GENTICA FORENSE: Concepto y aplicacin

Angel Carracedo
Instituto de Ciencias Forenses. Universidad de Santiago de Compostela

1. GENETICA FORENSE: De los grupos sanguneos al ADN

La Gentica forense es una especialidad de la Gentica y de la Medicina legal que incluye un

conjunto de conocimientos de Gentica necesarios para resolver ciertos problemas judiciales.
Los tipos de pericia ms solicitados al laboratorio de Gentica forense por los tribunales son
casos de investigacin biolgica de la paternidad, pericias de criminalstica biolgica (estudio
de vestigios biolgicos de inters criminal como manchas de sangre, esperma, pelos, etc.) y,
finalmente problemas de identificacin.
En Europa hay unos 300 laboratorios de Gentica forense y en Espaa ms de 50, aunque slo
algunos estn acreditados con la norma ISO 17025 y hacen pruebas de investigacin criminal
(laboratorios del Instituto Nacional de Toxicologa y Ciencias Forenses, de la Polica
Nacional, de las policas autonmicas, de la Guardia Civil y el Instituto de Ciencias Forenses
de Santiago y algunos laboratorios privados). En los Pases Escandinavos, Holanda o Irlanda,
la pericia oficial se realiza en grandes laboratorios estatales (habitualmente un laboratorio
para criminalstica y otro para pruebas de paternidad) y en otros pases como Italia, Portugal o
Alemania est distribuida en laboratorios ms pequeos pero la pericia en materia de
criminalstica biolgica suele estar centralizada. En otros pases como Blgica, Francia o
Austria, la situacin es intermedia.
En el Reino Unido una parte de la pericia oficial se realiza en algunos laboratorios de la
polica pero mayoritariamente en grandes laboratorios privados tras la clausura del Forensic
Science Service.
En el resto del mundo existen aproximadamente otros 800 laboratorios, siendo una
especialidad tpica de pases desarrollados econmica y socialmente. Europa lidera el campo
en investigacin cientfica por encima de Estados Unidos, Japn o Australia y en los ltimos
aos est actividad est experimentado un gran auge en Iberoamrica y Este de Asia.
Una actividad de creciente importancia en este campo son las bases de datos de ADN con
fines de identificacin criminal. Estn legisladas e implantadas en prcticamente toda la
Unin Europea as como en otros muchos pases del mundo y suponen la introduccin, en
conjunto, de unos 3 millones de perfiles de ADN por ao.
La Gentica forense comenz con el descubrimiento en el ao 1900 por Karl Landsteiner del
grupo ABO y con la demostracin de su herencia en 1910. Poco despus (1912) fue utilizado

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ya en casos de investigacin biolgica de la paternidad y pronto en el anlisis de vestigios
biolgicos de inters criminal como manchas de sangre.
Nuevos antgenos eritrocitarios polimrficos, esto es con una proporcin significativa de
variantes allicas en la poblacin, y que se heredan de forma mendeliana simple como el Rh,
MNSs, Kidd, Lutheran o Duffy fueron progresivamente incorporados al panel de marcadores
genticos utilizados.
La aparicin de polimorfismos proteicos y enzimticos de eritrocitos y leucocitos analizados
por tcnicas electroforticas y posteriormente de los antgenos del sistema mayor de
histocompatibilidad, HLA, permiti que se dispusiese de marcadores ms informativos y ms
objetivos.
Entre los marcadores enzimticos destacaba el uso de la fosfoglucomutasa (PGM1), la
fosfatasa cida eritrocitaria (ACP1) y la esterasa D (ESD). Entre las protenas sricas las
haptoglobinas (Hp), la alfa-1 antitripsina (Pi) y las protenas Gc.
Sin embargo todos estos marcadores y especialmente los HLA presentaban grandes
limitaciones cuando se trataba de analizar muestras degradadas o en minscula cantidad lo
que sucede con mucha frecuencia en el trabajo forense. Particularmente, la utilizacin de
todos estos polimorfismos era muy limitada para el anlisis de manchas o pelos y los
problemas de identificacin, y en la mayor parte de los casos criminales los genetistas
forenses poco o nada podan decir sobre la persona a la que perteneca un vestigio. Esto era
particularmente cierto para el anlisis de esperma o manchas de esperma y pelos o cabellos
donde era excepcional proporcionar algn dato acerca de la correspondencia de un vestigio a
un presunto agresor con lo que la ayuda a la justicia era muy limitada.
Tambin era imposible la realizacin de pruebas de paternidad en muestras degradadas (por
ejemplo a partir de restos seos) y muy difcil en casos complejos como las pruebas realizadas
sin el presunto padre a partir de familiares indubitados del mismo.
Y esta era la situacin cuando se descubrieron en la dcada de 1980 los polimorfismos del
ADN.

2. POLIMORFISMOS DE ADN

1. Concepto de polimorfismo de ADN

El trmino polimorfismo fue definido por Ford en 1940 como la aparicin conjunta en un
lugar de dos o ms formas discontinuas de la misma especie, de tal modo que la ms rara de
ellas no se puede mantener simplemente a travs de la mutacin peridica. Para que un gen
sea polimrfico, se asume que el alelo (es decir, la variante) ms comn para ese locus debe
tener una frecuencia menor del 99%.

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El genoma humano haploide contiene aproximadamente 3,2x109 pares de bases, aunque no
todas son expresivas en trminos de produccin de protenas. El genoma de los eucariotas
superiores, contiene secuencias de ADN con una funcin determinada (genes que codifican la
secuencia de aminocidos de una protena) denominadas ADN expresivo o codificante y
secuencias de ADN que no son transcritas a protenas y que se conoce como ADN no
codificante.
Slo el 2% del genoma humano corresponde a DNA codificante y el resto (la gran mayora)
es DNA no codificante.
Que sea codificante o no codificante no es sinnimo de funcionalidad. Muchas variaciones en
ADN codificante no son funcionales ni implican ningn cambio en las protenas (por ejemplo
las variaciones que llamamos sinnimas). Al contrario, muchas regiones de ADN no
codificante tienen importancia funcional (por ejemplo, regulan la expresin de genes).
El asociar ADN codificante a funcin y no codificante a neutralidad de informacin es un
error muy comn en muchos textos y en muchas legislaciones.
Un porcentaje importante del ADN no codificante es ADN repetitivo, el cual al no estar sujeto
a presin selectiva intensa, admite unos niveles de variacin muy grandes en comparacin con
las regiones de ADN codificante.
Los polimorfismos de ADN de mayor uso en medicina forense se encuentran en el ADN
repetido en tndem y clsicamente se utilizan los denominados minisatlites y microsatlites
que consisten en repeticiones de fragmentos de ADN de nmero variable, por lo que
genricamente se denominan VNTR ("variable number of tandem repeats").
La repeticiones en el ADN microsatlite son de tamao pequeo (de 2 a 6 pares de bases) por
lo que se suelen denominar STRs ("short tandem repeats") y su tamao usual es de 50 bp a
400 bp. Las repeticiones en un locus minisatlite tienen un tamao entre 15 y 50 pares de
bases para un tamao total de 300 bp hasta 20 Kb.
Poniendo un ejemplo, un STR puede tener una estructura como ACTT ACTT ACTT ACTT
ACTT ACTT ACTT ACTT...hasta un nmero n de repeticiones. Los individuos nos
diferenciamos por el nmero de repeticiones de esa secuencia. Un individuo 8-12 para ese
STR significa que tiene 8 veces la unidad de repeticin (ACTT) en un lugar especfico de un
cromosoma (locus gnico) y 12 veces en el locus correspondiente del cromosoma homlogo.
El polimorfismo en los microsatlites y minisatlites se basa principalmente en el nmero de
repeticiones, pero, en algunos casos, tambin existen diferencias puntuales en la secuencia
que lo compone (es decir, el orden que presentan los nucletidos que lo componen).
Los minisatlites y microsatlites adems de ser extraordinariamente polimrficos, poseen
una herencia mendeliana simple. Esto significa que el individuo 8-12, que antes pusimos de
ejemplo, ha heredado uno de los alelos de su madre y otro de su padre biolgico.

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Microsatlites y minisatlites difieren tambin en su distribucin en el genoma humano (son
mucho ms abundantes los microsatlites y estn ms ampliamente distribuidos) y el origen
de su variabilidad es tambin diferente.
En el campo forense utilizamos bsicamente STRs de 4bp y 5bp en la unidad de repeticin.
Los de menos repeticiones son muy propensos a artefactos (bandas tartamudas) lo que
dificulta la interpretacin de perfiles de ADN obtenidos a partir de mezclas de diferentes
individuos. En cuanto a la estructura si bien en un primer momento se utilizaban STRs
simples hoy la complejidad no es bice para su utilizacin y se prefieren STRs no ligados
entre si, de tasa de mutacin baja, con un buen comportamiento en relacin con posibles
artefactos y muy contrastados (validados) a efectos forenses.
Adems de los STRs en cromosomas autosmicos son de gran importancia los STRs de
cromosoma Y particularmente para el caso de agresiones sexuales.
Tambin, como ya veremos no slo el ADN nuclear es interesante, sino que desde el punto de
vista forense es de gran importancia el anlisis de ADN mitocondrial pues es ms eficaz en
muestras degradadas y es el tipo de variacin que mayor xito tiene en el anlisis de cabellos
sin bulbo, que son vestigios que aparecen con mucha frecuencia en la escena de delitos.
Los SNPs (polimorfimos puntuales de secuencia), tanto de cromosomas autosmicos y
cromosomas sexuales como de ADN mitocondrial, tienen, como veremos, una enorme
importancia en la prctica forense. Son polimorfismos muy sencillos y habitualmente (aunque
no siempre) biallicos, esto es, simples variaciones de un solo nucletido (A y G por ejemplo
en una posicin del genoma).

