes (tamao promedio de 87 nm) pueden ser observadas
usando el parlogo de Sec24, Lst1, que acta como u heterodmero con Sec24 para la
exportacin de la ATPasa de la membrana plasmtica Pma1 [42]. Esto sugiere que la
combinatoria composicin de la subunidad de COPII puede generar vesculas de diferentes
tamaos. De hecho, dos poblaciones de vesculas que difieren in el contenido de cargo se
pueden producir in vitro, una de ellas se dedica a llevar GPI ancladas a protenas [43] Sin
embargo, las vesculas COPII no libres (es decir, no unidas a la membrana del ER) de cualquier
tipo han sido visualizadas por microscopa electrnica en clulas de S. cerevisiae. Dificultades
similares en identificar vesculas de COPII son evidentes en clulas vegetales [44,45]. Estas
dificultades en S. cerevisiae y plantas pueden ser debido al rpido consumo de vesculas
despus de su fusin con Golgi mvil [44,46]. En la levadura Pichia pastoris, que tiene unGolgi
ms esttico, la tomografa electrnica identific probables vesculas COPII de 43 nm en el
interfaz ER-Golgi [47] Si la visualizacin de los intermediarios de COPII dependiera en una
motilidad menor, Golgi hacinado, uno podra esperar identificar estos en las clulas de
mamferos. De hecho, vesculas revestidas se han visualizado en clulas de mamferos. Por
ejemplo, vesculas redondas de 60-80 nm que contienen molculas cargo concentradas han
sido localizadas a nivel del ERESs en clulas RBL intactas (Figura 2A) La organizacin 3D del
ERESs, delineada por la combinacin de secciones finas en serie y estereologa, se encontr
que se compone de una capa de COPII activa que contiene zonas de formacin en las cisternas
del ER que rodeaba un grupo de elementos tubulares vesiculares que contenan COPI [48].

Usando microscopa electrnica de luz correlativa y tomografa sobre fibroblastos sometidos a

una onda sincronizada de procolgeno y transporte de glucoprotena G del virus de estomatitis
vesicular (VSV-G) [49], se identificaron transportadores saculares irregulares grandes (>300nm)
que contenan estos cargo secretores (Figura 2C). Estos transportadores no estaban cubiertos
pero s flanqueados por brotes con contornos recubiertos. La falta de una cobertura evidente
en estos grandes transportadores puede ser debido a la inestabilidad de la envoltura del COPII
y/o la posibilidad de que transportadores saculares no recubiertos (que sin embargo requieren
COPII para su biognesis) broten del ER bajo condiciones exigentes de cantidad de cargo.
Combinando el marcado immunogold y la tomografa electrnica en clulas HepG2 [50] revel
COPII revistiendo brotes asociados a ER, vesculas libres (~50 nm), y tublos largos 150-200 nm
con forma de pesas que son parcialmente (en la punta y solo en un lado) cubierto con COPII y
contienes la protena SNARE Sec33b (Figura 2D). Infortunadamente, cargo no se analiz ningn
cargo secretor en este estudio. Aunque se han producido vesculas recubiertas de COPII
regulares en diversos sistemas in vitro (figura 2E, F) la reconstruccin del brote en
transportadores de gran tamao se queda muy atrs, con la excepcin de vesculas de
transporte de pre-quilomicrones (PTCVs) (Figura 2G). Estas vesculas pueden basarse en un
nuevo complejo proteico que contiene Sar1B, Sec13, protenas interactivas pequeas VCP/p97,
y la protena de unin a cidos grasos FABP1, pero ser independientes de otros componentes
del COPII [4, 51]. Sin embargo, el mecanismo molecular subyacente a este sistema, cmo estos
grandes transportadores brotan de las membranas del ER, y cmo las muchas mutaciones en
el gen Sar1B que se asocian al impacto de la enfermedad de Anderson (AD) en esta funcin
permanecen confusas. Infortunadamente, la reconstitucin del brote del transportadores
procolgeno an no se ha logrado, Justificando las muchas incertidumbres acerca de su
composicin molecular y el mecanismo de su biognesis (vea abajo). Recientemente se han
generado transportadores grandes que podran adaptarse al tamao de las fibrillas de
procolgeno mediante la incubacin de vesculas unilamelares gigantes y componentes
purificados de COPII; aparecen como tbulos varicosos encerrados en un exoesqueleto COPII
[52] (Figura 2H), siendo as bastante diferentes de los grandes transportadores hasta ahora
observados en clulas intactas, que no estn recubiertas [49] o solo lo estn parcialmente [50].
Las dificultades para correlacionar la morfologa de los carriers generados in vitro con los
observados en clulas intactas puede deberse a la influencia del cargo y las protenas
accesorias en la biognesis de carriers, como se discuti anteriormente. Esta discrepancia
destaca la necesidad urgente de estudios futuros dirigidos a aclarar la morfologa de los
carriers COPII en clulas intactas y cmo, y si, estos son compatibles con aquellos observados
utilizando sistemas in vitro.

