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Artculo especial Arch Argent Pediatr 2011;109(3):237-244 / 237

Terapia gnica: los cidos nucleicos como


frmacos. Mecanismos de accin y vas de
entrega a la clula
Gene therapy: nucleic acids as drugs. Action mechanisms and
delivery into the cell

Dr. Brian M. Cavagnaria

RESUMEN El propsito de este artculo es


La terapia gnica involucra la transferencia de
compartir algunos de los ambiciosos
material gentico a una clula para conseguir un
beneficio teraputico, por lo que ofrece una nue- objetivos de la TG, as como comentar
va opcin para el tratamiento de muchas pato- cules son las molculas teraputicas
logas. En este artculo se presentan algunos de que se introducen en la clula y las
los nuevos frmacos a base de cidos nucleicos,
distintas formas de entrega del mate-
como plsmidos, aptmeros, oligonucletidos,
ribozimas y pequeos cidos ribonucleicos de rial gentico utilizadas para cumplir
interferencia. Se comenta el mecanismo y nivel su objetivo.
de accin de estos agentes teraputicos y se dis-
cuten sus varias vas de administracin, como
TERApIA GNICA
liposomas, polmeros catinicos, transferencia
directa de cidos nucleicos y vectores virales. La TG se basa en la introduccin
Palabras clave: terapia gnica, ribozimas, aptme- de nuevo material gentico dentro de
ros, oligonucletidos, vectores virales. una clula para conseguir un beneficio
teraputico.2,3
SUMMARY
Cuando la base molecular de la en-
Gene therapy involves the transference of new
genetic material to the cell in order to obtain a fermedad a tratar consiste, por ejem-
therapeutic benefit, offering a new option for plo, en la ausencia de un producto
the treatment of various diseases. In this article, determinado debido a un gen nativo
some of these nucleic acid-based drugs, such as
defectuoso (Factor IX, en la hemofilia
plasmids, aptamers, oligonucleotides, ribozymes
and small interfering ribonucleic acid, are pre- B; distrofina, en la distrofia de Duch-
sented. Their mechanism and level of action is enne, etc.), se podra introducir di-
commented and several delivery systems, such rectamente una copia adicional del
as liposomes, cationic polymers, direct nucleic
gen normal para restablecer la fun-
acid transfer and viral vectors, are also discussed.
Key words: gene therapy, ribozymes, aptamers, oli- cin. Esto se conoce como suplemen-
gonucleotides, viral vectors. tacin gnica y es la estrategia que la
mayora de los mdicos generalistas
considera como sinnimo de TG. Pe-
INTRODUCCIN ro la TG involucra tambin otras es-
El impacto de la biologa molecu- trategias.
lar sobre la medicina modific ini- Ante una situacin opuesta a la
cialmente la forma de comprender la del ejemplo previo, cuando la expre-
a. Departamento de sin de un gen favorece el desarrollo
enfermedad, para luego involucrar-
Pediatra.
Hospital Alemn. se en su diagnstico. Al da de hoy, de una enfermedad, sea ste un gen
Buenos Aires. se posiciona como una de las herra- nativo (oncogenes para el desarrollo
mientas ms importantes para el tra- de cncer) o material gentico viral
Correspondencia: (multiplicacin y desarrollo de la in-
tamiento de distintas patologas y
Dr. Brian M. Cavagnari:
bcavagna@gmail.com promete modificar sustancialmente feccin), se pueden introducir oligo-
la prctica mdica durante el presen- nucletidos antisentido o ribozimas,
Conflicto de intereses: te siglo,1 tanto por la disponibilidad para evitar la expresin del gen en
Ninguno que declarar. cuestin. Esto se conoce como supre-
de frmacos obtenidos por biotecno-
Recibido: 11-1-2011 loga, como por el desarrollo de la te- sin gnica.
Aceptado: 2-5-2011 rapia gnica (TG). Por otra parte, muchas veces la pre-
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sencia de unas pocas protenas mutantes puede das por cido desoxirribonucleico (ADN) (como
interferir con la funcin de muchas protenas nor- plsmidos, aptmeros y oligonucletidos) o ci-
males. Esto se denomina efecto negativo dominante. do ribonucleico (ARN) (como ribozimas, ARN
Basndose en este hecho, otra estrategia de TG de interferencia, aptmeros y oligonucletidos,
consiste en introducir en la clula secuencias que entre otras).4-6
codifiquen protenas mutantes para que inter-
fieran, por ejemplo, con las protenas necesarias Plsmidos
para el correcto armado de un virus y as actuar Los plsmidos son estructuras de ADN de ca-
frente a infecciones. dena doble que existen en procariotas (bacterias)
Otro ejemplo de TG consiste en introducir un y en algunos eucariotas (levaduras). Naturalmen-
gen suicida de manera especfica en clulas neo- te, los genes presentes en el plsmido le confieren
plsicas o infectadas con un patgeno peligroso, pa- a las bacterias portadoras ciertas cualidades, como
ra que slo estas clulas blanco sean destruidas, no la resistencia antibitica.
vindose afectadas las clulas sanas circundantes. En el contexto de la TG, los plsmidos se pue-
Vemos as, como la TG no consiste nica- den utilizar como herramientas que lleven incor-
mente en la introduccin de una copia sana de porados un promotor y el gen productor de la
un gen, sino que existen muchas otras estrategias protena deseada. Se los puede considerar como
muy originales, algunas de las cuales iremos co- profrmacos, ya que, una vez internalizados en
mentando a medida que analicemos qu mate- la clula del paciente, su secuencia se transcribe
rial gentico se introduce en la clula blanco y y luego traduce a la protena que cumple la fun-
con qu propsito. cin teraputica.7
Conceptualmente, la TG puede realizarse en la Los plsmidos son relativamente fciles de pu-
lnea germinal o en clulas somticas. rificar y manipular. Los mayores inconvenientes
se relacionan con su rpida degradacin y su ex-
TG de lnea germinal presin temporaria.8
Si se alteran genticamente las clulas de la Inicialmente se los utiliz solo para tratar en-
lnea germinal, todas las clulas del organismo fermedades monognicas, como la inmunode-
presentarn la modificacin y todo cambio intro- ficiencia combinada grave debida al dficit de
ducido pasar a la descendencia,2 con lo que sur- adenosina deaminasa,9 pero actualmente su uso
giran evidentes planteos ticos sobre la alteracin incluye patologas de etiologa ms compleja,
de la herencia humana. como Parkinson,10 Alzheimer11 y cncer,12-14 en-
En el presente artculo slo se discutir la TG tre otras.
de clulas somticas. Los plsmidos tambin se emplean actualmen-
te como vacunas de ADN que confieren una in-
TG de clulas somticas munizacin gentica.15
En ella, se altera genticamente un solo rgano
o tejido del individuo, sin afectar sus clulas ger- Aptmeros
minales y, por lo tanto, no existen efectos sobre la Los aptmeros son cidos nucleicos que no
descendencia. existen naturalmente. Para su creacin, primero
A su vez, se puede realizar ex-vivo (se obtienen se sintetizan diferentes cadenas de oligonucle-
clulas del paciente, se transfiere el material gen- tidos en forma aleatoria, las cuales luego se in-
tico deseado mediante un vector adecuado, se cuban con las molculas blanco de inters, hasta
seleccionan y se reimplantan en el paciente) o in- encontrar las que de acuerdo a su estructura tri-
vivo (se administra el material gentico terapu- dimensional presentan mayor avidez de unin.
tico directamente al paciente).2 Finalmente, se amplifican los oligonucletidos
Habiendo expuesto los objetivos y tipos de TG, que presentan la mayor afinidad.
debemos enfocarnos en dos aspectos bsicos para As, los aptmeros pueden interactuar direc-
entender su alcance: qu material teraputico se tamente con las protenas involucradas en el de-
utiliza y cmo se lo introduce en la clula. sarrollo de una enfermedad o con sus factores de
transcripcin.16,17 Su comportamiento es similar
Qu material teraputico se introduce al de los anticuerpos, pero los aptmeros seran
en la clula? muy especficos y menos inmunognicos.18 Su ma-
Para realizar TG se pueden introducir en la yor limitacin estara dada por su corta semivida.
clula blanco diferentes estructuras constitui- A modo de ejemplo, se han ensayado aptme-
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ros contra priones19 y contra infecciones como he- Estas molculas han sido ensayadas en dife-
patitis C,20 HIV,21 y hepatitis B,22 entre otras. rentes rganos, como msculo y cerebro34 y en el
El organismo estadounidense de control de tratamiento de diversas patologas, como hepati-
frmacos (United States Food and Drug Adminis- tis C20 y B,35 e infecciones por CMV.36
tration, FDA) aprob el primer aptmero de uso Normalmente, el transcripto primario (ARN
teraputico. Se trata de un frmaco antiangiogni- con intrones y exones) sufre modificaciones pos-
co para el tratamiento de la degeneracin macular transcripcionales para convertirse en un ARNm
neovascular asociada a la edad. Se llama Pegapta- maduro.37 La eliminacin de los intrones se pro-
nib y acta por unin al factor de crecimiento del duce durante el corte y empalme (splicing). Este
endotelio vascular, cuya actividad inhibe.23 proceso celular se lleva a cabo por estructuras de
ARN denominadas espliceosomas.
Oligonucletidos Teniendo esto en cuenta, las ribozimas no solo
Son cidos nucleicos pequeos de cadena sim- pueden eliminar los ARNm involucrados en una
ple que, tras su internalizacin, pueden impedir la patologa, sino que tambin pueden reparar el
expresin de una protena especfica involucrada ARNm del gen mutado, a travs del trans-splicing
en el desarrollo de una enfermedad.24,25 del ARN mediado por espliceosoma (SMaRT, por
Pueden actuar unindose directamente al gen, Spliceosome-Mediated RNA Trans-splicing).
formando una estructura de triplex con la doble Esta prometedora estrategia ha sido ensa-
cadena de ADN e impidiendo su transcripcin. yada, entre otras, en patologas como fibrosis
Tambin pueden usarse como oligonucletidos qustica,38,39 hemofilia A40 y enfermedades neuro-
antisentido, en donde se unirn al ARN mensaje- degenerativas.41
ro (ARNm), para formar un duplex e impedir su
traduccin. ARN de interferencia
Una limitacin importante para el uso clnico La interferencia del ARN es un fenmeno
de los oligonucletidos es su dificultad para llegar natural que lleva a silenciar la expresin de un
al citoplasma o al ncleo de la clula blanco con determinado gen, por un mecanismo postrans-
su actividad funcional intacta. Actualmente, los cripcional.
