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1. TEMA:
2. RESUMEN:
Para entender la presencia y el crecimiento de los microorganismos se
reconoce en la actualidad la importancia de su estudio con un enfoque
ecolgico.
Existen diferentes alternativas para la determinacin de la estructura
microbiana
Recientemente, sin embargo, se ha visto la necesidad de tomar en
cuenta el ecosistema completo, ya que el crecimiento, la sobrevivencia y
la actividad de cualquier especie, pueden estar determinados por la
presencia de otras especies. Para entender la presencia y el crecimiento
de los microorganismos se reconoce en la actualidad la importancia de
su estudio con un enfoque ecolgico.
Los conceptos ecolgicos constituyen las bases tanto para el control de
microorganismos indeseables como para el uso racional de
microorganismos.
Durante el ltimo siglo se ha dependido del aislamiento y cultivo de los
microorganismos para su identificacin. stos han sido caracterizados
tradicionalmente por su fenotipo, el conjunto de propiedades celulares
observables, como su morfologa, propiedades fisiolgicas y por la
estructura de sus componentes celulares.
La necesidad de cultivar los microorganismos para identificarlos ha
limitado la comprensin de la diversidad microbiana, ya que ahora se
sabe que ms del 90% de los microorganismos en los ambientes
naturales no pueden ser cultivados usando las tcnicas tradicionales.
No es posible obtener cultivos puros de ciertos microorganismos
porque dependen de las actividades de otros microorganismos o
porque no se conocen las condiciones para su cultivo. En otros casos
los microorganismos pierden la capacidad de reproducirse, pero
retienen su actividad metablica.
Palabras clave: mtodos, ecologa microbiana.
3. INTRODUCCIN:
Se dividen en:
MOs autotrficos: generan materia orgnica a partir
de CO 2
MOs organotrficos: participan en la biodegradacin
y reciclado de materia orgnica. Se puede definir un
ciclo biogeoqumico para los elementos clave (C, N, S,
Fe) en el cual los mismos sufren distintos estados de
xido reduccin a medida que se mueven a travs de un
ecosistema.
Los MOs participan en las reacciones biogeoqumicas.
Para muchos elementos son los nicos capaces de generar los
compuestos clave capaces de ser utilizados por otros
organismos.
4. OBJETIVOS
5. MATERIALES O MEDIOS
C. pH o grado de acidez-alcalinidad
Determina la clase de agente contaminante y los cambios que puedan
ocasionar en el alimento.
A mayor acidez, menor proliferacin microbiana:
Frutas cidas ----- mohos y levaduras
Carnes y pescados ------bacterias
(Bajo grado de acidez fcil contaminacin bacteriana)
Multiplicacin bacteriana: pH entre 4,5 y 9 ptimo 6,5 a 7,5.
D. Nutrientes
Los microorganismos tienen necesidades particulares para su
desarrollo, las diferencias de composicin de los alimentos
ejercen un efecto selectivo sobre estos.
Los alimentos de origen animal tienen un alto contenido de
protenas y humedad favoreciendo el desarrollo microbiano.
Necesidades para el desarrollo:
Agua: disponibilidad de agua libre
Fuente de energa: hidratos de carbono
Fuente de nitrgeno: aminocidos, pptidos y protenas
Vitaminas: carne (vitaminas del grupo B)
Sales minerales: hierro (leche)
C. RADIACION
Produce dao sub-letal o destruccin del Mo. (De acuerdo a dosis)
Radiacin ultravioleta
Radiaciones ionizantes Rayos x Rayos gamma
2. METODOLOGA
2. LA COLUMNA DE WINOGRADSKY
Tradicionalmente, la columna de Winogradsky se ha utilizado en el
cultivo de enriquecimiento para el aislamiento de bacterias fototrficas
rojas y verdes, de bacterias sulfatoreductoras y de muchos otros
anaerobios.
El nombre corresponde al famoso microbilogo ruso Sergei
Winogradsky, quien utiliz la columna por primera vez a finales del
siglo XIX para estudiar microorganismos del suelo.
La columna de Winogradsky es un ecosistema anxico en miniatura,
que puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para
cultivos de enriquecimiento.
La columna de Winogradsky se prepara con un cilindro de vidrio
grande que se llena aproximadamente hasta la mitad con lodo rico en
materia orgnica, y que preferiblemente contenga sulfuro.
a) SESGO EN EL ENRIQUECIMIENTO
Aunque el cultivo de enriquecimiento es una herramienta poderosa, en
muchos casos se produce un sesgo en el enriquecimiento.
