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Naturales
Farmacognosia
Gua de Trabajos
Prcticos
Autoras:
Dra. Silvia Debenedetti
Dra. Erica Wilson
Lunes a viernes de 9 a 21 h.
Torre Universitaria, Zabala 1837, primer nivel inferior.
C1426DQG - CABA
Telfono: 4788-5400, internos 5002 y 2122.
Email: fasciculos@ub.edu.ar
www.ub.edu.ar
Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales
Gua de Trabajos Prcticos-FARMACOGNOSIA
FARMACOGNOSIA
Gua de trabajos prcticos
Carrera de Farmacia
3 Ao Plan 2012 y plan 2008 transicin 2012.
OBJETIVO:
- Que el alumno se familiarice con el manejo de las drogas vegetales y sus preparados:
polvos, extractos secos y lquidos,etc.
- Que pueda disear procedimientos de extraccin, mtodos cromatogrficos, realizarlas
y detectar los puntos a mejorar a partir de los resultados obtenidos.
UNIDADES:
1. EXTRACCIN
2. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN (TLC/HPLC)
3. CONTROL DE CALIDAD
BIBIOGRAFA:
Libros que se detallan a continuacin se pueden consultar en la biblioteca o en la Ctedra
virtual:
-Sharapin, N. (2000).Fundamentos de Tecnologa de Productos Fitoteraputicos. Ed. R. Pinzn
CAB-CYTED. Bogot, Colombia (Site de Farmacognosia)
-Dewick P.M. (2004). Medicinal Natural products, a biosynthetic approach.2 Ed. John Wiley &
Sons, Ltd. (Site de Farmacognosia)
-World Health Organization "Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials" cap. 13.
(1998) (Site de Farmacognosia)
-Elementos de fitoqumica y de farmacognosia. Bruneton, Jean. 1991. xvii, 594 p.
Solicitar por: 041349.
-Farmacognosia. Evans, William Charles. 1991. 901 p. Solicitar por: 041361.
-Farmacognosia : fitoqumica, plantas medicinales. Bruneton, Jean. 2001.1099 p.
Solicitar por: 056588
http://www.rain-tree.com/plants.htm
Sitio con muy buenas monografas gratis (ingls)
http://www.herbphoto.com/education/index.html
Sitio con algunas monografas gratis (del listado hay algunas que estn, otras se pagan)
http://barcelonacomenius.googlepages.com/whomedicinalplantsbooks
Hay tres volmenes con monografas de plantas medicinales- Publicacin de la OMS (ingls)
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/
La Universidad de Antioquia, Colombia
http://www.profitocoop.com.ar
Si se registran tienen acceso a algunas monografas oficiales. Es gratis.
http://www.salutia.com.ar/Sitio/Sp/Servicios/Vademecum/Farmacopea_Argentina/sp_Vademe
cum_Farmacopea_Index.htm Farmacopea Argentina
Recordar que la mayora de los accidentes en los laboratorios qumicos son el resultado del
descuido o distraccin, falta de criterio o fatiga del accidentado o de alguna de las personas
cercanas.
El estudiante debe adquirir los hbitos de trabajo de manera de realizar las actividades en el
laboratorio con la mxima seguridad para l y sus compaeros.
1-Su localizacin.
2-Accesos a fuentes de agua, gas y desages
3-Dnde estn los matafuegos
4-Donde est la ducha de emergencia y lavaojos
5-Dnde estn las distintas puertas de salida.
1-Guardapolvo para no llevar ni traer contaminantes del medio ambiente, como barrera de
contencin de las proyecciones o salpicaduras de elementos corrosivos. No debe colocarse
nada encima de l.
2-Guantes para proteger las manos en caso que se usen elementos custicos.
3-Anteojos para proteger los ojos de las proyecciones, salpicaduras o radiaciones.
4-Propipetas para evitar respirar los vapores y la posible ingestin de distintas sustancias.
JAMS PIPETEE NADA CON LA BOCA.
5-Barbijo para evitar la penetracin de polvos a las vas respiratorias.
1-Usar todos los elementos de seguridad en todo momento en que est realizando una
experiencia.
14-Cuando caliente NO dirija la boca del tubo u otro elemento hacia su rostro o el de sus
compaeros.