oligonucletidos de tercera generacin son ms En lneas generales, cuando una clula in-
resistentes a las nucleasas. corpora, por infeccin viral o por transferencia,
Los oligonucletidos se han ensayado para el molculas de ARN de cadena doble, stas son
tratamiento de patologas como el cncer,26-28 la cortadas por una enzima en fragmentos ms
atrofia muscular espinal29 e infecciones por cito- pequeos (21-23 nucletidos) llamados ARN
megalovirus (CMV),30 hepatitis C20,31 y papiloma- pequeos de interferencia (siRNA, por small in-
virus,32 entre otras. terfering RNA). Estos se acoplan al complejo de
Un oligonucletido antisentido (Fomivirsen) silenciamiento inducido por ARN (RISC, por
fue aprobado por la FDA para tratar la retinitis RNA-induced silencing complex), donde una de las
causada por CMV en pacientes inmunocompro- hebras se degrada y la otra (hebra antisentido)
metidos con lo cual se ha convertido en el primer identifica al ARNm complementario que se de-
frmaco basado en cidos nucleicos.33 sea anular. Finalmente, se cortar el ARNm blan-
co y se evitar la expresin del gen involucrado
Ribozimas en la patologa.42
Son molculas de ARN que, gracias a su es- Las clulas de mamfero se pueden transfectar
tructura terciaria, presentan actividad enzimtica: con vectores que expresen siRNA o se pueden in-
cortan y pegan ARN en sitios especficos. Existen yectar con siRNA sintticos, obtenindose resul-
ribozimas naturales que han sido descriptas en tados similares.43-45
virus, procariotas y eucariotas. En el laboratorio, Cabe destacar que el efecto silenciador de
se pueden generar ribozimas sintticas, con la ca- genes es temporalmente limitado y que los siARN
pacidad de dirigir el corte hacia una secuencia es- pueden ser degradados por ribonucleasas end-
pecfica de blanco. genas en su camino a la clula. En el laboratorio,
Presentan la ventaja de ser especficas y poco se pueden modificar qumicamente para incre-
inmunognicas, pero las principales dificultades mentar su estabilidad.
para su uso teraputico son su baja estabilidad y Actualmente, se ensaya su uso teraputico
lo dificultoso de colocalizar la ribozima con la se- contra patologa oncolgica44 y contra infecciones
cuencia contra la cual est dirigida. como la del VIH.21
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Cmo se introduce el material gentico La gran desventaja es que no se los ha podido


en la clula? atenuar, por lo que suelen ser lticos para las c-
Para introducir cidos nucleicos en la clula lulas que los reciben.
se pueden utilizar vectores virales y no virales.
Adenovirus
Vectores virales Los adenovirus tienen ADN de cadena doble,
Los virus introducen su material gnico en el cual ingresa a la clula infectada sin integrarse
las clulas de manera eficiente, por lo que suena en su genoma.
lgico su uso como vectores del material gnico Resultan interesantes para dirigir el material
a introducir, sustituyendo el genoma propio del gnico a clulas del epitelio respiratorio y gas-
virus por un cido nucleico teraputico.46-49 En la trointestinal, aprovechando su va de infeccin
prctica, la mayora de los protocolos de TG utili- normal. Infectan tanto clulas en divisin como
za virus como vectores, habindose ensayado en las que no lo estn.
patologas como la distrofia muscular,50 el cn- Como el genoma viral no se replica durante
cer51 y el sida.52 la divisin celular, la informacin no se transmi-
Si bien los virus son muy eficientes para intro- te a la descendencia, por lo que su uso en TG es
ducir el material gnico en la clula, todava resta transciente. Adems, podran desencadenar una
mejorar aspectos relacionados a la seguridad de marcada respuesta inmunitaria sobre la clula
su empleo y a su inmunogenicidad.8 husped.2
Los Adenovirus han sido empleados en proto-
Retrovirus colos para el tratamiento de pacientes con cncer
En el laboratorio se generan retrovirus con to- de mama, ovario y melanoma metastsicos,63,64 y
da la maquinaria necesaria para su incorporacin ensayados contra entidades tan diversas como la
en la clula blanco, pero cuyo material a transfe- isquemia65,66 y el glioblastoma.67
rir sea el cido nucleico teraputico en lugar del
genoma viral.53 Virus adenoasociados
Estos pueden transportar hasta 8 kb (sufi- Los virus adenoasociados tienen ADN de ca-
ciente para prcticamente todos los cidos nu- dena simple, el cual ingresa a la clula infectada
cleicos teraputicos) pero, salvo los Lentivirus, y pasa al ADN de cadena doble. Luego se integra
slo pueden integrar su genoma en clulas en en el genoma del husped, generalmente en el
divisin activa.53-55 cromosoma 19, reduciendo las chances de muta-
Otra complicacin importante es que la inte- gnesis insercional.
gracin en el genoma celular ocurre de manera Infectan eficientemente tanto clulas en divi-
azarosa, pudiendo ocasionar la disrupcin de un sin como clulas que no se dividen. Para repli-
gen funcional (mutagnesis insercional). carse dentro de la clula necesitan la coinfeccin
Los Retrovirus han sido empleados en pro- de otro virus. Su capacidad es limitada (menos
tocolos para el tratamiento de la inmunodefi- de 4 kb) y no se asocian a ninguna enfermedad
ciencia combinada grave debida a dficit de humana, por lo que se ven reducidas eventuales
adenosina deaminasa, 56,57 cncer de ovario, 58 reacciones adversas.68,69
melanoma59 y enfermedad de Gaucher,60 entre Estos virus han sido ensayados en protocolos
otras patologas. de TG contra enfermedades como fibrosis qusti-
ca,70 artritis y hemofilia.71
Herpesvirus
Poseen dos caractersticas muy interesantes Vectores no virales
para su uso: 1) al ser neuropticos, resultan muy Los vectores no virales generalmente no pre-
tiles para introducir genes en clulas del siste- sentan inmunogenicidad (como los vectores vi-
ma nervioso; 2) al mantenerse en estado latente, rales), pero son menos eficientes a la hora del
pueden persistir por mucho tiempo en el tejido ingreso del material gnico a la clula.8
nervioso.
Su ADN no se integra al del husped, pero Liposomas
se mantiene establemente de manera epismica Los liposomas no presentan especificidad para
y se divide junto al ADN cromosmico. Por lo ningn tipo celular y su entrega de material g-
tanto, tampoco se ve interrumpido ningn gen nico es mucho menos eficaz que la mediada por
endgeno.61,62 virus. No obstante, algunos liposomas se pueden
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dirigir mediante la modificacin de sus lpidos de enfermedades y es muy usada para el desarrollo
pared72-78 o por su acople a sustancias, como la vi- de vacunas genticas.103,104
tamina A, o a fragmentos de anticuerpos (inmu-
noliposomas).79 CONCLUSIN
Se ha logrado as, entregar material gnico te- El campo de la salud es definitivamente uno
raputico para patologas como fibrosis qustica,73 de los ms beneficiados con el desarrollo de la bio-
carcinoma hepatocelular,74 melanoma75 y psoria- loga molecular. En particular, la TG se muestra
sis,77 entre muchas otras. como una de las opciones teraputicas que puede
revolucionar la forma tradicional de tratar muchas
Complejo asialoglicoprotena-polilisina y enfermedades en el presente siglo.
otros polmeros catinicos La actividad clnica cotidiana hace que el m-
La polilisina (carga positiva) se une al ADN dico generalista deba actualizar permanentemen-
(carga negativa), mientras que la asialoglicopro- te sus conocimientos sobre los frmacos clsicos y
tena permite su ingreso a los hepatocitos (poseen sus vas convencionales de administracin, pero
un receptor para molculas que perdieron su ci- este nuevo panorama obligar tambin a familia-
do silico).80-83 rizarse con los nuevos frmacos de cidos nu-
Otros polmeros catinicos utilizados son la cleicos, como plsmidos, aptmeros, ribozimas
polietilenimina84-87 y el quitosano.88-91 y ARN de interferencia, as como con las novedo-
Los polmeros catinicos han sido emplea- sas vas de administracin de estos frmacos, que
dos para dirigir la entrega de material gnico a ofrecen nuevas opciones teraputicas para el tra-
clulas hepticas,81 respiratorias,86 y corneales,89 tamiento de muchas patologas. n
entre otras.
Agradecimientos
Cromosomas artificiales Al Dr. Diego J. Rodrguez Gil, Facultad de Me-
Pueden transferir grandes segmentos de ADN. dicina de la Universidad Yale, New Haven, CT,
Al mantenerse como episoma (material gentico EE.UU.) por la lectura crtica del manuscrito y por
que puede existir de manera independiente al ge- sus oportunas sugerencias.
noma del husped) de forma estable, no se corre
el riesgo de mutagnesis insercional. BIBLIOGRAFA
Adems, pueden llevar varias secuencias regu- 1. Leslie L, Rappo P, Abelson H, Jenkins RR, et al. Final Report
of the FOPE II Pediatric Generalists of the Future Work-
latorias que permitan en funcin del promotor group. Pediatrics 2000; 106(5):1199-223.
que se utilice obtener la expresin histoespecfi- 2. Lever AML. Terapia gnica. En: Cox TM, Sinclair J. Biologa
ca del gen. Como ejemplo, si se coloca un gen de molecular en medicina. Madrid: Ed. Mdica Panamericana;
inters bajo el promotor de la alfa-fetoprotena, 1998:Pgs.304-19.
3. Anderson WF. Human gene therapy. Science 1992;
se lograr su expresin en los hepatocitos y no en 256(5058):808-13.
otras clulas.92-94 4. Crooke ST. An overview of progress in antisense therapeu-
Los cromosomas artificiales estn siendo en- tics. Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1998; 8(2):115-22.
sayados para diversas patologas, como el glio- 5. Stull RA, Szoka FC Jr. Antigene, ribozyme and aptamer nu-
cleic acid drugs: Progress and prospects. Pharm. Res 1995;
blastoma95 o la distrofia muscular de Duchenne,96 12(4):465-83.
entre otras. 6. Patil SD, Rodhes DG, Burgess DJ. DNA-based therapeu-
tics and DNA delivery systems: a comprehensive review.
Transferencia directa de cidos nucleicos AAPS J 2005; 7(1):E61-77.
