TESIS

Trabajo Final para optar al Ttulo
de
Licenciada en Biotecnologa
OBTENCIN DE ACEITE COMO

MATERIA PRIMA
PARA BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR
DE PLANTAS NATIVAS
DE LA REGIN DEL NOA:
EXPERIENCIA CON JATROPHA SP.
Constanza Mara Adn

Alumna
Lic. Gloria Susana Jaime
Directora
Dra. Cintia Mariana Romero
Co-Directora
Este trabajo fue realizado en:
Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia

Ctedra de Farmacobotnica
ndice
RESUMEN 5
INTRODUCCIN. 7
Problemtica energtica. 8
Biocombustibles.. 8
Biodiesel 9
El gnero Jatropha: taxonoma y distribucin. 11
Usos de Jatropha. 12
Importancia del gnero Jatropha como cultivo energtico. 15
HIPTESIS.. 17
OBJETIVOS. 17
OBJETIVOS ESPECFICOS. 17
MATERIALES Y MTODOS.. 19
1. Recoleccin del material vegetal.. 20
2. rea de estudio 20
3. Identificacin taxonmica... 21
3.1 Clave de identificacin para especies del gnero Jatropha. 22
4. Recoleccin de frutos y obtencin de semillas de Jatropha sp. ... 23
5. Anlisis de semillas de Jatropha sp. 23
5.1 Estudio morfolgico.. 23
5.2 Estudio histolgico 24
5.2.1 Pruebas histoqumicas.. 24
5.2.2 Anlisis histolgico 24
5.2.3 Microscopa electrnica de Transmisin y Barrido 26
5.3 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de aceite 26
5.4 Anlisis de Viabilidad 29
5.4.1 Aplicacin de tcnica de Viabilidad en semillas de Jatropha sp. 29

6. Germinacin de semillas.... 31
7. Extraccin de aceite de Jatropha sp. ... 34
7.1 Extraccin con n-hexano.. 34
7.2 Extraccin con mezcla cloroformo-metanol.. 34
8. Determinacin de la composicin qumica del aceite de Jatropha sp. 35
8.1 Evaluacin del perfil lipdico por Cromatografia en capa fina (TLC)... 35
8.2 Evaluacin del perfil lipdico por Cromatrografa Gaseosa (GC-FID) 36
9. Anlisis Termo gravimtrico (TLC) 37
10. Determinacin de Actividad Enzimtica lipoltica. 37
RESULTADOS Y DISCUSIN.. 38
1. Caracterizacin del rea de estudio.. 39
2. Identificacin taxonmica... 40
3. Descripcin Botnica de la especie. Caractersticas exomorfolgicas 41
3.1. Exsiccata... 45
4. Caracterizacin del fruto de Jatropha peiranoi 48
5. Caracterizacin morfolgica de la semilla de Jatropha peiranoi... 49
5.1 Forma, tamao y color de las semillas.. 50
6. Aspectos anatmicos. Caracterizacin histolgica de la semilla.. 53
6.1 Estructura y composicin de las semillas.. 54
6.2 Pruebas histoqumicas. 55
6.3 Estructura Interna del tegumento 56
6.4 Estructura Interna del endosperma y embrin.. 58
6.5 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de aceite. 61

7. Anlisis de Viabilidad.. 62
8. Germinacin de semillas 63
9. Extraccin del aceite con solventes................ 67
10. Caracterizacin fsico-qumica del aceite de Jatropha peiranoi. 68

10.1 Cromatografa en placa (TLC)... 68
10.2 Cromatografa Gaseosa (GC-FID) 69
10.3 Anlisis Termo gravimtrico (TGA).. 71
11. Actividad lipoltica.. 73
CONCLUSIONES 74
BIBLIOGRAFA 78
Abreviaturas
DO: densidad ptica.
FAA: formaldehido-alcohol etlico-cido actico-agua.
FAME: mtil ster de cidos grasos.
FID: detector de ionizacin en llama.
GC: cromatografa de gases.
GC-FID: cromatografa de gases con detector de ionizacin en llama.
LIL: sigla de reconocimiento del Herbario Miguel Lillo
m s. n. m.: metros sobre nivel del mar
NOA: noroeste argentino
p-NPA: p-nitrofenil acetato
P-NPL: p-nitrofenil laurato
Rf: movilidad electrofortica relativa
rpm: revoluciones por minuto
S: south: sur
SEM: microscopio electrnico de barrido
TEM: microscopio electrnico de transferencia
TLC: cromatrografa en placa
W: west: oeste
Resumen
La bsqueda de energas alternativas que reduzcan la dependencia
petrolera y los problemas asociados a las materias primas empleadas en la
obtencin de biocombustibles, motivan la investigacin de nuevas especies, no
comestibles, productoras de aceite. Diferentes trabajos reportan el uso de
especies del gnero Jatropha, J.curcas, J. macrocarpa, J. hieronymi como
materia prima para la produccin de biodiesel. Las semillas del gnero Jatropha,
son ricas en contenido de aceite, lo que hace interesante investigar nuevas
especies, de Jatropha sp.
Para la realizacin de este trabajo se recolect una especie nativa y
silvestre en zonas ridas del Valle Calchaqu para ser estudiada como potencial
especie oleaginosa, como una va alternativa para la produccin de
biocombustible.
En este trabajo se realiz la identificacin y caracterizacin botnica de la
especie recolectada, Jatropha peiranoi Lourteig & O'Donnell, planta endmica de
las provincias de Catamarca, Tucumn y Salta (Argentina). El estudio de su
aspecto vegetativo aporta caracteres diagnsticos para su reconocimiento,
presencia de pecolos canaliculados con expansiones foliceas en el borde del
canal, con glndulas estipitadas, y hojas con borde crenado. Los caracteres
reproductivos, flores y frutos, permitieron conocer su fenologa en cuanto a la
poca de floracin, fructificacin, maduracin y recoleccin de frutos y de
semillas. La morfologa de la semilla, permiti definir forma, tamao y color,
parmetros tiles al momento de seleccionarlas para realizar pruebas de
viabilidad y germinacin. La anatoma e histoqumica de las semillas aport a la
diagnosis de la especie, en cuanto a su estructura externa e interna, cuyo

tegumento posee episperma liso, macroesclereidas, parnquima colapsado,
fibras y restos de nucela y endosperma con parnquima rico en oleosomas e
inclusiones proteicas. El nmero de oleosomas encontrados fue entre 14 y 16,
con distribucin espacial agrupada dentro de la clula. Las pruebas de viabilidad
y de germinacin dieron como resultado un 80% de semillas viables y un 32%
de semillas germinadas. Caracteres que se informan por primera vez en este
trabajo.
En cuanto a la extraccin del aceite por mtodos qumicos con solventes
de distintas polaridades, permitieron conocer la eficiencia de extraccin y
rendimiento de aceite, obtenindose con n-hexano el mejor rendimiento, 88%.
El anlisis del contenido de triglicridos indic que el mismo es rico en
cido linoleico, presente en un 74,5% encontrandose tambin, cido oleico
(15,6%), cido palmtico (5,9%) y cido esterico (4%).
El anlisis termo gravimtrico del aceite de Jatropha peiranoi determin el
comportamiento del aceite frente a la temperatura y establecer que a
temperaturas inferiores a 380 C se mantiene estable. A temperaturas superiores
a 500 C la descomposicin es total.
Se detect actividad enzimtica lipoltica (lipasa y esterasa) en la biomasa
residual, esterasa con actividad de 4,23 U/L y lipasa con 2,35 U/L.
El conocimiento morfolgico e histolgico de la semilla de J. peiranoi y la
caracterizacin del aceite rico en cido linoleico, hacen a esta planta nativa una
especie promisoria como cultivo oleaginoso para ser usada como materia prima
en la produccin de biocombustible. Por otro lado, se aporta a la revalorizacin
de especies vegetales nativas promoviendo su cultivo como una nueva actividad
para el sector agrario de la regin.

Introduccin
Problemtica energtica
En los ltimos aos el mundo atraviesa una crisis debido al creciente
aumento de precios de los combustibles y la posibilidad de que las reservas se
agoten en un futuro mediato (Falasca et al., 2008). Esto se debe a que los
productos derivados de fuentes fsiles tienen un perodo acotado en el tiempo,
en particular el petrleo, principal materia prima utilizada para la elaboracin de
combustibles. La disponibilidad de este recurso radica en pocos pases, lo que
lleva a la bsqueda de nuevas fuentes de energa (IEA, 2015). Por otro lado es
necesario considerar la elevada contaminacin que genera el uso de
combustibles fsiles. De all que es necesario el vuelco hacia el uso de otro tipo
de energas alternativas y renovables (Falasca et al., 2008).
Las energas alternativas ms importantes son: elica, solar,
hidroelctrica, geotrmica y biomasa (IEA, 2015).
La biomasa se define como la fraccin biodegradable de productos,
desechos y residuos procedentes de la agricultura (incluidas las sustancias de
origen vegetal y de origen animal), de la silvicultura y de las industrias, as como
la fraccin biodegradable de los residuos industriales y municipales. Surge como
una fuente potencial de energa alternativa y en particular los cultivos energticos
que son aquellos destinados a la produccin de biocombustibles (Castells,
2005).
Biocombustibles
Segn la FAO (2015), los biocombustibles se presentan como una
solucin alternativa y transitiva a la escasez de los combustibles fsiles.

Los biocombustibles son combustibles producidos directa o
indirectamente de biomasa, se consideran renovables por provenir en forma
indirecta de la energa solar, a travs de la fotosntesis (FAO, 2015).
Los biocombustibles pueden ser slidos, lquidos o gaseosos. Los
primeros son la lea, el carbn vegetal y el estircol; lquidos, el bioetanol y el
biodiesel; gaseosos, el biogs y biohidrgeno (FAO, 2015).
Biodiesel
El biodiesel es un biocombustible derivado de aceites vegetales o grasas
animales que puede ser utilizado como sustituto o aditivo del disel
convencional, por lo que representa una alternativa a los combustibles fsiles
(Canakci, 2007). Es una fuente de energa limpia, renovable, de calidad y
econmicamente viable, que adems contribuye a la conservacin del medio
ambiente (Zheng et al., 2006).
Segn la norma de calidad IRAM 6515 (IRAM, 1989), el biodiesel es una
mezcla de steres metlicos o etlicos (de acuerdo al alcohol utilizado) de cidos
grasos saturados o insaturados de diferentes pesos moleculares, derivados de
la transesterificacin de aceites de origen vegetal.
El biodiesel puede ser sintetizado por un proceso de transesterificacin
catalizado por va qumica o enzimtica. En la primera se utilizan catalizadores
cidos o alcalinos y generalmente la reaccin es producida a elevadas
temperaturas (Huerga, 2010).
En la catlisis enzimtica o biocatlisis se utilizan enzimas del tipo lipasas
generalmente de origen microbiano. La biocatlisis se realiza en condiciones

ms suaves de reaccin, obteniendo productos ms limpios comparados con la
catlisis qumica (Luna-Durn, 2015).
El biodiesel puede ser producido por una gran variedad de materias
primas, entre las ms importantes se incluye el aceite de plantas oleaginosas.
Se denominan plantas oleaginosas a aquellas especies vegetales que se
cultivan por acumular aceite como sustancia de reserva en frutos y/o semillas.
Entre estos se pueden discriminar dos tipos de cultivos, los que presentan una
mayor concentracin de aceite que de protena, entre los que se encuentran,
pin o higuerilla, girasol, colza y ricino que son netamente oleaginosos. En
cambio otros como la soja tienen ms contenido de protenas que de aceite y
forma parte de los proteoleaginosos (Windauer et al., 2006).
Actualmente la produccin de biodiesel en nuestro pas se sustenta
principalmente en la soja. Sin embargo, se duda sobre la sostenibilidad
estratgica, ecolgica y social de la soja debido a algunas consecuencias
negativas que conlleva, como la expansin de la frontera agrcola y prdida de
biodiversidad por destruccin de ecosistemas naturales (Aizen et al., 2009).
As, se torna necesario ampliar la oferta de aceites para produccin de
biocombustibles. Actualmente, las actividades se centran en encontrar cultivos
alternativos como materia prima del proceso, abrindose un nuevo escenario, lo
que motiva la investigacin de nuevas especies oleaginosas no tradicionales, no
comestibles, productoras de aceite, como por ejemplo el gnero Jatropha sp.
(Falasca et al., 2008; Alves, 2008; Deore et al., 2008).