FIGURA 2

Morfologa de los transportadores del COPII en clulas intactas y en sistemas reconstituidos.

(A) Secciones en serie del ERESs adyacente a la envoltura nuclear de clulas de leucemia
basfila de rata (RBL). Los brotes del ER son visibles emergiendo de la envoltura celular y
frente a los conglomerados tubulares vesiculares. El recuadro muestra una vista a mayor
aumento de dos brotes de ER. (B) El etiquetado con immunogold de COPI (partculas de oro de
10 nm) and COPII (partculas de oro de 15 nm) en clulas pancreticas de ratas. COPII se
encuentra en las membranas de ER en los brotes de transicin (puntas de flecha) mientras
COPI (flechas) se encuentra en conglomerados tubulares vesiculares y cerca de los elementos
de Golgi (G). (C) Microscopa inmunoelectrnica (panel izquierdo) y reconstruccin 3D con
representacin superficial (panel derecho) de contenedores de procolgeno (PC). Izquierda: el
transportadores PC est conectado (flecha gruesa) con el ER (punta de fecha). El contorno del
ERES (flecha gruesa) no contiene PC. Derecha: vista 3D de la estructura de los contenedores de
PC (rojo). El ER es en blanco y la estructura amarilla no contiene PC. (D) Modelado de un
ERES en clulas HepG2 etiquetado para COPII (puntos rojos) y Sec22b (puntos verdes). El
modelo se muestra desde la perspectiva de un corte digital en un tomograma para que el rea
modelada por debajo del plano se vuelva transparente. Un ERES central frente a un elemento
del cis-Golgi es representado por celeste. Las membranas marcadas del COPII, incluyendo
dumbbell tubules, estn mostradas en amarillo. Barra de escala, 100 nm. (E) Seccin delgada
de microscopa electrnica de trasporte de vesculas reconstituidas in vivo a partir de
mebranas de ER lavadas y componentes del COPII purificadas (protenas de levadura: Sar1p,
Sec23/24p, y Sec13/31p). (F) Microscopa electrnica de vesculas derivadas de reacciones
realizadas en presencia del Sar1 mutante restringido GTP y microsomas aislados. Las vesculas
acumuladas se inmovilizaron sobre perlas magnticas y se procesaron para microscopa
electrnica. El tamao promedio de los transportadores es de vesculas de 50-70 nm (G)
Seccin delgada de microscopa de transmisin de vesculas de transporte de pre-
quilomicrones (PCTVs) generado por ER intestional. PCTVs son 350-500 nm de tamao y
contienen lpidos osmifilos. Barra de escala, 500 nm. (H) Microscopa crioelectrnica vista de
membranas y tbulos generados por incubacin de vesculas unilamelares gigantes con Sar1,
Sec23/24, y Sec13/31. Las extensiones tubulares estn recubiertas (flechas en el panel (b)) y
llevan constricciones a <100 nm de distancia.

Tabla 1. Fenotipos causados por la desregulacin de la maquinaria COPII en modelos

