1-Introduccion

Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos

nutrientes bsicos y factores fsicos para el mantenimiento de su vida, estas
necesidades varan segn el tipo de microorganismo y es necesario conocerlas
para cultivarlos en el laboratorio.

Las necesidades nutricionales bsicas pueden suministrarse en el laboratorio,

mediante el uso de medios de cultivo artificiales, los cuales se encuentran
disponibles en una gran variedad y los cuales en general aportan a los
microorganismos:
-Una fuente de carbono:El carbono es un componente esencial y central para
conformar la estructura celular y permitir a la clula realizar todas sus
funciones. Segn la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en
dos grupo: Auttrofos y hetertrofos. Los organismos auttrofos pueden
cultivarse en medios que contengan nicamente compuestos inorgnicos
(utilizan principalmente dixido de carbono como carbono inorgnico). Los
organismos hetertrofos en su lugar necesitan un suministro de carbono
orgnico (por ejemplo glucosa u otro carbohidrato).
-Una fuente de Nitrgeno:Elemento esencial para que la clula construya
macromolculas como: protenas y cidos nuclicos. Algunos microorganismos
usan nitrgeno atmosfrico, otros emplean sales de nitrato o de amonio como
compuestos inorgnicos, as como, otros requieren compuestos orgnicos que
contengan nitrgeno como los aminocidos.
-Elementos no metlicos:Iones no metlicos como el azufre y el fsforo. El
azufre puede encontrarse en protenas, sulfatos o como azufre elemental;
mientras el que el fsforo puede encontrarse formando sales.
-Elementos metlicos (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe+2 y Fe+3):Llamados
tambin micronutrientes, oligoelementos o elementos traza. Encontrados en
sales inorgnicas adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas
concentraciones por los microorganismos.
-Vitaminas:Los microorganismos puede tomarlas del medio ya elaboradas o
iniciar procesos de sntesis de las mismas. Algunos microorganismos poseen
una variedad de vas para sintetizar vitaminas; mientras otros, sintetizan un
nmero muy limitado de ellas a partir de componentes del medio. Otros las
requieren como suministro.
-Agua.
-Energa:Existen dos tipos bioenergticos de microorganismos, los fottrofos y
los quimitrofos. Los fottrofos emplean la energa radiante (luz solar), como
nica fuente de energa; y los quimitrofos que, obtienen la energa por
oxidacin de compuestos qumicos orgnicos o inorgnicos.
Las necesidades fsicas involucran factores, como: Temperatura, pH y gases,
los cuales se encuentran en un rango ptimo especfico para cada
microorganismo; por lo tanto, su variacin puede acelerar o disminuir el
crecimiento.
2-Objetivos
-Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos, aplicando los conceptos bsicos de nutricin y preparacin
de los mismos.
-Aprender a elaborar los medios de cultivo ms comunes usados en el
aislamiento de hongos fitopatgenos.

3-Revision bibliogrfica

3.1.Medio de cultivo: Son mezclas de sustancias que se usan para el

aislamiento y desarrollo de hongos, bacterias y otros microorganismos.

Propiedades de los medios de cultivo:

-Humedad. Indispensable para el crecimiento de microorganismos, su carencia

(desecacin) puede llevar a la muerte del microorganismo.
-Fertilidad. Se refieren a los elementos o compuestos bsicos que permiten el
crecimiento bacteriano.
-pH. Se refiere a los pH ptimos para el desarrollo bacteriano, indispensable
para su aislamiento; variaciones cidas o alcalinas, pueden inhibir su
crecimiento.
-Transparencia. Permite la observacin bacteriolgica, evidenciar morfolgica
y fsicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado.

3.2-Por su composicin
-Naturales:Utilizados para cultivar microrganismos tal y como se encuentran
en la naturaleza.Se usan como base a la experiencia y no a su composicin
ej.Sangre diluida,leche,etc.
-Sinteticos:De composicin exactamente conocida.Los mas conocidos son los
medios deshidratados comerciales ej.Agar,etc.
Puedes ser solidos,semilquidos y liquidos.
-Vivos:Contienen clulas u organismos vivos ej.Hoja,Fruto.
3.3-Clases de medio de cultivo.

A)Medios simples:

-Agar Nutritivo: Contiene extracto de carne, peptona y agar-agar.

-Caldo Nutritivo: Contiene extracto acuoso de carne adicionado

de peptona al 1% y Cloruro de Sodio al 0.5% (Ej.: Caldo BHI (Brain
Heart Infusion/Infusin Cerebro Corazn), Caldo TSB (Caldo de
Soya Tripticasa), y Caldo Nutritivo).
-Agar Base Sangre: Medio slido que contiene peptona, enriquecido con
sangre desfibrinada de conejo al 7%; usado para el desarrollo de todo tipo de
bacterias y especialmente para observar la actividad hemoltica.

B)Medios enriquecidos:

-Agar Sangre: Al medio Agar Sangre se le adiciona sangre de conejo

desfibrinada al 7% estril, cuando este tiene una temperatura de 45C y luego
de su esterilizacin (la fuente de sangre debe ser estril).

-Agar Chocolate: Consiste en un agar sangre que antes de su solidificacin se

lleva a 100 C/1min., (llevar a ebullicin); as, se rompen los glbulos rojos y el
medio toma un color caf. Se usa para el aislamiento de Haemophilus spp., y
Neisseria spp.

-Medio de Tioglicolato: Permite el aislamiento de aerobios tolerantes y

anaerobios. Debe conservarse en la oscuridad y en tubos tapa rosca de
manera que, la anaerobiosis se mantenga en el fondo y la aerobiosis en la
superficie del medio.