El gnero Jatropha: taxonoma y distribucin
Jatropha es una planta perteneciente a la familia de las Euphorbiaceae, la
palabra Jatropha proviene del griego iatrs que significa mdico y troph
alimento (Brtoli, 2008), conocida popularmente como nuez purgante, tempate,
pin o pioncillo, higuerilla, pin botija, yupur, barbasco, coquito (Janick, 2008).
El gnero Jatropha tiene histricamente su origen en Centro Amrica y el
norte de Amrica del Sur. Dentro del gnero se pueden encontrar ms de 170
especies distribuidas en diferentes partes del mundo (Rodrguez-Acosta et al.,
2009). Crece en reas tropicales como frica, el Sudeste Asitico, India y
Malasia, entre otros.
Se han localizado plantas nativas en Bolivia, Brasil, Colombia, Ecuador,
Paraguay, Per y Argentina (Heller, 1996) (Tabla 1).
Tabla 1. Diferentes especies del gnero Jatropha autctonas (Falasca et. al., 2008)
Jatropha Distribucin en Amrica Provincias Argentinas
Brasil,
breviloba Corrientes, Formosa
Noroeste de Argentina
Corrientes, Misiones, Jujuy,

curcas Desde Mexico hasta Argentina
Salta.
Paraguay, Bolivia y Norte de Formosa, Santiago del estero,

chacoana
Argentina Salta.
excisa Catamarca, Crdoba, Corrientes, Formosa,

Norte de Argentina
La Rioja, Salta, Santiago del Estero, San Luis,
San juan, Tucumn.
grossidentata Bolivia, Argentina Chaco, Formosa, Salta
isabelli W y Centro de Brasil,

Corrientes, Misiones
Noreste de Argentina
hieronymi Argentina, Bolivia, Paraguay Catamarca, Jujuy, La Rioja, Santiago del

Estero, Salta, San Juan, Tucumn
macrocarpa Argentina, Bolivia Catamarca, Chaco, Jujuy, La Rioja, Salta,

Santiago del Estero, San Luis, Tucumn
matacensis Paraguay, Argentina Formosa, Crdoba
pedersenii Argentina Corrientes
peiranoi Argentina Catamarca, Salta, Tucumn

En Argentina (Heller, 1996), se han registrado 11 especies pertenecientes
al gnero Jatropha: J. breviloba, J. chacoana, J. curcas, J. excisa, J.
grossidentata, J. isabelli, J. hieronymi, J. macrocarpa, J. matacensis, J.
pedersenii y J. peiranoi (Tabla 1).
Cinco de estas especies son endmicas, J. excisa, J. hieronymi, J.
macrocarpa, J. pedersenii y J. peiranoi (Zuloaga et al., 1999) (Fig. 1).
Fig. 1 Distribucin geogrfica de las especies de Jatropha de la Argentina (Clrici et al., 2013).
Usos de Jatropha
Esta planta ha sido histricamente empleada por indgenas en
aplicaciones medicinales. Fue producida comercialmente en la isla de Cabo
Verde y exportada a Portugal y Francia, en donde el aceite se us como
combustible para motores, lmparas y cocinas y como materia prima para la
produccin de jabones. En India, debido a la toxicidad de las hojas, la emplean
para alejar plagas, mientras que en frica, pases como Madagascar y Uganda
la emplean para proveer soporte fsico a las plantas de vainilla (Srivastava et al.,
2011; Brittaine et al., 2010).
El extracto de las hojas de Jatropha posee taninos (37%) que tie las telas
de un color negro indeleble que puede ser aprovechado para la industria textil,
tambin el ltex de esta planta contiene un 10% de taninos el cual puede ser
usado como tinta y tiene propiedades antimicrobianas contra Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pyogenes y
Candida albicans, posee efectos coagulantes y se aplica directamente en
heridas, cortes, sarpullidos, quemaduras como antisptico (Heller, 1996).
El uso de Jatropha como combustible sustituto se inici durante la
Segunda Guerra Mundial en Madagascar, Benn y Cabo Verde, y, su glicerina
era valiosa en la produccin de nitroglicerina (Brittaine et al., 2010). Durante los
ltimos aos, su cultivo ha sido considerado como una alternativa adecuada en
la produccin de biocombustibles debido a caractersticas de cultivo tales como
resistencia a la sequa, rpido crecimiento, fcil propagacin en reas no
competentes para cultivo con fines alimentarios y alto contenido de aceite
(Causarano, 2011; Akbar et al., 2009; Baroi et al., 2009; Kamarudin et al., 2009).
Adicionalmente, los residuos generados en la produccin de biodiesel pueden
emplearse como fertilizantes o en la produccin de biogs, considerando su uso
como un ciclo limpio (Abhilash et al., 2011).
La adaptacin de la semilla de Jatropha frente a distintas condiciones
ambientales aumenta su potencial como materia prima para su aplicacin
industrial (Achten et al., 2008).

La Figura 2 muestra un resumen de las mltiples aplicaciones de Jatropha
y sus productos.
Fig. 2 Usos de la planta y granos de Jatropha (Putten et al., 2010).

Importancia del gnero Jatropha como cultivo energtico
En el gnero Jatropha, los aceites se acumulan principalmente en semillas
y frutos, pero tambin se encuentran en cantidades importantes en rizomas y
otros rganos subterrneos. En las semillas se almacenan en compartimentos,
que van de 1 a 10 micrmetros de dimetro, conocidos como cuerpos de aceites,
oleosomas, rganos de lpidos o esferosomas (Moreau et al., 1980; Huang, 1994;
Cardinali et al., 2010). Se ha sugerido que los oleosomas surgen por la
acumulacin de aceite entre los fosfolpidos del retculo endoplasmtico rugoso
(Beaudoin et al., 1999) aunque tambin se ha reportado que se forman en el
citosol (Dutta et al., 1991).
En Argentina diferentes trabajos reportan el uso de especies del gnero
Jatropha (Casotti, 2008; Huerga, 2010; Falasca et al., 2008). Realizndose
estudios para la produccin de biocombustibles a partir de J. curcas, J.
macrocarpa, y J. hieronymi (Achten et al., 2008).
Las semillas de J. curcas se caracterizan por tener un contenido de aceite
(30-40% en peso) (Openshaw, 2000) con cidos grasos del tipo palmtico, oleico,
linoleico y esterico, siendo mayoritarios oleico 45,8% y linoleico 29%. El aceite
de Jatropha curcas, actualmente el ms utilizado para la produccin de biodiesel,
presenta un contenido de aceite, superior al de soja y palma (Arbak et al. 2009).
Las semillas de J. macrocarpa poseen un contenido del 36-40% de aceite,
siendo en este mayoritarios linoleico 55% y oleico 39%. Sin embargo la
produccin de semillas es baja por lo que necesita de mejoramiento en cuanto a
su cultivo para ser aprovechada (Wassner et al., 2012).

Las semillas de J. hieronymi poseen un 32% de aceite en sus semillas, en
el cual se encuentran en mayor proporcin el cido oleico en un 30% y el cido
linoleico en un 58% (Casotti, 2008)
El aceite de J. macrocarpa y J. hieronymi, tiene un buen rendimiento tanto
en cantidad y calidad, siendo el biodiesel obtenido a partir de estas dos especies
de similar calidad a los de soja, girasol y colza. La baja produccin de semillas
de estas especies, son todava motivo de investigacin para ser incorporadas
como cultivos oleaginosos (Falasca et al., 2008).
Debido al escaso conocimiento de especies nativas de Jatropha que
crecen en el NOA, en este trabajo se plantea el estudio de plantas nativas de
este gnero, en la zona de los Valles Calchaques, particularmente de la
localidad de Santa Mara, Catamarca, (Argentina). A partir de estos estudios se
busca contribuir al conocimiento de cultivos oleaginosos alternativos para la
produccin de biodiesel y aportar una nueva actividad para el sector agrario de
la regin.
Hiptesis
Especies nativas de Jatropha sp. recolectadas en zonas ridas del Valle
Calchaqu son potenciales especies oleaginosas para ser usadas como materia
prima en la produccin de biodiesel.
Objetivo General
Obtener y caracterizar aceite a partir de semillas de especies de Jatropha nativas
del Valle Calchaqu, para su aplicacin como materia prima en la obtencin de
biodiesel.
Objetivos especficos
1- Localizar especies de Jatropha sp. en zonas ridas de los Valles Calchaques.
Realizar la geolocalizacin, recoleccin e identificacin taxonmica de las
especies vegetales encontradas.
2- Caracterizar histolgicamente semillas de Jatropha sp. y realizar la
germinacin de las semillas de Jatropha sp.
3- Realizar la extraccin de aceite a partir de distintas tcnicas de extraccin y
caracterizar el aceite obtenido por tcnicas cualitativas y cuantitativas.
4- Evaluar la presencia de actividad enzimtica lipoltica en la biomasa residual
para dar valor agregado a las semillas de Jatropha sp.

Materiales
y
Mtodos
1. Recoleccin del material vegetal
La especie vegetal utilizada en este trabajo Jatropha sp. fue recolectada
en el Valle de Santa Mara, Catamarca (Argentina) a 1,5 Km del centro de esta
ciudad, a 1885 m s. n. m., coordenadas (66 2 33 W 26 41 16 S), en el mes
de marzo del ao 2015.
2. rea de estudio
El Valle de Santa Mara, coordenadas (66 2 00 W 26 41 00 S), se
encuentra en la provincia de Catamarca, delimitado geogrficamente por la falda
occidental del Aconquija, hacia el este, y la ladera oriental de la Sierra de Quilmes
o del Cajn por el oeste. Recorrido por el Ro Santa Mara que fluye de Sur a
Norte, con afluentes que provienen de la vertiente occidental de la Sierra del
Aconquija. En sus mrgenes se desarrollan cultivos de importancia para la
economa regional (Morlans, 1995), (Fig. 3 A). Corresponde a la Provincia
Fitogeogrfica de Monte (Fig. 3 B).
Este Distrito fitogeogrfico se ubica en el oeste y noroeste de la Argentina,
en la denominada diagonal rida; que abarca las provincias de Salta, Tucumn,
Catamarca, La Rioja, San Juan, y Mendoza (Cabrera, 1976). En el Valle de Santa
Mara, esta provincia fitogeogrfica se encuentra en el extremo sur en unidades
fisiogrficas entre los 500 y 2200 m s. n. m.

A B
Fig. 3 A- Regiones Naturales de Catamarca: Provincias Geolgicas y Provincias Fitogeogrficas

(Morlans, 1995) B- Mapa de Catamarca mostrando sus regiones fitogeogrficas. Tomado de
www.atlas.catamarca.gob.ar.
3. Identificacin taxonmica
Para la identificacin de esta especie, se recolect y herboriz la planta
entera de Jatropha sp., con partes vegetativas y reproductivas. Las hojas, tallos,
flores y frutos, fueron observados a la lupa para su caracterizacin.
El material vegetal fue determinado mediante claves taxonmicas segn
Lourteig & O'Donnell (1943), comparado con material de referencia del Herbario
LIL (Herbario Miguel Lillo) y bibliografa correspondiente consultada (Zuloaga et
al., 2008; Fernndez Casas, 2013; Fernndez Casas & Pizarro Domnguez,
2013). Muestras del ejemplar fueron ingresados al herbario de la
Fundacin Miguel Lillo (LIL), Tucumn, para su codificacin.
3.1 Clave de identificacin para las especies del gnero Jatropha

(tomada de Lourteig & O' Donell (1943), Euforbiaceae argentinae. Lilloa 9: 119)
A. Hojas con borde estipitado-glanduloso.
a. Pecolos 3-6 mm J. isabelli var. antisyphillitica.
aa. Pecolos ms de 1 cm (generalmente ms de 4 cm).
b. Pecolos con expansiones foliceas. J. peiranoi.
bb. Pecolos sin expansiones foliceas.
c. Hojas generalmente enteras o lobadas.
J. ribifolia var. breviloba.
cc. Hojas generalmente 5-3-partidas.
d. Hojas pubescentes, generalmente 3-partidas.
J. excisa var. pubescens.
dd. Hojas glabras generalmente 5-partidas.
e. Flores rojizas. J. excisa.
ee. Flores verdosas. J. excisa var. vidiflora.
B. Hojas sin borde estipitado-glanduloso.
a. Hojas con borde entero.
b. Hojas apenas lobadas o enteras. J. curcas.
bb. Hojas 5-7 partidas. J. macrocarpa.
aa. Hojas con borde serrado.
c. Borde groseramente serrado. Flores purpreas.
J. grossidentata.
cc. Borde no groseramente serrado. Flores amarillo-rojizas.
J. hieronymi.
4. Recoleccin de frutos y obtencin de semillas de Jatropha sp.

