Ao del Buen Servicio al Ciudadano

Tema:
Medio de Cultivo.

DOCENTE : Ing. Tejada Hinojoza

CURSO : Fitopatologia General

CICLO : V A

TURNO : Maana

ALUMNO : Alvarado Aparcana Kevin

ICA PERU
 Medio de Cultivo
Introduccin
El presente trabajo se llevara a cabo para desarrollar el proceso de cmo trabajar
con los hongos bacterias, virus, etc. El medio de cultivo constituye el aporte de
nutrientes para el crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa
depender de la especie que se quiera cultivar. Hay microorganismos muy poco
exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos
muy exigentes que necesitan otras sustancias para crecer.

Esta prctica a realizarse se llevara a cabo para poder estudiar todo

microorganismo, lo cual es necesario el uso de medios de cultivo. Ya sea
desarrollando cada paso uno a uno para que as esta prctica pueda desarrollarse
de manera ordenada y responsable.

Ya que adems este proceso tiene dificultad ya que puede infectarse de algn otro
organismo que no sea el que estemos cultivando as arruinando todo el proceso
ya realizado, lo cual debe de realizarse con total asepsia adems de desarrollar
los procesos de esterilizacin de los materiales para as evitar que ocurra estos
inconvenientes.

Objetivos:

El objetivo principal de cultivar a un microorganismo es obtener un cultivo; es

decir un cultivo puro que se forma a partir de una sola clula.
Aprender a diferenciar entre cada uno de los medios de cultivo que se vayan a
realizar en la prctica de laboratorio. Ya sea realizar este mtodo de forma
detallada y responsable para no tener inconvenientes al momento de que el
organismo empiece a crecer.
Desarrollar los mtodos de esterilizacin para que as no haya inconvenientes
de que se contamine con algn otro compuesto,
 Marco terico

Revisin Bibliogrfica
Un medio de cultivo es una tcnica de laboratorio que consta de un gel o una
solucin que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, hongos, nematodos,
microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn lo
que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones.

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en diferentes hongos y bacterias, virus y nematodos en el
laboratorio. El material en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
diferentes.

Es una solucin lquida o gelatinosa que contiene los nutrientes necesarios para el
crecimiento de los microorganismos

Clasificacin de los medios de cultivo:

1. Por su consistencia:

a. Lquidos: tambin se llaman caldos de cultivo, no contienen agar y se preparan

en matraces pequeos.

b. Semislidos: contienen 0.5% de agar y se preparan en matraces pequeos.

c. Slidos: contienen de 1.5 a 2% de agar y se preparan en cajas petri (placa) o

en tubos de ensaye.

2. Por su composicin:

a. Definido: se conoce su composicin exacta, se utiliza cuando ya se conocen

los microorganismos que se van a cultivar.

b. Complejo: no se conoce su composicin, pueden tener sangre, leche, extracto

de levadura o carne; se utiliza cuando no se conocen a los microorganismos o no
se conocen sus requerimientos nutricionales.

c. Mnimo: es un medio definido que proporciona solo los nutrientes necesarios.

 3. Por su funcin:

a. Selectivos: promueve o inhibe el crecimiento de los microorganismos

b. Diferenciales: permiten distinguir entre diferentes tipos de microorganismos.

c. De enriquecimiento: contiene factores de crecimiento, un nutriente esencial

que el microorganismo no puede sintetizar.

Preparacin de los Medios de Cultivo.

Para la realizacin y como preparar, es la base para la elaboracin en un medio

deshidratado, un medio que est en polvo al cual hay que disolver en agua y
esterilizar.

Primeramente se dar a conocer los distintos materiales que se emplearan en el

medio de cultivo. Los cuales son los siguientes:

Agar
Agua destilada
Placa Petri
Matraz Erlenmeyer
Algodn
Autoclave

Al ya conocer todos los materiales que se emplearan se continuara con la prctica.

Luego se proceder a la preparacin continuando con los siguientes pasos:

1er Paso. Pesar los medios de Cultivo. Cada muestra debe contener distintos
cantidades, ya sea en bacterias y hongos lo cual
se explicara a continuacin:

En Bacterias: se tendr que colocar por lo

menos 23 g de agar nutritivo para un litro de
agua destilada.

En Hongos: se deber colocar ya sea el agar,

dextrosa y papa y extracto de levadura para un
litro de agua destilada
2do Paso. Luego se coloca el medio de cultivo en polvo en un matraz Erlenmeyer
y luego se agrega agua destilada.

3er Paso. Ya al haber colocado todo en el matraz y el agua destilada se procede a

calentarlo en un calentador o una pequea cocina, dejarlo ah hasta que el medio
de cultivo llegue a tener una coloracin ya sea cristalina o blanquecina.