C)Medios selectivos y diferenciales:

-P10 VP: Sirve para aislar Phytophthora spp.

-Komada:Medio seletivo para especies de Fusarium.Se puede diferenciar las
especies de hongos por el color de sus colonias en este medio de cultivo.
-Papa dextrosa agar:Este medio es adecuado para la mayora de los hongos.
-Agar-caldo de guisantes sacarosado:Medio adecuado para Pythium y
Phytophthora.
-Agar harina de avena:Este es un medio adecuado para Pythium
sp.,Phytophthora sp,Fusarium sp.,Phoma sp.
-Agar agua:Es un medio muy pobre pero muy til para estudiar fructificaciones
fngicas debido al escaso crecimiento miceliar.Se utiliza tambin para estudiar
Rhizoctonia solani.

(Papa dextrosa agar)

4-Preparacion del medio de cultivo:
Es un proceso clave en el trabajo de rutina e investigacin microbiolgica. Para
obtener un producto final bien terminado (medio de cultivo), deber contarse
con la habilidad, destreza, conocimientos bsicos en fisicoqumica y
microbiologa. En trminos generales, un medio de cultivo puede ser preparado
correctamente siguiendo las indicaciones relacionadas a continuacin:

1-Disolucin del medio de cultivo deshidratado:Se debe emplear agua

limpia, recin destilada o desmineralizada y con pH lo ms cercano posible al
neutro. Los recipientes a usar deben ser lo suficientemente grandes para que el
medio sea agitado con facilidad. Inicialmente se aade la mitad de agua y se
agita suficientemente para conseguir una suspensin homognea; despus, se
incorpora la cantidad de agua restante. Todo tipo de medio de cultivo es
sensible al calentamiento, pero no debe calentarse ms de lo estrictamente
necesario. Leer siempre la etiqueta del envase, en caso de que no deba ser
sometido a ulterior esterilizacin en autoclave, es imprescindible prestar
atencin en su disolucin completa, esto se confirma cuando al agitar no se
adhiere a la pared interna del recipiente ninguna partcula de agar o de medio y
la solucin fluye libremente. Si la preparacin es de ms de 2 litros, se
recomienda desler el medio de cultivo en una dcima parte de la cantidad total
de agua y dejarla remojar durante 15 min.; simultneamente, calentar a
ebullicin el agua restante y agregar sta agua con constante agitacin al
medio remojado. Calentar hasta su completa disolucin.

2-Esterilizacin:Antes de su esterilizacin y despus de su completa

disolucin se debe repartir el medio en los recipientes definitivos o en los que
se lleve a cabo el trabajo de investigacin, excepto si corresponde a cajas de
Petri. La esterilizacin, si as lo indica la etiqueta, se lleva a cabo en autoclave
a 121C/15 libras de presin/15min. Tras la esterilizacin y despus de haber
alcanzado el equilibrio de presiones (vlvula abierta), y para evitar la
sobrecarga trmica del medio de cultivo, este debe sacarse enseguida del
autoclave y enfriar los recipientes rpidamente a temperatura de vertido entre
45 y 50 C, as se evitar alterar el medio de cultivo.

3-Vertido en placa:Previamente, remover el medio de cultivo oscilando el

recipiente en sentido circular para entremezclarlo de manera uniforme; verter el
medio a las cajas Petri a la temperatura de vertido, evitando la formacin de
humedad en la tapa de la caja. Las burbujas de aire en la superficie de la
placa se eliminan abanicando brevemente con la llama no luminosa de un
mechero de Bunsen. Recuerde que el proceso de servido de las cajas debe
realizarse en un cuarto estril o en cmara de flujo laminar.

4-Tubos de agar inclinado (bisel o pico de flauta), y sin inclinacin:Los

tubos llenos de medio de cultivo esterilizado, todava lquido, se colocan en una
posicin inclinada de tal forma que se forme una placa de aproximadamente
3cm y una superficie inclinada de iguales dimensiones (Agar inclinado, pico de
flauta o bisel). En los casos en los cuales se requiere el medio sin inclinar,
estos deben dejarse solidificar en posicin vertical sobre una gradilla.
5-Conclusiones
Se puede elaborar medios de cultivo de manera sencilla, siendo muy til para
el estudio de microorganismos debido a que en este tipo de medio se los puede
reproducir con facilidad. Elaborar medios de cultivo resulta eficiente para la
reproduccin y el posterior aislamiento de alguna cepa de microorganismo que
nos interese estudiar.
6-Bibliografia
1-Aquiahuatl Ramos, M. A., y Prez Chabela, M. L. 2004. Manual de prcticas
del Laboratorio de Microbiologa General. Universidad Autnoma Metropolitana,
Unidad Iztapalapa. Mxico. Departamento de Biotecnologa. 116 p.

2-Baker, F. J., y Breach, M. R. 1990. Manual de tcnicas de Microbiologa

Mdica. Editorial Acribia. Zaragoza, Espaa. 676 p.

3-Brock y Madigan. Microbiologa. Editorial. Prentice Hall Hispanoamrica S.A..

6edicin. Mxico 1993.

4-Castao-Zapata, J. y Del Ro Mendoza, L. 1997. Manual para el diagnstico

de hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatgenos. Zamorano- Universidad
de Caldas. 210 p.

5-MADIGAN M. T. MARTINO J.M.; Parker J. Brock Biologa de los

Microorganismos, Editorial. Prentice Hall Hispanoamericana S.A. 8 edicin.
Madrid. 1998.

Paginas de internet consultadas:

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-demicrobiologia/indice/preparacion-
de-medios-de-cultivo-
http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf