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Para Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una tcnica de rutina
bsica cuando se aborda un esquema de purificacin de una protena concreta, cuando se quiere
conocer la actividad especfica de una preparacin enzimtica, para el diagnstico de
enfermedades, as como para otros muchos propsitos.
La ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de luz a travs de una
sustancia y la concentracin de la sustancia, as como tambin entre la transmisin y la
longitud del cuerpo que la luz atraviesa.
A = cl
Donde:
A = absorbencia
l = longitud de la celda.
Intervalo del UV
Todas la protenas pueden ser detectadas, sin embargo solo ciertos residuos de aminocidos son
los que se leen en la regin del UV.
Enlaces peptdicos o ciertos aminocidos reaccionan y los productos coloridos son los que se
cuantifican
La cistina presenta una banda centrada a 250 nm, n-->s* (max ~ 300 M-1.cm-1), pero
apenas se puede considerar, ya que es muy dbil y el porcentaje relativo de puentes
disulfuro es muy pequeo en una protena.
La tirosina presenta un mximo a 275 nm con un hombro a 285 nm. La banda se desplaza
a mayores longitudes de onda cuando se produce la desprotonacin del OH del anillo
aromtico.
El triptfano agrupa al menos tres bandas diferentes.bajo el espectro centrado a 280 nm.
Tambin presenta bandas en la zona del UV lejano.
BIURET
La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-
CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los
compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas.
LOWRY
Primera reaccin Biuret. Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las protenas
formando complejos con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Estos
complejos Cu2+-protena tienen un color azul claro. Adems, provocan el desdoblamiento
de la estructura tridimensional de la protena, exponindose los residuos de tirosina que
van a participar en la segunda etapa de la reaccin. El Cu2+ se mantiene en solucin
alcalina en forma de su complejo con tartrato.
BRADFORD
Entre las sustancias que interfieren estn los detergentes y las soluciones
bsicas.