7. Uherek C, Wels W. DNA-carrier proteins for targeted gene
La incorporacin directa de cidos nucleicos delivery. Adv Drug Deliv Rev 2000; 44(2-3):153-66.
puede lograrse por electroporacin (aplicacin de 8. Ziello JE, Huang Y, Jovin IS. Cellular endocytosis and gene
una carga elctrica sobre la membrana plasmti- delivery. Mol Med 2010; 16(5-6):222-9.
ca) o por unin a esferas pequeas que pueden 9. Anderson WF. Human gene therapy. Nature 1998; 392(6679
Suppl):25-30.
a su vez ser acopladas a ligandos especficos 10. Baekelandt V, De Strooper B, Nuttin B, Debyser Z. Gene
que dirijan el material hacia un tejido especfi- therapeutic strategies for neurodegenerative diseases. Curr
co.97 Estas tcnicas (elctricas y mecnicas) pue- Opin Mol Ther 2000; 2(5):540-54.
den aplicarse ex-vivo98,99 o in-vivo.100-102 La entrega 11. Qu BX, Lambracht-Washington D, Fu M, Eagar TN, et al.
Analysis of three plasmid systems for use in DNA A beta
de material gnico es mucho menos eficaz que la 42 immunization as therapy for Alzheimers disease. Vac-
mediada por virus. cine 2010; 28(32):5280-7.
Esta estrategia se ha usado para ensayar TG 12. Galanis E, Russell S. Cancer gene therapy clinical trials:
contra el Alzheimer11 y el melanoma,14 entre otras Lessons for the future. Br J Cancer 2001; 85(10):1432-6.
242 / Arch Argent Pediatr 2011;109(3):237-244 / Artculo especial

13. Guinn BA, Mulherkar R. International progress in cancer ribozymes delivered by targeting retrovirus. Virol J 2010;
gene therapy. Cancer Gene Ther 2008; 15(12):765-75. 7:61-6.
14. Heller LC, Heller R. Electroporation gene therapy precli- 36. Bai Y, Li H, Vu GP, Gong H, et al. Salmonella-mediated
nical and clinical trials for melanoma. Curr Gene Ther 2010; delivery of RNase P-based ribozymes for inhibition of vi-
10(4):312-7. ral gene expression and replication in human cells. Proc
15. Johnston SA, Talaat AM, McGuire MJ. Genetic Immuniza- Natl Acad Sci USA 2010; 107(16):7269-74.
tion Whats in a name? Arch Med Res 2002; 33(4):325-9. 37. Cavagnari BM. Animales transgnicos: usos y limitacio-
16. Stull RA, Szoka FC Jr. Antigene, ribozyme and aptamer nes en la medicina del siglo XXI. Arch Argent Pediatr 2010;
nucleic acid drugs: progress and prospects. Pharm Res 1995; 108(4):343-9.
12(4):465-83. 38. Mansfield SG, Kole J, Puttaraju M, Yang CC, et al. Repair
17. Suess B, Weigand JE. Aptamers as artificial gene regula- of CFTR mRNA by spliceosome-mediated RNA trans-
tion elements. Methods Mol Biol 2009; 535:201-8. splicing. Gene Ther 2000; 7(22):1885-95.
18. Jayasena SD. Aptamers: An emerging class of molecu- 39. Liu X, Luo M, Zhang LN, Yan Z, et al. Spliceosome-media-
les that rival antibodies in diagnostics. Clin Chem 1999; ted RNA trans-splicing with recombinant adeno-associa-
45(9):1628-50. ted virus partially restores cystic fibrosis transmembrane
19. Gilch S, Schtzl HM. Aptamers against prion proteins and conductance regulator function to polarized human cys-
prions. Cell Mol. Life Sci 2009; 66(15):2445-55. tic fibrosis airway epithelial cells. Hum Gene Ther 2005;
20. Thompson AJ, Patel K. Antisense inhibitors, ribozymes, 16(9):1116-23.
and siRNAs. Clin Liver Dis 2009; 13(3):375-90. 40. Chao H, Mansfield SG, Bartel RC, Hiriyanna S, et al. Phe-
21. Zhou J, Li H, Li S, Zaia J, et al. Novel dual inhibitory function notype correction of hemophilia A mice by spliceosome-
aptamer-siRNA delivery system for HIV-1 therapy. Mol mediated RNA trans-splicing. Nat Med 2003; 9(8):1015-9.
Ther 2008; 16(8):1481-9. 41. Rodrguez-Martn T, Anthony K, Garca-Blanco MA,
22. Zhang W, Ke W, Wu SS, Gan L, et al. An adenovirus-deli- Mansfield SG, et al. Correction of tau mis-splicing caused
vered peptide aptamer C1-1 targeting the core protein of by FTDP-17 MAPT mutations by spliceosome-mediated
hepatitis B virus inhibits viral DNA replication and pro- RNA trans-splicing. Hum Mol Genet 2009; 18(17):3266-73.
duction in vitro and in vivo. Peptides 2009; 30(10):1816-21. 42. Tenenhaus Dann C. New technology for an old favorite:
23. Apte RS. Pegaptanib sodium for the treatment of age-rela- lentiviral transgenesis and RNAi in rats. Transgenic Res
ted macular degeneration. Expert Opin Pharmacother 2008; 2007; 16:571-80.
9(3):499-508. 43. Mrquez RT, McCaffrey AP. Advances in MicroRNAs:
24. Crooke ST. Molecular mechanisms of action of antisense Implications for Gene Therapists. Hum Gene Ther 2008;
drugs. Biochim Biophys Acta 1999; 1489(1):31-44. 19(1):27-38.
