Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan Vol. 7 No.

1 (2007) p: 23-30

PENAMBATAN NITROGEN DAN PENGHASILAN INDOL ASAM

ASETAT OLEH ISOLAT-ISOLAT AZOTOBACTER PADA PH RENDAH
DAN ALUMINIUM TINGGI

Fajar Isminarni*, Sri Wedhastri*, Jaka Widada*, Benito Heru Purwanto**

*Laboratorium Mikrobiologi Tanah dan Lingkungan, Fakultas Pertanian UGM

** Jurusan Tanah, Fakultas Pertanian UGM

Intisari

Pengelolaan tanah masam untuk kepentingan pertanian mengalami kendala ganda

(multiple constrains), yaitu kemasaman tinggi dan kekahatan unsur hara penting bagi tanaman
seperti N, P, Na, dan atau Mg. pH tanah yang masam berpengaruh nyata terhadap kelarutan dari
nutrisi tanaman dan mikroorganisme. Pada pH rendah aluminium (Al) menjadi sangat larut dan
toksisitas Al merupakan hambatan utama pertumbuhan pada tanah mineral masam.
Penelitian ini bertujuan untuk menyeleksi isolat Azotobacter yang tahan terhadap pH
rendah dan kadar aluminium tinggi, dan kemudian menguji kemampuan isolat Azotobacter terpilih
dalam penambatan nitrogen serta penghasilan zat pengatur tumbuh.
Dalam penelitian ini digunakan 20 isolat Azotobacter yang diisolasi dari tanah masam Jawa
Barat. Dalam pengujian ketahanan Azotobacter terhadap pH rendah dan aluminium tinggi
digunakan medium Burk’s dengan pH 4 dan 5 serta konsentrasi AlCl3 dari 0 ppb sampai 500 ppb
dengan interval 50. Kemampuan penambatan nitrogen dilakukan dengan metode Acetylene
Reduction Analysis (ARA), sedangkan kemampuan dalam menghasikan indol asam asetat (IAA)
ditentukan dengan metode spektrofotometri. Untuk mengetahui karakteritik Azotobacter
ditentukan dengan pengujian biokimia.
Dari penelitian diperoleh 3 isolat Azotobacter yang memiliki ketahanan terhadap pH
medium 4 dan 5 dengan konsentrasi AlCl3 tertinggi 500 ppb yaitu isolat Azotobacter sp. 26a, 28a,
dan 1a. Isolat Azotobacter sp. 26a memiliki kemampuan menambat nitrogen pada medium pH 5
dengan konsentrasi AlCl3 tertinggi 500 ppb sebesar 75,758 mg/g berat kering sel. Isolat
Azotobacter sp. 26a juga memiliki kemampuan untuk menghasilkan IAA pada medium larutan hara
pH 5 dengan konsentrasi AlCl3 tertinggi 250 ppb sebesar 168,046 ppm/g berat kering sel. Hasil
pengujian morfologi dan biokimia menunjukkan bahwa isolat 26a memiliki kemiripan yang tinggi
dengan Azotobacter chroococum.

Kata kunci : Penambatan nitrogen, Indol Asam Asetat, Azotobacter, pH, Aluminium

Abstract

Agricultural Podzolic acid soil management has multiple constrains, there are high acidity
and plant nutrition deficiency of N, P, Na, and Mg. Soil acidity has negative impacts to the plant
nutrition solubility and the microorganisms. Aluminium (Al) has been very soluble in soil at low pH
and its toxicity has become the major constrain for plant growth in the mineral acid soil.
The aim of this research were to select isolates of Azotobacter resistant at low pH and high
concentration of aluminium, examine the ability of the isolates to fix nitrogen and produce hormone
for supporting plant growth.
Twenty isolates of Azotobacter, isolated from west Java Podzolic acid soil were used to this
research. This ability to stand low pH and high concentration of aluminium was tested using Burk’s
medium at pH 4 and 5 with 0-500 ppb of AlCl3 (interval 50). The nitrogen fixing activity was
measured by using Acetilen Reduction Analysis (ARA), meanwhile the presence of Indole Acetic
Acid detected by spectrophotometry method. Biochemical assay were also used to identify the
isolates.
The result showed that 3 isolates of Azotobacter were resistant at medium in pH 4 and 5
with 500 ppb of AlCl3, they were 26a, 28a, and 1a. The ability of 26a to fixed nitrogen in Burk’s pH 5
with 500 ppb AlCl3 was 75,756 mg/g of dry weight cell. The IAA produced by 26a in the same
medium was 168,046 ppm/g of dry weight cell. The result of biochemical assay showed that 26a
had high similarity with Azotobacter chroococcum.

