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Departamento de Qumica
Qumica Biolgica
Dra. Cecilia Rojas
2. Resultados y discusin
3
Tabla 1. Cantidades usadas para la preparacin de las soluciones.
Vol.
[Protena] NaCl
Solucin A 1;540nm A 2;540nm A. ;540nm Biuret
[mg/6mL] [mL]
[mL]
1 0,125 0,112 0,119 2 1,8
2 0,214 0,192 0,203 4 1,6
3 0,308 0,272 0,29 6 1,4
4
4 0,379 0,36 0,37 8 1,2
5 0,455 0,435 0,445 10 1
0 0 0 0 0 2
0,45
0,4
0,35
y = 0,0463x
R = 0,9892
Absorbancia
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 2 4 6 8 10
Concentracin de proteina [mg/6mL]
4
2.b Determinacin de protenas del suero sanguneo.
0,5 [mL] suero 10 [mL] sol A 2 [mL] sol A 6 [mL] sol 1**
Solucin 2:
0,5 [mL] suero 10 [mL] sol B* 2 [mL] filtrado 6 [mL] sol 2**
+9,5 [mL] (NH4)2SO4 Filtracin por papel +4,0 [mL] sol Biuret
A partir de las soluciones se obtuvieron los valores de absorbancia a 540 nm, de 0,327
para la solucin 1 y de 0,109 para la solucin 2. Los valores son interpolados por la ecuacin
de la recta (ver figura 1), utilizando:
0,327
. 1 [] = [ ] = 7,06 [ ] = 35,3 [ ]
0,0463 6 1 2 10
0,109
. 2 [] = [ ] = 2,35 [ ] = 11,8 [ ]
0,0463 6 2 2 10
5
Considerando que para ambas soluciones se comenz con 10 mL y que el cloruro de
amonio solo hizo precipitar a la globulina, los resultados se resumen en la tabla 2:
Tabla 2. Determinacin de abundancia relativa de protenas en el suero sanguneo.
[Protena] Masa de
Fraccin V [mL] %
[mg/mL] Protenas [mg]
Solucin A 10 3,53 35,3 100
Solucin B 10 1,18 11,8 33,4
Precipitado - - 23,5 66,6
(1) (2)
7
Para solubilizar las protenas se utilizaron 30 gotas de solucin NaCl , estimando cada
gota con un volumen de 0,05[mL], de forma aproximada se puede decir que se utiliz
1,50[mL].
De lo observado se destaca que la presencia de sal afecta la solubilidad de una
protena a modo de que la aumenta, pero tambin, al menos en el caso del NaCl esta alcanza
un mximo de solubilidad para lo protena, de modo que al punto de llegar por sobre las 60
gotas adicionadas a la solucin de suero en agua, las protenas no mostraron signo de
aumentar an ms su solubilidad de lo ya observado a las 30 gotas, sin embargo tampoco fue
observable que la solubilidad de las protenas disminuyera, como se muestra con otras sales
en la figura 1, esto tambin corrobora empricamente la informacin sobre el NaCl mostrada
en la figura 1.
3. Conclusiones
A partir de los resultados obtenidos, se comprueba ele efecto salting in de las sales a
bajas concentraciones, y el efecto salting-out de sales bivalentes a concentraciones altas como
el sulfato de amonio. En el caso del experimento 2.b, se observa que los iones de gran tamao
y carga (como los NH4+ y el SO4-2), se pasa por un mximo de solubilidad y luego esta
disminuye. En tanto en el experimento 2.c se comprueba que para iones pequeos (Na+ y Cl-
) la solubilidad alcanza un mximo en el cual se estabiliza.
Se determin que en el suero utilizado, el porcentaje de albminas era de un 33,4% y
de globulinas de un 66,6%, una proporcin inusual para el suero sanguneo. Se observa que
las globulinas son protenas mucho ms sensibles a los cambios en la fuerza inica que las
albminas.
4. Bibliografa
[1] B.Q. Experimental. (2010). [En lnea]. Purificacin de la enzima lactato
deshidrogenasa de msculo esqueltico de pollo. Disponible en:
<https://bqexperimental.files.wordpress.com/2010/01/purificacion-salado.pdf> Consultado
el 23 de Abril del 2017.
8
[2] M. Sabata. M. Serrano. R. Devis. (2014). Practico 2. Salado (Salting aot) de
proteinas, su aplicacin en la separacin de albmina y globulinas en suero o plasma
sanguineo. Departamento de ciencias fisiologicas. Pag. 8.
[3] M. C. Rojas. (2016) Qumica Biolgica, Guas de trabajos prcticos.Santiago de
Chile. Departamento de Qumica. Unidad I: Efectos de la fuerza inica. Precipitacin por
salazn y cuantificacin de las proteinas del suero sanguneo. Efecto solubilizante del NaCl
sobre las proteinas del suero sanguneo.
[4] Morcillo, Jess (1989). Temas bsicos de qumica (2. edicin). Alhambra
Universidad. Pag. 270-272.
Anexo
0,5
0,45
y = 0,0479x
0,4 R = 0,9832
0,35 y = 0,0448x
R = 0,9934
0,3
Absorvancia
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 2 4 6 8 10
Concentracin de proteina [mg/6mL]