2. El descubrimiento de la huella gentica

En 1984, el genetista britnico Alec Jeffreys desarrollaba en la Universidad de Leicester junto

con V. Wilson y S.L. Thein un proyecto de Gentica molecular sobre el gen de la mioglobina
en uno de cuyos intrones encontraron una secuencia repetida en tndem de 33bp, que, como
les record las secuencias repetitivas de los satlites clsicos y eran ms pequeas las
denominaron minisatlites y partir de este hallazgo desarrollaron un mtodo para analizar
muchos minisatlites de forma simultnea.
Los minisatlites eran enormemente polimrficos, por lo que los distintos individuos
mostraban algo parecido a las barras de identificacin de los productos de consumo,
absolutamente caractersticas de cada individuo. Alec Jeffreys se dio cuenta del impacto
enorme que tendra para la gentica en general y para la medicina forense en particular y
denomin DNA fingerprint (huella gentica de ADN) al perfil de ADN obtenido por estas
sondas (que desde entonces se denominaron sondas multilocus), publicando sus resultados en
el ao 1985 en la revista Nature.

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El descubrimiento del DNA fingerprint pronto tuvo un enorme impacto en el mundo
forense aplicndose casi de inmediato, gracias a la colaboracin de Alec Jeffreys con el
Forensic Science Service britnico, en casos de inmigracin y sobre todo en importantes casos
criminales con resultados espectaculares. El primer caso criminal en el que se utiliz en
Espaa una prueba de ADN fue en un caso de homicidio (Sumario 1/89, Audiencia de A
Corua) en el ao 1989 y permiti liberar a una persona errneamente acusada de una
violacin.
Aunque en un primer momento de su aplicacin forense los minisatlites se analizaban tal
como haban sido desarrollados por Alec Jeffreys y su grupo, pronto se limit mucho su uso
principalmente por las dificultades en la estandarizacin del mtodo (lo que imposibilitaba
segundas opiniones) aunque tambin por los problemas bioestadsticos de evaluacin de los
resultados y fueron substitudos por el anlisis de minisatlites no de forma conjunta sino de
forma individual (single locus probes, sondas de locus nico). Incluso esta prueba ms
sencilla present algunos problemas iniciales, que llevaron a la necesidad lgica de una
estandarizacin obligada de la prueba. Para empezar son cientos los polimorfismos de ADN
minisatlite descritos que pueden ser detectados con decenas de enzimas de restriccin
diferentes. Si cada laboratorio utilizase sus propias sondas y enzimas sera enormemente
difcil poder comprobar un resultado en otro laboratorio y se imposibilitara una necesidad
legal bsica: la realizacin de contrapericias o segundas opiniones. Esto fue muy importante
porque se impuls la estandarizacin a nivel mundial de las pruebas de ADN.
El anlisis de minisatlites mediante sondas est prcticamente abandonado debido a que es
muy difcil analizar el ADN cuando es escaso o est degradado y esto dificulta gran parte de
las aplicaciones forenses.
Por fortuna esto se solucion con la aparicin de la reaccin en cadena de la polimerasa y el
descubrimiento de los microsatlites.

3. Anlisis de polimorfismos de ADN mediante PCR

Como es sabido, la PCR es una tcnica de amplificacin in vitro de pequeos segmentos de
ADN con la que a partir de una cadena nica se pueden hacer millones de copias, de modo
que el producto amplificado puede ser fcilmente analizado, incluso sin recurrir al uso de
sondas. Al poderse amplificar ADN a partir de un nmero muy pequeo de copias, el inters
forense de esta tcnica es obvio.
El primer sistema analizado por PCR con fines forenses fue un polimorfismo de ADN
codificante de la regin HLA: el locus HLA DQA1, que se detectaba mediante sondas que
reconocen cada alelo del sistema previamente fijadas a una membrana pero fue el
descubrimiento de los microsatlites o STRs lo que abri unas enormes posibilidades a este
campo. Sus ventajas eran notables ya que ofrecan junto a pequeos tamaos (y por lo tanto

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ms resistencia a la degradacin), un buen poder de discriminacin y facilidades para ser
amplificados mediante una PCR multiplex (esto es, la amplificacin simultnea de varios
STRs a partir de la misma muestra).
El anlisis de los productos amplificados se ha facilitado en gran medida gracias al uso de
fluorocromos y sistemas automatizados (secuenciadores automticos de ADN) que permiten
la visualizacin de varios microsatlites simultneamente.
Los polimorfismos analizables por PCR antes de ser aceptados para la prctica forense deben
cumplir una serie de requisitos y pasar rigurosos controles de validacin.
Actualmente se suelen analizar un nmero elevado de STRs, estandarizados y validados, a
partir de la misma muestra biolgica utilizando secuenciadores automticos y PCR multiplex.
Los muliplexes comerciales actuales contienen un nmero de al menos 16 y un marcador
(amelogenina) para determinar el sexo pero los ms modernos tienen un nmero an superior
e incluyen ms de 20 STRs, incluyendo todos los obligatorios en Estados Unidos y Europa
como se ve en la Figura 1.

Figura 1 STRs de uso comn en Europa y USA (CODIS)

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 Figura 2. Imagen perfil mezcla de ADN de dos mujeres para marcadores CODIS

En Europa aunque hay diferencias entre pases en todos es obligatorio usar el denominado
European Standard Set (ESS) que incluye una docena de STRs.
Para anlisis de criminalstica biolgica se prefiere usar STRs con un pequeo tamao en el
producto amplificado (menos de 200 bp) pues el tamao es inversamente proporcional a la
degradacin y en muestras muy degradadas slo cabe esperar xito con la amplificacin de
estos sistemas. Actualmente se han diseado numerosos multiplexes disponibles
comercialmente de este tipo de STRs que se suelen denominar miniSTRs e incluso se han
incorporado a alguno de los multiplexes ya existentes. Tambin son muy interesantes las
repeticiones de 5 nucletidos (pentanucleotide repeats) cuando se trata de analizar muestras
mezcladas con diferentes individuos pues tienen menos artefactos que otros STRs, por lo que
estn incluidos en varios multiplexes comerciales.
La figura 2 muestra un tpico perfil de ADN, en este caso proveniente de una mezcla de dos
individuos del sexo femenino.

4. Los polimorfimos del ADN mitocondrial

Hasta no hace muchos aos, el estudio de los polimorfismos de ADN se haba centrado
mayoritariamente en el anlisis de marcadores nucleares pero el ADN mitocondrial (ADNmt)
se presenta como un marcador con mltiples aplicaciones en el campo de la Gentica Forense
debido fundamentalmente a su modo de herencia y a la existencia de miles de molculas por

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clula, lo que permite su estudio en condiciones en las que el material biolgico a analizar se
encuentra en mal estado o en cantidad insuficiente para estudiar cualquier otro marcador
nuclear.
En el contexto de la Gentica de poblaciones humanas, el ADNmt es un marcador ideal para
el estudio evolutivo de las poblaciones debido a su elevada tasa mutacional respecto al
genoma nuclear y a la ausencia aparente de recombinacin. As, a lo largo de un perodo
relativamente corto (edad del hombre anatmicamente moderno) la molcula de ADNmt ha
estado registrando la historia de estas poblaciones y sus migraciones. Su modo de herencia
permite el uso de anlisis filogeogrficos para estudiar movimientos de poblaciones a travs
de la historia.
El ADN mitocondrial presenta las siguientes caractersticas:
a) El ADNmt humano es una molcula ADN circular, cerrado y de doble cadena, lo que le
confiere mayor estabilidad (con respecto al genoma nuclear) frente a fenmenos de
degradacin.
b) Es de pequeo tamao. Mide 16.569 bp y fue secuenciado en su totalidad por primera vez
en 1981 por Anderson y cols.
c) Mientras que el ADNmt representa menos del 1% del ADN celular total, este posee un gran
nmero de copias. Se estima que las clulas de mamferos contienen varios miles de copias de
ADNmt dependiendo del tipo de tejido. Este es el motivo y no otro, por el que funciona mejor
que el ADN nuclear en material degradado.
d) El ADNmt presenta herencia materna y en consecuencia:
.- no recombina (en los cromosomas autosmicos se intercambia el material gentico
de los progenitores).
.- tiene naturaleza haploide. Todas las copias de ADNmt de un individuo son iguales
excepto raras circunstancias (heteroplasma).
.- todos los individuos de un mismo linaje materno exhiben la misma secuencia
(haplogrupo) de ADNmt (exceptuando casos excepcionales en donde exista segregacin de
heteroplasmas en algn individuo del linaje o evidentemente mutaciones puntuales a nivel
germinal).
e) Tasa de mutacin elevada:
La tasa de mutacin del ADN mitocondrial es en promedio 5 a 10 veces superior al
ADN nuclear
La heteroplasma se define como el estado en el que un individuo presenta ms de un
genotipo de ADN mitocondrial. De este modo, cuando una mutacin surge en una de las
molculas de ADNmt, dentro de la mitocondria se crea una mezcla intracelular de molculas
mutantes y normales lo que puede dificultar la interpretacin forense.