Key Words : Nitrogen Fixation, Indole Acetic Acid, Azotobacter, pH, Aluminium
24
PENDAHULUAN
Tanah masam mempunyai karakteritik
pH yang rendah yaitu pada tanah masam kuat
(5,5-4,5) sampai pada tanah yang ekstrim
masam (< 4,5), kemampuan tukar kation rendah
dan kejenuhan basa rendah (Shen et al., 2006).
Reaksi tanah yang masam itu disebabkan oleh
curah hujan yang tinggi yang mengakibatkan
basa-basa mudah tercuci (Anonim, 1991).
Penggelolaan tanah masam untuk
kepentingan pertanian mengalami kendala ganda
(multiple constrains), yaitu kemasaman tinggi
dan kekahatan unsur hara penting bagi tanaman
seperti N, P, Na, dan atau Mg (Radjagukguk,
1983). pH tanah yang masam berpengaruh
nyata terhadap kelarutan dari nutrisi tanaman
dan mikroorganisme (Sparks, 1995). pH rendah
menyebabkan terlepasnya Al3+ kedalam larutan
tanah (Ma et al., 2006).
Peningkatan produktivitas tanah masam
terutama dilakukan melalui pengapuran,
pemilihan varietas yang dapat beradaptasi, dan
pemupukan (Razie dan Syaifuddin, 2005).
Penelitian menunjukkan bahwa pengapuran
selain biayanya tinggi juga menimbulkan dampak
negatif bagi tanah dan tanaman (Radjagukguk,
1983). Varietas tanaman yang diadaptasikan
pada tanah masam membutuhkan pupuk N
dalam jumlah yang besar, namun pemberian
pupuk buatan yang biasa dilakukan petani
cenderung tidak efisien karena sebagian besar
nitrogen akan hilang melalui proses pencucian.
Penggunaan pupuk dengan dosis tinggi
menyebabkan biaya produksi menjadi tinggi.
Sehingga tindakan yang bijak dibutuhkan agar
dapat mengefisienkan dan meminimalkan
penggunaan pupuk buatan.
Usaha penghematan dan pengurangan
pupuk buatan diperlukan adanya suatu penelitian
tentang pemanfaatan sumber hayati yang
berpotensi sebagai pupuk hayati untuk
mengganti pupuk buatan. Penambatan N2
atmosfer oleh mikroorganisme dapat membantu
ketersediaan unsur N bagi tanaman dan dapat
mengefisienkan penggunaan N yang berasal dari
pupuk buatan. Pemanfaatan mikroorganisme
penambat N2 ini akan mengurangi biaya produksi
(Razie dan Syaifuddin, 2005).
Azotobacter adalah spesies rizobakteri
yang telah dikenal sebagai agen biologis
pemfiksasi dinitrogen, diazotrof, yang mengubah
dinitrogen menjadi amonium melalui reduksi
elektron dan protonasi gas dinitrogen (Hindersah
dan Simarmata, 2004). Molekul nitrogen udara
diubah menjadi nitrogen sel secara bebas.
Nitrogen yang terikat pada struktur tubuhnya
dilepas dalam bentuk organik sebagai sekresi
Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan Vol. 7 No.1 (2007)
atau setelah mikroorganisme itu mati
(Andayaningsih, 2000). Apabila keunggulan
bakteri ini dapat dimanfaatkan dengan efisien,
maka harapannya dapat digunakan untuk
mengurangi penggunaan pupuk N tanpa
mengganggu target produksi tinggi.
Azotobacter sangat sensitif pada
alkalinitas, asiditas (Mishustin dan Shilnikova,
1971), dan optimum pada pH 7-8 (Sutedjo et al.,
1991). Ion Aluminium bersifat toksik untuk
Azotobacter. Hal ini merupakan hambatan utama
bagi keberadaan Azotobacter yang berasal dari
tanah podsolik (Mishustin dan Shilnikova, 1971).
Azotobacter yang diisolasi dari tanah
masam Jawa Barat mempunyai kemampuan
dalam penambatan nitrogen yang unggul (>400
mg/g b.k sel). Selain itu isolat Azotobacter juga
mampu menghasilkan zat pengatur tumbuh,
seperti Indol Asam Asetat (IAA) (Wedhastri,
1999). Sifat inilah yang menjelaskan pengaruh
menguntungkan Azotobacter sehubungan
dengan peran IAA dalam meningkatkan
perkembangan dan pembelahan sel tanaman.
IAA merangsang perkembangan akar dan
memperbanyak bulu-bulu akar tanaman padi
(Razie dan Anas, 2005), dengan demikian
pengambilan unsur hara melalui akar meningkat
dan efektifitas pemupukan dapat dilakukan.
Berdasarkan hal-hal tersebut diatas,
penelitian ini bertujuan menyeleksi 20 isolat
Azotobacter sp. dari tanah masam Jawa Barat
yang tahan terhadap pH rendah dan konsentrasi
aluminium tinggi. Dari hasil seleksi ini diharapkan
akan mendapatkan Azotobacter efektif yang
dapat dikembangkan sebagai pupuk hayati.
Fiksasi N dari udara dapat ditingkatkan
khususnya untuk memenuhi kebutuhan unsur N
tanaman pada tanah-tanah mineral masam
sehingga dapat meningkatkan hasil panen
tanaman yang dibudidayakan.
BAHAN DAN METODE
Dua puluh isolat Azotobacter koleksi
Laboratorium Mikrobiologi tanah dan lingkungan
diperbanyak pada medium agar miring Ashby.
Isolat disimpan pada suhu kamar sebagai stok
kultur.
Seleksi Azotobacter dilakukan dengan
menumbuhkan dua puluh isolat Azotobacter
pada medium Burk’s cair yang diperkaya dengan
AlCl3 dengan konsentrasi 0 ppb, 25 ppb, 75 ppb,
dan 100 ppb. Medium diatur pada pH 4 dan 5
menggunakan buffer asetat. Kerapatan sel awal
sebesar 106 sel/ml pada saat isolat mencapai
fase logaritmik. Laju pertumbuhan setiap isolat
diamati tiap 24 jam berdasarkan kekeruhannya
dengan menggunakan spektrofotometer.
Isminarni. Penambatan Nitrogen 25