Los frutos de Jatropha sp. se obtuvieron por recoleccin manual, al estado
inmaduro, se colocaron sobre papel y se dejaron expuestos al ambiente hasta
su maduracin.
Luego se separaron las semillas y se almacenaron en oscuridad en
ambiente fresco y seco.
5. Anlisis de semillas de Jatropha sp.
Semillas de Jatropha sp. se seleccionaron para su estudio morfolgico e
histolgico.
5.1 Estudio morfolgico
Se tuvieron en cuenta parmetros morfolgicos como forma, tamao y
color de las semillas. Para definir la forma de las semillas, se sigui a Murley
(1951). Para determinar el tamao se midi largo, ancho y espesor (l a e) de
60 semillas, con papel milimetrado, siempre en este orden y expresado en
milmetros. El largo de las semillas fue medido desde el extremo hilar hasta el
calazal; el ancho fue medido en la porcin media y ms ancha de la semilla al
igual que el grosor (Bentacur-Prisco et al., 2014) (Fig. 4). El color del tegumento
fue tenido en cuenta para estimar semillas maduras y vigorosas de semillas
inmaduras y vacas. El anlisis se realiz al azar por seleccin y separacin
manual de 215 semillas, segn el color del pericarpio en marrn oscuras,
castaas, castaas grisceas y marrn claro a pardo grisceas marmoreadas,
poco marmoreadas a no marmoreadas.

Fig. 4 Sistema de referencia definido para medicin de dimensiones de semilla de Jatropha
sp.
5.2 Estudio histolgico
5.2.1 Pruebas histoqumicas
Se realizaron cortes a mano alzada de endosperma y embrin de las
semillas para detectar grasas, aceites y almidn. La identificacin de grasas y
lpidos se realiz usando una solucin alcohlica saturada de Sudn IV y almidn
con solucin acuosa de Lugol (Iodo e Ioduro de Potasio, IKI) (Ruzin, 1999;
DAmbrogio de Argeso, 1986). Se tomaron fotografas microscpicas con
cmara digital TSVIEW 5.0 MP conectada a un Microscopio Invertido Olympus
CKX41.
5.2.2 Anlisis histolgico
Para el anlisis y caracterizacin histolgica se emplearon semillas
previamente esterilizadas y sin carncula (eleosoma), unas sin cubierta y otras
con cubierta seminal. Fueron fijadas en FAA (Formaldehido-alcohol etlico-cido
actico-agua 5:3:1:1), deshidratadas e incluidas segn tcnica de inclusin en
parafina descripta por Dizeo de Strittmater (1979), (DAmbrogio de Argeso,
1986).
A partir de este material se realizaron preparados microscpicos,
modificando los tiempos de deshidratacin y de inclusin en parafina, al igual

que las concentraciones de colorantes y soluciones utilizadas para tejidos
adultos (Tabla 2).
Tabla 2. Planilla de procedimiento para inclusin del material vegetal en parafina.
Tejidos adultos
FAA* 48 h
Fijacin
Alcohol 96 3 das
Deshidratacin Alcohol 100 12 h
Alcohol 100 12 h
Alcohol 100-xilol (3:1) 2h
Clarificacin
Xilol puro 1h
Xilol puro 1h
Xilol puro 1 noche
Xilol-parafina (3:1) 2h
Infiltracin
Parafina pura 4h
Parafina pura 1 noche
Parafina pura 1h
*Formaldehido-alcohol etlico-cido actico-agua (5:3:1:1), (DAmbrogio de Argeso, 1986).
Se obtuvieron cortes longitudinales y transversales de 25 m de espesor,
con micrtomo de rotacin Minot, Bausch & Lomb. Las muestras previamente
desparafinadas fueron teidas aplicndose tinciones diferenciales, con Safranina
1 %-Sudn IV 80 %-Azul de metileno 1%; Safranina-Fast green saturado en
alcohol 100 % (Conn, 1953), Safranina-Sudn IV y Azul de metileno-Sudn IV,
las cuales fueron modificadas en este trabajo en tiempo de exposicin y
coloracin a fin de aumentar el contraste de los cuerpos de aceite. Los
preparados permanentes se montaron en Blsamo de Canad para su posterior
observacin al microscopio ptico. Se tomaron fotografas microscpicas de los
preparados con cmara digital TSVIEW 5.0 MP conectada a un Microscopio
Invertido Olympus CKX41.

5.2.3 Microscopa Electrnica de Transmisin y de Barrido
Se utilizaron para examinar las estructuras celulares, oleosomas y
cuerpos proteicos presentes en la semilla. Todas las observaciones fueron
realizadas en el Centro Integral de Microscopa Electrnica (CIME), CONICET-
UNT.
Microscopa de Transmisin (TEM): las muestras fueron fijadas en
tetrxido de Osmio al 1% durante toda la noche, deshidratadas en una serie de
alcoholes, de graduacin creciente, e incluidas en resina Spurr (Pelco I). Los
cortes ultrafinos fueron contrastados con acetato de uranilo y citrato de plomo.
Se examinaron con microscopio electrnico de transmisin Zeiss EM109 (TEM)
operado a 50 kv.
Microscopa de Barrido (SEM): secciones transversales y longitudinales
de semillas fueron montadas con cinta doble faz en tacos especiales, para el
metalizado con oro. Las observaciones y fotografas digitales se realizaron a
travs de un microscopio electrnico de barrido Zeiss Supra 55VP (SEM).
5.3 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de
aceite
Se realiz el clculo del volumen de oleosomas, correlacionando con el
rendimiento de aceite contenido en las semillas, mediante observacin al
microscopio ptico de cortes transversales del endosperma de la semilla de J.
peiranoi, medidos con escala micromtrica. Para cada muestra se analizaron 10
campos pticos al azar y se calcul el volumen de oleosomas, teniendo en
cuenta nmero y dimetro de los oleosomas y nmero de clulas observadas
por rea del campo celular y tisular.

Para calcular el volumen de oleosomas, se tuvo en cuenta el dimetro
promedio de los oleosomas (3,53 m, para n= 15) y se utiliz el radio promedio
(1,76 m) de los mismos, aplicando la siguiente frmula:
V = 4/3 r3 considerando a los oleosomas como esferas perfectas
V = 4/3 (1.76 m)3 V= 22,83 m3 o 0,02283 mm3 o 2,283 10-1 L
El volumen celular (Vcelular) se calcul teniendo en cuenta el nmero de
oleosomas por clula, contndose 15 oleosomas por clula (valor promedio).
Vcelular= volumen del oleosoma nmero de oleosomas
Vcelular= 0,02283 mm3 15 Vcelular= 0,34245 mm3
Para realizar el clculo del volumen tisular (Vtisular), se tuvo en cuenta el
nmero promedio de clulas observadas en el campo visual microscpico
contndose 115 clulas (valor promedio).
Vtisular= volumen celular nmero de clulas observadas
Vtisular= 0,34245 mm3 115 Vtisular= 39,38 mm3
Para estimar % de aceite a extraer y % de rendimiento de la semilla, se
tuvo en cuenta el volumen y peso de las semillas que fueron pesadas en balanza
granataria.
Para el clculo de volumen de la semilla se consideraron las dimensiones
largo (l), ancho (a) y espesor (e) de las semillas.
Vsemilla= l mm a mm e mm
Vsemilla= 9,25 mm 4,2 mm 3,1 mm Vsemilla= 120,43 mm3
Clculo de Porcentaje de aceite extrado de la semilla
Con el Vsemilla= 120,43 mm3 se estim el % de aceite extrado aplicando
la siguiente relacin
120,43 mm3----------------100%
39,38 mm3----------------x= 33%
El peso promedio de la semilla= 0,1 g.
Este valor sirvi para calcular o estimar el porcentaje de aceite extrado.
0,1 g----------------100%
0,033 g-------------x= 33 % de aceite
Clculo de % de rendimiento de aceite o Estimacin de rendimiento de
aceite
Considerando que en las semillas de Jatropha el 40% de su peso
corresponde a aceite se calcul el rendimiento de aceite.
40---------------100%
33--------------x= 82,5%
5.4 Anlisis de Viabilidad
El anlisis de la viabilidad se realiz empleando el test de tetrazolio que
se basa en la actividad de enzimas deshidrogenasas (Moore, 1973).Es un
mtodo bioqumico que utiliza el 2,3,5-cloruro de trifeniltetrazolio como reactivo
indicador. Las soluciones de estas sales son incoloras, cuando se reducen se
transforman en trifenilformazn, una sustancia estable, no difusible de color rojo
intenso, que permite distinguir las reas vivas de las semillas (reas de color rojo
o rosado) de las zonas muertas sin coloracin (Ellis et al., 1985a; Moore, 1973;
Frana-Neto, 1989)
Sal de tetrazolio + H+ deshidrogenasas Trifenilformazn

incoloro rojo
difunde no difunde
5.4.1 Aplicacin de Tcnica de Viabilidad en semillas de Jatropha sp.
Acondicionamiento
Las semillas fueron lavadas sucesivas veces con agua destilada a fin de
eliminar contaminantes. Se colocaron 20 semillas en una caja de Petri con papel
de filtro hmedo, cubiertas con papel de Aluminio y mantenidas en estas
condiciones por un perodo de 18 h, en estufa a 37 C a fin de activar el
metabolismo de las semillas (Frana-Neto, 1989; ISTA, 2016; Ellis et al., 1985b)
Coloracin
Las semillas sin tegumento (el tegumento oscuro de las semillas de
Jatropha, no permite la difusin de la solucin de tetrazolio, por lo que fue
retirado antes del proceso de tincin) fueron colocadas en vaso de precipitacin,
inmersas en la solucin de tetrazolio (0,075%), llevadas a estufa a una

temperatura de 37 C, durante 3 h y en oscuridad, debido a que la solucin de
tetrazolio es sensible a la luz (Lakon, 1949).
Lavado de la muestra
Una vez que se alcanz la coloracin, las semillas fueron retiradas de la
estufa y lavadas con agua comn, y se mantuvieron sumergidas en agua hasta
el momento de la evaluacin (Frana-Neto, 1989).
Evaluacin de la Viabilidad
Las semillas se analizaron una a una, seccionndolas longitudinalmente
a travs del centro del eje embrionario (Fig. 5), con ayuda de un bistur u hoja de
afeitar.
Durante la evaluacin se tuvo en cuenta dao del eje radcula-hipoctilo
(corteza y cilindro central) y color de las semillas. Si hay dao en el eje radcula-
hipoctilo la semilla es NO VIABLE. Si no hay dao en el eje, la semilla es
VIABLE.
La diferenciacin del color presente en los tejidos de las semillas indica:
rojo intenso, TEJIDO VIVO y vigoroso y blanco lechoso, TEJIDO MUERTO
(Prez-Garca et al., 2001).
Las observaciones se realizaron en Microscopio estereoscpico Olympus
y las fotografas fueron tomadas con cmara digital Canon A620, Power Shot 7,1
MP.
Fig. 5 Corte longitudinal de semilla, con detalle de eje radcula-hipocotilo. Tomado de (Fahn,
1985).
6. Germinacin de semillas
Para el ensayo de germinacin, se seleccionaron semillas de Jatropha sp,
vigorosas y de mayor tamao, desinfectadas con una solucin diluida de
hipoclorito de sodio en agua (1:5 v/v) y sin cubiertas seminales (se elimin el 40
% del tegumento) para favorecer la germinacin (Ellis et al., 1985b).
Las semillas se colocaron en cajas de Petri estriles de 10 cm de
dimetro, sobre un colchn de algodn hmedo (2mL de agua destilada) como
soporte y medio de imbibicin. Se ubicaron de su lado ventral donde se
encuentra el rafe, de manera que tome contacto el micrpilo de la semilla con el
medio hmedo para favorecer el ingreso de agua y la emisin de la radcula.
Para poner a punto la tcnica y asegurar la germinacin, se probaron
distintos tratamientos con variaciones en el tiempo de esterilizacin, activacin
de las semillas y exposicin a la luz. En cada tratamiento se pusieron a germinar
25 semillas, simulando condiciones de la germinacin bajo tierra.