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La identificacin forense mediante ADNmt se basa fundamentalmente en el estudio por
secuenciacin de esta regin control, una regin pequea de 1.2 kb y que contiene varias
regiones polimrficas de las que las ms importantes son conocidas como la regin
hipervariable I (HVI) y la regin hipervariable II (HVII).
Los polimorfismos que caracterizan al ADN mitocondrial son:
a) Polimorfismos de secuencia (variaciones en bases individuales).
b) Polimorfismos de longitud.
En el ADNmt existen tractos homopolimricos (la misma base repetida un nmero de veces)
donde es habitual encontrar inserciones o deleciones de una o ms bases nucleotdicas en las
que suele ser frecuente la heteroplasma.
La alta tasa de sustitucin en la regin control posibilita que nos encontremos una o ms
diferencias en la secuencia del ADNmt en la lnea materna de una familia e incluso en
distintas muestras de un mismo individuo. El conocimiento de la tasa de mutacin y de los
mecanismos mediante los cuales las mutaciones se transmiten a la descendencia es importante
en gentica forense sobre todo para aquellos casos en los que las diferencias de las secuencias
que se estn cotejando son mnimas (diferencias de una sola base o diferencias en
heteroplasmas) para evitar el potencial de falsas exclusiones.

El estudio de variaciones nucleotdicas simples en regin codificante (SNPs) del ADNmt est
cobrando un valor cada vez mayor ya que permiten definir con mayor precisin el haplogrupo
al que pertenece una muestra lo que aumenta su valor identificativo. Por ejemplo un
porcentaje importante de las muestras europeas pertenecen al haplogrupo H (esto es a un
mismo linaje) sin posibilidad de diferenciar unos individuos de otros si no se recurre al
anlisis de SNPs de la regin codificante, lo que aumenta sensiblemente el poder del test.
El genoma mitocondrial contiene informacin de gran utilidad y en ocasiones decisiva
judicialmente para el establecimiento de la identidad o fuente de un determinado espcimen
biolgico, jugando un papel crucial en la identificacin criminal. Es importante su estudio en
el anlisis de pelos y cabellos y de muestras degradadas, ya que en estos casos las
probabilidades de xito en la amplificacin del ADNmt son muy superiores a la de los
marcadores nucleares. Los primeros casos en el que los resultados del anlisis de ADNmt
fueron llevados a los tribunales fueron el caso P.W Ware, en Estados Unidos en Junio de 1996
realizado por el FBI a raz de un caso de violacin y posterior asesinato en el estado de
Tennessee y simultneamente otro caso criminal resuelto por nuestro laboratorio (Sumario
2/95, Juzgado de 1 Instancia e Instruccin de Puente Genil, Crdoba; informe Instituto
Medicina Legal Santiago 23/1996). Posteriormente se aplic en el caso Alcasser (Audiencia
de Valencia, 287/1997).

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Por su mejor comportamiento en muestras degradadas el ADNmt es esencial para muchos
casos de identificacin a partir de restos seos. Se han obtenido secuencias de ADNmt en
muestras de miles de aos y la prueba ha servido para solucionar numerosos enigmas
histricos como la identificacin de los restos de la familia Romanov.
La mayora de los laboratorios que de Gentica forense utilizan hoy da el ADNmt, aunque en
casos complicados este tipo de pericia slo la deben realizar laboratorios muy especializados.
Los mayores problemas que la prueba de ADNmt tiene son el control de la contaminacin y la
valoracin estadstica. La Sociedad Internacional de Gentica Forense (ISFG) ha publicado
recomendaciones estrictas para el uso apropiado e interpretacin de los perfiles de ADNmt
(www.isfg.org).
La valoracin estadstica exige que se disponga de bases de datos poblacionales muy amplias
(es decir, de perfiles de ADNmt totalmente annimos con el fin de estimar su frecuencia) y en
este sentido se est haciendo un esfuerzo colaborativo importante a nivel mundial siendo la
base de datos ms importante EMPOP (http://empop.online/) coordinada por el Instituto de
Medicina Legal de Innsbruck (Austria).

5. Los polimorfismos del cromosoma Y

A pesar de representar solo el 2% del componente cromosmico humano, el cromosoma Y

posee unas caractersticas que le diferencian del resto de los cromosomas y le confieren gran
utilidad desde el punto de vista tanto forense como antropolgico y que son:

a) Es uno de los cromosomas humanos ms pequeos, con un tamao de aproximadamente 60

millones de pares de bases (Mb).
b) El 60% de su DNA est constituido por secuencias altamente repetidas.
c) La mayor parte del cromosoma Y no recombina durante la meiosis. Esta falta de
recombinacin, determina que todas las secuencias localizadas en la parte que no recombina
son heredadas como un bloque de padres a hijos, por lo que se trasmite exclusivamente por
va paterna. La nica fuente posible de variacin es la producida por eventos mutacionales.
d) Presenta una baja diversidad.

A pesar de la gran escasez de polimorfismos existente en este cromosoma, si se compara con

el resto, en la ltima dcada se han incrementado enormemente los estudios realizados sobre
los distintos marcadores especficos de este cromosoma y de todos ellos los ms interesantes a
efectos forenses son tambin los microsatlites (STRs).
Actualmente se pueden encontrar en bases de datos genmicas centenares de STRs de
cromosoma Y pero tambin se ha estandarizado su uso. As, los STRs que integran el llamado

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haplotipo mnimo (usados por todos los laboratorios forenses en la actualidad) se
encuentran en los multiplexes comerciales ampliamente usados, que incluyen adems un
elevado nmero de STRs.
Los microsatlites localizados en el cromosoma Y, han irrumpido con gran fuerza en el
panorama de los marcadores genticos de uso forense, debido a que suponen una ayuda
inestimable para ciertas situaciones forenses especficas como son algunos casos de
investigacin de la paternidad difciles y especialmente casos criminales con mezcla de ADN
masculino y femenino.
As, los polimorfismos de cromosoma Y se emplean cada vez ms en aquellos casos en los
que no hay muestra del presunto padre y sus supuestos hijos son varones. As, si se cuenta con
otro familiar masculino de la lnea paterna, su cromosoma Y ser idntico al del padre no
disponible y su supuesto hijo varn. Pero en estos casos, hay que tener en consideracin que
el resultado basado exclusivamente en microsatlites del cromosoma Y, no excluye como
padre a ningn otro varn de esa lnea paterna. Por lo tanto, el estudio debe complementarse
con marcadores autosmicos en el caso de que sea necesario eliminar esa posibilidad.

Pero sobre todo, los polimorfismos de cromosoma Y son importantes en el anlisis de

muestras en delitos contra la libertad sexual en las que el esperma u otras clulas del agresor
estn mezcladas con clulas femeninas de la vctima.
En caso de esperma se suelen separar las fracciones masculina y femenina mediante lisis
diferencial posibilitando as la obtencin del perfil gentico del agresor. Pero esta tcnica es
muy laboriosa y no siempre resulta exitosa, al no conseguirse siempre la completa separacin
de las dos fracciones. Lo mismo ocurre cuando hay cualquier mezcla hombre-mujer con un
componente minoritario del varn (por debajo de un 10% de una poblacin celular solo se ve
tras la PCR la poblacin mayoritaria). El uso de marcadores de cromosoma Y soluciona este
problema tcnico.
A pesar de resultar evidente su capacidad analtica, estos marcadores presentan, como hemos
dicho, una limitacin: todos los individuos de la misma lnea paterna compartirn idntico
perfil haplotpico de cromosoma Y por lo que no podrn ser excluidos como autores de un
delito si se presenta ese problema.
Adems, como ocurre con el ADNmt, la asociacin allica de los STRs de cromosoma Y,
implica que las frecuencias haplotpicas no puedan ser estimadas como producto de las
frecuencias allicas, por lo que el anlisis estadstico de los marcadores microsatlites de
cromosoma Y es ms complejo que el de marcadores autosmicos.
Con todo, los polimorfismos de cromosoma Y estn siendo utilizados en todos los
laboratorios forenses actualmente y han servido para arrojar luz sobre casos criminales
importantes en Europa sobre todo relacionados con agresiones sexuales.