animales
Gen Enfermedad Modelo Fenotipo Refs
humana animal
Sar1A No - - -
determinada
Sar1B AD o CMRD Ratones KO Alteracin del nivel de colesterol en -
el plasma
Sec23A CLSD Pez cebra Caractersticas que recuerdan a CLSD [90]
MO humano
 Pez cebra crusher mutant [91]
mutante
Sec23B Anemia Ratones KO Muerte despus del nacimiento con [56]
diseritropoytic degeneracin de tejidos secretores
a congnita tipo profesionales, sin anemia aparente
II Pez cebra Desarrollo de eritrocitos aberrantes [55]
MO
Sec24A No Ratones KO Supervivencia y desarrollo normales, [57]
determinada reduccin marcada del colesterol
plasmtico
Sec24B Posible papel Ratones KO Cranioraquisquisis, fracaso en el [58]
en los defectos cierre del tubo neural resultante de
del tubo neural la distorsin de la molcula de
humano sealizacin VANGL2
Sec24C No Pez cebra Desarrollo normal [64]
determinada MO
Sec24D No Ratones KO Letalidad embrionaria temprana [65]
determinada Ratones No hay anomala fenotpica [65]
haploinsufici
entes
Pez cebra Bullgod mutant; dismorfologa [64]
mutante craneofacial, defectos en el trfico
de protenas ECM incluyendo
colgeno tipo II y matrilina
Meda Defectos esquelticos en la [92]
mutante formacin de vrtebras
Sec13 No Pez cebra Anomalas esquelticas, similares al [76,
determinada MO crusher mutant, y defectos en la 93]
deposicin de proteoglicanos;
alteracin retiniana
Pez cebra Desintegracin de la estructura ER
mutante en condrocitos, clulas epiteliales
intestinales y hepatocitos; detenido
el crecimiento de los rganos
digestivos en desarrollo
Sec31A No - - [94]
determinada
Sec31B No - - -
determinada
Sec16A No - - -
determinada
Sec16B No Ratones KO Alteracin del nivel de colesterol en -
determinada el plasma
TANGO1 No Ratones KO Defectos generales de secrecin, [38]
determinada alteraciones severas en la
maduracin de los condrocitos y
mineralizacin sea
Sedlin SEDT - - -
Puntos de vista desde las enfermedades genticas y modelos animales

El rpido avance en el conocimiento de la organizacin molecular y dinmica de la maquinaria

COPII usando enfoques reduccionistas descritos no ha sido paralelo a un avance comparable
en nuestro entendimiento de cmo esta maquinaria bsica puede manejar la larga variedad de
cargas dejando el ER. Importantes puntos de vista en esta direccin han emergido ms
recientemente de estudios de defectos genticos de componentes del sistema secretor
temprano, incluyendo la maquinaria COPII, en enfermedades humanas y en modelos animales.
Una sorprendente caracterstica de estos defectos es que ellos dirigen a fenotipos muy
limitados, a menudo restringidas a patologas especficas de tejidos, sugiriendo que muchos
factores diferentes pueden estar involucrados (Tabla 1). A pesar de que esto represente un
cambio para el conocimiento de mecanismos patolgicos de la enfermedad, esto oferta una
oportunidad increble para comprender el rol fisiolgico de la maquinaria molecular de
exportacin del ER.

Tejidos- expresiones especficas de las isoformas del componente de trfico

Los restrictos fenotipos observados en enfermedades humanas y modelos animales que

afectan a los componentes del sistema secretor temprano pueden ser explicados en parte
por la presencia de mltiples parlogos del componente del COP II en vertebrados; hay dos
Sar1( Sar1 A y B) , dos Sec23( Sec 23 A y B) cuatro Sec 24 A- D, y dos Sex 31 ( Sec31 A y B)
parlogos. La levadura contiene solo un parlogo de cada subunidad de COPII (excepto Sec24)
y la supresin de algunas subunidades resulta en letalidad, consecuente con sus funciones
esenciales en el transporte del ER- Golgi. Por lo tanto, las expresiones especficas de tejidos, o
niveles relativos de expresin, de genes parlogos o protenas se pueden considerar para
fenotipos mutantes especficos de tejido. Por ejemplo, Displasia craniolenticulosutural (CLSD)
es causada por mutaciones en Sec 23 A en calvarios de osteoblastos, los cuales expresan bajos
niveles de Sec23B. [53] Adems, la mutacin Sec23B en clulas de la sangre rojas que tienen
bajos niveles de Sec23A relativos a Sec23B pueden causar

anemia diseritropoytica congnita tipo II [54,55] y la deficiencia de SecB causa la muerte de

ratones deficientes poco despus de su nacimiento debido a la degeneracin de tejidos
secretores profesionales, los cuales expresan ms alto la Sec23B relativa a Sec23A en tejidos
exocrinos y endocrinos [56]. As, los bajos niveles de un parlogo en un tejido dado pueden
no ser suficientes para compensar un defecto causado por mutaciones del otro.

