sumber:www.oseanografi.lipi.go.

id

Oseana, Volume XXXI, Nomor 3, 2006 : 33 - 44 ISSN 0216-1877

BEBERAPA METODE PENGUKURAN

KLOROFIL FITOPLANKTON DI LAUT

Oleh

Sumijo Hadi Riyono1)

ABSTRACT

SOME MEASUREMENT METHODS OF PHYTOPLANKTON CHLOROPHYLL IN

THE SEA. Its important is done measurement of phytoplankton chlorophyll because
phytoplankton chlorophyll can be made as indicator total quantity or standing
stock of phytoplankton. Phytoplankton quantity is how much of phytoplankton at
the time and certain water volume in the waters. There others, phytoplankton
chlorophyll can be use as measurement of primary productivity in the waters. The
measurement of phytoplankton chlorophyll can be done by various methods among
other like is colorimetric, spectrophotometric, fluorometric and chromatography
paper. Information about of measurement methods is important because by the
measurement knowledge method of phytoplankton chlorophyll the researcher and
analyst earn the match of method with its requirement. Various excess and insuffiency
from each the method is presented by detail.

PENDAHULUAN ICHIMURA dalam RIYONO, 1989). Dengan

Kemampuan potensial suatu perairan
untuk menghasilkan sumberdaya alam hayati
ditentukan oleh kandungan produktivitas
primernya. Produktivitas primer adalah
banyaknya zat organik yang dihasilkan dari zat
anorganik melalui proses fotosintesis dalam
satuan waktu dan volume air tertentu.
Pengetahuan mengenai kandungan
klorofil fitoplankton di suatu perairan apabila
dilengkapi dengan data cahaya dapat
digunakan untuk menghitung produktivitas
primernya (RYTHER & YENTSCH; SAIJO &
demikian kandungan klorofil fitoplankton
dapat dijadikan petunjuk akan kesuburan
suatu perairan.
FUSILER (dalam DEPKES, 1987)
mengemukakan bahwa rasio perbandingan
antara klorofil fitoplankton dengan biomassa
dapat dijadikan petunjuk kualitas (pencemaran)
suatu perairan. Untuk menentukan kandungan
klorofil fitoplankton di suatu perairan pada saat
tertentu, telah dikembangkan berbagai metode
dari yang paling sederhana sampai yang cukup
kompleks. Metode tersebut antara lain adalah
kolorimetri, spektrofotometri, fluorometri dan
chromatography-paper (kertas kromatografi).

1)
Bidang Dinamika Laut, Pusat Penelitian Oseanografi-LIPI, Jakarta.

33

Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006


Metode kolorimetri, sudah banyak ditinggalkan
sedangkan metode chromatography-paper
belum banyak digunakan dalam kegiatan yang
bersifat rutin, antara lain dalam survei-survei
oseanografi (NONTJI, 1973). Tulisan ini akan
membicarakan berbagai metode pengukuran
kandungan klorofil fitoplankton di laut serta
kelebihan dan kekurangan dari masing-masing
metode tersebut. Tujuan penulisan ini agar para
pembaca memahami cara pengukuran
kandungan klorofil fitoplankton sehingga
dapat memilih metode yang tepat, akurat dan
sesuai dengan tingkat kebutuhannya.
MACAMMACAM METODE
PENGUKURAN KLOROFIL
FITOPLANKTON
Pengukuran klorofil fitoplankton di laut
pertama kali diperkenalkan oleh HARVEY (1934)
dengan menggunakan metode kolorimetri.
Metode ini sederhana dan tidak memerlukan
biaya mahal, namun memiliki kelemahan karena
pengukuran untuk menentukan kesamaan
warna antara larutan ekstrak klorofil dengan
larutan standar dilakukan secara visual.
Pengukuran dengan metode ini kurang akurat
karena hasilnya sangat ditentukan oleh
subyektivitas si pengamat dan nilai yang
dihasilkan belum memiliki satuan absolut. KREY
(1958) melakukan modifikasi untuk
mendapatkan hasil pengukuran yang lebih
akurat dengan alat yang disebut Pulfrich
photometer dan Electrical colorimeter. Walau
demikian nilai yang dihasilkan masih
menggunakan satuan HPPU (Harvey Plant
Pigment Unit) belum memiliki satuan absolut.
Dalam perkembangan selanjutnya
RICHARDS & THOMPSON (1952) menemukan
metode spektrofotometric. Metode ini pertama
kali diperkenalkan masih menggunakan satuan
SPU (mikro Specified Pigment Unit), metode
ini kemudian mengalami modifikasi dengan
ditemukannya satuan absolut yaitu mg/m3 atau
34
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
g/L (STRICKLAND & PARSONS, 1968;
JEFFREY & HUMPHREY, 1975). Metode
spektrofotometri memiliki kelebihan
dibandingkan dengan metode kolorimetri
karena pengukuran sudah menggunakan alat
(spektrofotometer). Hasil pengukuran lebih
akurat, dapat menentukan jenis-jenis klorofil
(klorofil-a, -b, -c1 dan -c2) dan telah memiliki
satuan absolut. Kelemahan dari metode
spektrofotometri karena sensitifitas alat
(spektrofotometer) rendah sehingga dalam
proses penyaringan memerlukan volume air
yang besar. Selain hal tersebut, metode
spektrofotometri tidak dapat membedakan
antara klorofil dengan hasil dekomposisinya
sehingga hasil pengukuran lebih tinggi dari
nilai yang sebenarnya.
JEFFREY & ALLEN (1967)
memperkenalkan metode kertas kromatografi.
Metode ini dapat menentukan jenis-jenis
pigmen pada fitoplankton secara lebih teliti,
tetapi metode ini tidak dimaksudkan untuk
pengukuran rutin di laut karena metode ini
memerlukan tempat yang stabil. Metode kertas
kromatografi dimaksudkan untuk mempelajari
pigmen-pigmen fitoplankton dalam keadaan
khusus, misalnya penelitian fisiologis
blooming fitoplankton yang dilakukan in situ.
Seiring dengan perkembangan berbagai
metode tersebut, YENTSCH & MENZEL (1963)
dan HOL-HANSEN et al., (1965)
memperkenalkan metode fluorometri. Metode
ini banyak memiliki kelebihan dibandingkan
metode-metode lainnya, yaitu proses
penyaringan berlangsung lebih cepat hanya
memerlukan contoh air sebanyak 0,10,5 liter.
Metode fluorometri memiliki kepekaan yang
tinggi dan dapat membedakan antara klorofil
dengan dekomposisinya.
Untuk kepekaan yang sama pengukuran
klorofil fitoplankton dengan metode fluorometri
memerlukan jumlah volume contoh air yang
disaring lebih sedikit daripada metode
spektrofotometri. Besarnya jumlah contoh air
yang disaring sangat bervariasi untuk setiap