Lima isolat yang mempunyai OD (optical Isolat terpilih diidentifikasi berdasarkan

density) tinggi diuji kembali pada medium Burk’s
cair yang diperkaya dengan AlCl3 150 ppb-500
ppb (interval 50) dan pengaturan pH medium 4
dan 5.
Analisis kemampuan penambatan
nitrogen oleh isolat-isolat Azotobacter dilakukan
dengan metode Acetilen Reduction Analysis
(ARA) (Turner and Gibson, 1980; Barbosa et al.,
2002). Gas etilen yang terbentuk diukur dengan
Gas Chromatography. Standar dibuat dengan
etilen murni 1, 2, 3, 4, 5 ppm. Analisis
pembentukan indol asam asetat secara kualitatif
dilakukan dengan metode Ehrlich (Joetono, et
al., 1973). Kemudian isolat-isolat Azotobacter
yang positif terhadap uji Ehrlich dilakukan uji
pembentukan indol asam asetat secara
kuantitatif dengan metode Spectrofotometry
(Torres-Rubio, 2000). Kandungan IAA sampel
dianalisa dengan menggunakan
spektrofotometer pada panjang gelombang 530
nm dengan pewarna Salkowiski reagen. Standar
IAA dibuat dengan kristal IAA dengan
konsentrasi 5, 10, 20, 30, 40, 50, dan 100 ppm
sifat morfologi dan biokimia dengan acuan
Bergey’s Mannual of Determinative Bacteriology.
Uji tersebut meliputi uji morfologi koloni yaitu
bentuk koloni, tepi dan elevasi, uji morfologi sel
meliputi sifat Gram dan bentuk sel dan uji
biokimia yaitu uji kemampuan mereduksi nitrat
dan uji katalase. Uji biokimia lebih lanjut
dilakukan dengan acuan pada Azotobacteraceae:
The Taxonomy and Ecology of Aerobic Nitrogen
Fixing Bacteria. Pengujian ini berdasarkan
kemampuan tumbuhnya pada medium benzoat
dan medium pati.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Seleksi Pada Medium Cair
Seleksi pertama menunjukkan bahwa
isolat 26a, 28a,1a, 25a, dan 20 merupakan 5
isolat yang memiliki laju pertumbuhan lebih
tinggi dibandingkan dengan laju pertumbuhan
isolat yang lain. Tabel 1 nilai OD dari ke-5 isolat
Azotobacter yang memiliki pertumbuhan terbaik.