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Tambin est siendo cada vez ms importante el uso de polimorfismos nucleotdicos simples
(SNPs) de cromosoma Y. Estos completan la informacin de los STRs y son importantes para
conocer el origen geogrfico de una muestra.
La ISFG ha publicado recientemente recomendaciones para el uso correcto de estos
polimorfismos, su nomenclatura y especialmente la valoracin estadstica de los resultados,
problemas que comparte con el ADNmt. Como en ste, existe la necesidad para los
polimorfismos de cromosoma Y de grandes bases de datos poblacionales para estimar la
frecuencia de los haplotipos y se ha realizado un esfuerzo colaborativo a nivel mundial muy
importante en este sentido (www.ystr.org) que est coordinada por el Instituto de Medicina
Legal de la Universidad de Berlin.
STRs y SNPs del cromosoma X tambin estn siendo cada vez ms usados en la resolucin de
casos de paternidad difciles como herramientas complementarias a todas las anteriores.

6. SNPs y los mtodos de futuro

A diferencia de otros campos de la Gentica, los avances tecnolgicos en el rea forense

suelen tener una aplicacin a la realidad pericial relativamente lenta por la necesidad de
validacin previa y de incorporacin a programas de control de calidad.
Los polimorfismos de ms futuro, y ya en la mayora de los casos en una fase de validacin
avanzada son los ms simples, esto es los SNPs de cromosomas autosmicos. Estos poseen
una serie de propiedades que los hacen muy tiles en pruebas forenses como la posibilidad de
amplificar por PCR fragmentos muy pequeos, lo que les hace especialmente tiles en
material degradado y como la tasa de mutacin es muy baja son idneos para pruebas de
paternidad.
Frecuentemente, debido a la alta tasa de mutacin de los STRs, aparecen en las pruebas de
paternidad inconsistencias que parecen exclusiones pero que son debidas a mutaciones. Al
incluirlas en los clculos estadsticos la probabilidad de paternidad baja drsticamente. El uso
de paneles de SNPs est solucionando todos esos casos. Adems est demostrando ser
particularmente til en los casos en los casos de paternidad con relaciones familiares en el
grupo (por ejemplo, que los posibles padres sean dos hermanos), as como en paternidades
que se han de realizar a partir de material degradado (por ejemplo, tras exhumacin de los
restos seos del presunto padre).
El uso de microarrays de SNPs de alta densidad (con hasta un milln de SNPs) est
revolucionando tambin la investigacin de relaciones relativamente lejanas de parentesco
(to/sobrino por ejemplo) y est posibilitando comparaciones de relaciones de parentesco que
con los microsatlites no son posibles.

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Dado que el tamao de los productos amplificados puede ser mnimo, la eficacia de los SNPs
en material degradado y en bajo nmero de copias supera con creces a los STRs.
El nmero de SNPs que se necesitan a efectos forenses es relativamente bajo comparado con
otras aplicaciones de los SNPs en Gentica humana. Unos 50-60 SNPs de frecuencias
equilibradas tienen aproximadamente el mismo nivel de discriminacin que 12 STRs. El
grupo SNPforID (www.SNPforID.org) ha validado un set de 52 SNPs autonmicos que est
siendo muy empleado y tambin diversos set de SNPs para otras aplicaciones forenses de los
SNPs.
Hay paneles especficos para material degradado de SNPs situados en nucleosomas que son
estructuras nucleares especialmente protegidas y por ello con mayores posibilidades de xito
en el anlisis muestras muy pequeas o envejecidas. Tambin el uso de inserciones y
deleciones simples de un solo nucletido (indels), de los que hay paneles validados, estn
siendo muy usados porque resultan ms simples de analizar e interpretar.

Quizs la aplicacin ms novedosa de los SNPs es lo que se denomina Fenotipado Forense

por ADN, que incluye la determinacin del origen geogrfico, de las caractersticas fsicas y
de la edad de la persona que ha dejado una muestra biolgica.
Para determinacin de la ancestralidad se usan unos SNPs especficos denominados AIMs
(Marcadores Informativos de Ancestros) que tienen diferencias muy importantes entre
poblaciones. Este tipo de prueba la hemos empleado con xito por vez primera en los
atentados del 11-M de Madrid para predecir el origen geogrfico de perfiles no identificados
encontrados en objetos importantes para la investigacin judicial del caso. La eficacia del
mtodo es muy alta hasta el punto de poder predecirse con una elevada probabilidad en
muchos casos si una muestra es sureuropea o norteafricana, dos poblaciones tan prximas
geogrficamente y con una larga historia compartida.
Los SNPs son tambin importantes para la prediccin de caractersticas fsicas de un
individuo a partir de una muestra con fines de investigacin policial. As, a partir de un
vestigio biolgico, ya se puede decir con alta probabilidad el color de los ojos y se han
desarrollado paneles de SNPs al efecto as como herramientas matemticas para la prediccin.
Se est progresando mucho tambin en el anlisis del origen del fluido biolgico detectado
(esto es si es semen, esperma, saliva, sangre menstrual etc) mediante el anlisis de
microRNAs o expresin de mRNA.
Las tcnicas de secuenciacin de nueva generacin tambin estn produciendo una revolucin
al permitir el anlisis simultneo de STRs, SNPs para identificacin, AIMs y anlisis de
marcadores de caractersticas fsicas y tambin abriendo nuevas posibilidades para el anlisis
de ADN no humano (metagenmica, anlisis de suelos, anlisis de polen, trfico ilegal de
especies protegidas, etc). Con estas tecnologas mediante el anlisis masivo de genoma

13
completo, se ha logrado incluso diferenciar gemelos univitelinos, uno de los retos
tradicionales en el campo forense.
La secuenciacin masiva en paralelo (SMP), llamada tambin de nueva generacin, tiene la
ventaja de que las molculas de ADN se unen a un sustrato que puede ser analizado en
paralelo de forma independiente y masiva (de ah el nombre). En la SMP la preparacin del
molde de ADN no requiere necesariamente una etapa de amplificacin. Otras ventajas
adicionales sobre el mtodo convencional de Sanger son: la determinacin directa de la base
nucleotdica y la capacidad de juntar mltiples muestras de ADN en una nica carrera de
secuencia diferencindolas con adaptadores individuales. Las muestras se pueden analizar con
una gran cobertura y profundidad de lectura con lo que la sensibilidad en material degradado
se incrementa.
En esta revolucin tecnolgica sin fin se est avanzando tambin en secuenciadores de
molcula nica que tendrn un impacto en el futuro en el anlisis de muestras mezcladas.
Tambin un campo emergente es la determinacin a travs de marcadores de metilacin de la
edad del individuo que dej una muestra biolgica.
La metilacin de ADN regula la funcin de los genes y cerca de un 20% de la variacin de
metilacin en el genoma humano se correlaciona con la edad. Con ensayos de metilacin en
un grupo selecto de marcadores de metilacin nos hacemos una idea cada vez ms
aproximada de la edad del individuo que dej una muestra (el error medio es de menos de tres
aos).

3. OTROS ASPECTOS DEL USO DEL ADN EN MEDICINA FORENSE

1. ADN en bajo nmero de copias y mezclas de perfiles de ADN

La sensibilidad de las tcnicas actuales ha hecho posible que se puedan obtener perfiles de
ADN a partir de slo unas pocas copias (asir una prenda o un objeto unos pocos segundos ya
es suficiente para dejar un perfil). Por desgracia esto ha hecho ms compleja la interpretacin
de los resultados al aumentar el nmero de casos en los que existe una mezcla de perfiles de
ADN.
El anlisis de mezclas de ADN es pues una prctica habitual en la rutina forense. Su
interpretacin es delicada dado que se hace imposible diferenciar qu alelos pertenecen a cada
contribuyente a la mezcla. Si adems la mezcla est desequilibrada (uno de los contribuyentes
aport ms cantidad de fluido biolgico que el otro u otros) podemos cometer errores al
asignar alelos que en realidad son artefactos de la amplificacin (sttuters o bandas
tartamudas) o al no detectar alelos que realmente existen en la mezcla (drop out allico o
prdida allica).

14
Para solucionar los problemas de interpretacin de mezclas de perfiles se han creado
programas informticos que nos ayudan a la interpretacin de mezclas cuando no existe la
posibilidad de la separacin fsica de los perfiles genticos.