jenis perairan. Pada perairan oseanik (laut lepas)
maupun perairan neritik (dekat pantai), proses
penyaringan contoh air berkisar antara 0,1
0,5 liter untuk pengukuran dengan metode
fluorometri. Sedangkan pengukuran dengan
metode spektrofotometri memerlukan jumlah
contoh air berkisar 1 2 liter untuk perairan
neritik dan 5 10 liter untuk perairan oseanik.
Perairan oseanik pada umumnya kandungan
fitoplankton relatif lebih rendah daripada
perairan neritik (pantai), hal ini terkait dengan
ketersedian nutrien di perairan oseanik relatif
lebih rendah daripada perairan pantai.
Rendahnya kandungan fitoplankton pada
perairan oseanik tersebut berakibat pada
proses penyaringan contoh air berlangsung
lambat karena memerlukan jumlah volume
contoh air yang besar. Pada perairan pantai
fitoplankton dapat tumbuh dan berkembang
dengan pesat karena adanya suplai nutrien
secara langsung melalui aliran sungai (run-off)
yang bermuara di sekitar perairan tersebut.
Tingginya kandungan fitoplankton di perairan
pantai berakibat pada proses penyaringan
untuk pengukuran kandungan klorofil
fitoplankton berlangsung lebih cepat karena
hanya memerlukan jumlah volume contoh air
relatif lebih sedikit daripada perairan oseanik.
Berdasar pengalaman, penulis sering
membandingkan data hasil pengukuran dengan
metode spektrofotometri dengan fluorometri.
Hasil pengukuran menunjukkan bahwa data
yang dihasilkan dengan metode fluorometri
1,55,0 kali lebih besar dibandingkan
pengukuran dengan metode spektrofotometri.
Selain hal tersebut, pengukuran dengan metode
spektrofotometri sering tidak terdeteksi namun
setelah dilakukan pengukuran dengan metode
fluorometri masih mendapatkan hasil
(terdeteksi). Hal tersebut diperkuat oleh
pendapat LOFTUS & CARPENTER (1971) dan
RICHARD (2000), bahwa tehnik pengukuran
dengan metode fluorometri memiliki sensitifitas
lebih tinggi dibandingkan dengan
spektrofotometri. PARSONS et al., (1984)
berpendapat bahwa pengukuran dengan
35
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
metode fluorometri pada umumnya memiliki
sensitivitas 5 10 kali daripada metode
spektrofotometri. Sejalan dengan ini beberapa
penulis (HOLM-HANSEN et al., 1965 dan
YENTSCH & MENZEL, 1963) menyatakan
tehnik pengukuran dengan metode fluorometri
memiliki sensitifitas 10 kali lebih tinggi daripada
tehnik pengukuran dengan metode
spektrofotometri. Berdasarkan pengalaman
dalam melakukan pengukuran tersebut dan
berbagai literatur maka Laboratorium
Produktivitas Pusat Penelitian Oseanografi
dari tahun 1986 sampai saat ini menggunakan
metode fluorometri.
Berikut akan disampaikan prosedur serta
ulasan dari berbagai metode (metode
kolorimetri, spektrofotometri, flurometri dan
kertas kromatografi) secara rinci.
1. Metode Kolorimetri
Di Indonesia sampai saat ini metode
kolorimetri untuk pengukuran kadar klorofil
masih banyak digunakan. Hal ini disebabkan
metode tersebut cukup sederhana, tidak
memerlukan peralatan yang mahal dan hanya
didasarkan pada perbandingan warna-warna
(HARVEY, 1934).
Prosedur untuk melakukan pengukuran
klorofil dengan metode kolorimetri adalah
dengan cara mengisi sejumlah tabung gelas
(berdiameter sama) dengan larutan standar
yang memiliki kadar yang berbeda. Kadar
larutan standar tersebut semakin bertingkat
sehingga terdapat sederet warna yang semakin
pekat dan sekaligus menunjukkan satuan
HPPU-nya. Satu HPPU (Harvey Plant Pigment
Unit) dari larutan standar mempunyai warna
kehijau-hijauan, yang dihasilkan dari campuran
430 g nickel-sulphate-hexa hydrate ditambah
25 g potassium dichromate dalam larutan yang
agak asam. Warna larutan dalam tabung-tabung
tersebut dibandingkan dengan warna dari
ekstrak klorofil dalam aceton 90 % yang juga
berada dalam tabung-tabung serupa (Gambar
1). Warna yang paling cocok dengan salah satu
tabung standar menunjukkan nilai HPPU-nya.

