Elena Siekavizza

Facultad de Ciencias Ambientales y Agrcolas Carn: 1008112

Bioqumica 25.09.2013
Ing. Walter Mayen

Carbohidratos: Pruebas de reduccin

Prctica No. 3
Objetivos

Organizar los tubos de ensayo con base al color iniciado luego de los 5 minutos por azul, verde,
amarillo, naranjas, rojos y corintos.
Conocer pruebas de reduccin para monosacridos con distintas soluciones de carbohidratos dadas
en el laboratorio.
Determinar cualitativamente azucares en jugos comerciales de frutas.

Antecedentes
Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, oxgeno e hidrogeno. Las cuales varias molculas ms
importantes en la vida de los microorganismos la contienen, como por ejemplo la glucosa. Esta es utilizada
por las clulas para la obtencin de energa metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el musculo, que
forma la reserva de energa ms fcilmente accesible para las clulas del organismo y la ribosa y desoxirribosa
que forma parte de la estructura qumica de los cidos nucleicos. Desde el punto de vista qumico, los
carbohidratos son polihidroxi aldehdos o cetonas y sus polmeros. Existen tres categoras principales que se
distinguen por el nmero de unidades de azcar que los conforman: monosacridos, oligosacridos y
polisacridos. Los polisacridos liberan a la hidrolisis centenares o millares de monosacridos; mientras que
los oligosacridos producen de dos a 10 monosacridos y los monosacridos mismos son las unidades
mnimas de los carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a que su
estructura qumica se parece a formas hidratadas de carbono y se representa con la formula Cn (H2O) (Berg,
2008)

Los carbohidratos poseen diversas funciones en el organismo tales como, combustible metablico ( 1 gramo
de carbohidrato produce 4 kilocaloras), como precursores en la biosntesis de cidos grasos y algunos
aminocidos y tambin como constituyentes de molculas complejas importantes como lo es, glucolpidos,
glicoprotenas, nucletidos y cidos nucleicos. (Pacheco, 2006)
Hay dos familias de monosacridos, las aldosas y cetosas. Las aldosas y cetosas ms abundantes en la
naturaleza tienen entre 3 y 6 tomos de carbono. Normalmente, las cetosas se denominan insertando una
silaba ul en el nombre de la aldosa correspondiente. Los monosacridos, son pticamente activos, esto quiere
decir que, hacen girar el plano de la luz polarizada ya que tienen uno o ms tomos de carbono asimtricos
(quirales). En general, una molcula con n centros quirales puede tener 2n esteroisomeros. En la
nomenclatura de los monosacridos se pone habitualmente la letra D o L que corresponda segn su
configuracin de su ltimo carbono asimtrico. La D significa que el OH en ese carbono se encuentra en la
derecha y la L de izquierda, a diferencia de cuando se escribe d y l en letras minsculas que hablan solamente
del sentido de rotacin del plano de la luz polarizada. (Voet, 2006) (Berg, 2008)

Tanto el estudio estructural de los hidratos de carbono como su cuantificacin por mtodos colorimtricos se
basan en las reacciones qumicas propias de los grupos funcionales que poseen los hidratos de carbono o en
las caractersticas de los enlaces que establecen. La reduccin de aldehdos y cetonas a alcohol, la cual el
borohidruro de sodio reduce las aldosas a los alditoles correspondientes. Las cetosas se reducen a alcoholes
secundarios. En la mayora de los casos, se reduce el nmero de centros de asimetra molecular. (Guerrero,
2007)

Las funciones de los glcidos en el organismo son energticas, ahorro de protenas, regulan el metabolismo
de las grasas y estructuras. Los carbohidratos aportan 4 kcal por gramo de peso seco. Sin considerar el posible
contenido de agua que pueda tener el alimento en el cual se encuentre el carbohidrato. Cubiertas toda
necesidad energtica, existe una pequea parte donde se almacena la energa que es el hgado y los musculos
como glucgeno, el resto se transforma en grasas y se acumula en el tejido como un tejido adiposo. Si el
aporte de carbohidratos resulta no ser lo suficiente, se utilizaran las protenas para los fines energticos,
relegando su funcin plstica. Si existe una deficiencia de ingesta de carbohidratos, las grasas se metabolizan
anormalmente acumulndose en el cuerpo cetnicos, que son los productos intermedios de este
metabolismo el cual se presentan serios problemas, como la cetosis. Los carbohidratos constituyen una
porcin pequea del peso y estructura de un organismo, de cualquier manera, no debe excluirse esta funcin
por un mnimo que sea su indispensable aporte. (Bohinski, 1981)