2. Automatizacin y rapidez del anlisis forense

Uno de los principales problemas en los laboratorios forenses es el gran nmero de datos
electrnicos que se generan regularmente. Desde que una muestra llega al laboratorio hasta
que se escribe el informe pericial son muchos los pasos que se dan y los resultados analticos
que se producen. Hemos de tener en cuenta el carcter judicial de las muestras que
analizamos, y como tales han de estar controladas en todo momento, siguiendo una cadena de
custodia tanto de los efectos como de las sub-muestras que se generan de ellos. Por tanto, en
los ltimos aos ha sido necesario desarrollar sistemas informticos que permitan el manejo
fcil y seguro de toda esta informacin generada: los LIMS (Laboratory Information
Management Systems). Estos sistemas nos permiten saber dnde estn en cada momento las
muestras que se analizan y en qu fase del anlisis se encuentran (trazabilidad), nos
proporcionan las herramientas necesarias para las revisiones administrativas de cada caso y
contienen mdulos analticos para estudios de ADN (comparacin y almacenamiento de
perfiles genticos, anlisis estadsticos, etc).
Las tcnicas de anlisis en s tambin estn automatizndose. Existen hoy en da robots para
extraer ADN de un elevado nmero de muestras en un par de horas, aunque an no estn
preparados para muestras crticas.
Los sistemas miniaturizados compactos (lab-on-a-chip) estn actualmente en fase de diseo y
experimentacin. Han sido de muy difcil desarrollo al basarse, aun actualmente, la
identificacin en STRs lo que exige recorridos electroforticos de cierta distancia pero han
cobrado un nuevo auge con la potencial aplicacin de los SNPs. En el futuro prximo se
dispondr de sistemas que se puedan llevar a la escena del crimen y estn conectados de
forma directa con bases de datos. En algunos pases, dada la insuficiencia actual de este tipo
de aproximaciones, se utilizan laboratorios mviles que se llevan a la escena del crimen para
tratar de minimizar el tiempo de respuesta.

4. APLICACIONES MDICO-LEGALES DE LOS POLIMORFISMOS DE ADN.

1. Aplicaciones en investigacin de la paternidad, identificacin y criminalstica

Como hemos dicho en la introduccin, el anlisis de los polimorfismos de ADN ha supuesto
un cambio radical en las posibilidades del laboratorio de Gentica forense y Medicina legal.

15
En la investigacin de la paternidad antes del desarrollo de esta nueva metodologa, se
solucionaban la casi totalidad de los casos con los marcadores clsicos. Sin embargo, el uso
de polimorfismos del ADN ha simplificado la prueba, la ha hecho ms barata y ofrece,
adems, mayor posibilidad en casos difciles como aquellos en los que el presunto padre ha
fallecido y hay que realizar la investigacin de la paternidad a travs de restos cadavricos o
de familiares directos del mismo, o en los diagnsticos prenatales de paternidad (en casos de
violacin, por ejemplo). Todos estos casos eran difcilmente abordables con la metodologa
anterior al descubrimiento de los polimorfismos de ADN repetitivo.
En identificacin de restos seos la revolucin ha sido tambin notable ya que la mayora de
los casos se pueden resolver a travs del anlisis del ADNmt y en muchos casos se pueden
incluso obtener datos con STRs. As se han resuelto numerosos casos de gran importancia en
todo el mundo como la identificacin de desaparecidos en la dictadura argentina, y muchos
desastres de masas y enigmas histricos han sido y estn siendo investigados.
En criminalstica biolgica la revolucin ha sido total, particularmente en el anlisis de
manchas de esperma, de pelos y cabellos, saliva, o manchas minsculas de sangre, dado que,
en estos vestigios, se poda dar muy poca informacin sobre la persona a quien pertenecen
utilizando marcadores clsicos.
Hoy a partir de un nico cabello o de un mnimo nmero de espermatozoides recogidos en
cavidad bucal o una mancha envejecida y minscula de sangre se puede, en muchas
ocasiones, aportar datos de gran valor sobre la individualidad de ese vestigio, lo que era
totalmente impensable hace pocos aos.
Est siendo especialmente importante la aplicacin del polimorfismo del ADN en los delitos
contra la libertad sexual, delitos en los que ante la negativa del presunto culpable no suelen
existir ms pruebas indiciarias que las proporcionadas por posibles restos de esperma en
prendas y en cavidad vaginal o anal. El esperma es un vestigio idneo para el anlisis de ADN
y los marcadores clsicos apenas aportaban datos de utilidad salvo casos excepcionales.
Y sobre todo se puede analizar ADN a partir del simple contacto con un objeto aunque la baja
cantidad de ADN y la contaminacin hacen muchas veces difcil la interpretacin de los
hallazgos.

2. Las bases de datos de ADN con fines de identificacin criminal

El potencial del ADN como medio de identificacin hizo que pronto se propusiese la
realizacin de bancos de datos de perfiles de ADN de delincuentes.
El primer pas con bases de datos de perfiles de ADN y en el que son ms amplias es el Reino
Unido. As se implantaron en Inglaterra en 1995, seguido de Irlanda del Norte y Escocia en
1996, Nueva Zelanda tambin en 1996, Holanda, Eslovaquia y Austria en 1997 y Estados

16
Unidos, Alemania y Eslovenia en 1998 fueron los siguientes pases y poco a poco todos los
dems pases avanzados las fueron implantando y desarrollando una legislacin especfica.
Hay legislacin especfica sobre bases de datos de ADN en la mayora de los pases de la
Unin Europea con la excepcin de Italia. En Espaa estn reguladas por Ley Orgnica
10/2007, de 8 de octubre, reguladora de la base de datos policial sobre identificadores
obtenidos a partir del ADN. Tambin en diciembre de 2008 se aprob la creacin de la
Comisin Nacional para el uso forense del ADN.
La primera base de datos y la ms amplia es la del Reino Unido y contiene unos tres millones
de perfiles de ADN, introducindose ms de 1000 perfiles diarios de sospechosos, convictos o
muestras encontradas en el lugar de los delitos.
Existe una gran diversidad legislativa entre pases europeos en relacin con quin puede ser
incluido en las bases de datos, el tiempo que deben permanecer los perfiles en la base de datos
despus de la puesta en libertad de los individuos, sobre si se conserva muestra de ADN o
slo perfil de ADN, etc.
En Espaa se incluyen en las bases de datos perfiles procedentes de delitos contra las
personas (homicidios, delitos contra la libertad sexual, narcotrfico, terrorismo y robo con
violencia). Solo se pueden obtener muestras de los sospechosos por orden judicial o con
consentimiento informado con asistencia letrada.
Las bases de datos han demostrado su eficacia en la investigacin de delitos con alta tasa de
reincidencia y particularmente los delitos contra la libertad sexual y delitos contra la
propiedad. La limitacin de su uso obedece al necesario equilibrio entre seguridad y libertad
individual (en el sentido de autodeterminacin de la informacin y control del ciudadano).
Las bases de datos de ADN incluyen perfiles de ADN de loci microsatlites que previamente
se han estandarizado. En Europa se incluye en todas las bases al menos todos los marcadores
ESS (European Standard Set). Las bases de datos estn muy protegidas en el acceso a la
informacin y se separan en ficheros para garantizar el anonimato excepto de aquella
coincidencia de perfiles que se est buscando.
Los perfiles contienen informacin sensible (se pueden obtener datos de parentesco por
ejemplo y datos sobre posibles cromosomopatas, especialmente en cromosomas sexuales)
por lo que las bases de datos deben siempre estar legisladas y protegidas adecuadamente.
Los pases del mundo en donde actualmente estn implantadas se pueden ver en la Figura 3

17
 Figura 3: Pases con bases de datos de ADN con fines de investigacin criminal
operativas en 2016

5. EL VALOR DE LA PRUEBA DE ADN

Introduccin. El concepto de probabilidad

Seguramente el avance ms importante en la historia de las Ciencias Forenses haya sido la

introduccin de la valoracin estadstica de la prueba en los informes forenses.
En la ciencia hay cambios que son aditivos, y que suponen un avance sobre una idea
establecida (por ejemplo los STRs sobre los minisatlites o la reciente introduccin de los
SNPs) y hay cambios disruptivos que son ms trascendentes y que suponen un cambio total
de paradigma (como ocurri con el descubrimiento y aplicacin forense de los polimorfismos
de ADN) y que son ms difciles de introducir pues suponen cambios importantes en las
organizaciones y en los conceptos.
La valoracin estadstica de la prueba es uno de estos ltimos y supuso el paso de una
medicina forense artesanal basada en la intuicin y experiencia, que aplica modelos
heursticos y que da un valor absoluto a la opinin del perito, a una medicina forense basada
en la evidencia, en la que la opinin se basa en datos, en el razonamiento y en el que la
incertidumbre de la opinin se cuantifica de forma probabilstica.
Porque efectivamente cualquier opinin y decisin tiene incertidumbre y la probabilidad no es
ms que una medida de la incertidumbre de un suceso. Es como una escala en la que de
acuerdo con la primera ley de la probabilidad se le otorga un valor 0 a un suceso imposible y
1 a un suceso que es seguro que ocurrir. 0,5 sera un suceso tan probable como improbable.
Es frecuente en textos jurdicos asimilar probabilidad con incertidumbre, cuando en realidad
se trata de una medida de esa incertidumbre, que no siempre se puede calcular en la