Gambar 1. Pengukuran kandungan klorofil
berdasarkan perbandingan warna
(colorimetri) dengan larutan
standar.
Kesulitan dalam metode ini adalah untuk
membedakan warna secara cermat, karena
perbedaan warna hanya berdasarkan
pengamatan secara visual dengan penglihatan,
sehingga ada faktor subjektif si pengamat
adalah yang menentukan. Untuk mengatasi
kesulitan dalam membandingkan warna,
kemudian digunakan Pulfrich photometer dan
Electrical colorimeter dengan beberapa
modifikasi (KREY, 1958).
2. Metode Spektrofotometri
Metode spektrofotometri dalam
pengukuran klorofil fitoplankton adalah yang
paling populer digunakan (Gambar 2). Dalam
metode ini panjang gelombang yang digunakan
dapat diatur menurut keperluan dan
penyerapannyapun dapat diukur. Larutan yang
diperiksa dimasukkan dalam cuvette atau
absorption cell dan diletakkan dalam lintasan
cahaya di dalam spektrofotometer. Penyerapan
(log I0 log I) pada gelombang tertentu dapat
ditentukan secara elektrik. Prinsip yang
digunakan dalam metode ini didasarkan pada
hukum Lambert dan Beer, yaitu penyerapan
pada gelombang cahaya tertentu merupakan
fungsi dari kadar zat yang terlarut, koefisien
penyerapan dan panjang lintas cahaya (path
length) dalam cuvette. Ketelitian dalam metode
spektrofotometri ini ditentukan oleh beberapa
faktor yakni :
36
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
a. Panjang gelombang () dan half-value
band-width (lebar spektrum pada setengah
dari intensitas penyinaran maksimum).
Makin sempit band-width nya akan semakin
teliti, sedangkan spektrofotometer yang
baik dapat bekerja dengan band-width
sebesar 3 4 nm.
b. Kadar zat terlarut yang diperiksa. Kadar
yang sangat rendah memiliki akurasi yang
rendah, demikian pula sebaliknya.
c. Koefisien penyerapan pada panjang
gelombang yang digunakan.
d. Panjang lintas cahaya dalam cuvette (path-
length). Path-length yang panjang dapat
mengukur dengan lebih teliti.
Gambar 2. Spektrofotometer alat pengukuran
klorofil fitoplankton
Penentuan kadar klorofil pada
fitoplankton laut dengan metode
spektrofotometri didasarkan pada metode yang
digunakan oleh RICHARDS & THOMPSON
(1952). Berbagai modifikasi tentang prosedur
dan rumus penghitungan kemudian
dikembangkan di berbagai negara disesuaikan
dengan kondisi setempat, perkembangan
terakhir misalnya modifikasi yang diajukan oleh
DAVIS (1957), KREY (1958), TALLING &
DRAVER (1961), UNESCO (1966),
STRICKLAND & PARSONS (1968) dan
JEFFREY & HUMPHREY (1975).