Propiedades de unin especficas de los parlogos Sec24

Otro factor contribuyendo a los efectos diferenciales y restrictos de las mutaciones del COPII
pueden ser las propiedades especficas de cargamentos de unin del parlogo
Sec24. Mutaciones de parlogos individuales pueden afectar solo a restrictos cargamentos o
de un grupo de molculas de carga especfica a ese parlogo.

La ausencia del Sec24A en ratones produce un fenotipo relativamente leve (niveles ms bajos
de colesterol plasmtico) debido a la reducida protena subtilisina/kexina convertasa tipo 9 de
secrecin (PCSK9) [57]. PCSK9 est involucrada en la degradacin de receptores de
lipoprotenas de baja densidad (LDLRs) en el hgado; secreciones reducidas dirigen niveles de
LDLR, de este modo, incrementando el consumo de partculas de lipoprotenas de baja
densidad (LDL) en la clula y bajando los niveles de colesterol plasmtico. Por contraste,
mutaciones de Sec24B dirigen a los defectos en el cierre del tubo neuronal en ratones [58,59] y
posiblemente en humanos debido a la inhibicin selectiva del transporte de la protena 2 de
polaridad celular planar VANGL (VANGL2) ( a la que Sec24B se une) la cual es requerida para la
sealizacin de la polaridad celular planar.

Sec24C, la cual ha estado asociada con desrdenes bipolares [61], se une y media el trfico de
transportes neurotransmisores, intercambios de aniones, y receptores acoplados a protena G
seleccionados (GPCRs [62,63],

La deficiencia de Sec24D dirige a un fenotipo esqueltico en el pez cebra debido a un

requerimiento para el transporte de protenas de la matriz del cartlago [64], pero tambin
dirige la muerte embrionaria temprana en ratones [65]. Las manifestaciones en general en
enfermedades humanas y modelos animales son generalmente consistentes, pero hay algunas
diferencias que pueden ser debido a cambios especficos en las funciones de especies, funcin
residual, o por compensacin de una funcin por parlogos en mutantes hipomorfos
humanos. Dentro de este contexto podra ser interesante examinar cmo la expresin
del espacio temporal de las subunidades del COPII, molculas de carga, y protenas accesorias
son reguladas durante el desarrollo y cmo ellos afectan en la morfognesis, como descritas
por miembros de la familia Creb/ATTF6/OASIS de factores de transcripcin [67,68], los cuales
regulan la capacidad secretora y afectan en la funcin del COPII y son los nuevos
transductores del estrs fisiolgico del ER con roles esenciales en la gua de la diferenciacin
celular y en el mantenimiento de la homeostasis celular en tejidos y rganos especficos.

Requisitos especficos dirigen el tamao de la carga

Algunas cargas especficas de tejido tal como quilomicrones (dimetro promedio de

aproximadamente 250nm) y prefiltros de preclageno (300nm) exceden el tamao de la carga
de las vesculas cannicas del COPII, cual rango es de 60 a 90nm. El anlisis de trastornos
genticos que causan defectos especficos en el transporte de estas grandes molculas de
carga ha previsto mayor perspicacia mecanicista en cmo la maquinaria COPII puede
encargarse de estas cargas extra grandes.

Mutaciones en Sar1B causan enfermedad de retencin de quilomicrones (CMRD), O AD, la

cual es caracterizada por el fracaso de los enterocitos para secretar grandes partculas de
lipoprotenas y su retencin en los compartimentos ligados a la membrana. La expresin
incrementada observada del gen Sar1A, sin embargo, no parece ser suficiente para compensar
por los defectos en Sar1B [69]. Una explicacin para los requisitos especficos en Sar1B vienen
de la observacin que Sar1B ha debilitado la afinidad que Sar1A tiene por Sec13/31 [53].
Porque Sec31 enlaza una superficie en la que se extiende Sec23 y Sar1 [70], la interaccin floja
de Sar1B con Sec31 puede facilitar la formacin de una COPII ms flexible. Por contraste, los
enlaces ms estrictos de Sar1A a Sec31 pueden restringir la flexibilidad de la Sec13/31,
obstaculizando la formacin de grandes transportadores [2].