4to Paso. Luego de haberlo dejado en el calentador, primeramente formar unos

tapones de algodn que sern colocados en el Erlenmeyer para que no entre
ningn otro organismo que es desconocido.

5to Paso. Ya al haber calentado procedemos a retirar el Erlenmeyer del

calentador y colocar los tapones de algodn. Esto debe quedar bien fijado.
Adems en la boquilla del Erlenmeyer se tapara el algodn con una hoja de papel
para que este bien protegido.
6to Paso. Luego de haber sellado el medio de cultivo, se colocara en el autoclave
para que se pueda esterilizar a 121 C durante un lapso de tiempo de 20 minutos.

7mo Paso. Ya al haber pasado ese tiempo en la autoclave, se retirara de forma

responsable para evitar accidentes y dejar enfriar solo un poco.

8vo Paso. Luego se proceder a vaciar el

medio de cultivo en las placas Petri dentro
de un lugar esterilizado. Ya sea en cada
placa se deber vaciar una cantidad
aproximada de 30 ml.

Ya al saber cmo se desarrolla paso a paso el medio de cultivo, tambin debemos

tener en cuenta lo primordial para desarrollar esta prctica. Lo que es la limpieza
en el medio de cultivo, que es la esterilizacin:

Esterilizacin: una tcnica empleada en el laboratorio de Fitopatologa que es la

esterilizacin. Esterilizar o esterilizacin es eliminar todos los microorganismos
presentes en nuestro material. Todos los aparatos, superficies y materiales que
van a ser utilizados para cultivar deben ser esterilizados.
Lo cual se empleara los siguientes mtodos:

1. Mtodos fsicos:
Calor hmedo:

A.- autoclave

2. Mtodos fsicos:
Calor seco:

A.-estufa

B.-Rayos ultravioleta
Lo cual se puede hacer uso ya sea a
travs de la cmara de flujo laminar.
Adems se ver: Distintos medio de cultivo en Agar:

Agar Agua
Consiste en colocar 30 gr de agar en 1L de agua destilada. Este medio es muy
utilizado y adems es recomendado para la germinacin de conidios de Fusarium
lo cual sern utilizados para poder iniciar un cultivo.
Es especialmente usado para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo a
la consistencia que se quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o menor
cantidad de agar.
Aislamiento de hongos a partir de tejido vegetal. Se logra que el crecimiento sea el
resultado de la nutricin que posee el tejido vegetal.

Materiales
Agar 10 gr
Agua destilada 1 litro

Preparacin

Primeramente se agrega el agar al agua, luego se calienta hasta que se derrita y

luego se distribuye y luego se procede a esterilizarlo, lo cual este es ms simple
colocarlo en las placas.

Papa Dextrosa Agar (PDA)

Este medio es preparado con papas naturales. Es usado muchas veces para
separar los parsitos de plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y
esporulan en este medio.

Materiales y Preparacin:

Papa sin pelar 200 g

Dextrosa 10 g

Agar 18 g

Agua destilada 1 litro

Lavar las papas, cortarlas y hacerlas hervir en un litro de agua destilada por 20
minutos, colar y disolver en el lquido la dextrosa y el agar. Esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 15 libras de presin.
 Agar Papa Azcar (CPA)

Medio propicio para el crecimiento de hongos que son cultivables, adems til
para el aislamientos de estos cuando no hay una reproduccin bacteriana.

Materiales y Preparacin:

Trozos de papa Pelada 250 gr

Sacarosa 410 gr
Agua 1000 cc
Agar 18gr
Se hierve la papa a 500 cc de agua por 30 minutos, mientras se derrite el agar en
otros 500cc. Filtre el caldo de papa con tamiz y gasa. Luego se junta las dos
preparaciones y luego se agrega el azcar y se disuelve, y luego se restituya e
lagua hasta las 1000 cc. Luego se distribuye y esterilice.

Agar Harina de Maz

Este tipo de agar es usado para el aislamiento y la esporulacin en algunas

especies como pueden ser la de Phytophtora.

Materiales y Preparacin:

Harina de Maz 20 gr
Dextrosa (opcional) 20 gr
Peptona (opcional) 20 gr
Agar 18 gr
Agua hasta que se completa 1000 cc
Primeramente se mantiene la harina de maz en 500 cc de agua a una
temperatura de 60 c por 1h. Luego se obtiene un filtrado a travs de muselina,
agregarlo al agar y derretirlo en otros 500 cc de agua. Se acostumbra a agregar
dextrosa, luego se completa el volumen a 1000 cc de agua. Luego de esto se
distribuye y se esteriliza.
 Agar Nutritivo (AN).

