PROCEDIMIENTO DE VERIFICACIN DE ESTNDARES PRIMARIOS PARA

POLIOLES

PRINCIPIO
El sorbitol, manitol o maltitol se separan de otros componentes mediante elucin
con una fase mvil acuosa de una resina fuerte de intercambio catinico que
consiste en un copolmero reticulado de estireno-divinilbenceno sulfonado en
forma de plomo, de alrededor de 9 m de dimetro y son detectados por ndice de
refraccin.

ALCANCE
Este procedimiento es aplicable a manitol granulado, maltitol o sorbitol cristalino
91% o mayor, maltitol, manitol, soluciones de sorbitol de 64% o ms y soluciones
de sorbitol no cristalizable de 45% o ms. Este procedimiento es idntico al de la
USP y la FCC para cada uno de estos, incluyendo tanto la identificacin y el
ensayo.

REACTIVOS
Eluyente, agua purificada desgasificada
Se desmineraliza el agua desionizada de laboratorio usando un sistema de
purificacin Milli-Q equipado con dos cartuchos de intercambio inico y de un filtro
de 0,22 m, disponible de Millipore Co. Bedford, MA o equivalente. Se calienta a
ebullicin el agua con el fin de prevenir el crecimiento microbiano.
Solucin de maltitol / manitol / resolucin estndar sorbitol
Disolver maltitol USP RS, manitol USP y sorbitol USP RS en agua para obtener
una solucin con concentraciones de aproximadamente 4,8 mg por g cada uno.
Una descripcin completa de una preparacin similar de estndares
cromatogrficos est escrito en el CPSMA Mtodo S30 Apndice
Solucin estndar sorbitol

Disolver sorbitol USP RS en agua para obtener una solucin con una
concentracin conocida de aproximadamente 4,8 mg por g. Una descripcin
completa de una preparacin similar de estndares cromatogrficos est escrito
en el CPSMA Mtodo S30 Apndice.
PROCEDIMIENTO

1- Preparacin de estndares primarios:

Se preparan los estndares primarios de acuerdo a la farmacopea Americana

(USP), de la siguiente forma:
1. Estndar de Maltitol: 100,0 mg/g
2. Estndar de Sorbitol: 48,0 mg/g

Se pesan en balones aforados de 10 ml y se enrasan hasta aforo.

En este caso se procedi de la siguiente forma:

1. Peso de Maltitol: 101.1 mg (Pureza: 99,7%), Se us "tal como es". Peso en

base seca: 99,7 mg.
2. Peso de Sorbitol: 48,4 mg (Pureza: 98,7%), Se us "tal como es". Peso en
base seca: 47,4 mg.

2- Preparacin de estndares Secundarios:

Se preparan de manera similar a los primarios, en este caso se procedi de la
siguiente forma:

Muestra Peso de muestra

Maltitol 49,10 75.1 mg
Sorbitol 67,81 57.9 mg

Nota: Se inyectan como Unknown: (Muestra), para poder determinar la Pureza

real de estos estndares.
Una vez estn preparados los estndares primarios y secundarios se procede a
verificar primero en el equipo las siguientes condiciones:
- Flujo: 0.5 ml/min
- Presin de la bomba: 0-1500 PSI (ideal de trabajo: 450-550 PSI)
- Referencia de Columna: Aminex Biorad HPX-87C
- Temperatura Columna: 85 C
- Temperatura Detector: 45 C
Cuando estas condiciones se han cumplido se inician a inyectar las muestras
procediendo de la siguiente manera:

1. Ingreso a la funcin Manage Breeze donde aparece la opcin Change

Project/User como se observa en la siguiente pantalla:

2. Doy click en la opcin Change Project/User y aparece en la pantalla la opcin

para hacer cambio de proyecto de acuerdo al estndar que se vaya a inyectar, en este caso:

PROYECTO COMPONENTE
d_Sorbitol d_Sorbitol
Maltitol2 d_maltitol
 NOTA: para todos los casos aplica como User Name: System