18
diversidad de pruebas periciales pero que, afortunadamente, en el caso de la prueba de ADN
hemos aprendido a hacerlo.
La idea de probabilidad surgi hace muchos siglos ligada a los juegos de azar y se introdujo
pronto un concepto clsico de probabilidad como un cociente entre los casos favorables y
casos posibles de un suceso (por ejemplo un lanzamiento de un dado). Pronto se vio que no
siempre un suceso se poda ensayar pero si, a veces, se poda contar las veces que ocurra (por
ejemplo para determinar la probabilidad de que nazca un nio o una nia contar el sexo en un
nmero de nacimientos) y as se introdujo un concepto de probabilidad basado en frecuencias.
Sin embargo las probabilidades que utilizamos a diario no entran en ninguno de estos
conceptos y lo que hacemos es estimar la probabilidad de un suceso, que es modificada por
una serie de circunstancias que nos van sucediendo o por una serie de pruebas que vamos
obteniendo.
El matemtico ingls Bayes elabor un teorema (Teorema de Bayes) que permite calcular la
probabilidad a posteriori de un suceso, a partir de una probabilidad inicial (que se denomina a
priori) y que tiene en cuenta las probabilidades de circunstancias que influyen y que se
denominan condicionadas.
La estadstica bayesiana es la base de la teora de la decisin y es el principio lgico-
matemtico que utilizamos en Gentica Forense y que debe utilizar el juez si quiere combinar
la probabilidad que indica el perito en su informe con el valor a priori que sobre la
culpabilidad e inocencia del acusado tenga antes de la prueba pericial.
Pero el juez tiene que utilizar probabilidades? No tiene que tomar una decisin fuera de
toda duda razonable?
Lo que muchas veces se ignora es que la sola idea de duda razonable implica probabilidad. El
juez toma decisiones puramente probabilsticas y solo cuando la incertidumbre sobre la
culpabilidad es tan baja que en un contexto determinado (que no es independiente de la
magnitud de la pena) pasa un umbral concreto, es cuando se pronuncia a favor de la
culpabilidad.

La interpretacin de la prueba biolgica

Cundo se analizan polimorfismos genticos en manchas biolgicas y se trata de ver si

corresponden a un individuo, cuyo ADN tambin es analizado, pueden suceder dos
situaciones: que no coincidan varios marcadores analizados o que coincidan todos.
En el primer caso podemos decir que la mancha analizada no corresponde al individuo con un
margen de error prcticamente despreciable y que depende, en todo caso, de la seguridad
analtica del laboratorio, de ah la importancia de la acreditacin y los controles de calidad.
El problema se presenta cuando coinciden los grupos analizados en el individuo y la mancha.

19
Antes de nada hay que aclarar que aunque coincidan varios marcadores, siempre existir una
incertidumbre sobre si la mancha pertenece al individuo, que, en muchas ocasiones, puede ser
mnima, pero siempre es cuantificable y no puede hablarse en ningn caso de incriminacin o
seguridad absoluta. Siempre se ha de proceder a la valoracin probabilstica de la
coincidencia de perfiles de ADN.
La necesidad de la valoracin probabilstica es clara: Imaginemos que una mancha de sangre
es encontrada en la escena del crimen, y que existe un acusado cuya sangre se analiza. En
ambos, mancha y acusado, se estudia el grupo AB0 y los dos poseen el grupo A. Como quiera
que el grupo A lo posee cerca del 50% de los individuos, intuitivamente ya se entiende que
esa coincidencia tiene escaso valor probatorio.
Pero imaginemos que se analiza un polimorfismo de ADN, y que tanto la mancha como el
acusado tienen el genotipo 9-11, que lo posee una persona de cada cien. Intuitivamente ya se
entiende que la prueba cientfica tiene ahora un valor superior que en el caso anterior. Pero en
este ltimo caso la prueba se puede presentar ante el juez, como ahora veremos, de forma muy
diferente.
La acusacin puede presentar el caso as: "El anlisis del laboratorio forense tiene en este caso
una enorme importancia. El grupo encontrado lo posee slo el uno por cien de la poblacin,
de modo que slo hay un uno por ciento de probabilidades de que la mancha provenga de otro
que no sea el acusado. Es decir, solo hay el uno por ciento de probabilidades de que algn
otro haya cometido el crimen, de modo que el acusado tiene un 99% de probabilidades de ser
culpable".
La defensa puede al contrario decir: "La prueba del laboratorio forense tiene una importancia
muy escasa. Slo el uno por ciento de la poblacin posee ese grupo de ADN, pero en una
ciudad como esta...(supongamos que el crimen se cometi en Madrid), con al menos 500.000
personas en edad de cometer el crimen, ese grupo sera encontrado en 5000. El ADN muestra
pues que el acusado es una de las 5000 personas de la ciudad que pudo haber cometido el
crimen. Con slo una posibilidad en 5000 no solo es que no se pueda condenar a nadie sino
que tiene muchsimas ms posibilidades de ser inocente".
Ninguno de estos argumentos es correcto de forma aislada y han sido denominados la falacia
del fiscal y la falacia de la defensa, por Thompson y Schumann quienes, adems, demostraron
que presentando la prueba de forma aparentemente asptica (esto es que el perito diga
escuetamente que el grupo lo posee el uno por ciento de la poblacin), un elevado porcentaje
de individuos cae espontneamente en una de las dos falacias. Si adems se presenta
simplemente uno de los dos argumentos la mayora de las personas piensan que es correcto.
Pero, cul es la posicin correcta?

20
La verdad es que la solucin dista mucho de ser intuitiva y la manera correcta de valorar la
prueba necesita ser analizada y comprendida y se necesita una valoracin estadstica que debe
de ser presentada y comunicada de forma adecuada.
Una posibilidad podra ser utilizar porcentajes, pero no se debe porque a menudo en este caso
se confunden los porcentajes entendidos como frecuencia con el porcentaje a posteriori de
culpabilidad. Por ejemplo se podra escuchar: este perfil de ADN lo tiene el 1% de la
poblacin, de modo que solo uno de cada 100 tiene ese perfil por lo que el acusado tiene el
99% de posibilidades de ser culpable.
Esta es la tpica falacia del fiscal. Que el perfil de ADN lo tenga el 1% de la poblacin no
significa ni mucho menos que el acusado tenga el 99% de probabilidad de ser culpable. En la
falacia el 1% se est refiriendo nicamente a la medida de una caracterstica (gentica en este
caso) en la poblacin y en el 99% (deducido al restar el 1% al 100%) se estn teniendo en
cuenta hechos que ni mucho menos estn probados con slo el anlisis gentico (que el
acusado estuvo en la escena, que dej su ADN y que adems cometi el delito). Por tanto, con
este razonamiento incorrecto el perito est suplantando al juez, est afirmando que por el
hecho de la coincidencia el acusado es culpable sin tener ninguna otra prueba, en definitiva,
est estimando un a priori de culpabilidad que el perito no puede ni tiene porqu saber.
Cuando un perito dice por ejemplo (que nunca debera) que la probabilidad de paternidad es
del 99,99% lo hace partiendo de una probabilidad a priori del 50% (tan posible que sea el
padre como que no lo sea), pero si el a priori es ms bajo (si el juez tiene pruebas claras de la
no paternidad) la probabilidad a posteriori, despus de la prueba de ADN sera tambin
considerablemente ms baja. Desgraciadamente an se utiliza la probabilidad a posteriori en
pruebas de paternidad y aunque se especifica en el informe que se calcula con una
probabilidad a priori de 0,5 poca gente entiende la importancia del valor a priori, de modo
que, con frecuencia, se comprende mal ese valor.
Por fortuna en materia penal se consigui evitar su uso (aunque no sin esfuerzos).
Tambin podramos utilizar una presentacin de la probabilidad de coincidencia de perfiles en
forma de frecuencias (esto es, uno de cada 100 o uno de cada milln tienen ese perfil de
ADN) pero no lo hacemos porque est demostrado que con su empleo es muy fcil caer en la
falacia del fiscal y de hecho se incurre en ella intuitivamente.
Para poder realizar una valoracin correcta es necesario recurrir al teorema de Bayes que,
como dijimos, sirve para conocer las probabilidades finales de un suceso a partir de las
probabilidades iniciales, dada cierta informacin o informaciones adicionales obtenidas. El
mtodo proporciona una forma adecuada de incorporar informacin previa de un suceso
adems de permitir incorporar informacin posterior cuando sta sea accesible y as con ella,
adems, el perito es capaz de ofrecer al juez los resultados de la prueba gentica de una forma

21
ms cmoda para l, con el fin de que ste pueda combinar la informacin obtenida en la
prueba de ADN con otras informaciones no genticas obtenidas durante el proceso.
Todo ello solo es posible valorando la prueba con una lgica bayesiana que permite, adems,
evaluar los resultados de la analtica desde la perspectiva equilibrada de la acusacin y de la
defensa, mediante un cociente llamado Razn de verosimilitud (RV) o cociente bayesiano de
probabilidad.
Para ello es necesario enunciar dos hiptesis sobre los hechos, por ejemplo:

Ha (hiptesis de la acusacin) = la mancha hallada en la escena del

crimen pertenece al acusado
Hd (hiptesis de la defensa) = la mancha hallada en la escena del crimen
NO pertenece al acusado

La RV nos mide la probabilidad de haber obtenido los resultados del anlisis gentico de la
prueba y de la muestra del acusado (sea cual sea este resultado, es decir, coincidan sus perfiles
genticos o no) bajo las dos hiptesis mencionadas. En trminos ms entendibles, nos mide
cuntas veces es ms probable haber obtenido los resultados genticos si suponemos que el
acusado dej la prueba en comparacin al supuesto de que otro individuo dej la mancha en la
escena del delito. Y se formula de la siguiente forma:

P(E/Ha) probabilidad del hallazgo cientfico suponiendo que la mancha es del acusado
RV = --------- = -------------------------------------------------------------------------------------
P(E/Hd) probabilidad del hallazgo suponiendo que la mancha NO es del acusado

Siendo E = prueba (el resultado gentico en la muestra hallada en la escena y en la muestra

del acusado) y P = probabilidad.