16-Sea precavido al trasvasar lquidos, evite que se derrame sobre el exterior del envase. En
este caso, lmpielo con una servilleta de papel o un trapo rejilla.
17-Cuando finalice su trabajo deje todo el material limpio y ordenado, las mesadas limpias y
controle que las llaves de gas estn cerradas y los equipos elctricos apagados.
7-Qu aspectos se deben tener en cuenta en una industria fitofarmacutica para la eleccin
del solvente de extraccin?
8-Que solventes empleara para extraer la mayor cantidad de metabolitos presentes en una
droga vegetal?
9-En que se basara para la eleccin del solvente de extraccin de los grupos fitoqumicos
mencionados en la pregunta 2)? Indique para cada uno de ellos el solvente ms apropiado.
11-Mencione las diferentes tcnicas de extraccin. Clasifique las tcnicas mencionadas segn
extracciones solido-lquido o lquido-lquido y segn sean procesos en frio o en caliente.
12-Que tipo de extracto es una tintura? Que proceso de extraccin se utiliza para la obtencin
de tinturas?
Que es un alcoholaturo?
Que significa la relacin que se encuentra entre parntesis en los extractos?
Conocimientos previos:
1. Objetivo
- Familiarizarse con la metodologa de trabajo que se utiliza para la extraccin y aislamiento
de compuestos a partir de material vegetal
- Utilizando un ejemplo concreto usarn los siguientes mtodos de extraccin: sonicacin,
reflujo, Soxhlet, extraccin con agitacin mecnica.
- Tambin se familiarizarn con el uso del evaporador rotatorio y dems equipamiento de
laboratorio que utilizarn durante el cuatrimestre.
- Elegirn un solvente de extraccin de acuerdo a las caractersticas de la muestra.
- Se compararn los resultados obtenidos con los diferentes mtodos de extraccin por un
lado y con los distintos solventes elegidos por cada alumno.
2.Material vegetal:
Frutos de Capsicum annum desecados y molidos a polvo fino.
3.Mtodos:
- Reflujo.
-Ultrasonido a temperatura ambiente
-Soxhlet
Agitacin mecnica a temperatura ambiente
4.Procedimiento:
Se pesan 2 g de la droga vegetal y se coloca en el recipiente adecuado de acuerdo al
mtodo a utilizar. Se agregan 150 ml de solvente y se extrae durante 60 minutos (Soxhlet,
reflujo), 10 minutos (ultrasonido) y 30 minutos (agitacin mecnica).
Luego de transcurrido el tiempo preestablecido, se filtra el contenido del recipiente por
Buchner , se lleva a sequedad y se pesa.
1-OBJETIVO
2.MATERIAL VEGETAL
Polvo de Cscara sagrada.
Aloe
3.MTODO
Cada equipo (2 alumnos) elaborar un esquema de extraccin que utilizar con una de las
drogas. El esquema ser discutido con el profesor/ayudante previo a la realizacin de la
actividad.
Se trabajar con 1 g de droga y aproximadamente 50 ml de solvente en el caso de la
Cscara sagrada y con 0,5 g en el caso del Aloe.
La presencia de los grupos fitoqumicos extrados se verificar mediante las reacciones de
caracterizacin que se describen en el punto 4.
Se reservarn 2 ml de cada fraccin en viales de color caramelo identificados con el
nombre de los alumnos y su contenido para su anlisis por TLC en otro prctico.
4.REACCIONES DE CARACTERIZACIN
Esta reaccin consta de una extraccin con solvente poco polar, seguida del siguiente
procedimiento. En este caso utilizar 3 ml del extracto etreo obtenido anteriormente que
se colocan en un tubo de ensayo.
Agregar 2 ml de una solucin de hidrxido de amonio concentrado, agitar suavemente y
observar la coloracin de la fase acuosa.
Extracto acuoso:
Colocar la muestra en un tubo de ensayo. *Agregar 2 ml de NaOH 10% y calentar a bao
de mara durante 15 minutos. Enfriar y acidificar con HCl 1M, verificando con papel
tornasol. Agregar 2 ml de ter de petrleo y agitar cuidadosamente. Transferir la fase
orgnica con una pipeta pasteur a un tubo de hemlisis y agregar 1 ml de NaOH. Observar
el color de la fase acuosa.
Extracto orgnico:
Colocar aprox. 2 ml de la muestra en un tubo de ensayo. Eliminar el solvente por
evaporacin calentando a bao de mara. Seguir con el procedimiento indicado en el
prrafo anterior a partir del asterisco (*)
Droga vegetal:
Colocar aprox. 1 g de la droga pulverizada en un tubo de ensayo, agregar 2 ml de NaOH
10% y calentar a bao de mara durante 15 minutos. Filtrar y trasvasar el filtrado a otro
tubo de ensayo, acidificar con HCl 1M, verificando con papel tornasol. Agregar 2 ml de
ter de petrleo y agitar cuidadosamente. Transferir la fase orgnica con una pipeta
pasteur a un tubo de hemlisis y agregar 1 ml de NaOH. Observar el color de la fase
acuosa.
Informe
Elaborar el esquema de extraccin utilizado indicando solventes y resultados de las
reacciones de caracterizacin. Indique que otros grupos fitoqumicos pueden estar
presentes en cada una de las fracciones obtenidas.
CUESTIONARIO
1) Adems de Cscara sagrada, Qu otras drogas conoce cuyos principios activos son
derivados de antraquinonas? Nombre cientfico (NC), nombre vulgar (NV) y parte usada de
cada una de ellas.
2) Escriba la frmula de los principales componentes de las drogas mencionadas en (1) e
indique sus principales usos medicinales
3) Durante el TP ud. efectu la separacin de los distintos compuestos hidroxiantracnicos de
cscara sagrada (Rhamnus purshiana DC)
a) Fundamente en que fraccin obtiene las antraquinonas libres de las alonas y de los
cascarsidos presentes en la droga vegetal.
b) Que reacciones de caracterizacin utiliz en cada una de las fracciones? Justifique su
respuesta.
c) Fundamente el mtodo de separacin de O y C hetersidos realizado en el TP
1-OBJETIVO
Extraer los alcaloides de una droga vegetal empleando alguno de los mtodos convencionales
de extraccin de alcaloides: medio cido, medio bsico o con solventes.
2-MATERIAL
Quina (Cinchona calisaya- Rubiaceae)
3-MTODO
4-REACCIONES DE CARACTERIZACIN
Colocar unas gotas del extracto de cloruro de metileno en una placa de toque o
portaobjetos. Evaporar el solvente. Agregar una gota del reactivo de Draggendorf y observar
la reaccin. Utilizar como control, una solucin de sulfato de quinina al 0.1%.
Esta reaccin se puede realizar tambin sobre papel, sembrando unas gotas sobre un trozo
de papel de filtro y agregando el reactivo. Una vez seco, se debe lavar con agua,
considerndose positiva la reaccin si se observa una persistencia del color en el papel.
Informe
Elaborar el esquema de extraccin utilizado indicando solventes y resultados de las
reacciones de caracterizacin. Indique que otros grupos fitoqumicos pueden estar presentes
en cada una de las fracciones obtenidas.
PROBLEMAS DE EXTRACCIN
2) Y en un extracto hexnico?
3-Ud. necesita extraer los glicsidos flavonoides presentes en los botones florales de Sofora.
a) Describa la metodologa a utilizar.
Cmo hara para comprobar que agot el material vegetal
Acido linoleico
Mentol
Rutina
Soforosa
8. Se realiza una extraccin S/L semi-contnua de una droga vegetal, pasando sucesivamente
hexano, cloruro de metileno, acetato de etilo, metanol y agua.
Se realizan los siguientes ensayos de caracterizacin sobre las fracciones obtenidas:
Rojo de metilo, Liebermann-Bouchard, Shinoda, FeCl3, Dragendorff, Fehling, Rosenheim.
Explique en qu fracciones podra esperar reacciones positivas para dichas reacciones y qu
ncleo podra estar caracterizando.
Tolueno
Justifique su respuesta.
12. Disee un mtodo de extraccin que permita obtener los asiaticsidos de la Centella
(saponinas triterpnicas) , en un estado lo ms purificado posible .
13. Esquematice un mtodo de extraccin que le permita obtener los siguientes compuestos en
3 fracciones distintas. Indique qu ensayos realizara para caracterizarlos.
14. Disee un mtodo para obtener arbutina pura de las hojas de Ilex brasiliensis que contiene
aproximadamente 10% (P/P) sobre droga seca.
Arbutina
cido isoclorognico
16- Se realiza un proceso de extraccin semicontinuo slido lquido a una droga vegetal en
polvo, siguiendo el siguiente esquema de fraccionamiento:
a) Hexano
b) Cloroformo
c) Acetato de etilo
d) Agua
Discuta qu tipo de compuestos podra encontrar en los distintos extractos.
20-Las semillas de Nuez vmica (Strychnos nux-vomica, Loganiaceae) contiene alcaloides, lpidos
y aminocidos.
a) Proponga un mtodo de extraccin que permita separar en tres fracciones los alcaloides, los
lpidos y los aminocidos presentes en esta droga.
b) Cmo caracterizara cada grupo fitoqumico en la fraccin correspondiente?
18) En que caso es imprescindible la utilizacin de un extracto patrn y en que caso una
sustancia de referencia?
19) En que casos utiliza fases mviles que contienen con cidos y en que casos se agrega a la
fase mvil una base? Justifique.
1-OBJETIVO
Desarrollar sistemas cromatogrficos para el anlisis cualitativo de extractos vegetales.
2-MATERIAL VEGETAL
Extracto de Capsicum
Extractos de Cscara sagrada y Aloe obtenidos en el TP N 2
Extracto de quina obtenido en el TP N 4
3-MTODO
Se utilizarn Cromatofolios de silicagel como fase estacionaria. La fase mvil ser
seleccionada por cada equipo.
Se realizarn las corridas cromatogrficas y se evaluar la resolucin del sistema
registrando los Rf correspondientes a los compuestos de inters, optimizando el sistema
en base a los resultados obtenidos.
En todos los casos se deber informar las condiciones cromatogrficas utilizadas para
cada prueba realizada, los parmetros cromatogrficos obtenidos (k, y Rs) y la
justificacin de los cambios planteados.
Informe
Realizar un esquema del cromatograma obtenido indicando: Sistema cromatogrfico
utilizado (FM, FE, y revelado)
Tabla de Rfs de las bandas obtenidas en los extractos y sustancias de referencia (color al
UV y con reactivo revelados)
1. OBJETIVO
2. MATERIAL VEGETAL
- Extracto de Cscara sagrada
- Extracto de Frngula.
3. MTODO
4. RESULTADOS:
Registrar los Rf de las manchas observadas en los distintos cromatogramas, en tablas
similares a las siguientes:
a) Observacin a la luz visible (Rf)
Extracto de R.
Extracto de Solucin testigo
purshiana. R.frangula alona
1-OBJETIVO
Identificar un extracto vegetal en un producto terminado.
2-MATERIALES
Extracto de Cscara sagrada
Extracto de Frngula
Comprimidos de Cscara sagrada/Frngula
3.MTODO
Procedimiento
Analizar la muestra siguiendo el mtodo descripto en el TP N 7
4-CONCLUSIONES
Elabore un informe sobre los resultados obtenidos y la identidad del extracto presente
en los comprimidos de acuerdo al ensayo realizado.
1.- Se dispone de un extracto clorofrmico de centella asitica que contiene cido asitico
(triterpeno libre) entre otros compuestos.
a) Describa una tcnica que permita identificar cido asitico (triterpeno libre) en dicho
extracto.
b) Probando distintos sistemas cromatogrficos para identificar cido asitico obtuvo los
siguientes cromatogramas:
c.- Cmo procedera para obtener 5 mg de cido asitico a partir de un extracto clorofrmico de
centella asitica. Describa la metodologa a emplear detallando los siguientes puntos:
T= testigo
M= muestra
T M
Podra utilizar este sistema cromatogrfico para identificar barbaloina en el extracto de loe?
En caso necesario, que modificaciones hara para lograrlo? Justifique su respuesta, indicando
los factores de resolucin (capacidad, eficiencia, selectividad).
c)Que sistema utiliza par su revelado?
3.- Usted debe analizar los alcaloides presentes en un extracto cloruro de metileno
semipurificado de opio.
a) Describa una tcnica que permita identificar morfina (alcaloide) en dicho extracto.