Para identificar carbohidratos existe un mtodo ms comn, que es la prueba Benedict. Esta reaccin es
especfica para azucares con grupo de reductores libres (C-O). Todos los monosacridos poseen un grupo
reductor libre. Los disacridos como la maltosa y la lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa
no los posee, ya que se llegan a perder estos grupos reductores de sus componentes cuando se encuentra ya
formada. Se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu +2 a en un medio alcalino. El Cu+1 se oxida y
se precipita en forma de Cu +1, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin
depender de la cantidad de concentracin de xido de cobre y la reduccin del cobre va desde verde,
amarillo, anaranjado o rojizo. (Guerrero, 2007)

Diagrama de flujo

Identificar 7 tubos de ensayo. Colocar los tubos de ensayo

Colocar 20 gotas de Agregar 5 ml del reactivo en bao de mara. Luego de 5
soluciones azucares y jugos Benedict. minutos colocarlos en orden
naturales de colores. Anotar.

Del tubo anterior

Aadir al primer Colocar 5 tubos de
tomar 1 ml y
tubo 1 ml de ensayo con 1 ml de
agregar al segundo
glucosa. agua cada uno.
tubo.

Realizar el mismo
Colocar otros 5 tubos de Agregar 10 gotas de cada una
procedimiento. Hasta
ensayo y agregar 5 ml del de las 5 diluciones de glucosa
terminar en el 5to tubo de
reactivo de Benedict. que se prepar.
ensayo.

Mezclar bien.
Colocar en bao de
mara durante 3
minutos. Anotar.
Datos, clculos y resultados

Material y equipo utilizado:

- 2 pipetas de 5 ml
- 13 tubos de ensayo
- Gradillas
- Pinzas para tubos de ensayo
- Beakers de 100 y 500 ml
- Probeta de 50 ml

Tabla 1. Resultado de las soluciones de carbohidratos.

Solucin Tiempo
3 minutos 5 minutos
Maltosa Verde-azul Amarillo-verde
Fructosa Anaranjado Anaranjado-rojo
Sacarosa Azul Azul
Glucosa Verde Verde- amarillo
Jugo Kerns Mostaza-verde-caf Naranja- verde
Jugo Rabinal Verde Amarillo-Naranja
Jugo de Mango Azul Azul

Tabla 2. Resultado de cantidad de glucosa.

Cantidad 2.5% 1.25% 0.625% 0.3125% 0.1562%
Amarillo Anaranjado Verde Azul Azul
Coloracin Verde Verde Azul
Azul Azul

Observaciones

- En la primera parte de la prctica se observaron los primeros 7 tubos al pasar los 3 minutos y luego se
volvi a observar cuando se cumplieron los 5 minutos. La mayora de los tubos de ensayo cambiaron
su coloracin al terminar los 5 minutos.
- En la ltima parte de la prctica se observ que el tubo de ensayo que contena mayor glucosa fue la
que tena diferentes tonalidades en toda su dilucin.
- Se utilizaron 3 tipos de jugos comerciales, jugo de mango, kerns y Rabinal.

Discusin de resultados

En la primera parte de la prueba se utilizaron distintas soluciones de carbohidratos la cuales se queran