Supongamos que el perfil gentico hallado en la mancha de la escena coincide perfectamente

con el perfil hallado en la muestra indubitada del acusado. Evidentemente, bajo el supuesto de
que el acusado dej la mancha (Ha), encontraremos su perfil gentico en la evidencia con
probabilidad 1 (con probabilidad del 100% en forma de porcentaje, es decir, siempre) pues no
puede aparecer en la mancha un perfil gentico distinto al del acusado si es l el dueo del
fludo biolgico que apareci en la escena. Por tanto, el numerador del cociente de la RV ser
1 en este caso: P(E/Ha) = 1.
Pero bajo el supuesto de que la mancha de la escena NO pertenece al acusado, la probabilidad
de la evidencia cambia. Si la mancha no es del acusado tiene que pertenecer a alguien de

22
iguales caractersticas al acusado (con el mismo perfil gentico) y por tanto esta probabilidad
se traduce en la frecuencia con que ese perfil gentico aparece en la poblacin (por ejemplo 6
de cada 100 personas). Por tanto, el denominador del cociente de la RV ser en este ejemplo:
P(E/Hd=0,06)
Ahora slo tenemos que calcular la RV total: RV = 1/0,06 = 16,6.
Pero qu significa realmente este resultado? Significa que es 16,6 veces ms probable hallar
el perfil gentico encontrado en la mancha de la escena si suponemos que la mancha la dej el
acusado (Ha) que si suponemos que la dej otra persona (Hd). Es decir, la evidencia muestra
un resultado a favor de la hiptesis de la acusacin (16,6 veces ms a favor de la acusacin
respecto a la defensa).
Cuando el resultado de la RV es igual a 1, la evidencia es neutra, es decir, apoya por igual la
hiptesis de la acusacin y la de la defensa. Y finalmente, cuando la RV es menor que 1, la
evidencia apoya la hiptesis de la defensa. Por tanto, por medio de la RV, el juez puede
hacerse una idea del significado real de la prueba gentica. En muchos casos, las RV
obtenidas con la prueba gentica van a ser abrumadoras (RV del orden de millones, es decir
muy a favor de la hiptesis de la acusacin), pero veremos en apartados posteriores que esto
no es siempre as, pues no siempre se logran buenos resultados en el anlisis de la evidencia
biolgica (por el mal estado de conservacin del ADN o por la poca cantidad que contiene).
Por otro lado, a veces el genetista forense se ve obligado a analizar otros tipos de ADN
distintos a los analizados rutinariamente, y como veremos, estos otros tipos de ADN no tienen
un poder de discriminacin tan elevado.
Pero no acaban aqu las ventajas de la valoracin de la prueba desde el punto de vista
bayesiano. Apuntbamos al principio de este apartado que esta manera de evaluar la prueba
permite al juez combinar los resultados del anlisis gentico con otros resultados no genticos
obtenidos tras todo el proceso. Se logra simplemente multiplicando el valor obtenido en la RV
por la probabilidad de la culpabilidad antes de la prueba pericial (llamada probabilidad a
priori). Esta multiplicacin resulta en lo que llamamos probabilidad a posteriori y representa
la probabilidad de la culpabilidad teniendo en cuenta la prueba pericial, es decir,
exactamente lo que el juez quiere saber. Su formulacin es muy sencilla:
Pa posteriori = Pa priori x RV
Para poder calcular la probabilidad a priori, el juez tiene que pensar en toda la informacin de
la investigacin en forma de apuesta. Al llegar la prueba pericial el juez tiene una idea de la
culpabilidad o no culpabilidad del acusado despus de todo el proceso, de las pruebas
testificales y otras pruebas periciales. Se puede plasmar esta informacin en forma numrica,
por ejemplo en forma de apuesta (1000 a 1 a favor de la inocencia si el juez considera que el
acusado es inocente con muchas posibilidades, 100 a 1 a favor de la culpabilidad por
ejemplo).

23
Para valorar, de forma objetiva, la prueba cientfica, el juez no tendra ms que multiplicar- y
aqu es donde el teorema de Bayes se aplica- su grado de creencia previo sobre la culpabilidad
del acusado, expresado en forma de apuesta, por la razn de verosimilitud (RV) como se ve a
continuacin:

A priori RV A posteriori
1000 a 1 a favor de inocencia 100 10 a 1 a favor de inocencia
(0,001 x 100 = 10)
1 a 1 (mismas posibilidades de 100 100 a 1 a favor de
culpabilidad o inocencia) culpabilidad (1 x 100)
1000 a 1 a favor de culpabilidad 100 100000 a 1 a favor de
culpabilidad (1000 x 100 =
100000)

As, por ejemplo, si el juez piensa que el acusado es bastante ms culpable que inocente (por
ejemplo 1000 a 1 a favor de la culpabilidad) y adems se analiza una mancha de sangre
hallada en la ropa de un acusado y el perfil gentico coincide con el de la vctima (por
ejemplo con una RV= 1 milln), la probabilidad a posteriori de culpabilidad se ve muy
incrementada y es de mil millones a favor de la culpabilidad).
Por el contrario, si no existe prueba alguna que incrimine al acusado, solo una coincidencia
fortuita en la base de datos y el juez estima que puede haber al menos 10 millones de personas
en edad de cometer el crimen con ese perfil en la poblacin, si el perito indica que la RV es de
5 millones a 1 a favor de la hiptesis de la acusacin (lo que podra parecer una prueba
abrumadora a favor de la culpabilidad), multiplicando ambos factores el acusado tiene el
doble de posibilidades de ser inocente, esto es 2 a 1 a favor de la inocencia, multiplicando
como hemos hecho en el caso anterior.

Otra de las ventajas de este enfoque es que delimita perfectamente el papel del juez y del
perito. El juez es el que debe valorar la prueba en conjunto; y con la aproximacin bayesiana
se evita que el perito haga las funciones de juez. El perito genetista no dispone de la
informacin no gentica que el juez conoce y no es funcin del experto emitir una opinin
sobre la culpabilidad o inocencia del acusado.
Pero no es siempre la probabilidad altsima en la prueba de ADN en caso de coincidencia de
perfiles?
En la mayor parte de los casos es ciertamente elevadsima pero no siempre. Cuando se utiliza
ADN mitocondrial o polimorfismos de cromosoma Y es muchas veces ms baja y sobre todo

24
puede ser baja en el caso de perfiles obtenidos de muestras mezcladas, con muy poca cantidad
de ADN o de mala calidad, que representan una de la mayores dificultades para el clculo
estadstico para los peritos.
Los efectos debido al azar que se producen en la PCR (un mtodo para multiplicar la cantidad
de ADN de la que se dispone) producen artefactos que complican la evaluacin estadstica de
los perfiles. Sin embargo, en los ltimos aos, fruto de un gran esfuerzo cientfico se ha
desarrollado un marco matemtico muy robusto de interpretacin de este tipo de perfiles, lo
que unido al desarrollo de software libre y al gran impulso de estandarizacin, hace que
seamos capaces en la actualidad de proporcionar una razn de verosimilitud (esto es, una
probabilidad de coincidencia de perfiles equilibrando la visin de la acusacin y la visin de
la defensa) en muchos de estos casos complejos, pero, ciertamente, no siempre se consiguen
probabilidades (RV) altas.

Ha mejorado mucho la capacitacin de los peritos en el clculo probabilstico, y la valoracin

estadstica es hoy una parte fundamental de los controles de calidad.
Tenemos que mejorar en la comunicacin de los resultados, en las que a veces
afortunadamente cada vez ms infrecuentemente- se cometen errores.
En conclusin, tan importante como la revolucin que ha producido en el campo forense el
estudio del ADN, ha sido el dar el paso de cuantificar estadsticamente el valor de la prueba
cientfica.
No todas las pruebas forenses, ni en todas las pruebas incluso de gentica forense podemos
dar un valor de probabilidad, pero cuando la podemos dar (que es en la mayora de los casos
de las pruebas de ADN) se pasa de una opinin de un experto (una prueba subjetiva) a una
prueba objetiva, esto es, unas conclusiones cuya incertidumbre inherente siempre a cualquier
opinin- puede ser objetivamente calculada.
El valor de la opinin de un experto depende de muchos factores, entre ellos la cualificacin y
experiencia del mismo. En una evidencia cientfica el valor de la opinin es siempre
objetivable y cuantificable.
El valor que la prueba de ADN es habitualmente muy elevado pero en algunas ocasiones no
tanto, y es esencial que los peritos calculen correctamente ese valor y lo comuniquen
correctamente, y del mismo modo es esencial que los jueces lo entiendan correctamente y lo
puedan valorar de forma adecuada en el conjunto de las pruebas. La valoracin correcta de la
prueba contiene muchos matices como la poblacin de referencia, el uso en algunos tipos de
pruebas de valores a priori y es especialmente fcil caer en paradojas lgicas que llevan a una
mala interpretacin.
Esto no se puede hacer sin una preparacin adecuada y por ello es clave tanto el
entrenamiento de los peritos en el clculo correcto de la probabilidad como en su

25
comunicacin y, por parte de los juristas y especialmente los jueces en la interpretacin de ese
valor y en conocer como incorporarlo de forma correcta a otras pruebas para la toma final de
una decisin.