Tabel 1. Nilai OD setelah 3 hari 5 isolat Azotobacter yang memiliki pertumbuhan terbaik
Isolat 26a Isolat 1a Isolat 20 Isolat 28a Isolat 25a
pH 4 dan AlCl3 0 ppb 0.0585 0.0230 0.0200 0.0460 0.0275
pH 4 dan AlCl3 25 ppb 0.0510 0.0275 0.0200 0.0460 0.0265
pH 4 dan AlCl3 50 ppb 0.0430 0.0220 0.0220 0.0470 0.0255
pH 4 dan AlCl3 75 ppb 0.0480 0.0200 0.0240 0.0440 0.0270
pH 4 dan AlCl3 100 ppb 0.0425 0.0110 0.0220 0.0435 0.0235
pH 5 dan AlCl3 0 ppb 0.0625 0.0260 0.0295 0.1440 0.0390
pH 5 dan AlCl3 25 ppb 0.0530 0.0250 0.0275 0.1485 0.0300
pH 5 dan AlCl3 50 ppb 0.0480 0.0235 0.0280 0.1485 0.0290
pH 5 dan AlCl3 75 ppb 0.0485 0.0200 0.0255 0.1480 0.0375
pH 5 dan AlCl3 100 ppb 0.0470 0.0210 0.0285 0.1500 0.0325
Kontrol (pH 7, AlCl3 0 ppb) 1.5650 0.0615 0.0840 0.1366 0.0780