Prinsip metode spektrofotometri
Prinsip metode untuk pengukuran
klorofil secara spektrofotometri didasarkan
pada penyerapan maksimum oleh ekstrak
klorofil dalam aceton di daerah spektrum merah
(panjang gelombang 630 665 nm). Penyerapan
maksimum untuk klorofil-a, -b dan -c terjadi
pada tiga panjang gelombang, yaitu 665, 645
dan 630 nm (trichromatic). Beberapa tahapan
yang perlu mendapat perhatian adalah dari saat
proses pengambilan contoh air, penyaringan,
penyimpanan sampel, ekstraksi sampai dengan
pengukuran agar dihindarkan dari cahaya
secara langsung. Cahaya yang intensitasnya
terlalu kuat akan merusak klorofil dalam reaksi
yang disebut photo oxidation (NONTJI, 1973).
Modifikasi dari beberapa metode tersebut
diringkaskan sebagai berikut.
a. Pengambilan Contoh (Sample)
Pengambilan contoh fitoplankton dapat
dilakukan dari lapisan permukaan laut maupun
lapisan di bawahnya dengan berbagai alat,
diantaranya adalah Van Dorn (Gambar 3).
Volume yang diambil umumnya berkisar 510
liter. Pada perairan neritik (dekat pantai), volume
air yang diperlukan relatif lebih sedikit daripada
perairan oseanik karena pada umumnya
perairan neritik relatif keruh sehingga kertas
saring yang digunakan akan cepat tersumbat.
Gambar 3. Van Dorn (water sampler) alat
pengambilan contoh air
37
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
b. Penyaringan
Contoh air yang telah diambil, sebelum
dapat dilakukan penyaringan dapat disimpan
dalam almari es. Cara ini contoh air untuk
penentuan klorofil dapat bertahan selama 1 hari
sampai proses penyaringan dapat dilakukan
(HERVE & HEINONEN 1982), sedangkan
menurut WEBER et al., (dalam CARLSON &
SIMPSON, 1996) contoh air tersebut dapat
bertahan sampai 18 hari tanpa mengalami
perubahan yang signifikan. Namun contoh air
yang disimpan dalam suhu ruang (20 oC) akan
berkurang 50 % dalam waktu 5 hari. Walau
demikian disarankan agar segera disaring
karena perubahan suhu dapat berpengaruh
secara langsung terhadap contoh air, yakni
mengontrol reaksi kimia enzimatik dalam proses
fotosintesis.
Berbagai sistem penyaringan dapat
digunakan, salah satu alat saring yang efisien
adalah seperti tampak pada Gambar 4. Jenis
saringan (filter) yang digunakan bermacam-
macam. Millpore Filter jenis HAWP (ukuran
pori 0,45 m) mempunyai daya saring yang baik,
bahannya terbuat dari cellulose-ester dan
mudah larut dalam aceton. Filter jenis tersebut
memiliki pori-pori yang sangat halus sehingga
proses penyaringan berlangsung lambat. Glass-
fibre adalah filter jenis lain yang mempunyai
daya saring lebih kasar karena tidak mempunyai
ukuran pori tertentu, tetapi penyaringan dapat
berlangsung lebih cepat sehingga volume air
yang disaring cukup besar. Berbagai saringan
jenis lain dapat pula digunakan sesuai dengan
sasaran fitoplankton yang akan disaring.
Untuk memperlancar penyaringan maka
di bagian bawah saringan diberikan tekanan
vacuum dengan menggunakan pompa hisap
yang tekanan hisapnya tidak lebih dari 30 cm
Hg.