Tratamiento 1
Las semillas fueron esterilizadas durante 1 h, se pusieron en cajas de Petri
sometidas a un fotoperiodo luz-oscuridad: 8 h de luz artificial y 16 h de oscuridad.
Regndose con 2 mL de agua destilada estril cada dos das durante el tiempo
en que se desarroll el experimento (14 das).
Fig. 6 Semillas de Jatropha sp. puestas a germinar segn tratamiento 1.
Tratamiento 2
Semillas sin esterilizar se colocaron en heladera a 4 C por un tiempo de
12 h y posteriormente en estufa a 25 C durante 3 h a fin de someterlas a cambios
de temperatura (T nocturnas y diurnas) condiciones simuladas como en su
ambiente natural. Posteriormente se esterilizaron durante 3 h, fueron sembradas
en cajas de Petri con un fotoperiodo luz-oscuridad: 3 h de luz artificial y 21 h de
oscuridad, regndose con 2 mL de agua destilada estril, cada dos das durante
el tiempo en que se desarroll el experimento (14 das).

Tratamiento 3
Semillas sin esterilizar se colocaron en heladera a 4 C por un tiempo de
12 h y posteriormente en estufa a 25 C durante 3 h. Repitiendo condiciones
(cambios de temperatura frio-calor) como en el tratamiento 2. Se esterilizaron
durante 5 h y se sembraron en cajas de Petri, regndose con 2 mL de agua
destilada estril, cada dos das. Mantenindolas en oscuridad durante todo el
tiempo que dur el experimento (25 das).

7. Extraccin de aceite de Jatropha sp.
La extraccin del aceite se realiz utilizando dos sistemas de solventes
orgnicos, n-hexano y una mezcla de cloroformo-metanol (1:2). En ambos casos
se utilizaron semillas descascaradas. Las almendras obtenidas se secaron
previamente en estufa a 105 C durante 1 h, las cuales fueron a continuacin
trituradas en mortero para su posterior tratamiento con solventes.
7.1 Extraccin con n-hexano
A 2 g de semilla triturada se agreg 8 mL de n-hexano, la muestra fue
agitada en vortex durante 2 min y luego centrifugada para recuperar el
sobrenadante con el aceite extrado. La biomasa se continu tratando con n-
hexano hasta no observar turbidez, de manera de recuperar el aceite residual. A
continuacin se centrifug a 8.000 rpm durante 5 min. Los sobrenadantes
obtenidos se colocaron en campana para la evaporacin del n-hexano.
7.2 Extraccin con mezcla cloroformo-metanol
La extraccin con esta mezcla de solvente se realiz siguiendo la tcnica
de Bling y Dyer (1959). La semilla triturada (2 g) fue tratada con una mezcla de
cloroformo-metanol en una relacin 1:2 (v/v). La muestra fue homogenizada en
vortex durante 2 min. Luego se agregaron 2 mL de cloroformo y se mezcl
durante 30 seg. A continuacin se agregaron 2 mL de H 2O destilada, y se
continu mezclando por otros 30 seg.
El homogenizado obtenido se filtr con papel de filtro Whatman n 1.
Luego el filtrado se transfiri a un vaso de precipitacin de 50 mL. Se dej en
reposo para permitir la separacin de las fases y clarificacin.

Una vez obtenidas las fases, se retir la capa alcohlica, quedando la
capa de cloroformo que contiene el aceite, se dej en campana para evaporacin
del solvente.
Para extraer el aceite residual que qued retenido en los restos de
muestra, se realizaron 4 lavados con cloroformo. El filtrado obtenido de los
lavados, se agreg al primer filtrado.
Se calcul el contenido de aceite en las semillas para ambas tcnicas,
segn la siguiente frmula: % Aceite = (Peso aceite/ Peso inicial semilla)
100.
8. Determinacin de la composicin qumica del aceite de Jatropha sp.
8.1 Evaluacin del perfil lipdico por cromatografa en capa fina (TLC)
Para evaluar el perfil lipdico del aceite de Jatropha sp se realiz
inicialmente una TLC. Se utiliz como fase estacionaria una placa de slica de 10
cm de largo por 6 cm de ancho y como fase mvil una mezcla de n-hexano:
acetato de etilo: cido actico (90:10:1). Se sembr una muestra de aceite de
Jatropha sp. directamente en la placa y otra con previa extraccin con n-hexano.
Se utilizaron como controles para comparar el perfil lipdico, aceite de oliva,
aceite de soja y como cido graso libre, cido linoleico. Las muestras se
sembraron a 1 cm de distancia entre cada una de las muestras. Luego de la
corrida, la placa se sec y se revel en una cmara con granallas de Iodo.

8.2 Evaluacin del perfil lipdico por cromatografa gaseosa con detector a
la llama (GC-FID)
Metilacin de los cidos grasos
La muestra de aceite (1mg) fue disuelta en 1 mL de mezcla metilante (HCl
en MeOH) y calentada en bao seco a 100 C durante 2 h con agitacin
espordica. Luego de enfriar, se agreg 1 mL de agua y se extrajo con n-hexano
(31 mL). Se sec el extracto hexnico con sulfato de sodio anhidro y se filtr.
Se llev a sequedad con corriente de N2 y se resuspendi en 1 mL de n-hexano
(steres metlicos de cidos grasos).
Condiciones cromatogrficas GC-FID y anlisis cuantitativo de los steres
metlicos de los cidos grasos (FAME)
Los anlisis fueron realizados en un equipo GC-2014 Shimadzu equipado
con inyector split/splitness y detector de ionizacin de llama (FID). Se utiliz una
columna capilar SE 52 (30 m 0.25 mm 0.25 m) y el programa de temperatura
fue: 150C durante 2 min., (150-260) C a 5C/min., 260C durante 20 min. La
temperatura del inyector y del detector fue 300C. El volumen de inyeccin fue 1
L y fue operado en modo split (100:1), el gas carrier fue He, el flujo total 31
mL/min y el flujo de la columna fue 0.55 mL/min.
Los FAME fueron identificados por comparacin directa con estndares
puros y los porcentajes individuales de los mismos fueron hechos en relacin al
rea total del cromatograma.
Para calcular la composicin de los cidos grasos (%) se tomaron los
picos y se realizaron correccin de las reas. Para ello se multiplic el rea por
un factor dado para cada cido graso en particular. El rea total por muestra
indica la cantidad total de cidos grasos producidos.
9. Anlisis termo gravimtrico (TGA)
El anlisis termo gravimtrico se realiz empleando un analizador
Shimadzu TGA-50, con una atmsfera de Nitrgeno con velocidades de flujo de
20 mL/min. El anlisis se realiz a una velocidad constante de calentamiento de
30 C/min, desde temperatura ambiente hasta 800 C (en crisol de platino). Se
utiliz una muestra de 8,267 mg correspondiente a un volumen de 10 L.
10. Determinacin de actividad enzimtica lipoltica en la biomasa residual
Para evaluar la actividad enzimtica se emple la biomasa residual
obtenida luego de la extraccin del aceite. La biomasa se dej bajo campana
para evaporar el n-hexano y luego se coloc en estufa a 30 C, para realizar el
secado de la misma hasta peso constante. A continuacin la biomasa se
fraccion en 4 tubos conteniendo cada uno 0,05 g de biomasa.
La determinacin de actividad enzimtica se realiz a 37 C con agitacin
frente a dos sustratos p-nitrofenil acetato (C2) (p-NPA) y p-nitrofenil laurato (C12)
(p-NPL) en una concentracin 1 mM.
El buffer de reaccin utilizado present la siguiente composicin: pH 7,
Buffer fosfato 100 mM, Goma Arbiga 0,1 % (p/v) y Tritn X-100 0,4% (p/v)
(Winkler y Stuckman, 1979). En cada ensayo se realiz un control de reaccin
sin enzima para cuantificar la hidrlisis del sustrato por causas ajenas a la accin
enzimtica. Este control solo contiene buffer de reaccin y sustrato (p-NPA o p-
NPL).
La cuantificacin de p-nitrofenol liberado se realiz en espectrofotmetro
a 405 nm (Coeficiente de extincin molar (): 0,15 mM). La reaccin se realiz
por duplicado para ambos sustratos.
Se defini como Unidad de Actividad Enzimtica a la cantidad de enzima
que libera un mol de p-nitrofenol por minuto.

Resultados
y
Discusin
1. Caracterizacin del rea de estudio
El rea donde se realiz la recoleccin de la especie en estudio (Fig. 9),
corresponde a la Provincia Fitogeogrfica de Monte. Se caracteriza por presentar
vegetacin de tipo arbustiva, xerfila, dominada por Zigofilceas, siendo la
comunidad ms importante el jarillal. En su composicin florstica dominan las
especies del gnero Larrea, principalmente Larrea cuneifolia (jarilla macho) y
Larrea divaricata, (jarilla hembra), Bulnesia retama (retama o retamo), Fabceas:
Zuccagnia punctata (pus-pus o poposa), Cassia rgida (pichana), Geoffroea
decorticans (chaar), Cercidium praecox (brea), tambin algarrobales, que
aparecen exclusivamente como bosques marginales de los ros: Prosopis
chilensis, Prosopis nigra, Prosopis alba, entre otras y como acompaantes
cactceas y plantas halfitas del gnero Atriplex sp. y otras especies como Celtis
spinosa (talas) (Morello, 1958).
El suelo, se caracteriza por ser rido y semirido, pobre en materia
orgnica, arenoso o areno-arcilloso y alcalino, de baja retencin hdrica y de
estructura dbil (Palmieri et al., 2014).
Fig. 9 Fuente: Google Maps. Punto de referencia de recoleccin de muestra vegetal

en el Valle de Santa Mara, Catamarca (Argentina) a 1,5 Km del centro de esta
ciudad, a 1885 m s. n. m., coordenadas (66 2 33 W 26 41 16 S).
2. Identificacin taxonmica
Para determinar la identidad de la especie vegetal, se tuvo en cuenta
caracteres diagnsticos obtenidos a partir de hojas, tallos, flores y frutos,
confrontados (cfr) con ejemplares de la provincia de Catamarca y Tucumn de
la coleccin del Herbario LIL (Tucumn, Argentina).
La especie, recolectada corresponde a Jatropha peinaroi Lourteig &
O'Donell, nombre cientfico actualmente aceptado para la Flora del Cono Sur
segn Zuloaga et al. (2008). Muestras del ejemplar fueron ingresados al herbario
de la Fundacin Miguel Lillo (LIL), para su codificacin. Pertenece a la Familia
Euphorbiaceae (Tabla 3), es una planta arbustiva, endmica que habita las
provincias de Catamarca, Salta, Tucumn y crece entre 1700 a 1900 m de altura
(Lourteig & O'Donell, 1943).
Tabla 3. Jerarqua taxonmica de Jatropha peiranoi Lourteig & O'Donell
Jerarqua Taxonmica
Reino Plantae Planta
Subreino Tracheobionta Planta vascular
Divisin Magnoliophyta Angiosperma
Clase Magnoliopsida Dicotilednea
Subclase Rosidae
Orden Euphorbiales
Familia Euphorbiaceae
Subfamilia Crotonoideae
Gnero Jatropha
Especie Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell

3. Descripcin Botnica de la Especie. Caractersticas exomorfolgicas
Planta arbustiva, de aspecto herbceo, semirastrera, crece formando
matas, en parches hasta 50 cm de altura (Fig. 10 A, B), con ltex transparente o
lechoso. Tallo carnoso, de 4 a 7 mm de dimetro, de color verde claro a morado
y ramificado desde la base. Tallo subterrneo, rizoma grueso que vara desde
30 a 50 mm de dimetro (Fig. 10 C).
A B
Fig. 10 Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. A- Aspecto vegetativo de la planta en su

hbitat natural. B- Planta en floracin. C- Detalle de Rizoma, tallo subterrneo.
Pecolos de 1 a 7 mm, glabros, surcados, canaliculados, cuyos bordes
presentan expansiones foliares de forma variada, generalmente lanceolados,
con glndulas estipitadas notables (Fig. 11 A, B). Lmina foliar coricea 3 a 5
partidas, de base cordada con pelos hirsutos en la base y sobre las nervaduras,
con nervaduras secundarias notables; lbulos obovados, contrados en la base,

obtusos, mucronados (Fig. 11 C). Borde foliar de color verde amarillento,
suavemente crenado, con glndulas estipitadas notables (Fig. 11 D, E). Estpulas
foliceas, laciniadas, cuyos bordes presentan al igual que los mrgenes foliares,
glndulas estipitadas.
A B
C
F
D E
G H
Fig. 11 Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell A, B- Detalle de pecolos con expansiones
foliares y estructuras glandulares. C- Detalles de lmina foliar mucronada, D, E- Lmina foliar
con bordes crenados, glandulosos (glndulas estipitadas).
Inflorescencias cimosas, cortamente pedunculadas, densifloras, con
pednculos vellosos y brcteas lanceoladas, pubescentes, de borde glanduloso
estipitado.
Posee flores unisexuales (Fig. 12, 13). Flor Masculina: Spalos 5, ovado-
lanceolados, acuminados, vellosos, soldados 1/3, borde glanduloso-ciliado.
Ptalos obovados espatulados de color blanquecino, amarillentos, a rosado claro
y oscuro internamente, pubescentes. Disco: 5 glndulas libres. Estambres 10,
monadelfos dispuestos en 2 ciclos.
Flor Femenina: Spalos 5 obovado-lanceolados, acuminados,
glanduloso-ciliado. Ptalos de color blanquecino, amarillentos, rosado a fucsias
internamente y glandulosos-estipulados. Disco: 5 glndulas libres. Ovario glabro
o pubescente. Estilos 3; soldados en la base y estigmas bilobados.
Fig. 12 Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. A- Inflorescencias cimosas con flores masculinas
y femeninas fructificadas. Flores, blanquecinas y amarillentas. B- Detalle de flores pubescentes.
C- Detalle de frutos pubescentes.
D
Fig.13 Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. D, E, F-Inflorescencias cimosas con flores
masculinas y femeninas fructificadas. Ntese la variacin de colores de las flores,
rosado claro a fucsia.
Frutos cpsula, trigamocarpelar, trilocular, una semilla por cada lculo,
verdes al estado inmaduro y amarronados a la madurez (Fig. 14). Dehiscencia
explosiva o balstica. Semillas color marrn claro a oscuro rojizo, marmoreadas
y en algunos casos marrn grisceas. Con carncula desarrollada, 9 partida, de
color amarillento a marrn rojizo, de borde blanquecino.

Fig. 14 (2) Frutos cpsula verdes al estado inmaduro y semillas donde se observa la variabilidad
de colores.
Fenologa: Florece en los meses de Octubre a Diciembre, fructifica en
Noviembre y madura en el perodo comprendido entre Enero y Abril,
encontrndose con flores y frutos hasta el mes de abril inclusive. El perodo
vegetativo transcurre desde Agosto a fines de Mayo, en que la planta
desaparece, coincidiendo con la poca fra.
Hbitat: se encuentra en lugares degradados, en campos arenosos, a lo
largo de caminos entre vegetacin arbustiva xerfila.
3.1 Exsiccata
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. LIL N 6535, Catamarca, Santa Mara, altura
1950 m s.n.m. Leg. Peirano, 12- XI-1933.
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. LIL N 5186, Catamarca, Dep. Santa Mara,
Valle de Santa Mara (Punta de Balasto) Leg. Castillon, XI- 1915.
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. Sin LIL., Catamarca, Dep. Santa Mara Leg.
Bragadin (529) I-1943.

- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. Sin LIL, Catamarca, Dep. Santa Mara en
arenales del Valle de Santa Mara, altura 2000 m s. n. m. Leg. Schreiter (552)
XII-1917
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. LIL N5181, Amaicha del Valle, Tucumn.
19/05/ 1912; LIL N 5188, Valles Calchaques, Amaicha del Valle, Tucumn.
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. LIL N5177, Dep. Taf, Arenal de Tiopunco,
Tucumn, altura 2000 m s. n. m., Leg. Schreiter (1674), 18/2/1920
- Jatropha peiranoi Lourt. et O' Don. LIL N 4943, Villa Nougues, Tucumn, lado
W, 1200 m s. n. m, Leg. Venturi (1614), 27/12/1921.
La descripcin realizada en este trabajo para la diagnosis e identificacin
de J. peiranoi Lourteig & O'Donell coincide en su gran mayora con los caracteres
descriptos para la especie en la revisin del gnero Jatropha realizada por
Lourteig & O'Donell (1943), y en la revisin de la especie por Fernndez Casas
(2013). El carcter que define y diferencia a J. peiranoi de otras del mismo
gnero, es la presencia de pecolos canaliculados con expansiones foliares
lanceoladas, que portan glndulas estipitadas notables, en los bordes del canal;
diagnosis coincidente con los autores citados anteriormente. Esta caracterstica
permiti a Lourteig & O'Donell, reconocer la especie J. peiranoi de J. excisa, J.
hieronymi, J. ribifolia, J. macrocarpa, J. curcas, J. isabelli y J. grossidentata
quienes carecen de expansiones foliares (Lourteig & O'Donell, 1943) y a
Fernndez Casas, delimitar y diferenciar J. peiranoi de J. chacoana.
Observaciones obtenidas en este trabajo y las realizadas por Lourteig &
O'Donell y Fernndez Casas para el caso de J. peiranoi, difieren con Fortunato
(1988) quien elabor una clave para delimitar la especie J. chacoana, de J

peiranoi. Fortunato (1988) atribuye como carcter comn, la presencia o
ausencia de apndices foliceos para ambas especies sin precisar cul de las
dos especies carece o presenta el mismo. Fernndez Casas, describe y delimita
J. peiranoi por la presencia exclusiva de pednculos canaliculados con
expansiones foliceas, generalmente lanceoladas, con sus mrgenes
pectinados por glndulas estipitadas (Fernndez Casas, 2013) y a J. chacoana
por la presencia de pednculos relativamente finos, canaliculados por la faz,
desprovistos de expansiones foliceas que portan en los bordes del canal,
glndulas estipitadas ramificadas (Fernndez Casas & Pizarro Domnguez,
2013).
En su descripcin Lourteig & O'Donell (1943) informan la presencia de
flores blancas y amarillas para la especie en estudio, descripcin no coincidente
con lo observado tanto en este trabajo como por Fernndez Casas (2013) donde
se observan flores de colores que varan desde blanquecinas, amarillas y
rosadas a fucsias. Esta variacin se debe al desarrollo y a la madurez floral en
que se encuentra la planta, debido a que presenta floracin escalonada. Por lo
tanto la descripcin realizada por Lourteig & O'Donell se debe a que recolectaron
el espcimen en las primeras etapas de floracin.
En cuanto al aspecto fenolgico, J. peiranoi, florece y fructifica en los
meses clidos y templados del ao desde octubre a abril. Perodo coincidente
para casi todas las especies de Jatropha (Casotti, 2008).

4. Caracterizacin del fruto de J. peiranoi
El fruto de Jatropha peiranoi es una cpsula ovoide, pubescente, de tipo
esquizocarpo, formado por tres carpelos, cada uno conteniendo una semilla,
verde al estado inmaduro y amarronado a la madurez (Fig. 15). La dehiscencia
de esta planta es explosiva o balstica, es un tipo de autocoria en el que las
semillas son dispersadas a travs de la dehiscencia sbita del fruto (Aranda-
Rickert, 2011). Razn por la cual los frutos se obtuvieron por recoleccin manual,
al estado inmaduro. Caracterstica comn con otras especies del gnero y de la
familia, como J. curcas, J. macrocarpa (Casotti, 2008), J. excisa, (Aranda-
Rickert, 2011) y Ricinus communis (Perea Flores, 2011).
A B
C D
Fig. 15 Frutos de J. peiranoi. (4) A- Fruto inmaduro, cerrado con restos de flores
B- Fruto inmaduro, cerrado. C, D- Frutos maduros prximos a la apertura o
dehiscencia.
5. Caracterizacin morfolgica de la semilla de J. peiranoi Lourteig &
ODonell
Las semillas presentan una forma oval o elipsoide, de consistencia dura,
comprimida de su lado ventral y plano convexa dorsalmente. La superficie
seminal se presenta levemente lisa con un brillo satinado suave y de un color
marrn claro a oscuro rojizo, marmoreadas y en algunos casos marrn grisceas
(Fig. 16 A, B; C, D).
En su cara ventral se observa el rafe y el hilio ubicado prximo al micrpilo
debido a que se origina de un vulo antropo.
A B
Ca
h
rf
C D
Ca
h
rf
Fig. 16 (20) Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. Aspecto morfolgico de las semillas
vistas a la lupa A, C- Semilla vista de lado dorsal se observa carncula u eleosoma con bordes
blanquecinos (Ca). B, D- Semilla vista de lado ventral, se observa el rafe (rf) e hilio (h). (A:
Semillas marrn oscuro rojizo, C: Semillas marrn grisceas). La misma presenta una forma
oval o elipsoide
Cercano al micrpilo, se encuentra una excrecencia superficial en forma
de abanico, originada del funculo a modo de tercer tegumento denominada arilo,
carncula u eleosoma, dividida en nueve ramas de borde blanquecino,
orientadas hacia el lado dorsal (Fig. 16 A, C y 17 A, B). Esta carncula es rica en
aceites y constituye un rgano de atraccin, adaptado para la dispersin de la
semilla (Corner, 1949) por medio de hormigas, y otros mecanismos de dispersin
por vertebrados y el viento (Aranda-Rickert, 2011).
En la Fig. 17 se observa en detalle el aspecto morfolgico de las semillas
vistas por microscopa electrnica de barrido (SEM).
A B
Ca Ca
Fig. 17 A, B- Microfotografas obtenidas por microscopa electrnica de barrido (SEM) detalles

de las ramas de la carncula u eleosoma (Ca).
5.1 Forma, tamao y color de las semillas
Las semillas presentan tres semiejes desiguales, cuya forma se describi
como oval o elipsoide. El tamao se determin a travs de la medicin de sus
dimensiones caractersticas: largo (l), ancho (a) y espesor (e). Los valores fueron
referidos a valores promedio de 60 semillas. La dimensin longitudinal (l) vari
entre 7 y 9 mm, el espesor (e) entre 2 y 3 mm, mantenindose constante el ancho
(a) en 4 mm. Determinndose tres tipos de semillas, grandes, medianas y
pequeas.
En la Figura 18 y Tabla 4, se muestra la clasificacin de acuerdo al tamao
de las mismas.
Fig. 18 (2) Medicin y determinacin del tamao de las semillas de J. peiranoi.
Tabla 4. Dimensiones de las semillas de J. peiranoi.