En CLSD, las mutaciones en Sec23A dirigen a los defectos esquelticos asociados con una
discapacidad de la salida del procolgeno desde el ER. [53,71]. Un anlisis del mutante
Sec23A-F382L en CLSD revel un reclutamiento reducido del complejo de recubrimiento
exterior que result en una mayor asociacin del Sar1-GTP con el ER amplias extensiones
tubulares emanando del ER. (figura 3) . Otra mutacin de Sec23A ( M702V) asociado con CLSD
tambin resulta en un bloque en la exportacin de procolgeno desde el ER mientras cargas
ms pequeas no son afectadas. A pesar de que Sec23A- M702V interacta normalmente con
otras protenas COPII, este activa la actividad de Sar1B GAP ms que el desenfrenado tipo
Sec23A [72]. Esta activacin puede resultar en menor y muy transitoria actividad de Sar1
resultando en la prematura disociacin de Sar1 y COPII de la membrana.
Anlisis de los mecanismos moleculares subyacentes a otra enfermedad gentica han
subrayado el rol de la dinmica del ciclo de la GTPasa en la exportacin de grandes molculas
de carga. Displasia espondiloepifisaria tarda (SEDT), un trastorno esqueltico unido a x en el
cual los condrocitos muestran defectos en la secrecin de los componentes de la matriz
extracelular (ECM), es causada por mutacin del gen sedina.

El gen sedina codifica un componente del conservado complejo multimolecular TRAPP, el cual
tiene multiples roles en el trfico de la membrana [74]. La sedina es reclutada al ERES por
TANGO1 y, como TANGO1, es requerida para el transporte de la exportacin del ER de
procolgeno, pero no pequeas molculas de carga.

Sedina dirige directamente a Sar1 y es requerido para un ciclo eficaz de Sar1 GTPasa [75].
Reduccin o mutacin de sedina resulta en una incrementada concentracin de Sar1-GTP en el
ERES y produce extensiones tubulares del ER que se asemejan a perlas en una cuerda (Figura
3B), una reminiscencia de los observados en las clulas mutantes Sec23A-F382L.

As, el ciclo de SAR1 tiene que ser finalmente ajustado para acomodar las grandes fibras de
colgeno. (Figura 4A). Demasiada Sar1-GTP (como observada en clulas pacientes SEDT y CLSD
-F382L) podra constreir las membranas que conducen a la formacin de transportistas
anormales que son permisivos para cargas pequeas, pero inadecuadas para cargas grandes
(Figura 4B). Niveles muy bajos de Sar1-GTP puede resultar en la disociacin prematura de
COPII de la membrana as que los transportadores ms grandes no podrn formar. Una
combinacin de la regulacin que pueden ser influenciados en varios niveles, con el rol
estructural de la capa externa puede ser particularmente importante para la salida de grandes
cargas. ( figura 4A), como se ilustra por la flexibilidad en los vrtices de las jaulas formadas por
el revestimiento COPII exterior que puede ser impelido en clulas deficientes en Sar1B (AD)
porque la isoforma Sar1 no afectada (es decir, Sar1A) tiene una mayor afinidad para Sec31
(vase arriba y figura 4C ). Adems de ser flexible, la capa COPII necesita impartir rigidez para
conformar la forma al soporte y generar curvatura de la membrana (Figura 4D). Estos son
requisitos absolutos para cargas grandes, pero aparentemente no para pequeas, debido a
que las mutaciones en Sec23A disminuyen la afinidad para Sec31 (como la mutacin de
Sec23A-F382L inducida por CLSD) y la deplecin del componente COPII externo SEC13 inhiben
selectivamente el procolgeno ER Exportacin [76]. Adems, el hecho de que la carga parezca
salir eficazmente de la ER incluso en ausencia completa de Sec13 en la levadura cuando la
rigidez de la membrana ER est comprometida [36], refuerza la idea de que el papel principal
de Sec13 es estabilizar la curvatura de la membrana iniciada por Sar1 - Sec23 / 24 y / o
promover el vnculo entre la curvatura y la terminacin de la fisin. El mismo papel puede ser
desempeado por Sec13 en sus ubicaciones COPII adicionales, como en el complejo de poros
nucleares y en membranas vacuolar / lisosmicas [77,78]. Por lo tanto, un eficiente ciclo Sar1
GTPasa acoplado a los atributos combinados de flexibilidad y rigidez conferidos por la jaula
externa son elementos cruciales para exportar grandes molculas de carga desde la ER.
Figura 3