3. En el botn de Sample Queue se da click para habilitar la pantalla, una vez

se observe la pantalla se ingresa: # vial donde se encuentra la muestra a
analizar, nombre de la muestra, funcin, mtodo de procesamiento, tiempo
de corrida de la inyeccin, volumen de inyeccin, # de inyecciones a
realizar, peso de la muestra y dilucin, los otros parmetros no se
diligencian.
Para la calibracin, las inyecciones se realizaron con los siguientes parmetros de
trabajo:

PARMETROS DE TRABAJO PARA CURVA DE CALIBRACIN ESTNDAR SORBITOL

Function Run Time Inj. Vol # of injs Sample Dilution
(min) (l) Weight
Standars 26.00 20 3 48.40 10.00
Controls 26.00 20 3 57.90 10.00
 PARMETROS DE TRABAJO PARA CURVA DE CALIBRACIN ESTNDAR MALTITOL
Function Run Time Inj. Vol # of injs Sample Dilution
(min) (l) Weight
Standars 26.00 20 3 101.10 10.00
Controls 26.00 20 3 75.10 10.00

4. Una vez ingresados los parmetros, se selecciona la fila del estndar

primario y se selecciona la opcin componentes ( ).

5. Seguidamente aparecer una ventana (Component Editor) donde se

ingresar el valor de la pureza del estndar. Para el caso de los estndares
secundarios, las casillas de Component Editor deben estar en blanco.
6. Una vez se hayan ingresado todos los parmetros de trabajo se da inicio a
la corrida de inyecciones dando click en el botn ( ) ubicado en la parte
inferior izquierda:
7. finalizada la corrida de todas las inyecciones de los estndares primarios,
se inicia el procesamiento de los datos ingresando a la funcin Find Data,
aparece en la pantalla en una de las pestaas la opcin injections, aqu se
visualizan las inyecciones realizadas, sealo las inyecciones que se van a
procesar y doy click en la opcin review data
8. Cuando se activa la funcin Review data aparece la siguiente pantalla, en
este caso, en el software se da el cambio de la funcin Find Data a View
Data, se procesan las 3 inyecciones del estndar y las 3 inyecciones de
control o verificacin del estndar.
9. Se debe iniciar con el procesamiento del estndar primario, para esto se
utilizan las inyecciones del Standars y se hace de la siguiente manera:
1) Dar click en el botn Calibration curve, el cual se utiliza para realizar la
curva de calibracin para el estndar.
2) Dar click en injection 1, despus en el botn Integrate e inmediatamente dar
click en el botn Calibrate, repetir este procedimiento con las inyecciones 2
y 3.
3) Una vez est creada la curva de calibracin dar click en la opcin file / save
/ calibration, dar enter para guardar la calibracin.
4) Dar click en el botn Review Main window para seguir con el
procesamiento de las inyecciones de verificacin del estndar.
10. En la opcin Review Main window se procesan las inyecciones de la
siguiente manera:
1) Dar click en injection 1, despus en el botn Integrate e inmediatamente
dar click en el botn Quantitate, repetir este procedimiento con la
injection 2.
2) Cada vez que se realiza esto con cada una de las inyecciones en la
parte inferior de la pantalla se puede encontrar informacin respecto a
Retention Time, Area, Amount, % Amount, entre otras, para determinar
la pureza del estndar se utiliza la informacin encontrada como
Amount.
11. En caso de requerirse informacin de las inyecciones realizadas y
procesadas se accede de la siguiente forma:
1) Ingreso en la opcin de Find Data y all en la pestaa de resultados,
busco las inyecciones que ya se procesaron y las sealo.
2) Una vez sealadas las inyecciones de inters, doy click en el botn
Preview Report.
3) Aparece en la pantalla una ventana donde se da la opcin para abrir el
mtodo de reporte, se escoge la opcin Peak Summary Report y se da
OK, se genera el reporte en formato pdf.