En los cultivos lquidos de enriquecimiento tpicos, el organismo ms
adaptado a las condiciones escogidas puede convertirse en la poblacin
dominante.
Desgraciadamente, el organismo mejor adaptado en los cultivos de
laboratorio a menudo es slo un componente minoritario del
ecosistema microbiano, en lugar de ser el mayoritario o el ms
relevante desde el punto de vista ecolgico.
El sesgo en el enriquecimiento puede demostrarse cuando se comparan
los mtodos de dilucin con el clsico enriquecimiento en lquido.
La dilucin del inculo seguida de un enriquecimiento a menudo da
lugar a un organismo diferente que cuando se enriquece un inculo sin
diluir.
Se cree que la dilucin elimina aquellas poblaciones minoritarias pero
de rpido crecimiento, dando de este modo la oportunidad de
desarrollarse a otros miembros de la comunidad. Por tanto, la dilucin
del inculo es una prctica comn en el cultivo de enriquecimiento en
la microbiologa actual.
Desarrollo:
1.-Tincin Fluorescente con DAPI:
Las tinciones fluorescentes se han usado mucho para teir
microorganismos en hbitats opacos. El colorante DAPI (4,6-diamido-
2-fenilindo) se utiliza con frecuencia para este propsito; las clulas
teidas con DAPI presentan fluorescencia azul brillante y son muy
fciles de ver y enumerar. La tincin DAPI se emplea para la
enumeracin de microorganismos en muestras clnicas, del ambiente y
de alimentos.
Dependiendo de la muestra, la tincin con colorantes fluorescentes no
especficos puede representar un problema, pero el DAPI, que tie
cidos nucleicos, no suele reaccionar con la materia inerte.
Por tanto, para muchas muestras de suelo y agua, la tincin DAPI
proporciona una estimacin razonable del nmero de clulas presente.
Para muestras acuticas, las clulas se tien en la superficie de un filtro
despus de haber filtrado un volumen determinado de lquido. Estas
tcnicas sencillas tienen la ventaja de no ser especficas (tien todos los
microorganismos de una muestra), pero con el inconveniente de que no
diferencian entre clulas vivas y muertas, ni permiten el rastreo de
organismos especficos en el ambiente.
B.- TINCIONES GENTICAS
C.- PCR: RELACIONANDO GENES ESPECFICOS CON
ORGANISMOS ESPECFICOS.
2.-Tincin de viables:
Se ha desarrollado una tincin con colorantes fluorescentes que
diferencia entre clulas vivas y muertas. Esto proporciona informacin
no slo del nmero de organismos de una muestra sino tambin de su
viabilidad. Esta distincin se basa en la integridad de la membrana
citoplasmtica celular.
A la muestra se aaden dos colorantes, verde y rojo; el colorante
fluorescente verde penetra en todas las clulas, viables o no, mientras
que el rojo, que contiene yoduro de propidio, penetra slo en aquellas
clulas cuya membrana ya no se encuentra intacta y por tanto, estn
muertas.
Las clulas verdes estaban vivas y las rojas muertas, lo que ofrece una
evaluacin instantnea de la viabilidad.
Este mtodo se utiliza con cultivos bacterianos de laboratorio, pero no
es adecuado para el examen microscpico de hbitats naturales debido
a problemas de tincin inespecfica de los materiales inertes.
3.-Anticuerpos Fluorescentes:
Las tcnicas de tincin con sustancias fluorescentes pueden hacerse
ms especficas con el empleo de anticuerpos fluorescentes.
La gran especificidad de los anticuerpos frente a los constituyentes de
la superficie de un organismo particular puede explotarse para
identificar o rastrear un organismo en un hbitat complejo; por
ejemplo, suelo o una muestra clnica que contenga una mezcla de
muchos organismos.
El mtodo requiere la preparacin de anticuerpos especficos contra los
organismos que interesan, lo cual es largo y laborioso.
Sin embargo, para el caso de microorganismos de importancia clnica,
se dispone comercialmente de anticuerpos de alta especificidad.
4.-Protena Fluorescente Verde para el Etiquetado Celular:
En el genoma bacteriano se puede insertar un gen que codifica una
protena fluorescente verde (GFP, green fluorecens protein). Al
expresarse, las clulas que contienen la GFP aparecen de color verde
cuando se observan con un microscopio de luz ultravioleta.
