Determinacin del contenido de Nitrgeno por el mtodo de Microkjendahl

Natalia Hernandez1, Dayeliz Hernandez2 y Hector Hernandez3

Laboratorio de qumica analtica, Departamento de Qumica, Universidad del Valle, Calle 13 # 100-00, Cali.
1
natalia.hernandez.lopez@correounivalle.edu.co,2dayeliz.hernandez.romero@correounivalle.edu.co,
3
hernandez.hector@correounivalle.edu.co

Resumen. Para la determinacin del contenido de protena en un alimento por el mtodo de Kjendahl, se pes 0,0345g de
la muestra, que fue leche en polvo, y esta se deposit en un baln de microKjedahl. Se agreg al baln 0.1172 g de CuSO4,
0,0258g de MgO y 1,6013g de Na2SO4. Se digiri la muestra con 2,5 mL de H2SO4. . El baln se coloc de forma inclinada
sobre el digestor, se dej calentar unos 30 min hasta que se torn de color amarillo, se dej enfriar unos 10 min. Luego la
muestra se pas al equipo de micro destilacin, se adicion NaOH y se calent, dejando que reaccionara en el otro extremo
del equipo el H3BO3 hasta el viraje del indicador, esta solucin se titul con HCL 0,02M. Por ltimo se destil calentando
con plancha hasta cambio de color. Se destil otros 10 minutos ms. De esto se obtuvo que l %N en la muestra es de 1,63%

Palabras clave: Protena, Mtodo De MicroKjedahl, Destilacin.

1. INTRODUCCIN
El nitrgeno se encuentra en una gran variedad de
sustancias de inters en la investigacin, en la industria y
en la agricultura. El mtodo ms comn para la
determinacin de nitrgeno orgnico es el mtodo de
Kjendahl, desarrollado por un qumico dans, quien lo
describi por primera vez en 1883. (El nombre
microKjendahl viene dado por el tamao del tubo utilizado
para el anlisis, en un tubo macro, se pueden adicionar
hasta 15 mL de H2SO4, mientras que en un tubo micro,
mximo 5mL de cido) [1]. Este se basa en una titulacin
de neutralizacin. El procedimiento es sencillo, no requiere
de equipo especial y se adapta con facilidad al anlisis
rutinario de un gran nmero de muestras.
El anlisis consta de los siguientes pasos:
- digestin de la muestra con H2SO4 concentrado.
- destilacin de la solucin de digestin con vapor de agua.
- valoracin del destilado.
La etapa difcil en el mtodo Kjendahl, y la que demanda
ms tiempo, es la descomposicin de la muestra con el
cido sulfrico, que oxida el C y el H de la muestra hasta
CO2 y H2O. La transformacin del N depende de su estado
de combinacin en la muestra original. [2]
Con este anlisis se puede comprender el funcionamiento
del mtodo MicroKjendahl, y mediante este, determinar el
contenido de nitrgeno y protena en una muestra.

2. METODOLOGA

2.1 Determinacin Del Contenido De Protena En Un

Alimento

- se llev a secar al horno el Na2CO3, que se utiliz como

patrn primario en la estandarizacin del HCl.

- Se pes entre 0.03 y 0.05 g de muestra y se dej en un

Figura No. 1 mtodo de microKjendahl matraz de microKjedahl seco. Se aadi 0.1 g de una
mezcla 3:1 de CuSO4-MgO y 2 g de sulfato de potasio

- Despus de agrego 2.5 mL de H2SO4 concentrado. El

matraz se coloc de forma inclinada sobre el digestor. Se
calent la muestra gradualmente hasta que el cido Durante la destilacin se tiene:
sulfrico hirvi.
NH4SO4 + NaOH NH4OH + H2O
- se dej continuar la ebullicin hasta que el lquido sea
ligeramente amarillo y sin ninguna partcula de muestra en Reaccin 3.
suspensin. Despus se dej enfriar el matraz y aadiendo Al finalizar la destilacin se titul la solucin de H3BO3 con
agua para disolver los slidos. HCl requirindose 2,2mL para el viraje del indicador.
- Se trasvaso la muestra al equipo de micro destilacin. Se De acuerdo a la relacin estequiometria entre el NH 3 y el
abri la llave de suministro de agua al condensador y se H3BO3:
sumergi la manguera adaptada al extremo en un
Erlenmeyer de 125 mL con 10 mL de H3BO3 4%. NH4H2BO4 NH4 + H2BO3-

- Se adiciono 15 mL de la solucin alcalina y se tap Reaccin. 4

inmediatamente. Se destilo calentando con la plancha e
Se form el Ion borato formado, que se titul con HCl, de
incrementando gradualmente la temperatura. Despus del
acuerdo a la siguiente relacin:
cambio de viraje se destilo durante 10 minutos.
H2BO3- + HCl H3BO3 + Cl-
- Despus de hacer la destilacin, se retir el Erlenmeyer y
se apag la estufa y se titul el borato formado con cido Reaccin 5
clorhdrico 0.02 M estandarizado.
A partir de este volumen de HCl gastado, se calcul el %N,
3. RESULTADOS Y DISCUSIN como sigue:
0,0183 1 23 1
%N=2,2mLx x x x
En la tabla 1 se encuentran consignados los valores 1 1 1 23
14,01 100%
obtenidos para los diferentes tems medidos, luego se x = 1,63%
1 34,5
muestra el clculo de la estandarizacin del HCl.
Luego se tiene que para determinar el %de protena:
Tabla 1. Datos obtenidos
% de Protena = % de Nitrgeno x F Ec.2
tem Cantidad
Na2CO3 0,0194g En la tabla 2 se observan los diferentes factores de
Muestra (leche en polvo) 0,0345g conversin, para determinar protenas en los alimentos.
HCl (estandarizacin) 19,9mL
Tabla 2. Factores para cada alimento.
HCl (titulacin final) 2,2mL

Estandarizacin del HCl

De acuerdo a la relacin estequiometrica entre el Na2CO3 y

el HCl:

Na2CO3 + 2 HCl 2 NaCl + CO2 + H2O

Reaccin 1.