25. Akhtar S, Hughes MD, Khan A, Bibby M, et al. The deli- 44. Tomar RS, Matta H, Chaudhary PM. Use of adeno-asso-
very of antisense therapeutics. Adv Drug Deliv Rev 2000; ciated viral vector for delivery of small interfering RNA.
44(1):3-21. Oncogene 2003; 22(36):5712-5.
26. Liu C, Wu X, Luo C, Hu Z, et al. Antisense oligonucleo- 45. Spelios M, Kearns M, Savva M. From gene delivery to gene
tide targeting Livin induces apoptosis of human bladder silencing: plasmid DNA-transfecting cationic lipid 1,3-di-
cancer cell via a mechanism involving caspase 3. J Exp Clin myristoylamidopropane-2-[bis(2-dimethylamino-ethane)]
Cancer Res 2010; 29(1):63-70. carbamate efficiently promotes small interfering RNA-in-
27. Chen L, Zhu Y, Li H, Wang GL, et al. Knockdown of TS- duced RNA interference. Biochemistry 2010; 49(27):5753-9.
PAN1 by RNA silencing and antisense technique inhibits 46. Garca-Aragoncillo E, Hernndez-Alcoceba R. Design of
proliferation and infiltration of human skin squamous car- virotherapy for effective tumor treatment. Curr Opin Mol
cinoma cells. Tumori 2010; 96(2):289-95. Ther 2010; 12(4):403-11.
28. Mardan T, Kopecek J, Kissel T. Prospects for cationic poly- 47. Lotze MT, Kost TA. Viruses as gene delivery vectors: Ap-
mers in gene and oligonucleotide therapy against cancer. plication to gene function, target validation, and assay de-
Adv Drug Deliv Rev 2002; 54(5):715-58. velopment. Cancer Gene Ther 2002; 9(8):692-9.
29. Burghes HA, McGovern VL. Antisense oligonucleotides 48. Kamiya H, Tsuchiya H, Yamazaki J, Harashima H. Intracel-
and spinal muscular atrophy: skipping along. Genes Dev lular trafficking and transgene expression of viral and non-
2010; 24(15):1574-9. viral gene vectors. Adv Drug Deliv Rev 2001; 52(3):153-64.
30. Azad RF, Driver VB, Tanaka K, Cooke RM, et al. Antivi- 49. Mah C, Byrne BJ, Flotte TR. Virus-based gene delivery sys-
ral activity of a phosphorothioate oligonucleotide com- tems. Clin Pharmacokinet 2002; 41(12):901-11.
plementary to RNA of the human cytomegalovirus major 50. Chamberlain JS. Gene therapy of muscular dystrophy.
immediate-early region. Antimicrob Agents Chemother 1993; Hum Mol Genet 2002; 11(20):2355-62.
37(9):1945-54. 51. Green NK, Seymour LW. Adenoviral vectors: system-
31. Alt M, Renz R, Hofschneider PH, Paumgartner G, et al. ic delivery and tumor targeting. Cancer Gene Ther 2002;
Specific inhibition of hepatitis C viral gene expression by 9(12):1036-42.
antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotides. Hepa- 52. Lemiale F, Korokhov N. Lentiviral vectors for HIV disease
tology 1995; 22(3):707-17. prevention and treatment. Vaccine 2009; 27(25-26):3443-9.
32. Tonkinson JL, Stein CA. Antisense oligodesoxynucleo- 53. McTaggart S, Al-Rubeai M. Retroviral vectors for human
tides as clinical therapeutic agents. Cancer Invest 1996; gene delivery. Biotechnol Adv 2002; 20(1):1-31.
14(1):54-65. 54. Naldini L, Blomer U, Gallay P, Ory D. In vivo gene deliv-
33. Rosenberg SA, Blaese RM, Brenner MK, Deisseroth AB, et ery and stable transduction of nondividing cells by a len-
al. Human gene marker/therapy clinical protocols. Hum tiviral vector. Science 1996; 272(5259):263-7.
Gene Ther 2000; 11(6):919-79. 55. Lewis PF, Emerman M. Passage through mitosis is required
34. Mastroyiannopoulos NP, Uney JB, Phylactou LA. The for oncoretroviruses but not for the human immunodefi-
application of ribozymes and DNAzymes in muscle and ciency virus. J Virol 1994; 68(1):510-6.
brain. Molecules 2010; 15(8):5460-72. 56. Onodera M, Ariga T, Kawamura N, Kobayashi I, et al. Suc-
35. Wang CX, Lu YQ, Qi P, Chen LH, et al. Efficient inhibi- cessful peripheral T-lymphocyte-directed gene transfer for
tion of hepatitis B virus replication by hepatitis delta virus a patient with severe combined immunodeficiency caused
Terapia gnica: los cidos nucleicos como frmacos. Mecanismos de accin y vas de entrega a la clula / 243

by adenosine deaminase deficiency. Blood 1998; 91(1):30-6. some-mediated CFTR gene transfer to the nasal epithelium
57. Bordignon C, Notarangelo LD, Nobili N, Ferrari G, et al. of patients with cystic fibrosis. Nat Med 1995; 1(1):39-46.
Gene therapy in peripheral blood lymphocytes and bone 74. Tu Y, Kim JS. Selective gene transfer to hepatocellular car-
marrow for ADA-immunodeficient patients. Science 1995; cinoma using homing peptide-grafted cationic liposomes.
270(5235):470-5. J Microbiol Biotechnol 2010; 20(4):821-7.