Dimensiones
promedios de
Grandes Medianas Chicas
las semillas
(mm)
Longitud 9,25 8,06 7,06
Ancho 4,2 4,1 4,1
Espesor 3,1 2,6 2,4
El color del tegumento de las semillas muestra una gran variabilidad dada
por la poca de recoleccin y el tiempo y grado de maduracin de los frutos.
Debido a que la fructificacin es escalonada, fructifica a partir de noviembre,
encontrndose con flores y frutos hasta el mes de abril inclusive. En un lote de
215 semillas examinadas encontramos semillas marrn oscuras marmoreadas,
castaas (Fig. 19 A, B), castaas grisceas, poco marmoreadas y semillas
marrn claro a pardo grisceas poco marmoreadas a no marmoreadas (Fig. 19
C, D). Esto permiti diferenciar semillas maduras de inmaduras y estimar
semillas vigorosas de semillas vacas. El 66%, representa en su mayora,

semillas maduras de color marrn oscuro marmoreadas, generalmente
vigorosas y llenas, provenientes de aquellos frutos que han alcanzado su
desarrollo y madurez y un 33% semillas inmaduras, de llenado incompleto a
vacas, de color marrn claro a pardo grisceas, levemente marmoreadas a no
marmoreadas, provenientes de frutos verdes que no alcanzaron completo
desarrollo ni madurez.
A B
C D
Fig. 19 (2) Variacin de color de las semillas de J. peiranoi. A- Marrn oscuro (n= 70), B-
Castao (n= 47). C- Castao grisceo (n= 27). D- Marrn claro a pardo grisceo (n= 71).
La forma y el tamao de la semilla la diferencian de otras especies del
gnero. La semilla de J. peiranoi tiene forma elipsoide u oval de 7-9 5 mm y
una testa dura al igual que J. excisa y J. curcas ambas oblongo elipsoides, de
aproximadamente 7,73 4,74 mm y 20 10 mm, respectivamente (Aranda-
Rickert, 2011; Toral et al., 2008). A diferencia de J. chacoana, cuyas semillas son
angostamente elipsoides y miden 6-9 2,0-2,5 mm, (Fernndez Casas & Pizarro
Domnguez, 2013), de J. macrocarpa y J. hieronymi que presentan semillas
subesfricas que miden 15 mm de longitud (Casotti, 2008).
El color de la semilla de J. peiranoi vara de marrn claro a oscuro rojizo,
marmoreada y en algunos casos marrn griscea, carcter que permite
diferenciarla de otras especies, J. macrocarpa y J. hieronymi de coloracin
castao (Casotti, 2008), J. excisa castao rojiza a pardo oscura (Aranda-Rickert,
2011), J. curcas, negra (Lpez-Monte, 2008) y J. chacoana color marrn o rojiza
con hombros oscuros bien definidos, moteada o lisa (Fernndez Casas & Pizarro
Domnguez, 2013; Fortunato, 1988).
Se observ que el color y desarrollo del fruto y de la semilla de J. peiranoi,
est relacionado con la madurez fisiolgica; siendo indicador de madurez frutos
amarronados y semillas marrn oscuro marmoreadas. Esta caracterstica es
reportada por Zavala-Hernndez et al., (2015) quien determin la madurez
fisiolgica de la semilla y fruto para J. curcas, frutos amarillos y semillas negras.
6. Aspectos anatmicos: Caracterizacin histolgica de la semilla
La semilla de J. peiranoi ha sido estudiada por diversas tcnicas de
microscopa (fotnica y electrnica) en orden de caracterizar su microestructura.

6.1 Estructura y composicin de las semillas por microscopa
estereoscpica y de barrido (SEM)
Los cortes histolgicos de semillas de J. peiranoi, muestran la
organizacin general de la misma. La semilla consta de una cubierta seminal o
testa, el endosperma y el embrin, el cual est compuesto principalmente por la
radcula, gmula (eje embrionario) y cotiledones. En cortes longitudinales se
observ la cubierta seminal, endosperma y dos cotiledones, insertos al eje
embrionario corto y recto, con su porcin radical orientada hacia el extremo
micropilar de la semilla y su porcin apical o gmula orientada hacia el extremo
opuesto. En corte transversal, en la porcin ms ancha, se observa la misma
estructura y composicin seminal, con abundante endosperma y dos cotiledones
(Fig. 20, 21).
A B C
e
e
co
t
t co
co
e
r
r
Fig. 20 (20) Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. Microscopa estereoscpica A- Seccin
longitudinal lateral de la semilla se observa testa o tegumento (t), endosperma (e) y cotiledones
(c). Seccin longitudinal media B- testa (t), endosperma (e), cotiledones (co) y radcula (r). C-
Sin testa, (e), (c) y (r).
A B
e
co
e co
t t
C D
t
r
e
co
r
Fig. 21 Jatropha peiranoi Lourteig & ODonell. Microscopa electrnica de barrido (SEM). A-
Corte transversal, (t), (e) y (c). Corte longitudinal medio. B- (t), (e) y (co). C- (t), (e), (c) y (r).
D- Detalle de la radcula (r).
6.2 Pruebas histoqumicas
Las pruebas histoqumicas revelaron la presencia de grasas y aceites en
endosperma y embrin de semillas de J. peiranoi, que se tieron de color amarillo
naranja, con solucin alcohlica saturada de Sudn IV (Fig. 22); no se detect la
presencia de almidn con solucin acuosa de Lugol (Iodo e Ioduro de Potasio,
IKI). (Ruzin, 1999; DAmbrogio de Argeso, 1986).
CL
40 100
Fig. 22 Semillas de J. peiranoi, deteccin de cuerpos lipdicos (CL) teidos con Sudn
IV.
6.3 Estructura Interna del tegumento por microscopa ptica y de barrido
(SEM)
Cortes longitudinales de semillas de J. peiranoi, muestran una notable
cubierta seminal o tegumento que envuelve al endosperma y embrin de la
misma (Fig. 23 A). En ella se evidencia un tegumento externo o testa formado
por una cutcula levemente rugosa y macroesclereidas columnares,
pigmentadas, dispuestas radialmente, que confieren color castao a marrn
oscuro, a la semilla. Por debajo se visualiza el tegumento interno o tegmen que
muestra un exotegmen o mesfilo formado por clulas parenquimticas
colapsadas y un endotegmen formado por clulas que se alargan y esclerosan
radialmente y clulas esclerenquimticas columnares, en disposicin tangencial,
tapizado por restos de nucela de aspecto esponjoso, que envuelve al
endosperma rico en cuerpos de aceite u oleosomas y cuerpos proteicos (Fig. 24
A, B, C). Este endosperma ocupa un volumen importante en la semilla, contiene
y nutre al embrin.
Fig. 23 A- Detalle del tegumento externo o testa con una cutcula levemente rugosa.
Fig. 24 Microfotografas obtenidas por microscopa ptica A, B- Corte transversal de semilla
mostrando estructura interna: tegumento externo (a), tegumento interno formado por exotegmen
o mesfilo (b) y endotegmen (c), restos de nucela (d) y endosperma con oleosomas y cuerpos
proteicos (e) C- Microfotografa obtenida por microscopa electrnica de barrido (SEM) En corte
longitudinal se observa: tegumento externo con cutcula y macroesclereidas columnares (a),
tegumento interno formado por exotegmen o mesfilo con parnquima colapsado (b),
endotegmen con clulas esclerenquimticas (macroesclereidas y fibras esclerenquimticas) (c);
restos de nucela (d).
No hay registros de anlisis de anatomas del tegumento de semillas del
gnero Jatropha. En este trabajo se presenta por primera vez la descripcin
histolgica en cortes transversales y longitudinales de semilla de J. peiranoi.
La disposicin de los tejidos que conforman el tegumento de la semilla de
esta especie, (tegumento externo y tegumento interno) es similar al descripto por

Esau (1982) para Ricinus communis (Perea-Flores, 2011), especie perteneciente
a la misma familia.
6.4 Estructura Interna del Endosperma y embrin. Microscopa ptica, de
barrido (SEM) y de transmisin (TEM)
El endosperma ocupa un volumen importante en la semilla de J. peiranoi,
es rico en oleosomas o cuerpos de aceite. Su estudio histoqumico en cortes
longitudinales y transversales, teidos con tinciones diferenciales, triple
coloracin Sudn IV-Safranina-Azul de Metileno, y la doble coloracin Sudn IV
Safranina y Azul de Metileno-Sudn IV, dieron buenos resultados que
permitieron la localizacin y diferenciacin de los cuerpos de aceite, cuerpos
proteicos y determinacin del nmero de oleosomas en las clulas
endosprmicas (Fig. 25).
Los oleosomas son esferoidales miden entre 2,5 y 4,5. m de dimetro,
se encuentran en un nmero de 15 oleosomas por clula, con arreglo espacial
agrupado ocupando un volumen celular importante. Estos valores son
semejantes a lo descripto por Adriano-Anaya et al. (2014) para J. curcas, quienes
informan oleosomas de 2,18 m a 4,15 m de dimetro, nmero de oleosomas
que vara entre 13 a 15 por clula y con arreglo espacial agrupado y disperso en
85 genotipos de poblaciones de J. curcas estudiadas.
En cortes realizados para microscopa de barrido y de transmisin se
observan clulas endosprmicas (parnquima reservante) en distintos grados de
magnificacin en cuyo interior se visualizan estructuras oleosmicas y proteicas
ocupando todo el volumen celular (Fig. 26, 27). El embrin posee las mismas
caractersticas celulares que las clulas endosprmicas en cuanto a su contenido
rico en oleosomas.
La Figura 25 muestra las imgenes obtenidas mediante microscopa
ptica con tincin diferencial histoqumica en preparados permanentes
CP
Dr
CL
CL
CP
20 100
B
Dr
CL
CP
CP
CL
40 100
CP
CP
CL
CL
20 100
Fig. 25 Corte transversal de endosperma de la semilla. A- Tincin Sudn IV-Safranina-Azul de

Metileno. B- Sudn IV-Safranina. C- Sudan IV-Azul de metileno. Se observan oleosomas (CL),
cuerpos proteicos (CP) y drusas (Dr) (cristales de oxalato de Ca).
CP
CL
CL
CP
Fig. 26 Microfotografas obtenidas por microscopa electrnica de barrido (SEM). Endosperma

de la semilla en diferentes grados de magnificacin, observndose cuerpos lipdicos (CL) y
cuerpos proteicos (CP).
CL
Pc
Lm
CL
7500 12800
Fig. 27 Microfotografas obtenidas por microscopa electrnica de transmisin (TEM) a partir de

cortes ultrafinos de endosperma, observndose cuerpos lipdicos (CL), laminilla media (Lm) y
pared celular (Pc)
6.5 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de
aceite
El anlisis de las variables nmero de oleosomas, volumen de oleosomas,
volumen celular y tisular de las clulas endosprmicas de semillas de J. peiranoi
por observacin y medicin microscpica, permitieron estimar la relacin
oleosomas/tejido (v/v) (Tabla 5). Encontrndose correlacin entre la relacin
porcentual oleosomas/tejido (v/v) y el rendimiento de la semilla. La relacin
porcentual volumen de oleosomas por volumen de tejido estara correlacionada
con la cantidad de aceite acumulada en la semilla. Las semillas vigorosas,
pesaron 0,1 g. Este valor sirvi para estimar el porcentaje de aceite extrado, que
arroj un valor de 33% de aceite y de un 82,5% de rendimiento.
Tabla 5. Variables calculadas para oleosomas de J. peiranoi por observacin y medicin

microscpica de clulas endosprmicas. Estimacin de % de extraccin y rendimiento de
aceite.
Tamao de oleosomas 2-4 m
3
Volumen de oleosomas 0, 02283 mm
por L de tejido
N de oleosomas por
15
clulas
N de clulas por L de
1 115
tejido
3
Volumen celular 0,34245 mm
3
Volumen tisular 39,38 mm
3
Volumen de la semilla 120,43 mm
3
mm
Peso de la semilla en g 0,1 g
% rendimiento (v/v) 82,50%
% aceite 33%
La caracterizacin de los oleosomas y su relacin con el contenido de
aceite de las semillas de J. peiranoi revela caracteres semejantes a J. curcas en
cuanto a tamao y nmero de oleosomas por clula, con los genotipos Veracuz
y Soconusco respectivamente, estudiados por Anaya et al., (2014).