Se tiene lo siguiente:
1 Na2CO3 2
0,0194g Na2CO3 x x x
105,98 Na2CO3 1 Na2CO3
1
= 0,0183M
0,0199

Al finalizar la digestin se obtiene:

n-C-NH2 + H2SO4 CO2 + (NH4)2SO4 + SO2

(Esto es en presencia de CuSO4 y KSO4) Reaccin 2.

Se tiene la ecuacin 2 y se busca el factor correspondiente,
en este caso el de leche y productos lcteos. Luego
entonces:
% de Protena = 10,40%
Se calcul el error relativo, de acuerdo con la informacin
sobre el contenido de protena en la leche en polvo,
reportado en la etiqueta (10%)
|1010,40|
%ER= x 100= 4%
10
4. DISCUSION DE RESULTADOS
Para la determinacin de protena en una muestra de leche
en polvo, se realiz el mtodo Kjeldahl, el cual est
compuesto de tres etapas, la primera consisti en la
digestin de la muestra, que se descompone con H2SO4
concentrado a una temperatura elevada, este acta como
oxidante y los gases que se forman del cido se disocian en
forma de sulfatos y agua. El sulfato que se produce, se
descompone en sulfito y oxgeno, el cual oxida al carbono
y al hidrogeno de la materia orgnica, para convertirlos en
dixido de carbono y agua como se muestra en Reaccin.2
Debido a que el proceso de digestin de la muestra, puede
tardar mucho tiempo, se utiliz sales neutras como CuSO4-
MgO y KSO4, que actuaron como catalizadores e
incrementaron el punto de ebullicin del H2SO4 al igual
que el de la muestra. La cantidad que se aade de las sales
debe ser controlada para eliminar la posibilidad de
oxidacin del ion amonio NH4, esta dificultad se presenta
si se evapora excesiva cantidad de cido durante la
digestin. [3]
Terminada la digestin con una descomposicin completa
y obteniendo en solucin NH4SO4, se observ que la
solucin tom un color verde, debido a los catalizadores
utilizados.
La segunda parte del proceso del mtodo, es la destilacin,
la cual consiste en la dilucin y neutralizacin de la
solucin digestada utilizando NaOH y tiosulfato de sodio.
La solucin alcalina, desplaza al NH4SO4 que se obtuvo en
la digestin y lo elimina en forma de NH4OH, es importante
que la reaccin se realice de manera completa, de lo
contrario, el amoniaco no se liberara y no se llegar a una
determinacin adecuada Reaccin.3
El amoniaco liberado en la destilacin, reaccion con
H3BO3, produciendo Borato de Amonio, y el H+ cedido por
el cido, deja un exceso de H3BO3, con la ayuda del
indicador mixto se pudo observar un cambio de color.
La ltima parte del mtodo, se trata de la titulacin de la
solucin donde se encuentra en Borato de Amonio
(NH4H2BO4), Esta se titula con HCl, el cual al reaccionar
con el borato, regresa al estado original el H3BO3 y vuelve
a producir el ion amonio. Reaccin 4 y 5
A partir de los clculos realizados, se obtuvo un porcentaje
de protena del 10,40% el cul, comparado con la etiqueta
de la leche en polvo utilizada en la prctica que es 10%, se
puede decir que se determin de manera adecuada el
porcentaje de protena con un error del 4%
considerablemente bajo.
5. CONCLUSIONES
1. Debido al porcentaje de protena obtenido en la
determinacin, se puede decir que el anlisis
realizado fue correcto y los errores fueron
mnimos, obteniendo 4% de error.
2. Durante la digestin de la muestra se debe
controlar la temperatura, para que no ocurran
perdidas por ebullicin fuerte, adems de que altas
temperaturas posibilitan la oxidacin del ion
amonio, lo cual debe evitarse.
6. PREGUNTAS
b) si el NH3 proveniente de 1,50g de una muestra que
contiene 8,5% p/p de N, se recibe en HCl 0,1M Cul debe
ser el mnimo volumen del cido a utilizarse para garantizar
que el anlisis es correcto?
R/
8,5 1 1
1,50
100 14 1
1 1000
= 91,1
1 0,1
7. REFERENCIAS
[1] Grupo-selecta.com. (2017). Notas de
Aplicaciones. [Online] Available at:
http://www.gruposelecta.com/notasdeaplicaciones
/analisis-alimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-
water-analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-
metodo-de-kjeldahl-kjeldahl-method-for-protein-
determination/ [Accessed 8 Oct. 2017].
[2] SKOOG, D., RAMREZ MEDELES, M. and
ZUGAZAGOITIA HERRANZ, R. (2001). Qumica
analtica. 7th ed. Mxico: McGraw-Hill, p.351.

[3] SKOOG, D A and HOLLER, F,J. Qumica Analtica. 8

ed. Mxico: Thomson editores. S:A, 2005 pg.