Gambar 4. Alat saring
c. Penambahan magnesium carbonate
(MgCO3 )
Magnesium carbonate (MgCO 3 )
ditambahkan pada sampel selama penyaringan
berlangsung, dapat berupa tepung maupun
suspensi. Penambahan ini tidak bersifat
kuantitatif dan dimaksudkan untuk mencegah
terjadinya pengasaman yang dapat
memecahkan klorofil dengan membentuk
phaeophytin. Menurut HUMPHREY &
WOOTTON (1966), penambahan MgCO3 dapat
pula memperlancar penyaringan, oleh karena
itu disarankan agar penambahan MgCO 3
sebaiknya dilakukan pada permulaan
penyaringan.
d. Penyimpanan contoh
Filter hasil penyaringan yang telah
mengandung fitoplankton (sampel) agar
disimpan dalam tempat gelap dan segera
dikeringkan dengan silica-gel dalam desikator
aluminium pada suhu rendah (-20oC). Cara ini
sampel untuk penentuan klorofil dapat bertahan
sampai 30 hari sampai proses ekstraksi dapat
dilakukan (PARSONS et al., 1984). Sejalan
dengan hal tersebut RICHARD (2000)
melaporkan bahwa sampel yang disimpan
dalam freezer (-20oC) dapat diawetkan sampai
kurang lebih 3 minggu tanpa mengalami
perubahan yang nyata, namun lebih baik
langsung mengekstraknya. Pengawetan sampel
pada suhu rendah tersebut dimaksudkan untuk
menjaga agar sampel dalam kondisi segar (fresh)
dan mencegah aktivitas fitoplankton yang
terdapat dalam sampel tersebut sehingga hasil
38
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
pengukuran menggambarkan nilai yang
sebenarnya.
e. Ekstraksi
Contoh (sample) diekstrak dalam pelarut
aceton 90 %. Sampel yang telah diekstrak
sebelum dapat dilakukan pengukuran dapat
disimpan dalam almari es pada suhu (< 4 oC).
selama 20 50 jam (STRICKLAND &
PARSONS, 1968), tetapi RICHARD (2000)
berpendapat bahwa sampel yang telah diekstrak
dapat disimpan antara 2 24 jam. Bila filter yang
digunakan terbuat dari membram selulosa maka
filter tersebut segera larut dalam aceton, sedang
filter yang terbuat dari glass-fibre tidak dapat
larut maka perlu dihancurkan dengan cara
menggerus (ground). Penggerusan dengan
tissue-grinder hanya membutuhkan waktu 5
10 menit dan memberikan hasil yang baik karena
dapat memecah sel-sel hingga mempercepat
proses ekstraksi (KERR & SUBBA-RAO, 1966).
Akibat yang serupa dapat pula dicapai dengan
memberikan perlakukan ultrasonic (misalnya
dengan 10 MHz atau 1000 kc) terhadap sampel
yang diekstrak (SCIENCE COUNCIL OF
JAPAN dalam NONTJI, 1973).
f. Pengukuran penyerapan
Larutan yang telah diekstrak,
dicentrifuge dengan putaran 4000 rpm selama
kurang lebih 30-45 menit, kemudian diukur
penyerapannya dengan menggunakan alat
spektrofotometer pada panjang gelombang
tertentu. RICHARDS & THOMPSON (1952)
menggunakan panjang gelombang 750, 665, 645
dan 630 nm. Panjang gelombang 750 nm adalah
untuk koreksi terhadap kekeruhan (turbiditas)
karena pada panjang gelombang tersebut tidak
ada penyerapan yang disebabkan oleh klorofil.
Panjang gelombang 665, 645 dan 630 nm masing-
masing adalah panjang gelombang dimana
terjadi penyerapan maksimum dari klorofil-a, -b
dan -c dalam aceton 90 %. Gambar 5,
menunjukkan penyerapan maksimum dari
klorofil-a, -b dan -c dalam larutan ether
(BOGORAD, 1962).

Gambar 5. Spektrum maksimum penyerapan klorofil-a, -b dan c dalam larutan ether (BOGORAD,
1962).
g. Penghitungan
Penyerapan pada panjang gelombang
665, 645 dan 630 nm dikurangi dengan
penyerapan pada panjang gelombang 750
untuk koreksi terhadap kekeruhan. Kadar
klorofil yang telah diekstrak dapat dihitung
dengan rumus tertentu, misalnya rumus
RICHARDS & THOMPSON (1952) :
Chl.-a = 15,6 E665 2,0 E645 0,8 E630 g/ml
Chl.-b = 25,4 E645 4,4 E665 10,3 E630 g/ml
Chl.-c = 109 E630 12,5 E665 28,7 E645 SPU/ml
E, adalah penyerapan pada panjang gelombang
yang bersangkutan (misalnya E665 = penyerapan
pada gelombang 665 nm). Berdasarkan rumus
tersebut klorofil-c dinyatakan dalam satuan
SPU (mikro Specified Pigment Unit). Untuk
menghitung kadar klorofil pada sampel air laut
(dalam satuan g/l atau mg/m3) maka nilai di
atas dikalikan dengan faktor (k) :
Va
k = __________
Vs x d
39
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
dimana Va = volume ekstrak, ml
Vs = volume sampel air laut yang
disaring, liter
d = lebar kuvet, path length (cm)
Untuk mempercepat penghitungan
maka DUXBURY & YENTSCH (1956) dan
STRICKLAND & PARSONS (1968) membuat
nomograph untuk masing-masing rumus
RICHARDS & THOMSON dan STRICKLAND
& PARSONS.
h. Berbagai penggunaan rumus
Penentuan klorofil dengan metode
spektrofotometri didasarkan pada penyerapan
maksimum dari tiga panjang gelombang
(trichromatic). Masingmasing merupakan
penyerapan maksimum untuk klorofil-a, -b dan
-c di daerah spektrum merah. Adanya
overlapping penyerapan antara ketiga jenis
klorofil tersebut maka untuk melakukan
penghitungan dari masing-masing klorofil
dibuatlah rumus-rumus dimana faktor
overlapping tersebut dikoreksi. Dalam
perkembangannya kemudian muncul beberapa
versi rumus penghitungan klorofil-a, -b dan c
seperti tercantum dalam Tabel 1, 2 dan 3.