Se utiliza en este caso para el aislamiento de casi todas las bacterias, adems
como medio de investigacin y generalmente para almacenaje.

Materiales y Preparacin:

Extracto de carne vacuno 3 gr

Peptona 10 gr
Agar 18 gr
Agua hasta que complete 1000 cc
Primeramente se tiene que derretir el agar, para luego proceder a disolver los
otros ingredientes y luego se ajusta el volumen. Luego se filtra se distribuye y
luego procedemos a esterilizar.

Agar Czapeck.

Este es un cultivo de Hongos y bacterias consumidores a travs del Nitrato sdico.

Materiales y Preparacin:

Fosfato de potasio 1.0 gr

Nitrato de Potasio 2.0 gr
Sulfato de Magnesio 0.5 gr
Cloruro de Potasio 0.5gr
Sulfato Ferroso 0.005 gr
Sacarosa 30.0 gr
Agar 15.0 gr
Agua destilada 1000 ml

Primeramente se disuelve el agar en 500 ml de agua a travs del bao Mara.

Luego disolver los otros ingredientes en 500 ml de agua y mezclar ambas
soluciones. Despus de esto se agrega la sacarosa luego de los otros ingredientes
se hayan disueltos. Dispense el medio en ingredientes adecuados y esterilizarlos
en autoclave a 15 libras de presin por minuto.
 Agar V 8

Este medio de cultivo es muy especial ya que con este se logra estimular la
esporulacin de muchos hongos.

Materiales y Preparacin:

Juego v 8 200 gr
Carbonato de Calcio 3 gr
Agar 15 20 gr
Agua Destilada 800 ml

Primeramente se pesan el agar y el Carbonato de Calcio. Luego se coloca en un

matraz, agrega el juego y luego y se afora con el agua hasta obtener un volumen
de 1000 ml. Sellar y esterilizar el matraz. Se recomienda agitar al momento de
echarlo para que no se precipite. Este medio puede hacerse en diferentes
concentraciones solo que solamente logra variar la cantidad del juego.

Preparacin de Cmara Hmeda.

Definimos como cmara hmeda de laboratorio a un sistema cerrado capaz de

mantener una atmsfera saturada de humedad bajo condiciones estables de
temperatura. Esta caracterstica se utiliza en los medios de cultivo para inhibir el
crecimiento de bacterias. Cuando se cultivan en laboratorio la mayora de ellos
crecen bien a 22-25C. Es un medio de cultivo bastante utilizado para el recuento
de hongos y levaduras.

Para impedir el crecimiento bacteriano estos medios de cultivo generales se

acidifican y/o se aaden antibiticos. Los medios de cultivo acidificados son los
que se han usado tradicionalmente para el recuento de hongos y levaduras.

La muestra a colocar en el recipiente debe estar limpia para que los resultados no
se vean alterados por posibles contaminantes. Son de gran utilidad con
organismos que logran crecer rpidamente sobre hospederos.

Para agregar estos son de especial utilidad con microorganismos que llegan a
crecer de forma rpida sobre hospedero y compiten bien con los saprofitos dentro
de la cmara hmeda.
 Discusin
En el proceso de medios de cultivo an falta desarrollar las practicas lo cual
tendremos un mejor entendimiento del tema. Adems este proceso el cual se
desarrollara nos ayudara a identificar, adems de desarrollarlo de forma
responsable ya cada objeto es de vidrio, adems que los medios de cultivo al ser
plantados en la placa solo debe crecer un solo organismo.

Conclusiones
Este proceso el cual se desarrollara nos ayudara a identificar, adems de saber
diferenciar entre los hongos, nematodos, virus y bacterias; ya sea como la
phitoctora, el mildiu, entre otros.

Adems de saber cmo es el proceso de crecimiento de cada uno de ellos, ya sea

el de virus, mildiu, nematodos hongos y bacterias.

Bibliografa.
https://es.slideshare.net/guest5e31b0e1/medios-de-cultivo
https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_enriquecimiento
https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
http://www.medioscultivo.com/czapek-dox-agar/

https://books.google.com.pe/books?id=nR8PAQAAIAAJ&pg=PA37&lpg=PA37&
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Mtodos de investigacin fitopatolgica Escrito por Eduardo R. French,
Teddy Theodore Hebert Teora sacada de las Pg. 36 38

https://books.google.com.pe/books?id=i8QOAQAAIAAJ&pg=PA45&lpg=PA45&
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Qfgz6rA-
FQveJvx4&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjwtuX74qDXAhXEbiYKHQ_cBvUQ6AE
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Manual de Lab. Para Fitopatologa General Escrito por Eddie Echandi

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