M= Muestra
T=Testigo (morfina)
Podra utilizar este sistema para identificar morfina en el extracto. Justifique su respuesta. En
caso necesario cmo optimizara este sistema?
4.- Usted debe analizar por cromatografa sobre planos un extracto acetato de etilo
semipurificado de hiprico.
a) Describa una tcnica que le permita comprobar la presencia de hipersido (hetersido
flavonoide) en dicho extracto.
b) Ensayando diversos sistemas cromatogrficos para comprobar la presencia de hipersido en
el extracto, obtuvo los siguientes cromatogramas:
T M
6.- Usted debe analizar por cromatografa sobre planos un extracto acetato de etilo
semipurificado de hojas de Gingko biloba.
a) Describa una sistema cromatogrfico (FM, FE y Revelado) que le permita detectar la rutina
(hetersido flavonoide) presente en dicho extracto.
b) Buscando un sistema adecuado para cuantificar la rutina, obtuvo los siguientes
cromatogramas:
(1) (2) (3)
T M T M T M
c.- Usted necesita obtener rutina a partir de un extracto acetato de etilo semipurificado de
hojas de Gingko biloba. Describa la metodologa que empleara para obtener 10 mg de rutina
detallando los siguientes puntos:
I) Sistema cromatogrfico.
II) Soluciones a preparar.
III) Siembra de las mismas, revelado.
IV) Interpretacin del cromatograma resultante y obtencin de la rutina.
V) Verificacin de la pureza de la rutina aislada..
1.- Se dispone de un extracto clorofrmico de centella asitica que contiene cido asitico y
cido madecsico (triterpenos libres) entre otros compuestos.
a) Describa una tcnica que le permita detectar la presencia de cido asitico en dicho extracto.
b) Probando distintos sistemas cromatogrficos para identificar cido asitico obtuvo los
siguientes cromatogramas:
TRABAJO PRCTICO N 9
ANLISIS CUANTITATIVO DE UN EXTRACTO VEGETAL POR HPLC
1-OBJETIVO
Que el alumno realice un ensayo de cuantificacin siguiendo un procedimiento descripto en
una farmacopea (Farmacopea Espaola 2005).
2-MATERIALES
Comprimidos con extracto de Gingko biloba
Quercetina (sustancia de referencia).
3.MTODO
4-INFORME
2. MATERIALES
2) Enumere los ensayos que realizara sobre los siguientes productos botnicos para
determinar su calidad:
a) Aceite de ricino para cpsulas
b) Cscara sagrada segn Farmacopea Argentina.
c) Cscara sagrada en polvo segn Farmacopea Argentina.
d) Comprimidos de Cscara sagrada segn USP.
e) Extracto seco de Ginkgo con 24 % de glicsidos flavonoides expresados como rutina.
f) Comprimidos de extracto seco de Sen (conteniendo 8% de sennsidos expresados
como sennsido B) y 200 mg de polvo de Regalz.
g) Tisana con 20% de hojas de boldo, 30% de semillas de ans y 50% de tallos de Cola de
caballo.
h) Polvo de belladona con 0.08% de alcaloides totales expresados como hiosciamina.
b) Una muestra de polvo de semillas de Psillium que se utiliza para un laxante de accin
mecnica.
5) Disee un mtodo de control de calidad para unas gotas colerticas que contienen extracto
hidroalcholico de alcachofa y extracto de boldo.
6)Desarrollo un mtodo de control de calidad para comprimidos que contienen extracto seco de
manzanilla y polvo de corteza de frngula.
7) Se desea evaluar el reemplazo de una esencia de lavanda de Egipto (de calidad ptima) por
una de otro origen. Desciba un procedimiento que le permita saber si dicho reemplazo es
factible
9) Explique qu ensayos realizara sobre unas gotas antiespasmdicas que contienen tintura de
belladona y clorhidrato de papaverina para comprobar si las mismas cumplen cuali y
cuantitativamente con la frmula declarada.
-APNDICE-
MONOGRAFAS
cont..
Contina..
Forma y
Comunicacin 1A
Ficha N 2
Ctedra:
Arq. Eduardo Garca Lettieri