Pada fitoplankton laut, klorofil -a
dijumpai dalam jumlah terbesar (dominan)
dibandingkan dengan klorofil-b dan c,
sehingga beberapa peneliti membuat rumus
untuk klorofil -a yang didasarkan pada
penyerapan pada satu gelombang saja
(monochromatic).
Klorofil-c pada rumus yang diajukan
oleh RICHARDS & THOMPSON (1952) masih
menggunakan satuan arbitrary (SPU) tetapi
rumus-rumus seperti UNESCO (1966) dan
STRICKLAND & PARSONS (1968) telah
menggunakan satuan absolut, misalnya mg/m3.
i. Perbedaan klorofil dari hasil
dekomposisinya
Salah satu kelemahan dalam pengukuran
klorofil dengan metode spektrofotometri adalah
Tabel 1. Berbagai rumus untuk menghitung klorofil-a dengan pelarut aceton 90%.
Rumus
Klor-a = 15,6E665 2E645 0,8E630
Klor -a = 14,9E665
Klor -a = 14,3E665
Klor -a = 15,6E665 1,8E645 1,3E630
Klor -a = 11,9E665
Klor -a = 13,4E663 0,3E630
Klor -a = 11,64E66532,16E645 0,1E630
Klor -a = 11,6E665 1,31E645 0,14E630
Tabel 2. Berbagai rumus untuk menghitung klorofil-b dengan pelarut aceton 90%.
Rumus
Klor -b = 25,4E645 4,4E665 10,3E630
Klor -b = 20,97E645 3,94E663 3,66E630
Klor -b = 20,7E645 4,34E665 4,42E630
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
karena klorofil dan hasil dekomposisinya masih
sulit dibedakan, keduanya menyerap cahaya
pada spektrum merah. Apabila hasil-hasil
dekomposisi klorofil yang oleh YENTSCH &
MENZEL (1963) disebut sebagai phaeophytin
group, merupakan komponen yang besar maka
dengan sendirinya hasil pengukuran klorofil
akan lebih tinggi dari yang sebenarnya.
Klorofil -a mudah berubah menjadi
phaeophytin dengan menambahkan asam
lemah, misalnya dengan HCl 1 N, akibatnya
sampel klorofil tersebut penyerapannya akan
berkurang, sedangkan phaeophytin tidak
mengalami pengurangan penyerapan.
Berkurangnya penyerapan ini disebabkan
lepasnya ikatan klorofil dengan atom Mg,
sedangkan atom Mg bereaksi dengan HCl
menjadi MgCl2.
Sumber
RICHARDS & TOMPSON (1952)
DAVIS (1957)
ODUM et al. (1958)
HUMPHREY (1961)
TALLING & DRAVER (1961)
KERR & SUBBA-RAO (1966)
UNESCO (1966)
STRICKLAND & PARSONS (1968)
Sumber
RICHARDS & TOMPSON (1952)
UNESCO (1966)
STRICKLAND & PARSONS (1968)
40

Tabel 3. Berbagai rumus untuk menghitung klorofil-c dengan pelarut aceton 90%.
Rumus
Klor -c = 109E630 12,5E665 28,7E645
Klor -c = 55E630 4,64E665 16,3E645
Klor -c = 55,22E630 14,81E645 28,7E663
Sifat klorofil-a yang mudah berubah
menjadi phaeophytin dan penyerapannya
mengalami pengurangan dengan penambahan
asam tersebut adalah prinsip yang digunakan
untuk menentukan klorofil dalam sampel
fitoplankton yang mengandung phaeophytin.
LORENZEN (1967) mengajukan rumus seperti
berikut :
26,7 (665b 665a) x Ve
Klorofil-a (mg/m3) = _________________________________
Vs x d
dimana;
665b = penyerapan pada panjang gelombang
665 nm sebelum penambahan asam
665a = penyerapan pada panjang gelombang
665 nm setelah penambahan asam
Ve = volume aceton yang digunakan dalam
ekstraksi, ml
Vs = volume air yang disaring, liter
d = lebar kuvet, path-length (cm).
3. Metode Fluorometri
Sifat fluorescence pada klorofil dapat
dijadikan dasar bagi pengukuran klorofil
fitoplankton. YENTSCH & MENZEL (1963)
telah mengajukan metode pengukuran klorofil-
a dengan menggunakan fluorometer Turner
(Gambar 6) yang kemudian diteliti pula oleh
HOLM-HANSEN et al., (1965). Metode ini
mempunyai beberapa kelebihan, dengan
kepekaan yang sama sampel yang diperlukan
jauh lebih sedikit, lagi pula prosedurnya dapat
dikerjakan lebih cepat. Berdasarkan metode ini
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
Sumber
RICHARDS & TOMPSON (1952)
UNESCO (1966)
STRICKLAND & PARSONS (1968)
dapat pula dibedakan klorofil dengan
phaeophytin.
Gambar 6. Fluorometer alat pengukuran klorofil
fitoplankton
Prosedur pengambilan sampel,
penyaringan, ekstraksi dan centrifuge adalah
sama seperti pada metode spektrofotometri.
Perbedaanya hanya pada volume sampel yang
diperlukan jauh lebih sedikit dan dengan
perlakuan yang singkat. Prinsip kerja dari
fluorometer adalah penyinaran untuk cahaya
excitation dengan filter cahaya biru-ungu
(Corning CS. 5-60) kemudian diteruskan oleh
sampel (emisision) melalui filter cahaya merah
(Corning CS. 2-64). Apabila phaeophytin tidak
terdapat dalam sampel maka klorofil-a dapat
ditentukan dengan rumus HOLM-HANSEN et
al., (1965) :
Klorofil-a (mg/m3) = Fd x R
R, adalah bacaan fluorometer dan Fd adalah
faktor yang bergantung pada perbesaran
lintasan cahaya.
41