58. Tait DL, Obermiller PS, Hatmaker AR, Redlin-Frazier S, 75. Nabel GJ, Nabel EG, Yang ZY, Fox BA, et al. Direct gene
et al. Ovarian cancer BRCA1 gene therapy: Phase I and II transfer with DNA-liposome complexes in melanoma: Ex-
trial differences in immune response and vector stability. pression, biological activity, and lack of toxicity in humans.
Clin Cancer Res 1999; 5(7):1708-14. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90(23):11307-11.
59. Fujii S, Huang S, Fong TC, Ando D, et al. Induction of mel- 76. He ZY, Zheng X, Wu XH, Song XR, et al. Development of
anoma-associated antigen systemic immunity upon intra- glycyrrhetinic acid-modified stealth cationic liposomes for
tumoral delivery of interferon-gamma retroviral vector in gene delivery. Int J Pharm 2010; 397(1-2):147-54.
melanoma patients. Cancer Gene Ther 2000; 7(9):1220-30. 77. Li J, Li X, Zhang Y, Zhou XK, et al. Gene therapy for pso-
60. Dunbar CE, Kohn DB, Schiffmann R, Barton NW, et al. Ret- riasis in the K14-VEGF transgenic mouse model by topical
roviral transfer of the glucoceribrosidase gene into CD34+ transdermal delivery of interleukin-4 using ultradeforma-
cells from patients with Gaucher disease: In vivo detection ble cationic liposome. J Gene Med 2010; 12(6):481-90.
of transduced cells without myeloblation. Hum Gene Ther 78. Madeira C, Mendes RD, Ribeiro SC, Boura JS, et al. Non-
1998; 9(17):2629-40. viral gene delivery to mesenchymal stem cells using catio-
61. Lowenstein PR, Morrison EE, Bain D, Hodge P, et al. Use nic liposomes for gene and cell therapy. J Biomed Biotechnol
of recombinant vectors derived from herpes simplex vi- 2010; 2010:735349.
rus 1 mutant tsK for short-tem expression of transgenes 79. Park JW, Hong K, Carter P, Asgari H, et al. Development
encoding cytoplasmic and membrane anchored proteins of anti-p185HER2 immunoliposomes for cancer therapy.
in post mitotic-polarized cortical neurons and glial cells in Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92(5):1327-31.
vitro. Neuroscience 1994; 60(4):1059-77. 80. Lemkine GF, Demeneix BA. Polyethylenimins for in vivo
62. Carpenter DE, Stevens JG. Long term expression of a for- gene delivery. Curr Opin Mol Ther 2001; 3(2):178-82.
eign gene from a unique position in the latent herpes sim- 81. Aramaki Y, Lee I, Arima H, Sakamoto T, et al. Efficient
plex virus genome. Hum Gene Ther 1996; 7(12):1447-54. gene transfer to hepatoblastoma cells through asialoglyco-
63. Stewart AK, Lassam NJ, Quirt IC, Bailey DJ, et al. Aden- protein receptor and expression under the control of the
ovector-mediated gene delivery of interleukin-2 in meta- cyclin A promoter. Biol Pharm Bull 2003; 26(3):357-60.
static breast cancer and melanoma: Results of a phase 1 82. Gmez-Valads AG, Molas M, Vidal-Alabr A, Berm-
clinical trial. Gene Ther 1999; 6(3):350-63. dez J, et al. Copolymers of poly-L-lysine with serine and
64. lvarez RD, Gmez-Navarro J, Wang M, Barnes MN, et tryptophan form stable DNA vectors: implications for
al. Adenoviral-mediated suicide gene therapy for ovarian receptor-mediated gene transfer. J Control Release 2005;
cancer. Mol Ther 2000; 2(5):524-30. 102(1):277-91.
65. Mohler ER 3rd, Rajagopalan S, Olin JW, Trachtenberg JD, 83. Lollo CP, Banaszczyk MG, Mullen PM, Coffin CC, et al.
et al. Adenoviral-mediated gene transfer of vascular en- Poly-L-lysine based gene delivery systems: synthesis, pu-
dothelial growth factor in critical limb ischemia: safety re- rification, and application. Methods Mol Med 2002; 69:1-13.
sults from a phase I trial. Vasc Med 2003; 8(1):9-13. 84. Lemkine GF, Demeneix BA. Polyethylenimins for in vivo
66. Rajagopalan S, Mohler ER 3rd, Lederman RJ, Mendelsohn gene delivery. Curr Opin Mol Ther 2001; 3(2):178-82.
FO, et al. Regional angiogenesis with vascular endothelial 85. Veiseh O, Kievit FM, Fang C, Mu N, et al. Chlorotoxin
growth factor in peripheral arterial disease: a phase II ran- bound magnetic nanovector tailored for cancer cell tar-
domized, double-blind, controlled study of adenoviral de- geting, imaging, and siRNA delivery. Biomaterials 2010;
livery of vascular endothelial growth factor 121 in patients 31(31):8032-8042.
with disabling intermittent claudication. Circulation 2003; 86. Castellani S, Di Gioia S, Trotta T, Maffione AB, et al. Impact
108(16):1933-8. of lentiviral vector-mediated transduction on the tightness
67. Wohlfahrt ME, Beard BC, Lieber A, Kiem HP. A capsid- of a polarized model of airway epithelium and effect of ca-
modified, conditionally replicating oncolytic adenovirus tionic polymer polyethylenimine. J Biomed Biotechnol 2010;
vector expressing TRAIL Leads to enhanced cancer cell 2010:1-11.
killing in human glioblastoma models. Cancer Res 2007; 87. Schfer J, Hbel S, Bakowsky U, Aigner A. Liposome-po-
67(18):8783-90. lyethylenimine complexes for enhanced DNA and siRNA
68. Martin KR, Klein RL, Quigley HA. Gene delivery to the delivery. Biomaterials 2010; 31(26):6892-900.
eye using adeno-associated viral vectors. Methods 2002; 88. Borchard G. Chitosans for gene delivery. Adv Drug Deliv
28(2):267-75. Rev 2001; 52(2):145-50.