Tabel 2. Nilai OD setelah 3 hari 3 isolat Azotobacter yang memiliki pertumbuhan terbaik
Isolat 26a Isolat 28a Isolat 1a
pH 4 dan AlCl3 150 ppb 0.0280 0.0247 0.0223
pH 4 dan AlCl3 200 ppb 0.0263 0.0283 0.0293
pH 4 dan AlCl3 250 ppb 0.0287 0.0273 0.0273
pH 4 dan AlCl3 300 ppb 0.0233 0.0277 0.0333
pH 4 dan AlCl3 350 ppb 0.0313 0.0190 0.0263
pH 4 dan AlCl3 400 ppb 0.0270 0.0193 0.0270
pH 4 dan AlCl3 450 ppb 0.0283 0.0203 0.0217
pH 4 dan AlCl3 500 ppb 0.0290 0.0203 0.0247
pH 5 dan AlCl3 150 ppb 0.0313 0.0300 0.0250
pH 5 dan AlCl3 200 ppb 0.0290 0.0320 0.0243
pH 5 dan AlCl3 250 ppb 0.0240 0.0297 0.0227
pH 5 dan AlCl3 300 ppb 0.0270 0.0350 0.0217
pH 5 dan AlCl3 350 ppb 0.0280 0.0157 0.0183
pH 5 dan AlCl3 400 ppb 0.0233 0.0180 0.0180
pH 5 dan AlCl3 450 ppb 0.0287 0.0207 0.0167
pH 5 dan AlCl3 500 ppb 0.0203 0.0167 0.0147
26
Dari 5 isolat tersebut didapatkan bahwa
isolat 26a, 28a, dan 1a merupakan isolat yang
lebih tanah pada pH 4 dan 5 dengan konsentrasi
AlCl3 mulai dari 150 ppb sampai 500 ppb. Nilai
OD setelah 3 hari pengamatan dari 3 isolat
terpilih ditampilkan pada Tabel 2.
Kemampuan suatu isolat Azotobacter
untuk bertahan dan beradaptasi dengan
lingkungan yang asam diduga dipengaruhi oleh
adanya ekstra polisakarida (EPS) yang dihasilkan
oleh bakteri tersebut. EPS berperan penting pada
ketahanan sel yang hidup pada pH rendah.
Selain itu EPS juga berpengaruh pada ketahanan
terhadap toksisitas aluminium. Komponen EPS
mengandung gugus karboksil yang bebas,
sehingga mampu melakukan pengikatan atau
khelasi terhadap kation termasuk Al3+ yang
biasanya terdapat dalam kondisi masam
(Cunningham dan Munns, 1984).
Penambatan Nitrogen dengan Metode
Acetilen Reduction Analysis (ARA)
Tiga isolat Azotobacter terpilih dari
seleksi ketahanan isolat terhadap pH 4 dan 5
dengan kadar aluminium 0 ppb-500 ppb diuji
kemampuan penambatan nitogennya secara
kuantitatif dengan menggunakan metode ARA.
Pada perlakuan kontrol (medium Biphasik
0.07
0.06
0.05
OD(550nm)
0.04
0.03
0.02
0.01
0
0 50 100 150 200
AlCl3 (ppb)
Gambar 1. Kurva pertumbuhan isolat 26a berumur 3 hari pada medium Burk’s dengan pH 5 dan
konsentrasi AlCl3 0 ppb-500 ppb.
Pola pertumbuhan yang ditunjukkan
pada gambar 1 ternyata mempunyai pola yang
sama dengan aktivitas nitrogenase oleh isolat
26a (Gambar 2) pada berbagai konsentrasi AlCl3
yang diberikan pada medium. Pola pertumbuhan
maupun aktifitas nitrosenase dapat diamati pada
garis bantu pada masing-masing gambar. Hal ini
dapat diduga bahwa Al tidak menghambat
aktivitas nitrogenase tetapi menghambat
pertumbuhan sel sehingga berpengaruh pada
Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan Vol. 7 No.1 (2007)
Modifikasi Manitol cair dengan pH 7 dan
konsentrasi AlCl3 0 ppb) didapatkan bahwa isolat
26a mampu menambat nitrogen sebesar 227,653
mg/g berat kering sel, sedang isolat 28a dan 1a
tidak terdeteksi kemampuan penambatan
nitrogennya. Pada pH 4 kemampuan
penambatan nitrogen oleh isolat 26a tidak
terdeteksi, tetapi pada medium pH 5 dengan
konsentrasi AlCl3 0 ppb kemampuan
penambatan nitrogen diperoleh sebesar 193,240
N2 (mg/g berat kering sel).
Penambatan nitrogen oleh Azotobacter
sangat berkaitan dengan suatu sistem enzim
yang dinamakan azotase. Aktivitas enzim salah
satunya dipengaruhi oleh pH (Sutedjo, 1991).
Enzim dapat bekerja optimum pada pH netral.
Pada pH masam aktivitas enzim sangat menurun
bahkan tidak dapat bekerja. Pada kondisi
medium pH 5 nitrogenase dari isolat 26a masih
dapat beraktivitas mereduksi asetilen, yang
ditambahkan pada kultur Azotobacter, menjadi
etilen. Sedang pada medium pH 4 nitrogenase
sudah tidak mampu mereduksi asetilen menjadi
etilen. pH menjadi faktor pembatas pada
perkembangan Azotobacter (Sutedjo et al.,
1991). Pada pH yang rendah Azotobacter masih