Apabila pada sampel fitoplankton
terdapat phaeophytin maka klorofil-a dapat
dibedakan dari phaeophytin dengan cara
menambahkan larutan asam HCl 1 N dengan
menggunakan pipet tetes sebanyak 1-2 tetes,
kemudian diperiksa dengan fluorometer
sebelum dan sesudah penambahan asam
tersebut. HOLM-HANSEN et al., (1965)
menggunakan rumus sebagai berikut:
Klorofil-a (mg/m3) = Fd (Rb - Ra)
-1
dimana;
F d = faktor yang bergantung pada
perbesaran lintasan cahaya
Rb = bacaan fluorometer sebelum
penambahan asam
Ra = bacaan fluorometer setelah penambahan
asam
= ratio Rb/Ra dari larutan standar (klorofil-
a murni)
Penambahan asam yang terlalu banyak
menyebabkan degradasi phaeophytin menjadi
phaeophorbide (HALLEGRAEFF, 1976)
sehingga kadar klorofil menjadi lebih rendah
dari yang seharusnya. Klorofil -a mudah
berubah menjadi phaeophytin dengan
menambahkan asam lemah atau encer (HCl 1
N) karena lepasnya ikatan dengan atom Mg,
sehingga klorofil tersebut akan berkurang
penyerapannya, sedangkan phaeophytin tidak
mengalami pengurangan penyerapan. Namun
bilamana phaeophytin berubah menjadi
phaeophorbide karena penambahan asam
yang terlalu banyak maka penyerapannya akan
berkurang. Berkurangnya penyerapan akibat
terbentuknya phaeophorbide ini bersamaan
waktunya dengan berkurangnya penyerapan
pada klorofil saat pengasaman sehingga
sangat sulit dibedakan besarnya
pengurangan penyerapan antara klorofil
maupun phaeophorbide.
42
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
4. Metode Kertas Kromatografi
Penentuan pigmen-pigmen fitoplankton
dapat ditentukan secara lebih teliti dengan
metode kertas kromatografi, tetapi metode ini
tidak banyak digunakan dalam pengukuran-
pengukuran rutin di laut. Salah satu kesulitan
pokok kerja di lapangan (di atas kapal) adalah
kestabilan tidak dapat dipertahankan, karena
metode ini diperlukan solven-front horizontal
yang seragam. JEFFREY & ALLEN (1967)
membuat suatu modifikasi untuk diterapkan
dalam pekerjaan di laut, namun tidak
dimaksudkan sebagai metode yang dapat
digunakan secara luas dalam survei-survei
rutin oseanografi. Metode ini dimaksudkan
untuk mempelajari pigmen-pigmen fitoplankton
dalam keadaan khusus saja, misalnya penelitian
fisiologis blooming fitoplankton yang
dilakukan in situ dan sebagainya.
DAFTAR PUSTAKA
BOGORAD, D.L. 1962. Chlorophyll. In:
Physiology and Biochemistry of Algae.
(R. LEWIN ed.). Academic Press, New
York: 3-23.
CARLSON, R.E. and J. SIMPSON 1996.
Chlorophyll Analysis. North American
Lake Management Society: 96 pp.
DAVIS, F.S. 1957. A method for
determination of chlorophyll in
seawater. CSIRO Austr. Div. Fish.
and Oceanogr. Rep. 7 :1-8.
DEPKES 1987. Kualitas air sungai yang
digunakan sebagai sumber air minum
di DKI. Depkes, Jakarta: 31 hal.
DUXBURY, A.C. and C.S. YENTSCH 1956.
Plankton pigment monographs. J. Mar.
Res. 15 : 92-101.
HALLEGRAEFF, G.M. 1976. Pigment diversity
in freshwater phytoplankton I. A