identificar azcares reductoras. Se tuvieron las 7 muestras en un tubo de ensayo la cual se le agregaron
aproximadamente 5 ml del reactivo de Benedict. A la primera muestra, maltosa, al final de la observacin el
tubo de ensayo tubo un color amarillo. La maltosa presenta en toda su estructura qumica un OH
hemiacetlico por lo tanto es un azcar reductor. Respecto a la fructosa, es posible observar que dio positivo
presentando un color anaranjado, esto ocurre debido a las condiciones en las que se realiza en un medio
alcalino, la cetohexosa (fructosa) se tautomeriza, lo que quiere decir que se encuentra pasando por un medio
enolico, produciendo glucosa lo que hace que el ion cprico se reduzca. La sacarosa dio negativo debido a que
no es una azcar reductora. Ya que sus OH del Carbono anomrico estn siendo utilizados para el enlace
glucosidico. La glucosa dio positivo, es un monosacrido y es un azcar reductor fuerte. Para realizar la prueba
Benedict sobre jugos comerciales, un jugo de mango dio negativo, color azul, esto se debe a que el jugo de
mango no contiene azucares reductores y es muy probable que el sabor a mango sea sinttico. Y por ltimo
los jugos de kerns y Rabinal dieron positiva las pruebas, lo que se deduce que si contienen azcares
reductoras. La ltima parte de la prueba, se utiliz distintas cantidades de glucosa, realizadas por dilucin en
serie. La que contena mayor cantidad de glucosa 2.5% dio positiva. Con forme la cantidad de glucosa va
disminuyendo la prueba de Benedict no encuentra azucares rectores por lo tanto la solucin se torna color
azul. Las primeras dos, las cuales se observa una diferencia de colores que varan entre el amarillo y el verde,
es por la cantidad de glucosa. En el tercer tubo de ensayo la cual se tiene una concentracin de 0.625% posee
una pequea cantidad de azucares reductoras debida a su leve tonalidad de verde en su solucin.

Preguntas post laboratorio

1. Investigar sobre la prueba de Benedict:

La prueba de Benedict se utiliza en qumica para localizar la presencia de monosacridos y azucares
reductores. La solucin de Benedict tiene entre sus componentes carbonato de sodio, citrato de sodio y
sulfato de cobre. Para realizar esta prueba se posee una pequea cantidad del alimento disuelto en agua, se
agrega una pequea cantidad del reactivo. Si no existe ningn azcar presente el color de la solucin
permanecer de color azul. En presencia de azcar el color cambia a verde, amarillo, naranja rojo y corinto.
Un cambio de color confirma la presencia de la glucosa. La sacarosa no se identifica directamente en esta
prueba debido a que no es una azcar reductora. (Berg, 2008)

2. Qu puede concluir de las diversas coloraciones obtenidas en la primera parte del experimento?
Las soluciones que tienen ms unidades de azcar cambian de color con mayor rapidez como lo fueron los
jugos. La sacarosa permaneci del mismo color, azul, debido a que esta no es una azcar reductora. La
mayora de los tubos de ensayo que contenan los jugos comerciales presentaron distintas tonalidades de
colores dentro de sus soluciones.

3. Investigue sobre mtodos cuantitativos y cualitativos para determinar azucares en diferentes

medios.
- Prueba de Bial: Es una prueba especfica para la determinacin de pentosas. Cuando es positiva la
prueba su coloracin es de color verde brillante.
- Prueba de Molish: Es una prueba especficamente para determinar carbohidratos que contengan 5
tomos de carbono.
- Prueba de lugol: Se utiliza para identificar almidn. El color azul se debe posiblemente a la formacin
de un complejo ioduro de almidn.
- Prueba de Barfoed: Sirve para identificar monosacridos y algunos disacridos en especial los
reductores, dan positiva la reaccin cuando se calienta ya que se hidroliza el disacrido. Es posible
que se deba debido a la reduccin del acetato cprico a oxido cuproso.
- Prueba de Fenilhidrazina: Sirve para distinguir oligosacridos. Los carbohidratos que solo se
diferencian en sus tomos de carbono 1 y/o 2 darn la misma como es el caso de la glucosa y la
fructosa que son ismeros de funcin.
- Prueba de Benedict: Sirve para identificar soluciones que posean azucares reductores o carboxilos
libres.
- Prueba de Seliwanott: Sirve para identificar cetosas que contengan 5 o ms tomos de carbono, pero
se usa especficamente para identificar fructosa. (Voet, 2006)

Conclusiones

- Para las distintas soluciones de carbohidratos se clasificaron por medio a color y por medio a la
cantidad de azcares reductoras en su solucin. Lo cual iba desde los amarillos, anaranjados, verdes,
 rojos y por ultimo los azules que identificaban que la prueba es negativa, lo que quiere decir que no
hay azucares reductores en la disolucin.
- Para la reduccin de monosacridos se pueden utilizar distintas pruebas, por ejemplo la realizada en
el laboratorio.