Aunque no resulta til para el estudio de poblaciones naturales (porque
estas clulas carecen del gen GFP), las clulas etiquetadas con GFP se
pueden introducir en un medio, como las races de las plantas y seguir
con el microscopio la cepa etiquetada.
Con este mtodo los eclogos microbianos pueden estudiar in situ la
competencia microbiana entre la microbiota nativa y la cepa con GFP
introducida o evaluar el efecto de la perturbacin en el ambiente.
Desarrollo:
1.- TINCIN FILOGENTICA CON HIBRIDACIN
FLUORESCENTE IN SUTU (FISH, fluorescen in situ
hybridization).
Los colorantes filogenticos son oligonucleotidos fluorescentes
complementarios en la secuencia de base a las secuencias en el ARNr
16s o 18s. Los colorantes filogenticos penetran en la clula, donde
hibridan con el ARNr directamente en los ribosomas.
Como se han identificado sondas filogenticas para especies
microbianas individuales, as como para dominios enteros de
organismos, el grado de especificidad de un colorante filogentico
puede controlarse mediante la secuencia de la sonda fusionada. La
FISH permite identificar o rastrear un organismo particular o un grupo
de organismos relacionados, dependiendo de la especificidad de la
sonda.
GLOSARIO:
1. ECOLOGIA MICROBIANA:
La 'ecologa microbiana' es la rama de la ecologa que estudia a los
microorganismos en su ambiente natural, los cuales mantienen una
actividad continua imprescindible para la vida en la Tierra.
2. MOs: Microorganismos
3. METODOS:
Mtodo es una palabra que proviene del trmino griego methodos
(camino o va) y que se refiere al medio utilizado para llegar a un
fin. Su significado original seala el camino que conduce a un lugar
4. ECOSISTEMA:
Sistema biolgico constituido por una comunidad de seres vivos y el
medio natural en que viven.
"ecosistemas terrestres; pueden describirse como ecosistemas zonas
tan reducidas como los charcos de marea de las rocas y tan extensas
como un bosque completo, pero no es posible determinar con exactitud
dnde termina un ecosistema y empieza otro
5. ACTIVIDAD MICROBIOLGICA:
La respiracin del suelo es un proceso que refleja la actividad biolgica
del mismo y se pone de manifiesto a travs del desprendimiento del
CO2 o el consumo de O2resultante del metabolismo de los
organismos existentes del suelo
6. COMUNIDADES MICROBIANAS:
Comunidades microbianas del suelo determinan el funcionamiento de
los ecosistemas terrestres.
Con frecuencia en los ecosistemas terrestres los procesos que suceden
en la superficie del suelo y los que suceden en el interior del suelo han
sido estudiados por separado. Sin embargo, ambos componentes de los
ecosistemas son interdependientes y sus relaciones determinan el
funcionamiento y propiedades de los ecosistemas (Wardle et al. 2004).
Las plantas producen el carbono (C) orgnico necesario para los
microorganismos del suelo (hongos y bacterias fundamentalmente),
mientras que los microorganismos alteran y mineralizan la materia
orgnica vegetal e indirectamente afectan a la productividad y
composicin de las comunidades vegetales al condicionar la tasa de
renovacin de nutrientes en el suelo.
7. ENRIQUECIMIENTO MICROBIANO:
Un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene
los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos, entre ellos algunos de los ms exigentes.
Se utilizan comnmente para la cosecha de diferentes tipos de
microbios que estn presentes en la muestra.
8. ANLISIS MICROBIANO:
El anlisis se lleva a cabo por medio de la aplicacin de
pruebas microbiolgicas, o lo que es lo mismo, a travs de cultivos
elaborados con ese fin.
Se debe hacer notar que el objetivo principal de este estudio es realizar
la inspeccin del alimento, para determinar si presenta o no patgenos
y, en caso de ser positivo, su carga (cantidad), grado de patogenicidad
y, posiblemente, la cantidad de alimento contaminado que ya ha sido
ingerido por el animal, a fin de saber si est apto para su posterior
procesamiento como alimento para la especie humana.
9. BIODIVERSIDAD:
La biodiversidad o diversidad biolgica es la variedad de formas
de vida en el planeta, incluyendo los ecosistemas terrestres, marinos
y los complejos ecolgicos de los que forman parte, ms all de la
diversidad dentro de cada especie, entre las especies y los ecosistemas.
CUESTIONARIO DE PREGUNTAS
1. De qu depende la clasificacin de los tipos de mtodos de
ecologa microbiana?
2. Cul es la finalidad de los mtodos para organismos especficos?