6. LA ESTANDARIZACIN Y EL CONTROL DE CALIDAD

Ms importante que todo el desarrollo cientfico de la prueba de ADN ha sido en mi opinin

el profundo cambio conceptual que ha experimentado la Ciencia forense de mano de la
Gentica forense en las dos ltimas dcadas.
Este cambio conceptual afecta a dos aspectos: uno, el acabamos de comentar, de valoracin
estadstica de la prueba y el segundo la necesidad de una estandarizacin no slo para hacer
posible la comparacin de resultados entre los laboratorios sino para probar la calidad del
laboratorio y de sus resultados.
Este cambio representa el paso de mtodos subjetivos con opiniones basadas en la experiencia
y en la intuicin y que dan un valor absoluto a las mismas, al cientfico moderno con
opiniones basadas en la evidencia cientfica, en el razonamiento y que sabe que todas tienen
incertidumbre y que sta se puede cuantificar.

Pero, por qu son los estndares tan importantes en Gentica forense?

1. Controles de calidad
Sin un acuerdo en estndares es imposible gestionar controles de calidad y estos son cada vez
ms necesarios en todos los laboratorios forenses.
2. Segundas opiniones o contrapericias
Si cada laboratorio utiliza los marcadores que quiere o les denomina de forma diferente a
otros laboratorios, no habra forma de valorar los datos que un laboratorio emite,
impidindose la posibilidad de una contrapericia.
3. Validacin de procedimientos
Un procedimiento es vlido cuando la comunidad cientfica as lo establece. Los
procedimientos han de ser comprobados por los cientficos, validados por las comisiones
apropiadas y establecidos estndares para su uso.
4. Experiencia
Una de las mayores ventajas en ponerse de acuerdo y establecer estndares comunes, es el
conocimiento que se deriva del uso de sistemas concretos que redunda en beneficios
indudables para su aplicacin en la prctica.
As, gracias al uso de marcadores comunes, podemos tener una mejor estima de frecuencias
poblacionales y conocer la existencia o no de problemas gentico-poblacionales para sistemas

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concretos, podemos conocer con mayor exactitud la tasa de mutacin o la existencia de alelos
raros y una estima eficaz de su frecuencia, acumularemos ms datos sobre la estructura de
esos sistemas, etc.
5. Comparacin de bases de datos poblacionales e integracin de bases de datos
criminales comunes
El establecimiento de estndares comunes permite comparar datos y permite usar e integrar
bases de datos de frecuencias.
Adems la mayor movilidad internacional de los delincuentes especialmente en delitos como
terrorismo y crimen organizado hace conveniente el establecimiento de bases de datos con
fines de identificacin criminal comunes que slo se lograr con el establecimiento de los
estndares adecuados.
Los estndares en el laboratorio forense pueden ser agrupados en estndares tcnicos y de
procedimiento.
Los estndares tcnicos incluyen el tipo de marcadores genticos que deben de ser usados, su
nomenclatura, la metodologa vlida para su anlisis, los mtodos estadsticos utilizados para
la valoracin de la prueba, la elaboracin del informe final y su comunicacin.
Las estndares de procedimiento incluyen todos aquellos necesarios para una acreditacin de
laboratorios e incluyen aspectos como la organizacin del laboratorio, el personal (su
formacin, entrenamiento especfico, experiencia, responsabilidades, etc), la documentacin y
control de las pruebas, los protocolos de laboratorio, el calibrado y mantenimiento de los
equipos, los controles externos e internos, las auditoras externas y su frecuencia, etc.
En cuanto a los estndares tcnicos y a pesar del nmero de marcadores y estrategias que hoy
da existen para el anlisis de polimorfismos de ADN existe una tendencia hacia el uso de
marcadores comunes. Esto es posiblemente debido a los esfuerzos de estandarizacin de
algunos grupos, a la existencia de kits comerciales para el anlisis de ADN con fines forenses,
a la influencia de algunos grupos lderes en el campo y tambin al decidido esfuerzo de los
genetistas forenses por conseguir estndares comunes y a las pruebas de suficiencia
(proficiency testing) que slo admiten un nmero determinado de sistemas.
La mayora de los laboratorios en el mundo siguen las recomendaciones de la Sociedad
Internacional de Gentica Forense (ISFG, International Society for Forensic Genetics),
sociedad que agrupa a la casi totalidad de peritos a nivel mundial, lo que facilita enormemente
la estandarizacin y lo que implica que todos los laboratorios usen la misma nomenclatura.
La estandarizacin tcnica estaba ya contemplada por el Consejo de Europa en su
Recomendacin R (92)1 de 10 de febrero de 1992 sobre El uso de anlisis de ADN en el
marco de la Justicia Penal que estableci en su artculo 10:

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 Los estados miembros promocionarn la estandarizacin de los mtodos de ADN
tanto a nivel nacional como internacional. Esto lleva involucrado la adecuada colaboracin
interlaboratorial en la validacin de los procedimientos analticos y de control
Todos los grupos de trabajo de la ISFG (www.isfg.org) contribuyen de forma decisiva a la
estandarizacin y al control de calidad, pero sin duda el Grupo de Espaol y Portugus
(GHEP-ISFG) es uno de los ms activos y el que mejor sistema de pruebas de suficiencia
posee a nivel mundial. En el se integran ms de 100 laboratorios de Espaa, Portugal y de la
totalidad de los pases iberoamericanos.
De los grupos de estandarizacin ms globales destacan en Norteamrica el grupo SWGDAM
(Scientific Working Group for DNA Analysis and Methods) y en Europa los grupos EDNAP
(European DNA Profiling Group) y grupo de trabajo de ADN de ENFSI (European
Network of Forensic Science Institutes).
En este sentido la Comisin de ADN de la ISFG trata de coordinar estos esfuerzos y emite
regularmente recomendaciones para el uso de polimorfismos de ADN en la prctica forense.
La comisin de ADN de la ISFG est integrada por el board de la ISFG junto con
representantes de los principales grupos de estandarizacin (EDNAP-STADNAP y
SWGDAM) y expertos externos elegidos segn los aspectos concretos que se traten. Un
listado de las recomendaciones de la Comisin de ADN pueden encontrarse en la web de la
ISFG (http:/www.isfg.es).

Bibliografa
Bogusz MJ (2008) Handbook of Analytical Separations. Forensic Science, vol. 2.
Amsterdam: Elsevier, Academic Press.

Butler JM (2010) Fundamentals of Forensic DNA Typing, ch. 3. New York: Elsevier
Academic Press.

Butler JM (2012) Advanced Topics in Forensic DNA Typing: Methodology. New York:
Elsevier Academic Press.

Evett I, Weir B.S (1998). Interpreting DNA Evidence, Sinauer Associates Inc. Sunderland,
Massachussets, USA

Freire-Aradas A, Phillips C, Mosquera-Miguel A, Girn-Santamara L, Gmez-Tato A,

Casares de Cal M, lvarez-Dios J, Ansede-Bermejo J, Torres-Espaol M, Schneider PM,
Popiech E, Branicki W, Carracedo , Lareu MV. Development of a methylation marker set
for forensic age estimation using analysis of public methylation data and the Agena
Bioscience EpiTYPER system. Forensic Sci Int Genet. 2016 Sep;24:65-74.

Jeffreys AJ, Wilson V, and Thein SL (1985) Hypervariable minisatellite regions in human
DNA. Nature 314: 6773.

28
Kayser M and de Knijff P (2011) Improving human forensics through advances in genetics,
genomics and molecular biology. Nature Reviews Genetics 12(3): 179192.

Maroas O, Schtig J, Ruiz Y, Phillips C, Carracedo , Lareu MV. The genetics of skin, hair,
and eye color variation and its relevance to forensic pigmentation predictive tests. Forensic
Sci Rev. 2015 Jan;27(1):13-40.

Phillips C, Prieto L, Fondevila M, Salas A, Gmez-Tato A, Alvarez-Dios J, Alonso A,

Blanco-Verea A, Brin M, Montesino M, Carracedo A, Lareu MV. Ancestry analysis in the
11-M Madrid bomb attack investigation. PLoS One. 2009 Aug 11;4(8):e6583.

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