dapat juga tumbuh tetapi tidak aktif.
250 300 350 400 450 500 550
jumlah N2 yang dapat diubah oleh sejumlah sel
Azotobacter. Secara umum semakin tinggi kadar
Al menyebabkan pertumbuhan sel semakin
menurun, sehingga menyebabkan penurunan
jumlah N2 yang dapat diubah oleh sel
Azotobacter.
Isminarni. Penambatan Nitrogen
Penghasilan Indol Asam Asetat (IAA)
(A) Pengujian IAA secara kualitatif
Dari hasil uji pembentukan indol 3 isolat
terpilih, diperoleh bahwa isolat 26a merupakan
isolat yang lebih unggul jika dibanding dengan 2
isolat yang lain. Hal ini terlihat dari ketebalan
cincin warna merah yang dibentuk oleh ketiga
isolat tersebut. Isolat 1a dan 28a menghasilkan
250
N (mg/g berat kering sel)
200
150
100
50
0
0 50 100
Gambar 2. Konsentrasi nitrogen yang dihasilkan oleh isolat Azotobacter sp. 26a pada medium Bifasik
Modifikasi Manitol Cair dengan pH 5 dan konsentrasi AlCl3 dari 0 ppb-500 ppb
(B) Pengujian IAA secara Kuantitatif
Isolat 1a dan isolat 28a yang mempunyai
kemampuan pembentukan indol kecil secara
kualitatif ternyata tidak terdeteksi
kemampuannya dalam menghasilkan IAA pada
kontrol (medium Burk’s pH 7 dan AlCl3 0 ppb).
Sedang isolat 26a yang memiliki kemampuan
menghasilkan indol secara kualitatif relatif lebih
besar ternyata mampu menghasilkan IAA secara
kualitatif pada medium Burks pH 7 dan
konsentrasi AlCl3 0 ppb sebesar 872.050 ppm/g
berat kering sel.
Berdasarkan analisis kuantitatif ternyata
pH merupakan faktor yang berpengaruh pada
produksi IAA oleh isolat 26a. Pada pH 4 produksi
IAA oleh isolat 26a tidak terdeteksi sedang pada
pH 5 dengan konsentrasi AlCl3 0 ppb isolat 26a
masih mampu memproduksi IAA sebesar
762,164 ppm/g berat kering sel. Semua proses
fisiologis pada makhluk hidup terkait dengan
sistem enzim, diduga pada kasus ini pH dapat
menurunkan aktivitas enzim yang berperan
dalam produksi IAA. Semakin rendah pH aktivitas
enzim pemproduksi IAA semakin menurun.
Gambar 3 menunjukkan produksi IAA
dipengaruhi oleh konsentrasi Al yang terlarut
dalam medium. Terdapat perbedaan antara pola
pertumbuhan bakteri pada Gambar 1 dengan
pola penerunan produksi IAA yang disebabkan
27
indol lebih kecil, ditunjukkan dengan
terbentuknya cincin berwarna merah tipis di
permukaan medium. Secara berurutan
kemampuan penghasilan senyawa indol dari
yang paling tinggi ke yang paling rendah yaitu
26a, 1a, dan paling rendah isolat 28a karena
hanya membentuk cincin yang tipis.
150 200 250 300 350 400 450 500 550
AlCl3 (ppb)
oleh konsentrasi Al yang berbeda pada Gambar
3. Dari hasil ini diduga bahwa Al selain
menghambat pertumbuhan sel juga
menghambat produksi IAA. Isolat 26a hanya
mampu memproduksi IAA sampai konsentrasi
AlCl3 250 ppb saja. Selain itu dapat dilihat bahwa
semakin tinggi konsentrasi AlCl3 maka semakin
kecil produksi IAA yang dihasilkan.
Karakterisasi Isolat Azotobacter
Berdasarkan uji morfologi didapatkan
bahwa isolat 26a mempunyai sifat gram negatif,
bentuk sel oval, bentuk koloni sirkular, elevasi
konveks, mempunyai pigmen cokelat. Hasil uji
biokimia menunjukkan bahwa isolat 26a mampu
mereduksi nitat dan menunjukkan sifat katalase
positif. Isolat 26a tidak mampu tumbuh pada
medium benzoat. Pengujian pada medium pati
menunjukkan bahwa isolat 26a mampu tumbuh
pada medium. Pati digunakan oleh isolat 26a
sebagai sumbur karbon sehingga isolat 26a
mampu tumbuh dengan baik. Dari hasil uji
morfologi koloni dan biokimia menurut Bergey’s
Mannual of Determinative Bacteriology dan
Thompson, J. P. and V. D. B. Skerman dalam
Azotobacteraceae: The Taxonomy and Ecology
of Aerobic Nitrogen Fixing Bacteria, isolat 26a
mempunyai kemiripan yang tinggi dengan
Azotobacter chroococcum.
28 Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan Vol. 7 No.1 (2007)