69. Fisher KJ, Jooss K, Alston J, Yang Y, et al. Recombinant 89. Klausner EA, Zhang Z, Chapman RL, Multack RF, et al.
adeno-associated virus for muscle directed gene therapy. Ultrapure chitosan oligomers as carriers for corneal gene
Nat Med 1997; 3(3):306-12. transfer. Biomaterials 2010; 31(7):1814-20.
70. Flotte TR, Zeitlin PL, Reynolds TC, Heald AE, et al. Phase 90. Gao JQ, Zhao QQ, Lv TF, Shuai WP, et al. Gene-carried
I trial of intranasal and endobronchial administration of a chitosan-linked-PEI induced high gene transfection effi-
recombinant adeno-associated virus serotype 2 (rAAV2)- ciency with low toxicity and significant tumor-suppressive
CFTR vector in adult cystic fibrosis patients: a twopart cli- activity. Int J Pharm 2010; 387(1-2):286-94.
nical study. Hum Gene Ther 2003; 14(11):1079-88. 91. Xu Q, Wang CH, Pack DW. Polymeric carriers for gene
71. Carter BJ. Adeno-associated virus vectors in clinical trials. delivery: chitosan and poly (amidoamine) dendrimers.
Hum Gene Ther 2005; 16(5):541-50. Curr Pharm Des 2010; 16(21):2350-68.
72. Dewa T, Asai T, Tsunoda Y, Kato K, et al. Liposomal poly- 92. Vos JM. Therapeutic mammalian artificial episomal chro-
amine-dialkyl phosphate conjugates as effective gene car- mosomes. Curr Opin Mol Ther 1999; 1(2):204-15.
riers: chemical structure, morphology, and gene transfer 93. Wong SP, Argyros O, Coutelle C, Harbottle RP. Strategies
activity. Bioconjug Chem 2010; 21(5):844-52. for the episomal modification of cells. Curr Opin Mol Ther
73. Caplen NJ, Alton EW, Middleton PG, Dorin JR, et al. Lipo- 2009; 11(4):433-41.
244 / Arch Argent Pediatr 2011;109(3):237-244 / Artculo especial

94. Macnab S, Whitehouse A. Progress and prospects: human Biophys Res Commun 1998; 245(1):235-39.
artificial chromosomes. Gene Ther 2009; 16(10):1180-8. 100.Rizzuto G, Cappelletti M, Maione D, Savino R, et al. Effi-
95. Kinoshita Y, Kamitani H, Mamun MH, Wasita B, et al. A cient and regulated erythropoietin production by naked
gene delivery system with a human artificial chromoso- DNA injection and muscle electroporation. Proc Natl Acad
me vector based on migration of mesenchymal stem cells Sci USA 1999; 96(11):6417-22.
towards human glioblastoma HTB14 cells. Neurol Res 2010; 101.Rols MP, Delteil C, Golzio M, Dumond P, et al. In vivo
32(4):429-37. electrically mediated protein and gene transfer in murine
96. Kazuki Y, Hiratsuka M, Takiguchi M, Osaki M, et al. Com- melanoma. Nat Biotechnol 1998; 16(2):168-71.
plete genetic correction of ips cells from Duchenne mus- 102.Wolff JA, Malone RW, Williams P, Chong W, et al. Direct
cular dystrophy. Mol Ther 2010; 18(2):386-93. gene transfer into mouse muscle in vivo. Science 1990;
97. Li SD, Chen YC, Hackett MJ, Huang L. Tumor-targeted 247(4949 Pt 1):1465-8.
delivery of siRNA by self assembled nanoparticles. Mol 103.Best SR, Peng S, Juang CM, Hung CF, et al. Administra-
Ther 2008; 16(1):163-9. tion of HPV DNA vaccine via electroporation elicits the
98. Mann MJ, Gibbons GH, Hutchinson H, Poston RS, et al. strongest CD8+ T cell immune responses compared to in-
Pressure-mediated oligonucleotide transfection of rat and tramuscular injection and intradermal gene gun delivery.
human cardiovascular tissues. Proc Natl Acad Sci USA Vaccine 2009; 27(40):5450-9.
1999; 96(11):6411-6. 104.Huang HN, Li TL, Chan YL, Chen CL, et al. Transdermal
99. Nakamura M, Dvila-Zavala P, Tokuda H, Takakura Y, immunization with low-pressure-gene-gun mediated chi-
et al. Uptake and gene expression of naked plasmid DNA tosan-based DNA vaccines against Japanese encephalitis
in cultured brain microvessel endothelial cells. Biochem virus. Biomaterials 2009; 30(30):6017-25.

Todas las ciencias exactas estn regidas


por el principio de la aproximacin.

Bertrand Russel