comparison of spectrophotometric and
paper chromatographic methods. Int.
Revue ges. Hydrobiol. 61 : 149-168.
HERVE, S. and P. HEINONEN 1982. Some
factors effectin the determination of
chlorophyll-a in algal samples. Ann.
Bot. Pennici 19 : 211-217.
HARVEY, H.W. 1934. Measurement of
phytoplankton population. Ass. UK.
Journ. Mar. Biol. 19 : 761763.
HOLM-HANSEN, O.; C.J. LORENZEN; R.W.
HOLMES and J.D.H. STRICKLAND
1965. Fluorometric determination of
chlorophyll. Journ. du Conseil 30 : 3
15.
HUMPHREY, G.F. 1961. Phytoplankton
pigments in the Pacific Ocean. Proc.
Conf. Primary Productivity Measure-
ment, Marine and Freshwater. US.
Atomic Energy Commission, Div. Tech.
Inform. 7633 : 121141.
HUMPHREY, G.F. and M. WOTTON 1966.
Comparison of techniques used in the
determination of photosinthetic
pigment in seawater. Unesco
monographs on Oceanographic
Metodology 1 : 3783.
JEFFREY, S.W. and M.B. ALLEN 1967. A paper
chromatographic method for the
separation of phytoplankton pigment at
the sea. Limnol. and Oceanogr. 12 : 533
537.
JEFFREY, S.W. and G.F. HUMPHREY 1975. New
spectrophotometric equations for
determining chlorophylls a, b, c1 and c2
in higher plants, algae and natural
phytoplankton. Biochem. Physiol.
Pflance. 167 : 191194.
KERR, J.D. and D.V. SUBBA-RAO 1966.
Extraction of chlorophyll-a from Nitschia
closterium by grinding. Determination
43
Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006
sumber:www.oseanografi.lipi.go.id
of photosinthetic pigments in seawater.
Unesco Monographs on Oceano-
graphic Methodology 1: 66-69.
KREY, J. 1958. Chemical method of estimating
standing crop of phytoplankton. Rapp.
et Proc. Verb. 144 : 2027.
LOFTUS, M.E. and J.H. CARPENTER 1971. A
fluorometric method for determining
chlorophylls a, b, and c. J. Mar. Res. 29:
319-338.
LORENZEN, C.J. 1967. Determination of
chlorophyll and phaeopigments.
Spectrophotometric equations. Limnol.
and Oceanogr. 12 : 343346.
NONTJI, A. 1973. Kandungan klorofil pada
fitoplankton laut. Skripsi Fakultas
Biologi Universitas Nasional, Jakarta :
50 hal.
ODUM, H.T.; W. Mc CONNELL and W. ABBOT
1958. The chlorophyll-a of communities.
Pub. Inst. Univ. Texas. Mar. Sci. 5 : 65
96.
PARSONS, T.R.; Y. MAITA and C.M. LAILLI
1984. A Manual of Chemical and
Biological Methods for Seawater
Analysis. Pergamon Press : 101-109.
RICHARD, F.L. 2000. Phytoplankton
chlorophyll. Fluorometric Analysis
Base on USEPA Method 445.0.
Greenwood University, SC.: 1-2.
RICHARDS, F.A. and T.G. THOMPSON 1952.
The estimation and characterization of
plankton populations by pigment
analysis II. A spectrophotometric
method for estimation of plankton
pigments. Journ. Mar. Res. 11 : 156-172.
RIYONO, S.H. 1989. Kesuburan perairan di
Pantai Kartini, Jepara dan sekitarnya
ditinjau dari kandungan klorofil
fitoplankton. Dalam: Penelitian
Oseanologi Perairan Indonesia Buku I.
 sumber:www.oseanografi.lipi.go.id

Biologi, Geologi, Lingkungan dan Conf. Primary Productivity Measure-

Oseanografi. (D.P. PRASENO, W. ment, Marine and Freshwater. US.
ATMADJA, O.H. ARINARDI, Atomic Energy Commission, Div. Tech.
RUYITNO dan I. SUPANGAT eds.). Inform. 7633 : 142146.
Pusat Penelitian dan Pengembangan
UNESCO 1966. Determination of photo-
OseanologiLIPI, Jakarta : 81 88.
syntethic pigments in seawater. Unesco
STRICKLAND, J.D.H. dan T.R. PARSONS 1968. Monographs on Oceanographic
A practical handbook of seawater Methodology 1 : 69 pp.
analysis. Board Canada. Bull. Fish. Res.
YENTSCH, C.S. and D.W. MENZEL 1963. A
167 : 311 pp.
method for determinations of
TALLING, D.F. and D. DRAVER 1961. Some phytoplankton chlorophyll and
problems in the estimation of phaeophytin by fluorescence. Deep.
chlorophyll-a in phytoplankton. Proc. Sea. Res. 10 : 221231.

44

Oseana, Volume XXXI No. 3, 2006