Extensiones tubulares irregulares sobresalen del retculo endoplasmtico (ER) en displasia

craniolenticulosutural (CLSD) y clulas de pacientes con displasia tarda de Spondyloepiphyseal
(SEDT). (A) Micrografa electrnica de seccin delgada de una clula mutante homocigoto en la
regin de la ER de un paciente afectado por CLSD que muestra extensiones tubulares de la ER.
Reproducido, con permiso, de [53]. (B) Tomogramas y reconstruccin 3D de los sitios de salida
ER (ERES) en fibroblastos de pacientes afectados por SEDT. Escudo complejo de protenas II
(COPII) recubierto con brotes (amarillo), ER (verde), y los tbulos no recubiertas (de color
marrn) estn resaltados. Tenga en cuenta las yemas constreidas.
Figura 4

Mecanismos moleculares propuestos para el deterioro selectivo del retculo endoplasmtico

(ER) de exportacin de cargas grandes en trastornos genticos que afectan componentes de la
va secretora temprana. (A) Biognesis de los transportadores de transporte dependientes de
la protena de la cubierta II (COPII) en condiciones fisiolgicas donde la dinmica
espaciotemporal del ciclo Sar1 funciona junto con la rigidez y flexibilidad de la membrana para
incorporar molculas de carga tanto grandes como pequeas. La disfuncin de cualquiera de
estos procesos podra resultar en transportadores COPII que pueden acomodar cargas
pequeas pero no grandes. (B) Biognesis de los transportadores de transporte dependientes
de COPII en condiciones de hidrlisis de Sar1-GTP alteradas [por ejemplo, en la displasia tarda
de Spondyloepiphyseal (SEDT)]. Disminuir el ciclo Sar1 induce las constricciones de la
membrana en el portador naciente debido a los niveles ms altos de Sar1-GTP [75]. (C)
Biognesis de transportadores de transporte dependientes de COPII cuando se ve afectada la
flexibilidad de la jaula. Sar1B podra permitir la expansin de la jaula porque interacta ms de
Sar1A con Sec31. En la ausencia de Sar1B (por ejemplo, en la enfermedad de Anderson) la
afinidad ms fuerte de Sar1A para Sec31 podra reducir esta flexibilidad [2]. Biognesis de
transportadores de transporte dependientes de COPII cuando la rigidez y la curvatura de la
membrana estn deterioradas. En ausencia de la capa externa (por ejemplo, en la displasia
craniolenticulosutural [CLSD]), la fuerza generada por los restantes componentes COPII puede
ser suficiente para producir transportadores adecuados para molculas de carga pequeas,
mientras que el mantenimiento de la rigidez y la curvatura sostenida de la membrana, puede
ser ms importante para el desarrollo de grandes transportistas. Ver (figura I) en la casilla 1 y
(figura 1) para los smbolos.

Observaciones finales

Enormes avances han sido hechos en nuestro conocimiento de las caractersticas mecnicas
que regulan la exportacin de protenas dependientes de COPII del ER. Esta exportacin es un
proceso altamente dinmico que comprende un bucle de auto regulacin que es sujeto a
mltiples capas adicionales de regulacin. Estudios recientes han identificado un rango de
enfermedades causadas por mutaciones en los componentes de COPII y factores accesorios y
estn seguros que vendrn ms en un futuro cercano. A pesar de que nuestro conocimiento
detallado de la maquinaria COPII nos ha ayudado a entender estas patologas, ellos en turno
han contribuido significativamente a refinar los mecanismos de las protenas de exportacin
del ER. Sin embargo, numerosas cuestiones permanecen. Una cuestin crucial es la escasez de
evidencia morfolgica por transportadores y por qu, dado tal conocimiento detallado, esto
ha probado lo difcil de identificar estos transportadores en clulas intactas. Otra cuestin
importante es cmo las diferentes molculas cargadoras, en asociacin con su respectivo
parlogo Sec24, regulan la generacin del transportador y cmo esto se relaciona a clulas
fisiolgicas y enfermedades. Aqu podra ser esperado que otros receptores de cargamento, de
los cuales muy poco son conocidos en mamferos, puedan encontrarse vinculados a
enfermedades en humanos. Finalmente, dada la presencia de parlogos diferentes de COPII,
cmo podran sus afinidades diferenciales y combinaciones afectar los tipos de
transportadores generados dentro de tipos diferentes de clulas y durante el desarrollo?