800

700
IAA (ppm/g berat kering sel)
600

500

400

300

200

100

0
0 50 100 150 200 250 300
AlCl3 (ppb)

Gambar 3. Konsentrasi IAA yang dihasilkan oleh isolat Azotobacter sp. 26a pada medium Burk’s
dengan pH 5 dan AlCl3 0 ppb-250 ppb

Dari hasil seliksi 20 isolat Azotobacter
didapatkan bahwa isolat 26a, 28a, dan 1a
memiliki ketahanan terhadap pH 4 dan 5 dan
kadar Al tinggi 500 ppb. Isolat 26a merupakan
isolat unggul dalam menambat nitrogen dan
dalam menghasilkan IAA. Penambatan N isolat
26a hanya didapatkan pada pH 5 dengan
konsentrasi AlCl3 tertinggi mencapai 500 ppb
yaitu sebesar 75,758 mg/g berat kering sel.
Penghasilan IAA isolat 26a didapat pada pH 5
dengan konsentrasi AlCl3 tertinggi 250 ppb yaitu
sebesar 168,046 ppm/g berat kering sel.
Aktivitas nitrogenase tidak dipengaruhi oleh
kelarutan aluminium dalam medium sedang
penghasilan IAA dipengaruhi oleh kelarutan
aluminium dalam medium. Dari hasil uji
morfologi koloni dan biokimia menurut Bergey’s
Mannual of Determinative Bacteriology dan
Thompson, J. P. and V. D. B. Skerman dalam
Azotobacteraceae: The Taxonomy and Ecology
of Aerobic Nitrogen Fixing Bacteria, isolat 26a
mirip dengan ciri morfologi dan biokimia dari
Azotobacter chroococcum.
DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, F., I. Ahmad, M. S. Khan. 2005. Indole
acetic acid production by the indigenous
isolates of Azotobacter and fluorescent
Pseudomonas in the presence and
absence of tryptophan. Turk J Biol. 29:
29-34
Amy, C. 2000. Azotobacter.
Andayaningsih, P.
2000. Pengaruh takaran
molase terhadap perkembangan
Azotobacter indigenus podsolik merah
kuning asal subang pada media gambut.
Jurnal Bionatura. 2: 66-74.
Anonim. 1991. Kimia Tanah. Dirjen Pendidikan
Tinggi. Depdikbud. Jakarta.
Barbosa, H.R., M.A. Moretti, D.S. Thuler, E.F.P.
Augusto. 2002. Nitrogenase activity of
Beijerinnckia derxii is preserved under
adverse conditions for its growth. Braz J
Microbiol. 33
Cunningham, S. D. and D.N. Munns. 1984. Effect
of Rhizobial extracellular polysaccharide
on pH and aluminium toxicity. Soil Sci.
Soc. Am. J. 48:1276-1279
Diakses tanggal 18 Maret 2006
Ehnman, A. 1977. The Van Urk-Salkowski
reagent-A sensitive and spesific
chromogenic reagent for silica gel thin
layer chromatographic detection and
identification of indole derivatives.
Journal of Chromatography. 132: 267-
276.
Emtiazi, G., Z. Ethemadifar and M. H. Habibi.
2004. Production of extra-cellular
polymer in Azotobacter and biosorption
of metal by exopolymer. Afr. J.
Biotechnol. 3:330-333.
Flis, S.E., A.R. Glenn, and M.J. Dilworth. 1993.
The interaction between aluminium and
root nodule bacteria. Soil Biol. Biochem.
25:403-417.
Hakim, N., M.Y. Nyakpa, A.M. Lubis, dan S.G.
Nugroho. 1986. Dasar-Dasar Ilmu
Tanah. Universitas Lampung. Lampung.
Hindersah, R. dan T. Simarmata. 2004. Potensi
rhizobacteri Azotobacter dalam
meningkatkan kesehatan tanah. Jurnal
Natura Indonesia. 5:127-133.
Isminarni. Penambatan Nitrogen 29

Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, leaves but not in seeds. Plant and Soil.
S.T. Williams. 1994. Bergey’s Manual of 284:265–271
Determinative Bacteriology. Ninth
Sparks, D.L. 1995. Enveronmental Soil
Edition. The Williams and Wilkins
Chemistry. Academic press. United State
Company. United State of America.
of America.
Joetono, J. Soedarsono, S. Hartadi, S. Kabirun,
Subba Rao, N.S. 1979. Recent Advances in
S. Darmosuwito dan Soesanto. 1973.
Biological Nitrogen Fixation. Oxford and
Pedoman Praktikum Mikrobiologi Umum
IBH Publishing Co. New Delhi, Bombay.
untuk Perguruan Tinggi. Gadjah Mada
Calcuta.
University Press. Yogyakarta.
Subba Rao, N.S. 1982. Biofertilizer in Agriculture.
Lambers, H., F.S. Chapin, and T.L. Pons. 2000.
Oxford and IBH Publishing Co. New
Plant Physioligical Ecologi. Springer. New
Delhi, Bombay. Calcuta.
York.
Subba Rao, N.S. 1994. Mikroorganisme Tanah
Ma, H., G. Bai & Wei. Lu. 2006. Quantitative trait
dan Pertumbuhan Tanaman. Edisi
loci for aluminum resistance in wheat
Kedua. Universitas Indonesia Press.
cultivar Chinese Spring. Plant and Soil.
Jakarta.
283:239–249.
Sudarmadji, S., B. Haryono, dan Suhadi. 1997.
Mishustin, E.N. dan N.K. Shilnikova. 1971. The
Prosedur Analisis untuk Bahan Makaman
Biological Fixation of Atmospheric
dan Pertanian. Edisi Keempat. Liberty.
Nitrogen by Free-Living Bacteria.
Yogyakarta.
MacMillan. London.
Sutedjo, M.M., A. G. Kartasapoetra, S.
Radjagukguk, B. 1983. Masalah pengapuran
Sastroatmodjo. 1991. Mikrobiologi
tanah mineral masam di Indonesia.
Tanah. Rineka Cipta. Jakarta.
Seminar masalah pengapuran tanah
mineral masam di Indonesia oleh alumni Tejera, N., C. Lluch, Mart´ınez-Toledo, and. J.
Fak Pertanian UGM. Yogyakarta. Gonz´alez-L´opez. 2005. Isolation and
characterization of Azotobacter and
Razie, F dan I. Anas. 2005. Potensi Azotobacter
Azospirillum strains from the sugarcane
spp. (dari lahan pasang surut Kalimantan
rhizosphere. Plant and Soil. 270: 223–
Selatan) dalam menghasilkan indole
232.
acetic acid (IAA). Jurnal Tanah dan
Lingkungan. 7:35-39. Thompson, J. P. and V. D. B. Skerman. 1979.
Azotobacteraceae: The Taxonomy and
Razie, F. dan Syaifuddin. 2005. Potensi
Ecology of Aerobic Nitrogen Fixing
Azotobacter spp. dari persawahan lahan
Bacteria. Academic Press. New York.
pasang surut Kalimantan
Selatan:kemampuannya menambat Torres-Rubio, M. G., Sandra A. V. C. Jaime B. C.
nitrogen dan memasok N untuk and M. N. Patricia. 2000. Isolation of
pertumbuhan padi IR64. Agroscientiae. enterobacteria, Azotobacter sp. and
12:106-133 Pseudomonas sp., producers of indole-3-
acetic acid and siderophores, from
Salisbury, F. B. dan W. R. Ross. 1992. Fisiologi
Colombian Rice rhizosphere. Revista
Tumbuhan. Jilid 3. ITB Bandung.
Latino Americana de Microbiologia.
Bandung.
42:171-176.
Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis.
Turner, G. I. and Gibson. 1980. Measurement of
1989. Molecular Cloning A Laboratory
Nitrogen Fixation by Indirect Means. In:
Manual. 2rd Ed. Coldspring Harbor
Method for Evaluating Biological Nitrogen
Laboratory Press. New York.
Fixation. F. J. Bergersen (Ed.). John
Setijono, S. 1982. Lime estimation of Indonesian Wiley and Sons, Inc. New York.
acid mineral soils and its significance to
Wedhastri, S. 1999. Isolasi dan seleksi
crop production. Doctoral Disertation
Azotobacter spp. penghasil faktor
Institut Pertanian Bogor, Bogor.
tumbuh dan penambat nitrogen dari
Shen, R.F., R. F. Chen, J.F. Ma. 2006. tanah masam.Laporan Penelitian
Buckwheat accumulates aluminum in Fakultas Pertanian Universitas Gadjah
Mada. Yogyakarta.
30 Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan Vol. 7 No.1 (2007)

Wedhastri, S.
2002. Isolasi dan seleksi Arbuskular. Departemen Pendidikan dan
Azotobacter spp. penghasil faktor Kebudayaan. Yogyakarta.
tumbuh dan penambat nitrogen dari
Wood, M. 1995. A. Mechanism of aluminium
tanah masam. Jurnal Ilmu Tanah dan
toxicity to soil bacteria and possible
Lingkungan. 3:45-51.
ecological implication. Plant and Soil.
Widada, J. Dan S. Wedhastri. 1998. 87:63-69.
Pengembangan Inokulan Jamur Mikorisa
Yutono. 1987. Bioteknologi Pupuk Hayati. Pusat
Arbuskular Tanah Masam: 3.
Antar Universitas Bioteknologi.
Penggunaan Rhizobacteria Dalam
Yogyakarta.
Produksi Inokulan Jamur Mikorisa