El biodiesel es una alternativa valiosa a los combustibles fsiles y muchos pases eligen

el biodiesel como una fuente de energa no convencional. Se ha realizado un gran

nmero de investigaciones sobre las microalgas como fuente de produccin de petrleo.
En los ltimos aos, las contaminaciones de las aguas residuales han causado muchos
problemas ecolgicos y, por lo tanto, la depuracin de las aguas residuales ha atrado la
atencin internacional. Este trabajo estudi el cultivo de Chlorella vulgaris en un
ambiente contaminado con crudo para la produccin de biodiesel. Las concentraciones
previstas fueron de 10 y 20 g por litro (aceite crudo / agua) en dos tiempos. Los
resultados mostraron que el crecimiento de C. vulgaris fue mejorado en aguas residuales
y la mxima cantidad de masa seca y aceite fue producida a la mayor concentracin de
crudo (0,41 g y 0,15 g / l, respectivamente). Adems, la masa seca y el rendimiento de
aceite de la microalga se mejoraron significativamente aumentando la duracin del
experimento.

Materiales y mtodos

Condiciones de microalgas y cultivo

Chlorella vulgaris fue proporcionada por la Coleccin de Cultivos de Algas del Instituto
de Investigacin de Camarones de Bushehr, Irn. La microalga se cultiv bajo luz
fluorescente (2 x 1000 lx) a una temperatura de 25 C sobre un ciclo diurno de 12 h de
luz, 12 h de oscuridad y el pH de 7. Se utiliz medio de transporte con los siguientes
componentes: KNO3 (100 g / L), Na2EDTA (45 g / l), H3BO3 (33,6 g / l), NaH2PO4 \
alpha 4H2O (20 g / l), FeCl _ {3} \ cdot 6H _ {2} O (1,3 g / l) 21 g / l), (20 g / l), NaSO
_ {3} (20 g / l), KNO _ {3} (100 g / l), B _ {1} Y vitamina B12 (2 y 0,1 g / l). Las algas
se cultivaron en matraces Erlenmeyer de 1 litro. Los recuentos de clulas se realizaron
mediante la diapositiva Hemocytometer (cada 24 h con 3 repeticiones) (Huang et al.,
2002).

Productos qumicos

El agua para los mesocosmos del experimento se obtuvo del Golfo Prsico, con ayuda
de la Universidad del Golfo Prsico de Bushehr, Irn. El petrleo crudo fue
suministrado desde el campo petrolero de Pazanan, Irn.

Diseo experimental y tratamientos

Acuario con las dimensiones de 20? 20? 20 cm para los experimentos. Los diseos
experimentales fueron factoriales basados en el diseo de bloques al azar con 3
repeticiones. Las concentraciones previstas fueron de 10 y 20 g por litro (petrleo crudo
/ agua) a dos duraciones de experimento, 7 y 14 das.

Pruebas iniciales

Los valores seleccionados de las clulas iniciales para Chlorella vulgaris fueron
(Clulas por litro). Adems, los valores de la salinidad eran 20 ppt, 25 ppt, 30 ppt, 35
ppt y 40 ppt (la salinidad del Golfo Prsico es de aproximadamente 40 ppt). Los
volmenes iniciales de microalga que entraron en el ambiente contaminado fueron 10%,
20%, 30%, 40% y 50% del volumen del medio contaminado. Debe tenerse en cuenta
que el volumen del ambiente contaminado fue de 2 litros y cada uno de estos pasos se
llev a cabo en 2-14 das (para la prueba inicial).

Secado de la extraccin de algas y lpidos

Despus de 7 y 14 das, se recogi C. vulgaris de agua por centrifugacin a 5000 rpm

durante 10 min y se liofilizaron (Muthukumar et al., 2012). El mtodo de Bligh y Dyer
modificado fue utilizado para la extraccin de lpidos de la biomasa seca de microalga
(Araujo et al., 2013; Ros et al., 2013). Para este propsito, se mezcl 1 g de biomasa
seca con 7,5 ml de agua destilada y luego se aadi una mezcla de 30 ml de cloroformo
y metanol (1: 2 v / v) como disolvente y se homogeneiz con un agitador magntico
durante 10 minutos (Ros Et al., 2013). A continuacin, se aadieron 10 ml de
cloroformo y 5 ml de agua destilada y, en consecuencia, se formaron dos fases. Los
ipides extrados en cloroformo en el fondo del tubo se separaron por el filtro de fibra de
vidrio Whatman de 0,45 lm y el cloroformo se elimin mediante un evaporador
rotatorio (Bligh y Dyer, 1959; Ros et al., 2013).

Reaccin de transesterificacin

Se seleccion NaOH como el catalizador y metanol como el alcohol. El aceite obtenido

se mezcl con metanol (1: 6 v / v) y NaOH (1% de peso de aceite) a 55C durante 15
min. Despus de 3 h, el producto se mantuvo a temperatura ambiente durante 24 h.
Finalmente, se produjeron tres fases; De tal manera que el metanol y el agua estaban
arriba y el biodiesel y la glicerina estaban en el fondo (Mallick et al., 2012;
Muthukumar et al., 2012). El biodiesel se separ mediante un separador de matraz.

anlisis estadstico

Los datos se sometieron al anlisis de varianza (ANOVA) y compararon los medios con
MSTAT-C y SPSS 20.0. Los resultados se consideraron significativamente diferentes
cuando P <0,05.