Esto permitir en futuras investigaciones realizar estudios de la herencia
de caracteres, contribuyendo al mejoramiento gentico de esta especie.
7. Anlisis de Viabilidad
Se evalo la viabilidad de 20 semillas, mediante la aplicacin del test de
tetrazolio que dio reaccin positiva en el 80% de las semillas. Se tieron de color
rojo intenso que indica que no hubo dao del eje radcula-hipoctilo (corteza y
cilindro central) y el 20% presenta daos. Esto permiti distinguir TEJIDO VIVO
y vigoroso (color rojo) de TEJIDO MUERTO (color blanco lechoso) y clasificarlas
en VIABLES y NO VIABLES (Fig. 28).
Esto se debe a que en las reas teidas con la solucin de tetrazolio las
clulas vivas llevan a cabo reacciones de xido-reduccin en la cual participan
las enzimas deshidrogenasas. En esta reaccin, los protones liberados en el
proceso de respiracin reducen el trifeniltetrazolio a trifenilformazn.
V V V V V V
ERH
V V V V V V V
V V V NV NV NV NV
Fig. 28 (2) Test de tetrazolio. Semillas viables (V). Semillas no viables (NV).
Eje radcula-hipoctilo (ERH).
8. Germinacin de semillas
En su ambiente natural, la semilla pasa por un perodo de latencia o
dormancia bajo tierra, soportando temperaturas muy fras durante el invierno.
Inicia la germinacin entre los meses de agosto a septiembre, donde hay una
gran amplitud trmica entre el da y la noche, (variacin trmica tpica de climas
ridos y semiridos). Teniendo en cuenta estas caractersticas, se puso a punto
la tcnica para asegurar la germinacin de las semillas de J. peiranoi,
probndose distintos tratamientos con variaciones en el tiempo de esterilizacin,
activacin de las semillas y exposicin a la luz, simulando condiciones de la
germinacin bajo tierra (Tabla 6). Considerando como criterio de germinacin la
aparicin visible de la radcula.
Tabla 6. Ensayo de germinacin: % germinacin y contaminacin en los diferentes tratamientos.
N de Tiempo de Activacin Fotoperodo N de % de N de % de

Tratamientos semillas Esterilizacin Frio-calor Luz-oscuridad semillas Semillas Semillas Semillas
(h) (h) (h) Contaminadas Contaminadas Germinadas Germinadas
Tratamiento 1 25 1 - 8 - 16 24 96 1 4
Tratamiento 2 25 3 12 - 3 3 - 21 24 96 1 4
Tratamiento 3 25 5 12 - 3 oscuridad 1 4 8 32
La germinacin se inicia entre los tres y siete das del ensayo y germinan
en forma escalonada entre los 3, 7 y 14 das (Fig. 29, 30). Observndose que el
crecimiento radicular en longitud, es constante desde que germina hasta que
avanza el crecimiento, para los 3 tratamientos

En la Figura 29 se observa detalle de la evolucin de crecimiento radicular
en longitud de semillas de J. peiranoi.
Fig. 29 (4) Desarrollo evolutivo en longitud de la radcula de J. peiranoi.

En la Figura 30, se observan diferentes estadios de germinacin de la
semilla de J. peiranoi, desde que se inicia la aparicin de la radcula a los 7 das
de iniciado el ensayo, hasta que se reabsorbe el endosperma y los cotiledones
se vuelven fotosintticos entre 18 y 25 das.
A B
C D
F E
Fig. 30 Jatropha peiranoi tratamiento 3. (2) Semillas en distintos estadios de germinacin. A-

Semillas germinadas 7-13. B- Semillas germinadas de 11-16. C- Semillas germinadas de 13-18.
D- Semillas germinadas 15-20, E- Semillas germinadas de 17-22. F- Reabsorcin del
endosperma y cotiledones fotosintticos independientes 20-25.
En el grfico (Fig. 31) se muestra la germinacin escalonada (n=8) y
promedios de longitud radicular en milmetros (mm) para el tratamiento 3.
Fig. 31 Promedios de longitud radicular (mm) para tratamiento 3.
De los diferentes tratamientos probados el que mejores resultados dio fue
el tratamiento 3, ya que este permiti obtener un 32% de semillas germinadas y
disminuir el porcentaje de semillas contaminadas, en un 96%. La activacin junto
a un mayor tiempo de esterilizacin, durante todo el proceso de germinacin,
fueron las condiciones que permitieron optimizar la obtencin de un mayor
nmero de semillas germinadas en comparacin a los tratamientos 1 y 2. Las
condiciones de oscuridad contribuiran a mejorar la germinacin en el tratamiento
3.
En los tratamientos 1 y 2, las semillas se contaminaron en un porcentaje
de 96%. Lo que result en 4% de semillas germinadas para ambos tratamientos.
A pesar de los resultados obtenidos en el tratamiento 3, el porcentaje de
semillas germinadas es bajo, teniendo en cuenta que las pruebas de viabilidad

indicaron un porcentaje del 80%. Por lo que es necesario ajustar otros
parmetros como temperatura y humedad en cmara de germinacin, para
potenciar la misma.
No existen datos publicados acerca de pruebas de viabilidad y
germinacin de las semillas de Jatropha peiranoi, datos importantes para
determinar el valor til de las mismas.
Snchez Herrera (2008), realiz estudios de viabilidad mediante la
aplicacin de rayos X para determinar el estado de las semillas de J. curcas,
previo a la germinacin, reportando resultados superiores de un 99% de
viabilidad y germinacin respecto a los obtenidos en este trabajo, viabilidad del
80% y germinacin del 32%.
El tiempo de germinacin, se encuentra dentro de los tiempos citados en
diferentes bibliografas para la germinacin de semillas. En J. peiranoi, germina
en forma escalonada entre los 3, 7, 11 y 14 das, mientras que J. curcas, germina
a partir del tercero al quinto da y entre los 7, 9, 11 y 14 DDS (Das Despus de
Siembra en tratamientos con pulpa-cascarilla-madera como sustrato) con
porcentajes de germinacin del 70 al 90% segn Lpez-Montes (2008) y con
50% de germinacin a 14 DDS segn Fnez-Oseguera (2009), respectivamente.
9. Extraccin del aceite con solventes
Para la extraccin del aceite, se utilizaron dos sistemas de solventes, n-
hexano y una mezcla de cloroformo-metanol, de manera de evaluar el efecto de
diferentes polaridades de solventes.

De los resultados obtenidos, se observ que con la mezcla cloroformo-
metanol, se logr una extraccin del 20% de aceite mientras que con n-hexano
se obtuvo un 35%. En semillas de Jatropha curcas la extraccin de aceite
utilizando n-hexano como solvente, tambin mostr el mejor rendimiento
(Tambunan et al., 2012)
Se sabe en general que en las semillas de Jatropha el 40% de su peso
corresponde a aceite (Putten et al., 2010). Teniendo en cuenta estos valores
podemos estimar que el rendimiento en la extraccin de aceite en 2 g de semillas
de Jatropha peiranoi usando n-hexano fue del 88%.
Los valores estimados en cuanto a % de aceite (33%) y rendimiento
(82,5%) obtenidos del recuento y medicin microscpica, son similares a los
valores obtenidos mediante extraccin con n-hexano 35% y 85%,
respectivamente.
Los rendimientos obtenidos en este trabajo fueron superiores a los
observados en la extraccin de aceite de semillas de J. curcas usando n-hexano,
en donde se observ un rendimiento del 78%, Shivani et al. (2011) o al
observado por Sayyar et al. (2009) donde el rendimiento de la extraccin con n-
hexano fue del 47%.
10. Caracterizacin fsico-qumica del aceite de Jatropha peiranoi
10.1 Cromatografa en Placa (TLC)
Para analizar el perfil lipdico de Jatropha peiranoi, la muestra fue corrida
y evaluada inicialmente por cromatografa en capa fina. Se utilizaron como
controles aceites vegetales; aceite de oliva y aceite de soja.

Como se observa en la Fig. 32 el perfil lipdico de Jatropha peiranoi
presenta mayor similitud con el aceite de soja. Los Rf encontrados para los
distintos aceites se observan en la Tabla 7.
Tabla 7. Rf de los spots encontrados para los aceites

evaluados.
Fig. 32 Cromatografa en capa fina.1- cido linoleico. 2- Aceite de J. peiranoi. 3- Aceite de J.

peiranoi + n-hexano. 4- Aceite de soja. 5- Aceite de oliva.
10.2 Cromatografa Gaseosa con detector de ionizacin a la llama (GC-FID)
La composicin de cidos grasos del aceite de Jatropha se analiz por
GC-FID (Fig. 33). El anlisis por cromatografa gaseosa mostr que el triglicrido
de Jatropha est compuesto por cido linoleico (75%), cido oleico (15,6%),
cido esterico (4%) y cido palmtico (5,9%).

Fig. 33 Cromatograma de GC-FID. Tiempos de retencin en el anlisis del aceite de
Jatropha peiranoi. A- cido palmtico B- cido linoleico. C- cido oleico. D- cido esterico.
En la tabla 8 puede observarse la composicin de cidos grasos que
presentan los aceites vegetales de especies del mismo gnero; Jatropha
peiranoi, Jatropha curcas (Berchmans et al., 2008) y Jatropha excisa (Clerici et
al., 2013), y otros aceite vegetales como soja (Molina-Mayo, 2013) y oliva (Kostik
et al., 2013). Se puede observar una variacin en la composicin de cidos
grasos, tanto en el mismo gnero como en los aceites de otras especies
vegetales tales como el aceite de soja y oliva. Cabe destacar que la mayora de
los aceites presentan una mayor proporcin de cido oleico y linoleico, excepto
oliva que posee poca cantidad de cido linoleico.
Tabla 8. Composicin de cidos grasos del triglicrido de distintas especies de Jatropha

comparados con Jatropha peiranoi. Se realiza tambin una comparacin con aceite de Soja y
Oliva.
Composicin (%)
Compuesto Jatropha Jatropha Jatropha Jatropha Jatropha
Soja Oliva
peiranoi curcas macrocarpa hieronymi excisa
cido palmitico C 16:0 5,9 14-15 11-12 11-14 8,2 7-11 11,5
cido esterico C 18:0 4 3,7-9,8 3-4 7-9 5,68 3-6 2
cido oleico C 18:1 15,6 34,3-45,8 27-39 20-30 18,36 22-34 78
cido linoleico C 18:2 74,5 29-44,2 42-55 45-58 66,49 50-60 7
Fuente: Berchmans et al., 2008; Casotti, 2008; Clerici et al., 2013; Molina-Mayo, 2013; Kostik et
al., 2013
En este trabajo se presenta por primera vez la composicin del aceite de
Jatropha peiranoi, el cual posee una composicin similar a la reportada para el
aceite de Jatropha excisa (Clerici et al., 2013) y de soja (Molina-Mayo, 2013).
El aceite de Jatropha peiranoi, si bien presenta una composicin similar al
aceite de Jatropha excisa y de soja difiere de las otras especies de Jatropha,
como J. curcas, J. macrocarpa y J. hieronymi, en cuanto al contenido de cido
oleico y linoleico. El contenido de cido oleico, proporciona estabilidad oxidativa
en el biodiesel y el cido linoleico, mejora las propiedades a baja temperatura
(punto de nube, punto de fluidez y punto de obstruccin del filtro fro),
propiedades importantes que debern ser evaluadas para nuestra especie en
estudios posteriores.
Es sabido que en la industria de los biocombustibles se buscan aceites
cuya composicin sea rica en cidos grasos de cadena media a larga y que
presenten, estabilidad oxidativa y buenas propiedades de baja temperatura entre
otras, caractersticas necesarias para la calidad del biocombustible (Moreira-
Santos, 2012).
El hecho que J. peiranoi presente elevado contenido de aceite en las
semillas, cuya composicin de cidos grasos sea rica en cido linoleico la hacen
una especie promisoria para su aplicacin como biocombustible entre otras
aplicaciones industriales (Moreira-Santos, 2012; Balat, 2011).
10.3 Anlisis termo gravimtrico (TGA).
Para caracterizar el proceso de degradacin trmica del aceite se realiz
el anlisis termo gravimtrico que permiti medir la prdida de peso de la
muestra de aceite empleada (8,267 mg), en funcin de la temperatura bajo una

atmsfera controlada de nitrgeno. La Fig. 34 presenta el anlisis
termogravimtrico del aceite de Jatropha peiranoi en el que se evidencian tres
fases de prdida de peso por evaporacin. La primera fase corresponde al
intervalo de temperatura de 30 C a 380 C. En esta fase la reduccin de masa
es 4,70%, principalmente a temperaturas superiores a 300 C. La segunda fase
presenta una rpida evaporacin registrada como una prdida de peso cercana
al 90%, en el intervalo de 380 C a 448,67 C, por efecto de la volatilidad de los
componentes del aceite al incrementar la temperatura. La tercera fase se
produce a partir de 448,67 C donde se alcanza una reduccin de 100% en peso
del aceite, cuando la temperatura se acerca a los 600 C. Estos resultados
permitieron establecer que a 380 C el aceite de Jatropha peiranoi inicia su
ebullicin y que en atmsfera de nitrgeno no hay descomposicin del aceite an
a 400 C. Estos parmetros, permitieron conocer el comportamiento del aceite a
la temperatura. El perfil de prdida de peso para Jatropha peiranoi mostr ser
ms estable que el observado por Sharma et al. (2015) en aceite de canola, que
mostr ser estable por debajo de 333 C.
Fig. 34 Anlisis termo gravimtrico del aceite de Jatropha peiranoi