RESULTADOS Y DISCUSIN

3.2 Porcentaje de petrleo

El porcentaje de aceite en el medio contaminado con petrleo crudo se obtuvo 37% por
1 g de la masa seca de C. vulgaris (Figura 4). El porcentaje de aceite depende no slo de
la deformacin de las microalgas sino tambin del disolvente elegido para la extraccin
de lpidos. Hasta ahora, se ha reportado una amplia gama de porcentaje de aceite (5-
40%) para C. vulgaris. Rawat et al. (2011) inform que el porcentaje de aceite (por 1 g
de masa seca) de C. vulgaris se increment en un 9-15% en aguas residuales (en
comparacin con la muestra de control). Se inform que este contenido era de un 17%
de acuerdo con los resultados de Chinnasamy et al. (2010). La pared celular de C.
vulgaris es muy rgida y, por lo tanto, la extraccin de petrleo de las clulas de algas es
muy dificultada (Rawat et al., 2013). Anteriormente, se utiliz n-hexano o metanol para
la extraccin de petrleo de sistemas microalgales. Sin embargo, el n-hexano es un
disolvente dbil no polar y por lo tanto no puede permear ptimamente en la pared
celular de C. vulgaris (Lam y Lee, 2012). En el presente estudio, se seleccion la
mezcla de metanol y cloroformo, ya que era aproximadamente el disolvente ideal, en
comparacin con otros (Ros et al., 2013). Como se muestra en la Fig. 4, el porcentaje
mximo de aceite estaba en una concentracin de 10 g / l, 20% ms que en la muestra
de control. Este aumento podra ser causado por la constitucin de petrleo crudo que
proporciona un medio de crecimiento ms adecuado para la microalga.

fig. 4. Porcentaje de aceite de C. vulgaris en diferentes concentraciones de petrleo

crudo ('a', 'b' y 'c' muestran la clasificacin de Duncan).

3.3 Rendimiento de aceite

El rendimiento de aceite se define como la produccin de aceite (g) de microalgas por 1

L de agua. De acuerdo con la Tabla 2, el rendimiento de aceite de C. vulgaris durante 14
das fue un 8% ms que durante 7 das (P <0,05). Cabe destacar que el rendimiento de
aceite en la muestra de control fue el mismo durante 7 y 14 das (0,12 g), mientras que
en el medio contaminado, fue de 0,13 g durante 14 das. Se observ que el rendimiento
de aceite de C. vulgaris a 10 g / l y concentraciones de 20 g / l era 35% y 67% ms alto
que el de la muestra de control, respectivamente (P <0,01). De acuerdo con los datos
presentados en la Tabla 2 y la Figura 5, el porcentaje de aceite de microalga fue
relativamente el mismo en dos concentraciones. Sin embargo, la masa seca a una
concentracin de 20 g / l fue mayor que la concentracin de 10 g / l, y por lo tanto, el
rendimiento de aceite a 20 g / l fue ms alto que el otro (aproximadamente 20%).

Tabla 2

La produccin de aceite (rendimiento) y el rendimiento de biodiesel de C. vulgaris

durante 7 y 14 das y en tres concentraciones de petrleo crudo ('a', 'b' y 'c' muestran la
clasificacin de Duncan).

3.4 Rendimiento de biodiesel

El rendimiento de biodiesel se mejor con el aumento de la duracin del experimento (P

<0,05). Sin embargo, como se muestra en la Tabla 2, el rendimiento de biodiesel se
redujo al aumentar la concentracin de petrleo crudo (P <0,05). El rendimiento del
biodiesel podra mejorarse con los cambios estructurales y qumicos en el aceite o la
reaccin de transesterificacin (Atadashi et al., 2013; McNeff et al., 2008). Se esperaba
que los compuestos de petrleo crudo pudieran cambiar, y luego el rendimiento de
biodiesel se incrementara. Aunque Rawat et al. (2011) no informaron el aumento del
rendimiento de biodiesel en aguas residuales domsticas, los resultados obtenidos por
Prajapati et al. (2013) mostr mejoras en la produccin de biocombustibles en aguas
residuales usando microalgas. Con una investigacin sistemtica adicional, debera
quedar claro si los resultados del presente estudio pueden ser aplicados efectivamente
para aumentar la produccin de biodiesel C. vulgaris.

Fig. 5. Oil yield of C. vulgaris regarding oil percent and dry mass at different concentrations of
crude oil.
Conclusiones

Nuestros resultados demuestran de manera concluyente que C. vulgaris podra ser

cultivado con precisin en el medio ambiente contaminado con petrleo crudo. El
crecimiento de la microalga fue sorprendentemente mejorado en aguas residuales y una
cantidad notable de masa seca y aceite se produjeron a una alta concentracin de
petrleo crudo. El rendimiento de biodiesel aument con el aumento de la duracin del
experimento (P <0,05), y se disminuy al aumentar la concentracin de crudo. La
funcin potencial de C. vulgaris para la produccin de biodiesel en el medio ambiente
contaminado con petrleo crudo hace que la especie sea atractiva para estudios
extensivos adicionales.