De esta manera el aceite de J. peiranoi mostr ser ms estable a la
temperatura, lo que podra deberse a la presencia de uniones hidrogeno intra
moleculares. As, el aceite de Jatropha peiranoi presenta propiedades deseadas
para su aplicacin como biolubricante especialmente a altas temperaturas
(Sharma et al., 2015).
Actualmente los lubricantes utilizados a nivel industrial o en el sector
automotriz son de aceites minerales. Sin embargo en los ltimos aos han
cobrado gran inters en el estudio de lubricantes obtenidos a partir de aceites
vegetales fundamentalmente si estos son aceites no comestibles (Sharma et al.,
2015). Estos aceites lubricantes presentan ventajas sobre los minerales tales
como, ser renovables, no contaminantes y biodegradables (Lathi et al., 2007;
Campanella et al., 2010).
11. Actividad lipoltica
La biomasa residual es un subproducto de la obtencin de aceite y se la
conoce como torta de semilla. Generalmente esta torta es utilizada como
fertilizante. Tambin puede ser utilizada en biodigestores para producir biogs
para la generacin de calor y energa elctrica (Huerga, 2010).
Sin embargo se busca dar un valor agregado a la produccin de esta
especie vegetal.
La biomasa residual es fuente de enzimas lo que proporciona a la misma
un potencial valor agregado de gran inters a nivel comercial. El uso de
biocatalizadores o enzimas permiten aplicar procesos de biocatlisis a nivel
industrial lo que aporta al desarrollo de industrias verdes en proceso. En las dos
ltimas dcadas la contaminacin ambiental como as tambin la bsqueda de

mejorar los rendimientos de los procesos industriales ha impulsado el uso de
enzimas para obtener bioproductos. El inconveniente de este proceso es el costo
de las enzimas. Es por esto que poder obtener enzimas como subproducto de la
obtencin del aceite de Jatropha hace del mismo un producto ms rentable.
Tal es el caso de la recuperacin de enzimas lipoliticas del tipo esterasas
o lipasas. Estas enzimas se encuentran presentes en la biomasa vegetal
fundamentalmente en semillas oleaginosas (Barros et al., 2010). Durante el
periodo de germinacin de semillas oleaginosas, los lpidos de reserva son
rpidamente usados para producir energa para el crecimiento del embrin. Las
lipasas pueden estar localizadas en las membranas de los cuerpos lipdicos u
otros compartimentos celulares (Borgstn et al., 1984). Se han estudiado las
lipasas de distintas semillas oleaginosas como semillas de lino, de girasol,
Jatropha curcas entre otras. (Staubmann et al., 1999; Sadeghipour y Bhatla,
2003; Barros et al., 2010). Sin embargo no se ha estudiado hasta ahora la
actividad lipasa en semillas de Jatropha peiranoi.
La biomasa residual de J. peiranoi mostr ambas actividades enzimticas,
con una actividad esterasa de 4,23 U/L y lipasa de 2,35 U/L y una actividad
especfica de 84,5 U/g y 46,7 U/g respectivamente (Fig. 35).
Fig. 35 Actividad enzimtica presente en la biomasa residual.

De esta manera la obtencin de enzimas lipoliticas a partir de la biomasa
residual brinda la posibilidad de plantear un ciclo de produccin de un
biocombustible como el biodiesel a partir de transesterificacin del aceite de J.
peiranoi catalizada por lipasas propias de la planta.
Este tipo de plataforma biotecnolgica se ha planteado en los ltimos aos
para dar valor agregado a tecnologas con aplicacin comercial (Zhu et al., 2016).
En nuestro caso esta plataforma se genera a partir de una especie vegetal
oleaginosa nativa de nuestra regin, no comestible, para su aplicacin en
diversas reas industriales.

Conclusiones
- En este trabajo se describi y caracteriz el hbitat de la especie motivo
de estudio, Jatropha peiranoi, como una ecorregin de vegetacin tpica de la
provincia Fitogeogrfica de Monte.
- Se determin a travs de claves diacrticas la posicin taxonmica de J.
peiranoi, Familia Euphorbiaceae, a fin de asegurar su identidad, delimitar el
gnero y especie y diferenciarla de otras especies del gnero Jatropha.
- Se realiz la caracterizacin botnica de la especie, en su aspecto
vegetativo y reproductivo. Lo que permiti establecer caractersticas
diagnsticas vegetativas, intrnsecas de la especie, como forma de vida de la
planta, tamao o altura y caracteres foliares. Los caracteres reproductivos, flores
y frutos determinaron la fenologa de la misma en cuanto a la poca de floracin,
de madurez y recoleccin de frutos y semillas.
- El anlisis morfolgico de las semillas permiti determinar su forma,
tamao y color. A travs de este anlisis se pudo precisar de modo cualitativo la
madurez fisiolgica del fruto, madurez y vigor de la semilla, caractersticas
asociadas al rendimiento (frutos maduros y semillas marrones oscuras).
- El estudio anatmico de la semilla de J. peiranoi por diversas tcnicas
de microscopa permiti caracterizar por primera vez, la estructura anatmica
externa e interna de la semilla e identificar las estructuras celulares, oleosomas
y cuerpos proteicos presentes en esta especie.
La localizacin, identificacin y diferenciacin histoqumica de los cuerpos
de aceite y proteicos, se vio mejorada por la modificacin de las tcnicas
histolgicas utilizadas en este trabajo.

El conocimiento morfolgico e histolgico de las semillas aport datos
tiles para realizar los ensayos de viabilidad, germinacin y obtencin de aceite,
y proyectarla con potencial utilidad como biocombustible.
-La caracterizacin de los oleosomas de J. peiranoi, y su relacin con el
contenido de aceite hace que esta especie sea promisoria para la obtencin de
biocombustible y permitir en futuras investigaciones realizar estudios de la
herencia de caracteres, contribuyendo al mejoramiento gentico de esta especie.
- La extraccin de aceite de las semillas de J. peiranoi con solventes de
distintas polaridades, permitieron conocer la eficiencia de extraccin y
rendimiento de aceite, obtenindose con n-hexano los mejores rendimientos,
superiores a los de J. curcas.
- La caracterizacin cualitativa y cuantitativa del aceite, permiti conocer
el perfil lipdico del aceite de J. peiranoi y compararlo con otros aceites vegetales
como soja y oliva, presentando mayor similitud con el aceite de soja. Se
determin la composicin de cidos grasos (cido linoleico 75%, cido oleico
15,6%, cido palmtico 5,9% y cido esterico 4%), de fundamental importancia
para conocer las propiedades fsicas que podra presentar el biodiesel producido
a partir de este aceite.
- Se determin la estabilidad trmica del aceite establecindose el rango
de temperatura al que es estable, punto de ebullicin y descomposicin,
parmetros importantes para la aplicacin del proceso de transesterificacin o
para su futura utilizacin como biocombustible.
- La determinacin de la presencia de actividad enzimtica lipoltica (lipasa
y esterasa) en la biomasa residual, dando un valor agregado a este subproducto.

- El estudio de la caractersticas fsico-qumicas del aceite de J. peiranoi
contribuira a ampliar el espectro de materias primas no comestibles tiles para
su aplicacin a nivel industrial, sumado a esto el valor agregado de la biomasa
residual, que cerrara de este modo el ciclo til productivo de esta especie, ya
que la semilla presenta alto potencial para la extraccin de aceite y podra ser
rentable en base al rendimiento final obtenido.

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OBTENCIN DE ACEITE COMO

Constanza Mara Adn

Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia

El gnero Jatropha: taxonoma y distribucin. 11

Importancia del gnero Jatropha como cultivo energtico. 15

3.1 Clave de identificacin para especies del gnero Jatropha. 22

4. Recoleccin de frutos y obtencin de semillas de Jatropha sp. ... 23

5. Anlisis de semillas de Jatropha sp. 23

5.1 Estudio morfolgico.. 23

5.2 Estudio histolgico 24

5.2.1 Pruebas histoqumicas.. 24

5.2.2 Anlisis histolgico 24

5.2.3 Microscopa electrnica de Transmisin y Barrido 26

5.3 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de aceite 26

5.4 Anlisis de Viabilidad 29

5.4.1 Aplicacin de tcnica de Viabilidad en semillas de Jatropha sp. 29

7. Extraccin de aceite de Jatropha sp. ... 34

7.1 Extraccin con n-hexano.. 34

7.2 Extraccin con mezcla cloroformo-metanol.. 34

8. Determinacin de la composicin qumica del aceite de Jatropha sp. 35

8.2 Evaluacin del perfil lipdico por Cromatrografa Gaseosa (GC-FID) 36

9. Anlisis Termo gravimtrico (TLC) 37

10. Determinacin de Actividad Enzimtica lipoltica. 37

1. Caracterizacin del rea de estudio.. 39

3. Descripcin Botnica de la especie. Caractersticas exomorfolgicas 41

4. Caracterizacin del fruto de Jatropha peiranoi 48

5. Caracterizacin morfolgica de la semilla de Jatropha peiranoi... 49

5.1 Forma, tamao y color de las semillas.. 50

6. Aspectos anatmicos. Caracterizacin histolgica de la semilla.. 53

6.1 Estructura y composicin de las semillas.. 54

6.2 Pruebas histoqumicas. 55

6.3 Estructura Interna del tegumento 56

6.4 Estructura Interna del endosperma y embrin.. 58

6.5 Clculo de volumen de oleosomas y estimacin de rendimiento de aceite. 61

9. Extraccin del aceite con solventes................ 67

10. Caracterizacin fsico-qumica del aceite de Jatropha peiranoi. 68

10.2 Cromatografa Gaseosa (GC-FID) 69

10.3 Anlisis Termo gravimtrico (TGA).. 71

11. Actividad lipoltica.. 73

DO: densidad ptica.

FAA: formaldehido-alcohol etlico-cido actico-agua.

FAME: mtil ster de cidos grasos.

FID: detector de ionizacin en llama.

GC: cromatografa de gases.

GC-FID: cromatografa de gases con detector de ionizacin en llama.

LIL: sigla de reconocimiento del Herbario Miguel Lillo

m s. n. m.: metros sobre nivel del mar

NOA: noroeste argentino

p-NPA: p-nitrofenil acetato

P-NPL: p-nitrofenil laurato

Rf: movilidad electrofortica relativa

rpm: revoluciones por minuto

SEM: microscopio electrnico de barrido

TEM: microscopio electrnico de transferencia

TLC: cromatrografa en placa

La bsqueda de energas alternativas que reduzcan la dependencia

petrolera y los problemas asociados a las materias primas empleadas en la

obtencin de biocombustibles, motivan la investigacin de nuevas especies, no

comestibles, productoras de aceite. Diferentes trabajos reportan el uso de

especies del gnero Jatropha, J.curcas, J. macrocarpa, J. hieronymi como

son ricas en contenido de aceite, lo que hace interesante investigar nuevas

especies, de Jatropha sp.

Para la realizacin de este trabajo se recolect una especie nativa y